Ovarian responses and FSH profiles at superovulation with a single epidural administration of gonadotropin in the Thai-Holstein crossbreed

Abstract The conventional method of ovarian superstimulation requires multiple injections of gonadotropins which is time-consuming and may be stressful for the cows. This study was designed to determine whether a single epidural injection of FSH (EI group) would induce the superovulatory response in the Thai-Holstein crossbreed and evaluate FSH plasma hormone concentrations. Eight cows (replication = 3; n=24) were assigned to one of 2 treatments in switch back design. Control group (n=12): cows were received 400 mg FSH twice daily by intramuscularly for 4 days (80, 80, 60, 60, 40, 40, 20 and 20 mg), EI group (n=12): cows were received 400 mg FSH by single epidural injection. Data were collected in term of ovarian follicle responses, superovulatory responses, ova/embryo collection. FSH concentrations were examined using ELISA. The total follicular responses during oestrus were not different between treatments; however, the large follicles were less frequent (P < 0.01) while the medium follicle sizes were higher (P < 0.05) in the EI group. The plasma concentration of FSH in EI was dramatically increased within 2 hours before decreasing sharply thereafter (P < 0.01) and did not remain above baseline after 10 hours of administration. The embryo quality was better in the control than the EI groups (P < 0.05). Interestingly, the number of ovulation cysts in the EI group was 50%. The ovarian responses and embryo quality in the cows with cysts were worse compared with the non-cyst groups (P < 0.05). In conclusion, alternative protocols decreased the superovulatory response and increased poor embryo quality in Thai-Holstein crossbred. Also, the incidence of ovarian follicular cysts is higher in the EI group.

Synchronization of follicular wave emergence does not improve embryonic yield in superovulated ewes

Abstract The present study aimed to investigate the effects of a combination of progesterone with different doses of E-17β on following end points: (1) ovarian follicular dynamics and emergence of a new follicular wave, and (2) superovulatory response and embryo yield. In Experiment 1, 28 ewes were randomly divided into four groups (n = 7) to receive either 2.0 mg, 1.0 mg, 0.5 mg or none E-17β one day after insertion of a progesterone device. The different doses of estradiol similarly delayed the moment of follicular emergence (overall mean = 3.1 ± 1.0 days vs. control group = 0.86 ± 1.0 days; P < 0.01), but the emergence of the new wave showed greater synchronization with the 0.5 mg dosage of E-17β. In Experiment 2, sixty-two donor ewes received an internal progesterone release device (day -1) for 7 d and 1 d after the insertion of this device (day 0) were allocated randomly to receive 0.5 mg of E-17β or only the vehicle (control group). Superstimulation was initiated on day 3 with the administration of 133 mg of pFSH in eight decreasing doses. Contrary to expectations, the protocol with the administration of 0.5 mg E-17β did not improve the percentage of donors with > 2 CL, the number of CL and the production of embryos (P > 0.05). It was concluded that the combination of progesterone and 0.5 mg E-17β was more efficient in synchronizing the emergence of the new follicular wave, however this approach seems to be unnecessary in ewe's superovulation programs.

Ovarian responses and FSH profiles at superovulation with a single epidural administration of gonadotropin in the Thai-Holstein crossbreed

The conventional method of ovarian superstimulation requires multiple injections of gonadotropins which is time-consuming and may be stressful for the cows. This study was designed to determine whether a single epidural injection of FSH (EI group) would induce the superovulatory response in the Thai-Holstein crossbreed and evaluate FSH plasma hormone concentrations. Eight cows (replication = 3; n=24) were assigned to one of 2 treatments in switch back design. Control group (n=12): cows were received 400 mg FSH twice daily by intramuscularly for 4 days (80, 80, 60, 60, 40, 40, 20 and 20 mg), EI group (n=12): cows were received 400 mg FSH by single epidural injection. Data were collected in term of ovarian follicle responses, superovulatory responses, ova/embryo collection. FSH concentrations were examined using ELISA. The total follicular responses during oestrus were not different between treatments; however, the large follicles were less frequent (P < 0.01) while the medium follicle sizes were higher (P < 0.05) in the EI group. The plasma concentration of FSH in EI was dramatically increased within 2 hours before decreasing sharply thereafter (P < 0.01) and did not remain above baseline after 10 hours of administration. The embryo quality was better in the control than the EI groups (P < 0.05). Interestingly, the number of ovulation cysts in the EI group was 50%. The ovarian responses and embryo quality in the cows with cysts were worse compared with the non-cyst groups (P < 0.05). In conclusion, alternative protocols decreased the superovulatory response and increased poor embryo quality in Thai-Holstein crossbred. Also, the incidence of ovarian follicular cysts is higher in the EI group.(AU)

Relationship between superovulation and embryo production with ovarian follicular population before superovulatory treatment in Brazilian Bergamasca sheep / [Relação da resposta superovulatória e produção embrionária com a população folicular ovariana antes do tratamento superovulatório de ovelhas da raça Bergamácia Brasileira]

The objective of this study was to quantify the superovulatory response and embryo production of Brazilian Bergamasca sheep and to evaluate the link to the follicular condition before superovulatory treatment, as a reference for selection of donors with potential for superovulation. Follicular population of twenty-three sheep was evaluated by ultrasound during metestrus phase of the estrous cycle and divided into groups of low, medium and high follicular population. Subsequently, they were synchronized, superovulated with 133mg of pFSH, mated and subjected to embryo collection. The superovulatory response (9.0±3.3 vs 10.7±6.2 vs 13.8±7.1) and embryo production (4.0±3.8 vs 2.6±2.0 vs 1,8±4.0) were similar between groups (P>0.05). There was a positive correlation between the number of follicles during the metestrus phase and the number of corpus luteum with premature regression (PLR) (0.52) and a negative correlation between the recovery rate and PLR (-0.44) (P<0.05). The sheep that presented PLR had more follicles during metestrus (16.9±7.8 vs 12.7±3.2) and lower embryo recovery rate (38.8±29.3 vs 72.2±29.9) than those with functional CLs (P<0.05). Follicular quantification during metestrus phases was unable to identify donors with high embryo production. Animals with PLR had a larger follicular population during metestrus and lower embryo recovery rate.(AU)

O objetivo deste trabalho foi quantificar a resposta superovulatória e a produção embrionária de ovelhas Bergamácia Brasileira e relacioná-las com a condição folicular antes do tratamento superovulatório, como referência para seleção de doadoras com potencial para superovulação. Vinte e três ovelhas foram avaliadas quanto à população folicular por ultrassonografia na fase de metaestro do ciclo estral e divididas em grupos com baixa, média e alta população folicular. Posteriormente foram sincronizadas, superovuladas com 133mg de pFSH, acasaladas e submetidas à coleta de embriões. A resposta superovulatória (9,0±3,3 vs. 10,7±6,2 vs. 13,8±7,1) e a produção embrionária (4,0±3,8 vs. 2,6±2,0 vs. 1,8±4,0) foram semelhantes entre os grupos (P>0,05). Houve correlação positiva entre o número de folículos no metaestro e o número de corpos lúteos com regressão prematura (RPCL) (0,52) e correlação negativa entre a taxa de recuperação e RPCL (-0,44) (P <0,05). As ovelhas que apresentaram RPCL tiveram mais folículos no metaestro (16,9±7,8 vs. 12,7±3,2) e menor taxa de recuperação embrionária (38,8±29,3 vs. 72,2±29,9) do que as que apresentaram CLs funcionais (P<0,05). A quantificação folicular nas fases de metaestro não foi capaz de identificar doadoras com alto potencial de produção embrionária. Animais com RPCL tiveram maior população folicular no metaestro e menor recuperação de embriões.(AU)

Synchronization of follicular wave emergence does not improve embryonic yield in superovulated ewes

The present study aimed to investigate the effects of a combination of progesterone with different doses of E-17β on following end points: (1) ovarian follicular dynamics and emergence of a new follicular wave, and (2) superovulatory response and embryo yield. In Experiment 1, 28 ewes were randomly divided into four groups (n = 7) to receive either 2.0 mg, 1.0 mg, 0.5 mg or none E-17β one day after insertion of a progesterone device. The different doses of estradiol similarly delayed the moment of follicular emergence (overall mean = 3.1 ± 1.0 days vs. control group = 0.86 ± 1.0 days; P < 0.01), but the emergence of the new wave showed greater synchronization with the 0.5 mg dosage of E-17β. In Experiment 2, sixty-two donor ewes received an internal progesterone release device (day -1) for 7 d and 1 d after the insertion of this device (day 0) were allocated randomly to receive 0.5 mg of E-17β or only the vehicle (control group). Superstimulation was initiated on day 3 with the administration of 133 mg of pFSH in eight decreasing doses. Contrary to expectations, the protocol with the administration of 0.5 mg E-17β did not improve the percentage of donors with > 2 CL, the number of CL and the production of embryos (P > 0.05). It was concluded that the combination of progesterone and 0.5 mg E-17β was more efficient in synchronizing the emergence of the new follicular wave, however this approach seems to be unnecessary in ewes superovulation programs.(AU)

Avaliação da eficiência de reutilização do CIDR® em protocolos de superovulação de ovelhas / Evaluation of efficiency of the reuse of CIDR® in sheep superovulation protocols

Sheep farming is an area of veterinary medicine of great importance at regional and national level, among the easily found breeds of economic relevance in northeastern Brazil are Morada Nova and Santa Inês. In addition, ultrasonography has been used systematically in animals superovulatory response to the sheep supervoulation protocols. In order to assess, based on the number of yellow bodies and number of viable embryos produced, the efficiency of the reuse of CIDR® in superovulation protocols in sheep using ultrasonography in color Doppler mode, a superovulatory protocol was performed in a total 40 sheep, with G-USED when 10 Morada Nova ewes and 10 Santa Inês ewes received reused CIDR® and G-NOVO when 10 Morada Nova ewes and 10 Santa Inês ewes received new CIDR®. The mean and standard error of yellow bodies was 10.35±1.33 for G-USED and 9.25±1.65 for G-NOVO, while the number of viable embryos was 6.50±2, 54 for G-USED and 8.25±1.49 for G-NEW. Thus, the reuse of CIDR® demonstrated efficiency in superovulation and did not interfere with the development of corpus luteum and the production of quality transferable embryos in sheep.

Avaliação da eficiência de reutilização do CIDR® em protocolos de superovulação de ovelhas / Evaluation of efficiency of the reuse of CIDR® in sheep superovulation protocols

Sheep farming is an area of veterinary medicine of great importance at regional and national level, among the easily found breeds of economic relevance in northeastern Brazil are Morada Nova and Santa Inês. In addition, ultrasonography has been used systematically in animals superovulatory response to the sheep supervoulation protocols. In order to assess, based on the number of yellow bodies and number of viable embryos produced, the efficiency of the reuse of CIDR® in superovulation protocols in sheep using ultrasonography in color Doppler mode, a superovulatory protocol was performed in a total 40 sheep, with G-USED when 10 Morada Nova ewes and 10 Santa Inês ewes received reused CIDR® and G-NOVO when 10 Morada Nova ewes and 10 Santa Inês ewes received new CIDR®. The mean and standard error of yellow bodies was 10.35±1.33 for G-USED and 9.25±1.65 for G-NOVO, while the number of viable embryos was 6.50±2, 54 for G-USED and 8.25±1.49 for G-NEW. Thus, the reuse of CIDR® demonstrated efficiency in superovulation and did not interfere with the development of corpus luteum and the production of quality transferable embryos in sheep.(AU)

Superovulação em éguas da raça Crioula e Quarto de Milha com extrato de pituitária equina (EPE) / Superovulatory protocol with equine pituitary extract (EPE) in mares Crioula and the Quarter Horse

Este trabalho compara a resposta superovulatória de éguas doadoras de embriões das raças Quarto de Milha (QM) e Crioula, utilizando um protocolo com baixa dose de extrato de pituitária equina (EPE). Oito éguas QM e seis éguas Crioulas foram acompanhadas durante 3 ciclos estrais consecutivos, sendo que cada ciclo corresponde a um grupo. Grupo Controle – monitoramento do crescimento folicular até a ovulação; Grupo EPE – monitoramento ultrassonográfico até que os folículos atingissem cerca de 20 mm de diâmetro e, posteriormente, administração de 7 mg de EPE, duas vezes ao dia, até a indução da ovulação com 2500UI de hCG; Grupo Pós-EPE – idem ao grupo controle. Os dados foram submetidos à análise de variância, utilizando o procedimento GLM do pacote estatístico SAS, sendo previamente testadas para normalidade dos resíduos, e as médias comparadas pelo teste de Tukey ao nível de 5%. Nas éguas Crioulas tratadas com EPE houve um aumento no número de ovulações (p=0,0534), com média de 3,33±2,06 quando comparadas aos grupos controle e pós-EPE e às éguas da raça QM (2,00±0,53). O tratamento com EPE na dose preconizada permitiu uma melhor resposta superovulatória e produção embrionária nas éguas Crioulas, quando comparadas com as éguas Quarto de Milha.

This study compared the superovulatory response of embryos donor mares of Quarter Horse (QH) and Crioula using a protocol with low dose of equine pituitary extract (EPE). Eight QH mares and six Crioula mares were monitored during 3 consecutive estrous cycles, with each cycle corresponds to a group. Control Group - monitoring of follicle growth up to the ovulation; EPE group - when the follicles reached 20 mm in diameter were administered 7 mg EPE twice daily. When the follicles achieved a diameter 35 mm, the ovulation was induced with 2500UI hCG; Post-EPE Group - idem to the control group. Data were analyzed using GLM procedure of the SAS statistical package. The variables were submitted to the Tukey’s test and least square means adjusted for multiple comparisons using the Tukey-Kramer’s test, with significance level of 5%. Values are presented as mean ± SD. In the Crioula mares treated with EPE, there was an increase in the number of ovulations (p =0.0534) with a mean of 3.33 ± 2.06 ovulations when compared to the control and post-EPE groups, and mares QM. (2.00±0.53). Treatment with EPE in the recommended dose allowed better superovulatory response and rate of embryo recovery in Crioula mares when compared to the QM mares.

Superovulação em éguas da raça Crioula e Quarto de Milha com extrato de pituitária equina (EPE) / Superovulatory protocol with equine pituitary extract (EPE) in mares Crioula and the Quarter Horse

Este trabalho compara a resposta superovulatória de éguas doadoras de embriões das raças Quarto de Milha (QM) e Crioula, utilizando um protocolo com baixa dose de extrato de pituitária equina (EPE). Oito éguas QM e seis éguas Crioulas foram acompanhadas durante 3 ciclos estrais consecutivos, sendo que cada ciclo corresponde a um grupo. Grupo Controle monitoramento do crescimento folicular até a ovulação; Grupo EPE monitoramento ultrassonográfico até que os folículos atingissem cerca de 20 mm de diâmetro e, posteriormente, administração de 7 mg de EPE, duas vezes ao dia, até a indução da ovulação com 2500UI de hCG; Grupo Pós-EPE idem ao grupo controle. Os dados foram submetidos à análise de variância, utilizando o procedimento GLM do pacote estatístico SAS, sendo previamente testadas para normalidade dos resíduos, e as médias comparadas pelo teste de Tukey ao nível de 5%. Nas éguas Crioulas tratadas com EPE houve um aumento no número de ovulações (p=0,0534), com média de 3,33±2,06 quando comparadas aos grupos controle e pós-EPE e às éguas da raça QM (2,00±0,53). O tratamento com EPE na dose preconizada permitiu uma melhor resposta superovulatória e produção embrionária nas éguas Crioulas, quando comparadas com as éguas Quarto de Milha.(AU)

This study compared the superovulatory response of embryos donor mares of Quarter Horse (QH) and Crioula using a protocol with low dose of equine pituitary extract (EPE). Eight QH mares and six Crioula mares were monitored during 3 consecutive estrous cycles, with each cycle corresponds to a group. Control Group - monitoring of follicle growth up to the ovulation; EPE group - when the follicles reached 20 mm in diameter were administered 7 mg EPE twice daily. When the follicles achieved a diameter 35 mm, the ovulation was induced with 2500UI hCG; Post-EPE Group - idem to the control group. Data were analyzed using GLM procedure of the SAS statistical package. The variables were submitted to the Tukeys test and least square means adjusted for multiple comparisons using the Tukey-Kramers test, with significance level of 5%. Values are presented as mean ± SD. In the Crioula mares treated with EPE, there was an increase in the number of ovulations (p =0.0534) with a mean of 3.33 ± 2.06 ovulations when compared to the control and post-EPE groups, and mares QM. (2.00±0.53). Treatment with EPE in the recommended dose allowed better superovulatory response and rate of embryo recovery in Crioula mares when compared to the QM mares.(AU)

Produção de embriões em ovinos Morada Nova e Somalis Brasileira / Embryo production in Morada Nova and Somalis Brasileira ewes

Superovulatory response and embryo yield in 19 Morada Nova and 20 Somalis Brasileira ewes was analyzed. All animals were synchronized with the insertion of an intravaginal device (CIDR®) on Day 0, replaced by a new device on Day 7, which remained in place until Day 14 and superovulated with 133mg of porcine FSH (pFSH) in decreasing doses at 12h intervals from Day 12 until Day 15 of the treatment, and a single dose of equine chorionic gonadotropin (eCG, 200UI) on Day 14 (i.e., administered in CIDR removal). Fifty hours after CIDR® removal, females were inseminated by laparoscopy. All embryos were recovered by laparotomy 5 days after insemination. Sheep which responded to the superovulation protocol (P>0.05) included 74% of the Morada Nova ewes and 50% of the Somalis Brasileira ewes. Morada Nova showed better results (P<0.05) than Somalis Brasileira in number of ovulations (15.38 ± 5.24 vs. 10.56 ± 2.83), total structures (11.00 ± 7.55 vs. 3.33 ± 1.94) and embryo yields (6.79 ± 5.35 vs. 2.90 ± 2.18). Despite the high fertilization rate, degenerate embryo rate was high for both breeds, with an overall rate of 39% (57/145). In conclusion, superovulatory response and embryo yields in Morada Nova ewes were considered sufficient to justify the use of this procedure in genetic resources conservation programs. However, improvements to embryo quality and control of precocious regression of corpus luteum are necessary to produce better results in the MOET program, with minimal variations and maximum embryo yield in Morada Nova and Somalis Brasileira ewes.(AU)

Produção de embriões em ovinos Morada Nova e Somalis Brasileira / Embryo production in Morada Nova and Somalis Brasileira ewes

Superovulatory response and embryo yield in 19 Morada Nova and 20 Somalis Brasileira ewes was analyzed. All animals were synchronized with the insertion of an intravaginal device (CIDR®) on Day 0, replaced by a new device on Day 7, which remained in place until Day 14 and superovulated with 133mg of porcine FSH (pFSH) in decreasing doses at 12h intervals from Day 12 until Day 15 of the treatment, and a single dose of equine chorionic gonadotropin (eCG, 200UI) on Day 14 (i.e., administered in CIDR removal). Fifty hours after CIDR® removal, females were inseminated by laparoscopy. All embryos were recovered by laparotomy 5 days after insemination. Sheep which responded to the superovulation protocol (P>0.05) included 74% of the Morada Nova ewes and 50% of the Somalis Brasileira ewes. Morada Nova showed better results (P<0.05) than Somalis Brasileira in number of ovulations (15.38 ± 5.24 vs. 10.56 ± 2.83), total structures (11.00 ± 7.55 vs. 3.33 ± 1.94) and embryo yields (6.79 ± 5.35 vs. 2.90 ± 2.18). Despite the high fertilization rate, degenerate embryo rate was high for both breeds, with an overall rate of 39% (57/145). In conclusion, superovulatory response and embryo yields in Morada Nova ewes were considered sufficient to justify the use of this procedure in genetic resources conservation programs. However, improvements to embryo quality and control of precocious regression of corpus luteum are necessary to produce better results in the MOET program, with minimal variations and maximum embryo yield in Morada Nova and Somalis Brasileira ewes.(AU)

PRODUÇÃO E COLETA DE EMBRIÕES PELO MÉTODO NÃO CIRÚRGICO EM OVELHAS MORADA NOVA

O objetivo do presente estudo foi viabilizar a produção e coleta de embriões pelo método não cirúrgico (NSER) em ovelhas Morada Nova, uma vez que o uso desta técnica pode contribuir para o Programa de Conservação de Recursos Genéticos desta importante raça brasileira, aumentando o número de embriões nos bancos de germoplasma. Este estudo foi realizado em duas etapas sendo que na primeira, foi comparada a produção de embriões in vivo de doadoras submetidas a diferentes protocolos de sincronização de estro e/ou superovulação. As ovelhas receberam esponjas intravaginais embebidas em 60 mg de acetato de medroxiprogesterona (MAP), as quais foram mantidas por seis (G6; n = 12), nove (G9; n = 12) ou 12 (G12; n = 12) dias. Metade das ovelhas em cada grupo permaneceu sincronizada (SYNCH) enquanto a outra metade foi superovulada (SOV) com hormônio folículo estimulante suíno (pFSH). Das variáveis analisadas, houve diferença no início do estro que ocorreu 10-12 h depois (P <0,01) em ovelhas G9SYNCH quando comparadas a G6SYNCH e G12SYNCH, e a duração do estro foi 19 h maior (P <0,01) em G9SOV do que em G6SOV. A duração média do procedimento de coleta foi de 32,6 ± 1,3 min. Pelo menos uma estrutura foi recuperada em 85,7% das ovelhas sincronizadas e em 87,5% das superovuladas. As taxas de recuperação de embriões viáveis também foram semelhantes (P> 0,05) para os grupos sincronizados e superovulados: G6 (1,0 ± 0,3 e 2,5 ± 1,5), G9 (1,3 ± 0,5 e 4,8 ± 2,0) e G12 (1,0 ± 0,3 e 4,8 ± 2,3). Conclui-se que o pré-tratamento com diferentes durações de progesterona pode ser empregado em ovelhas Morada Nova, resultando em taxas de recuperação embrionária viáveis em animais sincronizados e/ou superovulados. Na segunda etapa, procurou-se correlacionar quantidade de folículos acima de 2 mm de diâmetro no momento da última dose de pFSH com a resposta superovultória (número de corpos lúteos) e a produção de embriões (quantidade de blastocisto e qualidade embrionária) em ovelhas sincronizadas com os dois tratamentos mais promissores do experimento anterior (G9 e G12). A contagem total de folículos com diâmetro 2 mm dobrou entre a 1ª e a 6ª dose de pFSH em ambos os grupos de ovelhas (P <0,05). As respostas ao estro não variaram entre os dois subconjuntos de ovelhas Morada Nova e foram em média 95,2%. Corpos lúteos (CL) foram detectados em 85,0% e 60,0% das ovelhas que apresentaram cio, respectivamente, nos grupos G9 e G12. A NSER foi concluída com sucesso em 86,2% de todas as ovelhas estudadas. O número médio de CLs por doadora e por doadora lavada com sucesso foi maior (P <0,05) no G12 (12,3 ± 1,7 / 12,1 ± 1,9) do que no G9 (7,9 ± 1,4 / 8,2 ± 1,6). O número médio de blastocistos recuperados e de embriões viáveis foi maior (P <0,05) para G12 (5,8 ± 1,9 e 3,7 ± 1,7) do que para G9 (3,5 ± 1,1 e 0,8 ± 0,3, respectivamente). A contagem total de folículos no momento da aplicação da 6ª dose de pFSH no grupo G12 foi positivamente correlacionada (P <0,05) com o número de CLs (r = 0,95) e com o de embriões viáveis (r = 0,91). Conclui-se que o protocolo de sincronização de estro baseado na utilização de P4 por 12 dias resultou em melhores resultados superovulatórios quando comparado ao protocolo de 9 dias e que a contagem total de folículos na última dose de pFSH foi um bom preditor de resposta superovulatória apenas nas ovelhas tratadas com P4 por 12 dias.

The objective of the present study was to enable the production and collection of embryos by the non-surgical method (NSER) in Morada Nova ewes, since the use of this procedure can contribute to the Program for the Conservation of Genetic Resources of this important Brazilian breed, increasing the number of embryos in germplasm banks. This study was carried out in two experiments; the first one compared the production of embryos in vivo from donors submitted to different estrous and / or superovulation synchronization protocols. The ewes received intravaginal sponges soaked in 60 mg of medroxyprogesterone acetate (MAP), which were maintained for six (G6; n = 12), nine (G9; n = 12) or 12 (G12; n = 12) days. Half of the ewes in each group remained synchronized (SYNCH) while the other half were superovulated (SOV) with porcine follicle stimulating hormone (pFSH). Of the analyzed variables, there was a difference in the beginning of estrus that occurred 10-12 h later (P <0.01) in G9SYNCH ewes when compared to G6SYNCH and G12SYNCH, and the duration of estrus was 19 h longer (P <0.01) in G9SOV than in G6SOV. The average duration of the collection procedure was 32.6 ± 1.3 min. At least one structure was recovered in 85.7 and 87.5% of the synchronized and superovulated ewes, respectively. The recovery rates of viable embryos were also similar (P> 0.05) for the synchronized and superovulated groups: G6 (1.0 ± 0.3 and 2.5 ± 1.5), G9 (1.3 ± 0, 5 and 4.8 ± 2.0) and G12 (1.0 ± 0.3 and 4.8 ± 2.3). It is concluded that pretreatment with different progesterone durations can be used in Morada Nova ewes, resulting in viable embryo recovery rates in synchronized and / or superovulated animals. In the second experiment, the number of follicles 2 mm at the time of the last dose of pFSH was correlate with the superovultory response (number of corpus luteum) and the production of embryos (number of blastocyst and embryonic quality) in synchronized ewes with the two most promising treatments from the previous experiment (G9 and G12). The total count of follicles 2 mm doubled from the 1st to the 6th pFSH dose in both groups of ewes (P < 0.05). Estrus responses did not vary between the two subsets of Morada Nova sheep and they averaged 95.2%. Corpora lutea (CL) were detected in 85.0% and 60.0% of ewes going estrus in G9 Days and G12 Days groups, respectively. NSER was successfully completed in 86.2% of all ewes studied (P > 0.05). The mean number of CL per ewe/successfully flushed donor ewe was greater (P < 0.05) in G12 (12.3 ± 1.7/12.1 ± 1.9) than in G9 (7.9 ± 1.4/8.2 ± 1.6). Mean numbers of retrieved blastocysts and viable embryos were greater (P > 0.05) for G12 (5.8 ± 1.9 and 3.7 ± 1.7) than for G9 ewes (3.5 ± 1.1 and 0.8 ± 0.3, respectively). The total follicle count when applying the 6th dose of pFSH in the G12 group was positively correlated (P <0.05) with the number of CLs (r = 0.95) and with the number of viable embryos (r = 0.91). It was concluded that estrus synchronization protocol based on the use of P4 for 12 days resulted in better superovulatory results when compared to the 9 days protocol and that the total follicle count in the last dose of pFSH was a good predictor of superovulatory response only in Morada Nova ewes treated with P4 for 12 days.

AVALIAÇÃO DE PERDAS GESTACIONAIS EM BOVINOS DE LEITE EM PROGRAMAS DE BIOTÉCNICAS DA REPRODUÇÃO E A PARTICIPAÇÃO DO Neospora caninum

O uso de biotécnicas como ferramenta de manejo reprodutivo, tem evoluído de forma significativa nas últimas décadas, proporcionando aumento da eficiência reprodutiva em bovinos de leite. Dentre as biotécnicas, Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF), Transferência de Embriões (TE) e a Fertilização in vitro (FIV), são as que mais evoluíram e são atualmente utilizadas em programas reprodutivos de rebanhos leiteiros. Apesar da capacidade destas é necessária a compreensão dos fatores relacionados ao seu sucesso para a aplicação das mesmas, desta forma o desenvolvimento de estudos que avaliem a resposta superovulatória, as taxas de prenhez e perdas gestacionais podem contribuir para o aumento da eficácia. O rigoroso controle sanitário dos rebanhos, torna-se imprescindível para que os respectivos programas possam proporcionar os ganhos esperados em eficiência reprodutiva. Desta forma, dois experimentos foram desenvolvidos. O primeiro experimento teve como objetivo detectar, através da técnica de PCR, o DNA de Neospora caninum em embriões oriundos de vacas soropositivas em protocolos de superovulação para transferência de embriões. Entre receptoras de embriões provenientes de doadoras soropositivas e soronegativas não foram encontradas diferenças na taxa de prenhez (60 e 57,1%, P=0,57), perda gestacional (50% e 43,8%, P=0,79) e número de embriões produzidos após superovulação (40 e 51, P=0.64). Não houve também alteração do status sorológicos das receptoras, independente do status da doadora, assim como não foram identificados o DNA do protozoário em embriões e amostras de PBS da lavagem uterina realizada para a coleta de embriões. Assim, pode-se demonstrar que a técnica de TE é segura e pode ser utilizada em programas de controle da neosporose, ressaltando que apesar da similaridade no número de embriões, houve diferença significativa no número de estruturas congeláveis (25% e 74%, P<0,0001) e transferíveis (27,5% e 78,4%, P<0,0001). O segundo estudo avaliou o efeito do aumento da progesterona circulante (P4) pela indução da formação de corpo lúteo acessório (CL) em receptoras de embriões clonados (TNCS) e produzidos in vitro (FIV). Como esperado, o tratamento com hCG causou ovulação e aumentou a P4 circulante, embora o hCG tendesse a aumentar as prenhezes por TE (P/TE) para receptoras de embriões TNCS nos dias 28 (P = 0,07) e 42 (P = 0,09). As taxas de prenhez foram semelhantes para FIV e embriões TNCS nos dias 28 e 33, no entanto, P/TE foi maior para FIV do que TNCS no dia 42 e mais tarde, devido a maiores (P = 0,05) perdas de gestação no TNCS (44,4%) do que embriões FIV (15,0%) dos dias 33-42. Assim, o aumento da P4 circulante pode melhorar a fertilidade em receptoras de embriões TNCS, como evidenciado pela tendência do tratamento com hCG para aumentar P/ET de embriões TNCS. Conclui-se que a TE é uma técnica viável para o melhoramento genético do rebanho, podendo ser utilizadas também no controle de enfermidades como a neosporose bovina

The use of biotechniques as a reproductive management tool has evolved significantly in recent decades, increasing reproductive efficiency in dairy cattle. Among the biotechniques, FixedTime Artificial Insemination (FTAI), Embryo Transfer (ET) and in vitro Fertilization (IVF) the most evolved and currently used in reproductive programs for dairy herds. Despite their capacity, it is necessary to understand the factors related to their success for their application, thus the development of studies that assess the superovulatory response, pregnancy rates and pregnancy losses can contribute to increased effectiveness. The strict sanitary control of the herds becomes essential so that the respective programs can provide the expected gains in reproductive efficiency. In this way, two experiments were developed. The first experiment aimed to detect, through the PCR technique, the DNA of Neospora caninum in embryos from seropositive cows in superovulation protocols for embryo transfer. Among recipients of embryos from seropositive and seronegative donors, no differences were found in the pregnancy rate (60 and 57.1%, P=0.57), gestational loss (50% and 43.8%, P=0.79) and number of embryos produced after superovulation (40 and 51, P=0.64). There was also no change in the serological status of the recipients, regardless of the status of the donor, as well as the protozoan DNA in embryos and PBS samples from the uterine lavage performed for embryo flushing were not identified. Thus, it can be demonstrated that the TE technique is safe and can be used in neosporosis control programs, noting that despite the similarity in the number of embryos, there was a significant difference in the number of freezeable (25% and 74%, P <0.0001) and transferable (27.5% and 78.4%, P<0.0001) structures. The second study evaluated the effect of increasing circulating progesterone (P4) by inducing accessory corpus luteum (CL) formation in recipients of cloned (SCNT) and in vitro produced (IVF) embryos. As expected, treatment with hCG caused ovulation and increased circulating P4, although hCG tended to increase pregnancies by ET (P/ET) for SCNT embryo recipients on days 28 (P = 0.07) and 42 (P = 0.09). Pregnancy rates were similar for IVF and SCNT embryos on days 28 and 33, however, P/ET was higher for IVF than SCNT on day 42 and later, due to higher (P = 0.05) pregnancy losses in SCNT (44.4%) than IVF embryos (15.0%) from days 33-42. Thus, increasing circulating P4 may improve fertility in recipients of SCNT embryos, as evidenced by the tendency of treatment with hCG to increase P/ET of SCNT embryos. Although additional research is needed, it can be concluded that ET is a viable technique for the genetic improvement of the herd, which can also be used to control diseases such as bovine neosporosis

RESPOSTA SUPEROVULATÓRIA E PRODUÇÃO IN VIVO DE EMBRIÕES EM DIFERENTES RAÇAS OVINAS NATIVAS BRASILEIRAS

Com finalidade de aumentar o rebanho e a variabilidade genética, produtores de ovinos, estão optando pela biotécnica de múltipla ovulação e transferência de embriões. Porém, está técnica apresenta resultados imprevisíveis, devido a fatores intrínsecos e extrínsecos, dos quais destaca-se o efeito raça. Portanto, esse estudo avaliou o efeito raça sobre a resposta superovulatória e a produção in vivo de embriões em ovelhas nativas brasileiras (Morada Nova, Santa Inês e Somalis Brasileira). Trinta ovelhas multíparas (n = 10/ raça) foram submetidas a protocolo de nove dias de duração à base de progesterona e tratamento superovulatório com 133 mg de FSH. Nos Dias 11 (36 horas após a remoção do dispositivo) e 15 (12 horas antes da colheita não cirúrgica de embriões), os animais foram submetidos às análises ultrassonográficas em modo-B e Doppler para avaliação da população ovariana e características de perfusão ovariana. A colheita transcervical dos embriões foi realizada 7 dias após a remoção do dispositivo. Os dados foram submetidos aos testes ANOVA, teste de Tukey e teste de Bartlett; e as correlações foram testadas pelo teste de Spearman (p < 0,05). O número de folículos médios (4,0 a 5,99 mm) no Dia 11 foi maior (p = 0,0025) em ovelhas Santa Inês e Somalis Brasileira comparadas às ovelhas Morada Nova. O número de corpos lúteos e o status Superovulatório no Dia 15 foram maiores (p < 0,0001) para ovelhas Santa Inês (15,3 ± 1,4 e 2,4 ± 0,2), seguido pelas ovelhas Somalis Brasileira (10,4 ± 0,8 e 1,5 ± 0,2) e então pelas ovelhas Morada Nova (5,5 ± 1,6 e 0,8 ± 0,3). A área ovariana (p = 0,02), área de fluxo sanguíneo (p= 0,05) e porcentagem da área dopller (p = 0,007) tiveram maiores valores no Dia 15 em relação ao Dia 11 para as ovelhas Santa Inês e Somalis Brasileira. Para as características de fluxo sanguíneo de alta velocidade foram encontrados maiores valores no Dia 15 em relação ao Dia 11, independentemente da raça. Para cada raça foram registradas distintas correlações entre características ovarianas e resposta superovulatória e produção de embriões. Em conclusão, houve influência da raça sobre as respostas superovulatórias e características da vascularização ovariana. No entanto, a produção de embriões foi similar entre as raças de ovelhas nativas brasileiras.

In order to increase the herd and genetic variability, sheep producers are opting for multiple ovulation and embryo transfer. This technique, however, provides unpredictable results due to intrinsic and extrinsic factors. Among these factors the breed effect stands out. The present study assessed if the breed effect influences the follicular population, ovarian blood perfusion, superovulatory response, and the in vivo production of embryos in native Brazilian sheep breeds (Morada Nova, Santa Inês and Somalis Brasileira). Thirty multiparous ewes (n=10/breed) received intravaginal devices impregnated with 0.33 g of progesterone for nine days and superovulatory treatment with 133 mg of FSH started 60 h before the device removal. On Days 11 (36h after device removal) and 15 (12h before nonsurgical embryo recovery, NSER) the ewes were submitted to B-mode and Doppler ultrasonography to evaluate the ovarian population and characteristics of ovarian blood perfusion. NSER was performed seven days after device removal. The number of medium follicles (4.0 to 5.99 mm) on Day 11 was greater (p=.0025) in Santa Inês and Somalis Brasileira compared to Morada Nova ewes. The number of corpora lutea and superovulatory status on Day 15 was greater (p<0.0001) for Santa Inês (15.3±1.4 and 2.4±0.2), followed by Somalis Brasileira (10.4±0.8 and 1.5±0.2) and then Morada Nova ewes (5.5±1.6 and 0.8±0.3). The ovarian area (DA, p=.02), blood flow area (TA, p=.05), and DA/TAx100% (p=.007) had greater values on Day 15 in relation to Day 11 for the Santa Inês and Somalis Brasileira ewes. The high-velocity blood flow characteristics had greater values on Day 15 in relation to Day 11, regardless of breed. For each breed, different correlations were recorded between ovarian blood flow characteristics and superovulatory response and embryo yield. In conclusion, there was an influence of the breed effect on the number of medium follicles, superovulatory responses and for characteristics of ovarian blood perfusion; however, the in vivo embryo production was similar among native Brazilian sheep breeds.

Resposta superovulatória e produção embrionária de ovelhas da raça Bergamácia Brasileira

O objetivo deste trabalho foi quantificar a resposta superovulatória e produção embrionária de ovelhas Bergamácia Brasileira e relacioná-las com a condição folicular antes do tratamento superovulatório, como referência para seleção de doadoras com potencial para superovulação. Vinte e três ovelhas foram avaliadas quanto a população folicular por ultrassonografia na fase de metaestro do ciclo estral e divididas em grupos com baixa, média e alta população folicular. Posteriormente foram sincronizadas, superovuladas com 133mg de pFSH, acasaladas e submetidas a coleta de embriões. A resposta superovulatória (9,0±3,3 vs 10,7±6,2 vs 13,8±7,1) e produção embrionária (4,0±3,8 vs 2,6±2,0 vs 1,8±4,0) foram semelhantes entre os grupos (P>0,05). Houve correlação positiva entre o número de folículos no metaestro e o número de corpos lúteos com regressão prematura (RPCL) (0,52) e correlação negativa entre a taxa de recuperação e RPCL (-0,44) (P <0,05). As ovelhas que apresentaram RPCL tiveram mais folículos no metaestro (16,9±7,8 vs 12,7±3,2) e menor taxa de recuperação embrionária (38,8±29,3 vs 72,2±29,9) do que as que apresentaram CLs funcionais (P<0,05). A quantificação folicular nas fases de metaestro não foi capaz de identificar doadoras com alto potencial de produção embrionária. Animais com RPCL tiveram maior população folicular no metaestro e menor recuperação de embriões.

The objective was to quantify the superovulatory response and embryonic production of Brazilian Bergamacia sheep and to relate them to the follicular condition before superovulatory treatment, as a reference for selection of donors with potential for superovulation. Twenty-three sheep were evaluated for the follicular population by ultrasound in the metestrus phase of the estrous cycle and divided into groups with low, medium and high follicular population. Subsequently, they were synchronized, superovulated with 133mg of pFSH, mated and subjected to embryo collection. The superovulatory response (9.0±3.3 vs 10.7±6.2 vs 13.8±7.1) and embryonic production (4.0±3.8 vs 2.6±2.0 vs 1,8±4.0) were similar between groups (P>0.05). There was a positive correlation between the number of follicles in the metestrus and the number of corpus luteum with premature regression (PLR) (0.52) and a negative correlation between the recovery rate and PLR (-0.44) (P<0.05). The sheep that presented PLR had more follicles in the metestrus (16.9±7.8 vs 12.7±3.2) and a lower embryo recovery rate (38.8±29.3 vs 72.2±29.9) than those with functional CLs (P<0.05). Follicular quantification in the metestrus phases was not able to identify donors with high potential for embryonic production. Animals with PLR had a larger follicular population in the metestrus and less embryo recovery

Addition of sucrose on cryoprotectant solution of vitrification enhances the quality of Dorper sheep embryos produced in vivo / Adição de sacarose na solução crioprotetora de vitrificação melhora a qualidade de embriões ovinos Dorper produzidos in vivo

This study aimed to evaluate the efficacy of adding sucrose in vitrification solution of ovine embryos produced in vivo. Forty Dorper ewes were selected and superovulated. Immediately prior to the embryo collection by laparotomy, a laparoscopy was performed to verify the superovulatory response. The recovered flushing was followed by embryo evaluation and embryos were divided in two experimental groups where embryos from Control group were submitted to a traditional vitrification protocol and embryos from Sucrose group to a modified vitrification protocol with sucrose. After warming, embryos were again divided regarding cryoprotectant removal (Indirect) or not (Direct). The embryo quality was classified as embryos of degrees I (excellent or good), II (regular), III (poor) and IV (dead or degenerate). It was also verified the homogeneity of mass, occurrence of embryonic mass retraction and rupture of pellucid zone. The results were expressed as percentages and were subjected to Chi-square test with P 0.05. The embryos vitrified in the presence of sucrose had lower proportions of lower-quality embryos after warming (22.20 vs. 44.50%), higher percentages of homogeneous embryos after warming (63.89 vs. 38.89 %) while concerning other parameters there was no difference between these groups. It can be concluded that the addition of 0.4 M sucrose during vitrification improves the embryo quality.(AU)

Este estudo objetivou avaliar a eficácia da adição de sacarose na solução de vitrificação de embriões ovinos produzidos in vivo. Foram selecionadas 40 ovelhas da raça Dorper as quais foram superovuladas. Imediatamente antes da colheita de embriões por laparotomia, uma laparoscopia foi realizada para verificar a resposta superovulatória. O lavado recuperado foi submetido à procura e avaliação de embriões e estes foram divididos em dois grupos experimentais, onde os embriões do Grupo Controle foram submetidos ao protocolo tradicional de vitrificação e os embriões do Grupo Sacarose a um protocolo modificado de vitrificação com sacarose. Após a descongelação, os embriões foram novamente divididos considerando a remoção (Indireto) ou não (Direto) do crioprotetor. A qualidade embrionária foi classificada como embriões de graus I (excelente ou bom), II (regular), III (pobre) e IV (morto ou degenerado). Foi também verificada a homogeneidade da massa, ocorrência de retração da massa e ruptura de zona pelúcida. Os resultados foram expressos em porcentagem e foram submetidos ao teste do Qui-quadrado com P < 0.05. Os embriões vitrificados na presença de sacarose apresentaram menores proporções de embriões de menor qualidade após a descongelação (22,20 vs. 44,50%), e maiores percentuais de embriões homogêneos após a descongelação (63,89 vs. 38,89%) enquanto com relação aos demais parâmetros não existiram diferenças entre grupos. Pode-se concluir que a adição de 0,4 M de sacarose durante os procedimentos de vitrificação e descongelação beneficia a qualidade embrionária.(AU)

Effect of pFSH dose reduction on in vivo embryo production in Dorper ewes / Efeito da redução da dose de pFSH na produção in vivo de embriões em ovelhas Dorper

To evaluate the effect of pFSH dose on the in vivo embryo production of Dorper ewes in the semi-arid northeast of Brazil, 40 sheep females were distributed into two groups of 20 animals that received intravaginal CIDR for 14 days, and two days before device removal, they received one of the following treatments: in the FSH200 group, the ewes received 200 mg of pFSH; and in the FSH128 group, the ewes received a total of 128 mg in decreasing doses every 12 h. Beginning 12 h after the conclusion of the treatments, estrus detection was performed every four hours using two Dorper rams of proven fertility. The ewes were mated at estrus onset and 24 hours later. Seven days after intravaginal device removal, the superovulatory response was evaluated, and embryo collection was performed using the laparotomy method. The recovered flushings were subjected to embryo searches under a stereomicroscope and classified according to their qualities. Analyses of variance (ANOVAs) and LSD tests were used to compare the different parameters. The data expressed as percentages were analysed by chi-square test. The ovulation rate was higher in the FSH200 group, which had 16.3 ± 0.3 corpora lutea (CL), than in the FSH128 group, which had 11.3 ± 0.3 CL (P 0.05). However, higher fertilization rate (83.6% vs. 62.4%) and higher transferable (86.0% vs. 71.6%) and freezable (67.9% vs. 40.8%) embryo rates were observedin the FSH 128 group compared with the group that received 200 mg. Furthermore, no significant differences in the remaining parameters were observed between the experimental groups (P>0.05), demonstrating that pFSH dose reduction promoted a greater production of freezable and transferableembryos in Dorper ewes subjected to MOET.(AU)

Com o objetivo de avaliar o efeito da redução de pFSH na produção in vivo de embriões de ovelhas da raça Dorper exploradas no semiárido do Nordeste do Brasil, 40 fêmeas ovinas foram distribuídas em dois grupos com 20 animais, os quais receberam um CIDR intravaginal por 14 dias e dois dias antes da remoção do dispositivo receberam um tratamento superovulatório proposto: grupo FSH200 onde as ovelhas receberam 200 mg de pFSH, enquanto o grupo FSH128 totalizou 128 mg em doses decrescentes intervaladas por 12 horas. Doze horas após o final do tratamento, foi realizada a detecção de estro, a cada quatro horas, utilizando dois carneiros Dorper, de fertilidade comprovada. As ovelhas foram cobertas no início do estro e 24 horas depois. Sete dias após a retirada do dispositivo intravaginal, foi realizada a avaliação da resposta superovulatória e a colheita de embriões pelo método de laparotomia. O lavado recuperado foi submetido à procura de embriões em estereomicroscópio e classificados de acordo com sua qualidade. Para comparação dos diversos parâmetros, foi utilizada a Análise de Variância (ANOVA), seguida da realização do teste LSD. Os dados expressos em porcentagem foram submetidos ao Teste de Qui-quadrado. A taxa de ovulação foi superior no grupo FSH200 com 16,3 ± 0,3 corpos lúteos (CL) quando comparado ao grupo FSH128 com de 11,3 ± 0,3 CL (P 0,05). Entretanto, foi verificada uma maior taxa de fecundação (83,6% vs. 62,4%) e uma maior taxa de embriões transferíveis (86,0% vs.71,6%) e congeláveis (67,9% vs. 40,8%) no grupo FSH 128 quando comparado ao grupo que recebeu200 mg. Além disso, não foi observada qualquer diferença significativa entre os grupos experimentais, para os demais parâmetros avaliados demonstrando que a redução da dose de pFSH promove maior produção de embriões congeláveis e transferíveis em ovinos Dorper submetidos à MOTE.(AU)

Effect of pFSH dose reduction on in vivo embryo production in Dorper ewes / Efeito da redução da dose de pFSH na produção in vivo de embriões em ovelhas Dorper

To evaluate the effect of pFSH dose on the in vivo embryo production of Dorper ewes in the semi-arid northeast of Brazil, 40 sheep females were distributed into two groups of 20 animals that received intravaginal CIDR for 14 days, and two days before device removal, they received one of the following treatments: in the FSH200 group, the ewes received 200 mg of pFSH; and in the FSH128 group, the ewes received a total of 128 mg in decreasing doses every 12 h. Beginning 12 h after the conclusion of the treatments, estrus detection was performed every four hours using two Dorper rams of proven fertility. The ewes were mated at estrus onset and 24 hours later. Seven days after intravaginal device removal, the superovulatory response was evaluated, and embryo collection was performed using the laparotomy method. The recovered flushings were subjected to embryo searches under a stereomicroscope and classified according to their qualities. Analyses of variance (ANOVAs) and LSD tests were used to compare the different parameters. The data expressed as percentages were analysed by chi-square test. The ovulation rate was higher in the FSH200 group, which had 16.3 ± 0.3 corpora lutea (CL), than in the FSH128 group, which had 11.3 ± 0.3 CL (P 0.05). However, higher fertilization rate (83.6% vs. 62.4%) and higher transferable (86.0% vs. 71.6%) and freezable (67.9% vs. 40.8%) embryo rates were observedin the FSH 128 group compared with the group that received 200 mg. Furthermore, no significant differences in the remaining parameters were observed between the experimental groups (P>0.05), demonstrating that pFSH dose reduction promoted a greater production of freezable and transferableembryos in Dorper ewes subjected to MOET.

Com o objetivo de avaliar o efeito da redução de pFSH na produção in vivo de embriões de ovelhas da raça Dorper exploradas no semiárido do Nordeste do Brasil, 40 fêmeas ovinas foram distribuídas em dois grupos com 20 animais, os quais receberam um CIDR intravaginal por 14 dias e dois dias antes da remoção do dispositivo receberam um tratamento superovulatório proposto: grupo FSH200 onde as ovelhas receberam 200 mg de pFSH, enquanto o grupo FSH128 totalizou 128 mg em doses decrescentes intervaladas por 12 horas. Doze horas após o final do tratamento, foi realizada a detecção de estro, a cada quatro horas, utilizando dois carneiros Dorper, de fertilidade comprovada. As ovelhas foram cobertas no início do estro e 24 horas depois. Sete dias após a retirada do dispositivo intravaginal, foi realizada a avaliação da resposta superovulatória e a colheita de embriões pelo método de laparotomia. O lavado recuperado foi submetido à procura de embriões em estereomicroscópio e classificados de acordo com sua qualidade. Para comparação dos diversos parâmetros, foi utilizada a Análise de Variância (ANOVA), seguida da realização do teste LSD. Os dados expressos em porcentagem foram submetidos ao Teste de Qui-quadrado. A taxa de ovulação foi superior no grupo FSH200 com 16,3 ± 0,3 corpos lúteos (CL) quando comparado ao grupo FSH128 com de 11,3 ± 0,3 CL (P 0,05). Entretanto, foi verificada uma maior taxa de fecundação (83,6% vs. 62,4%) e uma maior taxa de embriões transferíveis (86,0% vs.71,6%) e congeláveis (67,9% vs. 40,8%) no grupo FSH 128 quando comparado ao grupo que recebeu200 mg. Além disso, não foi observada qualquer diferença significativa entre os grupos experimentais, para os demais parâmetros avaliados demonstrando que a redução da dose de pFSH promove maior produção de embriões congeláveis e transferíveis em ovinos Dorper submetidos à MOTE.

Addition of sucrose on cryoprotectant solution of vitrification enhances the quality of Dorper sheep embryos produced in vivo / Adição de sacarose na solução crioprotetora de vitrificação melhora a qualidade de embriões ovinos Dorper produzidos in vivo

This study aimed to evaluate the efficacy of adding sucrose in vitrification solution of ovine embryos produced in vivo. Forty Dorper ewes were selected and superovulated. Immediately prior to the embryo collection by laparotomy, a laparoscopy was performed to verify the superovulatory response. The recovered flushing was followed by embryo evaluation and embryos were divided in two experimental groups where embryos from Control group were submitted to a traditional vitrification protocol and embryos from Sucrose group to a modified vitrification protocol with sucrose. After warming, embryos were again divided regarding cryoprotectant removal (Indirect) or not (Direct). The embryo quality was classified as embryos of degrees I (excellent or good), II (regular), III (poor) and IV (dead or degenerate). It was also verified the homogeneity of mass, occurrence of embryonic mass retraction and rupture of pellucid zone. The results were expressed as percentages and were subjected to Chi-square test with P 0.05. The embryos vitrified in the presence of sucrose had lower proportions of lower-quality embryos after warming (22.20 vs. 44.50%), higher percentages of homogeneous embryos after warming (63.89 vs. 38.89 %) while concerning other parameters there was no difference between these groups. It can be concluded that the addition of 0.4 M sucrose during vitrification improves the embryo quality.

Este estudo objetivou avaliar a eficácia da adição de sacarose na solução de vitrificação de embriões ovinos produzidos in vivo. Foram selecionadas 40 ovelhas da raça Dorper as quais foram superovuladas. Imediatamente antes da colheita de embriões por laparotomia, uma laparoscopia foi realizada para verificar a resposta superovulatória. O lavado recuperado foi submetido à procura e avaliação de embriões e estes foram divididos em dois grupos experimentais, onde os embriões do Grupo Controle foram submetidos ao protocolo tradicional de vitrificação e os embriões do Grupo Sacarose a um protocolo modificado de vitrificação com sacarose. Após a descongelação, os embriões foram novamente divididos considerando a remoção (Indireto) ou não (Direto) do crioprotetor. A qualidade embrionária foi classificada como embriões de graus I (excelente ou bom), II (regular), III (pobre) e IV (morto ou degenerado). Foi também verificada a homogeneidade da massa, ocorrência de retração da massa e ruptura de zona pelúcida. Os resultados foram expressos em porcentagem e foram submetidos ao teste do Qui-quadrado com P < 0.05. Os embriões vitrificados na presença de sacarose apresentaram menores proporções de embriões de menor qualidade após a descongelação (22,20 vs. 44,50%), e maiores percentuais de embriões homogêneos após a descongelação (63,89 vs. 38,89%) enquanto com relação aos demais parâmetros não existiram diferenças entre grupos. Pode-se concluir que a adição de 0,4 M de sacarose durante os procedimentos de vitrificação e descongelação beneficia a qualidade embrionária.

Redução da resposta superovulatória de fêmeas bovinas superestimuladas com FSH em doses split / Reduced superovulatory response of bovine females overstimulated with FSH in split doses

Objetivou-se avaliar a superovulação (SOV) de vacas zebuínas, utilizando protocolo convencional ou protocolo com número menor de aplicações e similar dosagem (dose split). Utilizaram-se 16 fêmeas (total 32 SOV), com idade entre 17-42 meses e escore de condição corporal 2,5-4 (escala de 1-5), em delineamento tipo cross-over. No início do tratamento (D0), os animais receberam um dispositivo de progesterona e 2mg de benzoato de estradiol. As fêmeas do grupo convencional receberam 250UI de FSH/LH divididas em oito doses decrescentes administradas em intervalos de 12h (FSH/LH no D4, D5, D6 e D7 no período da manhã e tarde, nas respectivas dosagens: 50,0 UI; 37,5 UI; 25,0 UI; 12,5 UI). No D7 pela manhã, as fêmeas foram tratadas com 150μg de D+cloprostenol, e a remoção da progesterona foi realizada no D7 à tarde. As fêmeas do grupo split também receberam 250 UI de FSH/LH. No D4 de manhã, administraram-se 62,5 UI de FSH/LH via IM e 125 UI por via SC. Quarenta e oito horas após (D6) administraram-se 62,5 UI via SC e na manhã do D7 foi removida a progesterona e aplicaram-se 150μg de D+cloprostenol. As fêmeas de ambos os grupos receberam 50μg de análogo de GnRH no D8 pela manhã e foram inseminadas 12 e 24 horas após. No D15 realizou-se a colheita dos embriões em ambos os tratamentos. Avaliou-se a resposta superovulatória pela contagem do número de folículos e CLs de cada ovário, com auxílio de ultrassom. Todas as variáveis foram submetidas ao teste T de Student para amostras pareadas. Houve diferença (P<0,05) na quantidade de folículos acima de 8mm no D8 (9,06±4,54 e 5,50±4,59); número de CLs no dia da colheita (8,12± 3,26 e 4,69±3,46), número de embriões totais (6,69±3,05 e 3,37±2,50) e de embriões viáveis (5,25±2,29 e 2,37±1,78) nas vacas do grupo convencional em relação às do split, respectivamente. Conclui-se que o protocolo split tem pior resposta superovulatória e de produção in vivo de embriões, em vacas zebuínas, quando comparado ao protocolo convencional.(AU)

The aim of this study was to evaluate the superovulation (SOV) response of zebu cows, using conventional protocol or other protocol with similar dose but smaller number of applications (split dose). 16 females (32 SOV), aged 17-42 months, and body condition score of 2.5-4 (1-5 scale) were used in randomized cross-over. At the start of treatment (D0), the animals received progesterone device and 2mg of estradiol benzoate. The females from the conventional group received 250 IU of FSH/LH divided into eight decreasing doses administered at intervals of 12 hours (FSH/LH in D4, D5, D6 and D7, with their respective strengths: 50.0 IU, 37.5 IU, 25.0 IU, 12.5 IU). In D7, the females were treated with 150μg of D+cloprostenol, and the removal of progesterone device was held in the afternoon. The females from the split group also received 250 IU of FSH/LH. In the morning D4 was administered in 62.5 IU FSH/LH IM and 125 IU subcutaneously. Forty eight hours later (D6) 62.5 IU was administered subcutaneously in the morning and on D7, the progesterone device was removed and 150 μg of D+cloprostenol was applied. The females in both groups were given 50 μg of GnRH in the morning and on D8 were inseminated after 12 and 24 hours. On D15 the embryo collection was performed in both treatments. The evaluation of superovulatory response was done by counting the number of follicles and corpus luteum (CL) in each ovary, with the aid of ultrasound. The variables were assessed by Student's t test for paired samples. There were differences (P<0.05) in the number of follicles over 8mm in D8 (9.06±4.54 and 5.50±4.59); in the amount of CL at the time of collection (8.12±3.26 and 4.69±3.46), total number of embryos (6.69±3.05 and 3.37±2.50) and viable embryos (5.25±2.29 and 2.37±1.78) for cows in the conventional group compared to the split group, respectively. It is concluded that the split protocol has worse superovulatory response and in vivo production of embryos in zebu cows compared with the conventional protocol.(AU)