Atividade antifúngica de nanofibras de policaprolactona/nistatina: estudo in vitro e in vivo / Antifungal activity of polycaprolactone/nystatin nanofibers: in vitro and in vivo study

Este estudo avaliou a eficácia in vitro e in vivo de mantas de nanofibras (NF) de policaprolactona (PCL) incorporadas com nistatina (NIS) no tratamento da estomatite protética (EP) em modelos animais. NF foram sintetizadas com diferentes concentrações de NIS, totalizando quatro soluções: PCL puro, PCL/NIS 0,045 g, PCL/NIS 0,090 g e PCL/NIS 0,225 g. A liberação da NIS foi analisada por espectroscopia Ultravioleta-Visível. A capacidade das mantas de inibirem o biofilme de Candida albicans, principal fator etiológico da EP, dividindo-se cinco grupos (N=5) compostos por um grupo com controle de células de C. albicans e com PCL puro, além das três concentrações de NIS. A seguir, foi analisada a viabilidade celular em queratinócitos humanos (HaCat) por meio do teste colorimétrico de resazurina. Cinco grupos foram divididos (N=10): controle celular, PCL puro e as três concentrações de NIS. Em modelos animais de ratos Wistar albinos (N=18), dispositivos palatinos (DP) de resina acrílica foram confeccionados simulando próteses totais e utilizados para a indução da EP. Para isso, DP contaminados com C. albicans foram cimentados na região molar da cavidade bucal dos animais e permaneceram em boca por 48 h. Após esse período, os DP foram removidos e os animais foram divididos em três grupos: (C) controle; (B1) com tratamento por mantas de PCL/NIS 0,045 g e (B2) PCL/NIS 0,225 g, com N=6. Então novos DP, livres de contaminação, foram cimentados na cavidade oral dos animais e permaneceu por mais 48 h. Após esse período, os animais foram eutanasiados, a contagem de UFC/ mL foi realizada e os palatos foram coletados para a análise histológica. A curva padrão de NIS obtida apresentou R2 de 0,99. As três concentrações de NF apresentaram liberação de NIS, com pico no tempo de 6 h e valores de 66,26 µg/ mL para PCL/NIS 0,045 g, de 333,87 µg/ mL para PCL/NIS 0,090 g e 436,51 µg/ mL para PCL/NIS 0,225 g, constantes até o fim do experimento. Os grupos com NIS reduziram em 2,5 log10 de crescimento do biofilme fúngico em relação aos grupos sem tratamento, Controle e PCL, sem diferença estatística significativa. Não foi observada citotoxicidade nas células HaCat, com viabilidade celular de 93,7% para PCL/NIS 0,045 g, 72,6% para PCL/NIS 0,090 g e 72,4% para PCL/NIS 0,225 g. A indução da EP nos três grupos foi possível e, porém, sem redução significativa na contagem de UFC/ mL de C. albicans nos grupos B1 e B2. Na análise histológica do grupo C pôde-se observar infiltração de hifas de Candida na camada queratinizada, presença de células inflamatórias formando micro abscessos e um discreto infiltrado inflamatório no tecido conjuntivo subjacente ao epitélio infectado. Nos grupos B1 e B2 não foram encontradas alterações epiteliais, concluindo-se que as NF demonstraram atividade antifúngica in vitro e foram efetivas na prevenção da penetração de hifas no tecido palatino de animais com DP (AU)

This study evaluated the in vitro and in vivo efficacy of nanofiber (NF) mats of polycaprolactone (PCL) incorporated with nystatin (NIS) in the treatment of denture stomatitis (DS) in animal models. NFs were synthesized with different concentrations of NIS, totaling four solutions: pure PCL, PCL/NIS 0.045 g, PCL/NIS 0.090 g, and PCL/NIS 0.225 g. The release of NIS was analyzed by Ultraviolet-Visible spectroscopy. The ability of the mats to inhibit Candida albicans biofilm, the main etiological factor of DS, was assessed by dividing five groups (N=5) composed of a group with C. albicans cell control and with pure PCL, in addition to the three concentrations of NIS. Next, cell viability in human keratinocytes (HaCat) was analyzed using the resazurin colorimetric test. Five groups were divided (N=10): cell control, pure PCL, and the three concentrations of NIS. In albino Wistar rat animal models (N=18), palatal devices (PD) made of acrylic resin were fabricated to simulate total prostheses and used to induce DS. For this, PD contaminated with C. albicans were cemented in the molar region of the animals' oral cavity and remained in the mouth for 48 hours. After this period, the PDs were removed, and the animals were divided into three groups: (C) control; (B1) treated with PCL/NIS 0.045 g mats, and (B2) PCL/NIS 0.225 g, with N=6. Then new, uncontaminated PDs were cemented in the animals' oral cavity and remained for another 48 hours. After this period, the animals were euthanized, UFC/ mL counts were performed, and the palates were collected for histological analysis. The standard NIS curve obtained showed an R2 of 0.99. The three concentrations of NF showed NIS release, with a peak at 6 h and values of 66.26 µg/ mL for PCL/NIS 0.045 g, 333.87 µg/ mL for PCL/NIS 0.090 g, and 436.51 µg/ mL for PCL/NIS 0.225 g, remaining constant until the end of the experiment. The groups with NIS reduced fungal biofilm growth by 2.5 log10 compared to the untreated groups, Control and PCL, with no significant statistical difference. No cytotoxicity was observed in HaCat cells, with cell viability of 93.7% for PCL/NIS 0.045 g, 72.6% for PCL/NIS 0.090 g, and 72.4% for PCL/NIS 0.225 g. Induction of DS in the three groups was possible; however, there was no significant reduction in UFC/ mL counts of C. albicans in groups B1 and B2. Histological analysis of group C revealed infiltration of Candida hyphae in the keratinized layer, presence of inflammatory cells forming micro abscesses, and a discreet inflammatory infiltrate in the connective tissue underlying the infected epithelium. No epithelial alterations were found in groups B1 and B2, concluding that NFs demonstrated in vitro antifungal activity and were effective in preventing hyphal penetration into palatal tissue in animals with PD.(AU)

Beneficial effects of three natural products for the treatment of denture stomatitis: a randomized clinical trial / Efeitos benéficos de três produtos naturais para o tratamento da estomatite protética: um ensaio clínico randomizado

Aim: To evaluate the effect of three natural antifungal agents combined with routine denture care on the treatment of DS, using a quantitative mycological culture analysis. Methods: Thirty denture wearers with denture stomatitis DS were treated using five substances: sterile distilled water (G1), nystatin oral suspension (G2), 20% alcoholic extract propolis (G3), Punica granatumLinné gel (G4), and Uncaria tomentosa gel (G5). The substances were used 3 times a day for 14 days. Quantitative mycological culture analysis of samples collected from the palatal mucosa was performed at three stages: before treatment (T0), after 14 days of treatment (T1), and 30 days after treatment completion (T2). Data were evaluated using Kruskal-Wallis and Friedman tests (p < 0.05). Results: Palatal mucosa intragroup analysis showed a significant reduction of Candida CFU/mL values for all groups at T1 compared to T0 (p < 0.05). However, they did not present statistical differences when comparing T1 and T2 (p > 0.05). The intergroup analysis demonstrated that there are no statistical differences, regardless of the evaluation time (p > 0.05). Conclusion:The natural products tested showed a satisfactory result on DS treatment, which proved to be equivalent to conventional topical therapy with nystatin and to treatment using only regular oral hygiene procedures.

Objetivo: Avaliar o efeito de três antifúngicos naturais combinados com o cuidado rotineiro com próteses dentárias no tratamento da EP, por meio de uma análise quantitativa de cultura micológica. Métodos: Trinta usuários de próteses dentárias com EP foram tratados com cinco substâncias: água destilada estéril (G1), suspensão oral de nistatina (G2), extrato alcoólico de própolis 20% (G3), gel Punica granatum L. (G4) e gel Uncaria tomentosa (G5). As substâncias foram utilizadas 3 vezes ao dia durante 14 dias. A análise micológica quantitativa das amostras coletadas da mucosa palatina foi realizada em três etapas: antes do tratamento (T0), após 14 dias do tratamento (T1) e 30 dias após o término do tratamento (T2). Os dados foram avaliados pelos testes de Kruskal-Wallis e Friedman (p < 0,05). Resultados: A análise intragrupo da mucosa palatina mostrou uma redução significativa dos valores de Candida UFC/mL para todos os grupos em T1 em comparação com T0 (p < 0,05). No entanto, não apresentaram diferenças estatísticas na comparação de T1 e T2 (p > 0,05). A análise intergrupos demonstrou que não há diferenças estatísticas, independentemente do tempo de avaliação (p > 0,05). Conclusão: Os produtos naturais testados apresentaram resultado satisfatório no tratamento da EP, sendo equivalente à terapia tópica convencional com nistatina e ao tratamento apenas com procedimentos rotineiros de higiene bucal.

Surface morphology and in vitro leachability of soft liners modified by the incorporation of antifungals for denture stomatitis treatment

Abstract Objective: To evaluate the surface morphology and in vitro leachability of temporary soft linings modified by the incorporation of antifungals in minimum inhibitory concentrations (MIC) for Candida albicans biofilm. Methodology:Specimens of soft lining materials Softone and Trusoft were made without (control) or with the addition of nystatin (Ny), miconazole (Mc), ketoconazole (Ke), chlorhexidine diacetate (Chx), or itraconazole (It) at their MIC for C. albicans biofilm. The surface analyses were performed using Confocal laser scanning microscopy after 24 h, 7 days, or 14 days of immersion in distilled water at 37ºC. In vitro leachability of Chx or Ny from the modified materials was also measured using Ultraviolet visible spectroscopy for up to 14 days of immersion in distilled water at 37ºC. Data (µg/mL) were submitted to ANOVA 1-factor/Bonferroni (α=0.05). Results: Softone had a more irregular surface than Trusoft. Morphological changes were noted in both materials with increasing immersion time, particularly, in those containing drugs. Groups containing Chx and It presented extremely porous and irregular surfaces. Both materials had biexponential release kinetics. Softone leached a higher concentration of the antifungals than Trusoft (p=0.004), and chlorhexidine was released at a higher concentration than nystatin (p<0.001). Conclusions: The surface of the soft lining materials changed more significantly with the addition of Chx or It. Softone released a higher concentration of drugs than Trusoft did, guiding the future treatment of denture stomatitis.

Porosity of temporary denture soft liners containing antifungal agents

ABSTRACT Incorporation of antifungals in temporary denture soft liners has been recommended for denture stomatitis treatment; however, it may affect their properties. Objective: To evaluate the porosity of a tissue conditioner (Softone) and a temporary resilient liner (Trusoft) modified by minimum inhibitory concentrations (MICs) of antifungal agents for Candida albicans biofilm. Material and Methods: The porosity was measured by water absorption, based on exclusion of the plasticizer effect. Initially, it was determined by sorption isotherms that the adequate storage solution for specimens (65×10×3.3 mm) of both materials was 50% anhydrous calcium chloride (S50). Then, the porosity factor (PF) was calculated for the study groups (n=10) formed by specimens without (control) or with drug incorporation at MICs (nystatin: Ny-0.032 g, chlorhexidine diacetate: Chx-0.064 g, or ketoconazole: Ke-0.128 g each per gram of soft liner powder) after storage in distilled water or S50 for 24 h, seven and 14 d. Data were statistically analyzed by 4-way repeated measures ANOVA and Tukey's test (α=.05). Results: Ke resulted in no significant changes in PF for both liners in water over 14 days (p>0.05). Compared with the controls, Softone and Trusoft PFs were increased at 14-day water immersion only after addition of Ny and Chx, and Chx, respectively (p<0.05). Both materials showed no significant changes in PF in up to 14 days of S50 immersion, compared with the controls (p>0.05). In all experimental conditions, Softone and Trusoft PFs were significantly lower when immersed in S50 compared with distilled water (p<0.05). Conclusions: The addition of antifungals at MICs resulted in no harmful effects for the porosity of both temporary soft liners in different periods of water immersion, except for Chx and Ny in Softone and Chx in Trusoft at 14 days. No deleterious effect was observed for the porosity of both soft liners modified by the drugs at MICs over 14 days of S50 immersion.

Efeito da incorporação de agentes antifúngicos na resistência à tração e porosidade de materiais resilientes temporários para base de próteses / Effect of incorporation of antifungal agents on the ultimate tensile strength and porosity of temporary soft denture liners

Este estudo investigou a resistência à tração (ou limite de resistência à tração- LRT) e a porosidade de reembasadores resilientes temporários modificados por concentrações inibitórias mínimas (CIMs) de agentes antifúngicos para o biofilme Candida albicans (SC5314). Para os testes de LRT, corpos de prova em forma de halteres (n=7) com uma área transversal de 33 mm x 6 mm x 3 mm foram produzidos para os materiais resilientes (Trusoft e Softone) sem (controle) ou com incorporação de cinco fármacos em suas CIMs: nistatina- 0,032 g; diacetato de clorexidina- 0,064; cetoconazol- 0,128 g; miconazol- 0,256 g; itraconazol-0,256 g (grama de fármaco por grama de pó de material resiliente). Após a plastificação, as amostras foram imersas em água destilada a 37°C durante 24 h, 7 e 14 dias e, então, testadas em tensão em uma máquina universal de ensaios (EMIC DL-500 MF) a 40 mm/min. A porosidade foi mensurada por absorção de água, com base na exclusão do efeito plastificante. Inicialmente, determinou-se por isotermas de sorção, que a solução de armazenagem adequada para os corpos de prova (65 mm x 10 mm x 3,3 mm) de ambos os materiais foi o cloreto de cálcio anidro a 50% (S50). Assim, o fator de porosidade (FP) foi calculado para os grupos de estudo (n=10) formados por espécimes sem (controle) ou com incorporação de fármaco em suas CIMs (nistatina, clorexidina ou cetoconazol) após a armazenagem em água destilada ou S50 por 24 h, 7 e 14 dias. Os dados de resistência à tração (MPa) e percentagem de alongamento (%) foram submetidos à ANOVA de 3 fatores seguida pelo teste de Tukey (=0,05). Os dados de porosidade foram analisados estatisticamente por ANOVA de medidas repetidas para 4 fatores e teste de Tukey (=0,05). Ao final de 14 dias, a resistência à tração para ambos os materiais foi significativamente menor nos grupos modificados pelo miconazol e itraconazol em relação aos outros grupos (P<0,0001), que não mostraram diferenças significativas entre si (P>0,05). Após 7 e 14 dias em água, o miconazol e itraconazol adicionados a ambos os materiais resultaram em percentagens significativamente menores de alongamento em comparação com os outros fármacos e ao controle (P<0,0001), que foram semelhantes entre si (P>0,05). O cetoconazol não resultou em alterações significativas no FP para ambos os materiais resilientes em água ao longo de 14 dias (P>0,05). Em comparação aos controles, houve aumento dos FPs do Softone e Trusoft aos 14 dias de imersão em água somente após a adição de nistatina e clorexidina e de clorexidina, respectivamente (P<0,05). Ambos os materiais não apresentaram alterações significativas no FP em até 14 dias de imersão na S50, em comparação aos controles (P>0,05). Em todas as condições experimentais, os FPs do Softone e Trusoft foram significativamente menores quando imersos em S50 em comparação com a água destilada (P<0,05). Concluiu-se que a adição de nistatina, clorexidina e cetoconazol nas CIMs para o biofilme de C. albicans não resultou em efeitos deletérios na resistência à tração e na percentagem de alongamento dos materiais resilientes temporários para base de prótese até o período de 14 dias. A adição de antifúngicos nas CIMs não resultou em efeitos adversos à porosidade de ambos os materiais resilientes temporários em diferentes períodos de imersão em água, com exceção da clorexidina e nistatina no Softone e clorexidina no Trusoft aos 14 dias. Não foram observados efeitos deletérios para a porosidade de ambos os materiais resilientes modificados com as CIMs dos fármacos durante os 14 dias de imersão na S50.(AU)

This study investigated the tensile strength (ultimate tensile strength- UTS) and porosity of temporary soft denture liners modified by minimum inhibitory concentrations (MICs) of antifungal agents for Candida albicans biofilm (SC5314). For UTS tests, dumbbell-shaped specimens (n=7) with a central cross-sectional area of 33 mm x 6 mm x 3 mm were produced by resilient materials (Trusoft and Softone) without (control) or with incorporation of five drugs at MICs: nystatin- 0.032 g; chlorhexidine diacetate-0.064 g; ketoconazole- 0.128 g; miconazole- 0.256 g; itraconazole- 0.256 g (each per gram of soft liner powder). After plasticization, specimens were immersed in distilled water at 37°C for 24 h, 7 and 14 days, and then tested in tension in a universal testing machine (EMIC DL-500 MF) at 40 mm/min. The porosity was measured by water absorption, based on exclusion of the plasticizer effect. Initially, it was determined by sorption isotherms that the adequate storage solution for specimens (65 mm x 10 mm x 3.3 mm) of both materials was 50% anhydrous calcium chloride (S50). Then, the porosity factor (PF) was calculated for the study groups (n=10) formed by specimens without (control) or with drug incorporation at MICs (nystatin, chlorhexidine or ketoconazole) after storage in distilled water or S50 for 24 h, 7 and 14 days. Data of tensile strength (MPa) and elongation percentage (%) were submitted to 3-way ANOVA followed by Tukey's test (=0.05). Data of porosity were statistically analyzed by 4-way repeated measures ANOVA and Tukeys test (=0.05). At the end of 14 days, the tensile strength for both materials was significantly lower in the groups modified by miconazole and itraconazole compared to the other groups (P<0.0001), which showed no significant difference between them (P>0.05). After 7 and 14 days in water, miconazole and itraconazole added into both materials result in significant lower elongation percentages compared to the other drugs and control (P<.0001), which were similar to each other (P>0.05). Ketoconazole resulted in no significant changes in PF for both liners in water over 14 days (P>0.05). Compared to the controls, Softone and Trusoft PFs were increased at 14-day water immersion only after addition of nystatin and chlorhexidine, and chlorhexidine, respectively (P<0.05). Both materials showed no significant changes in PF in up to 14 days of S50 immersion, compared to the controls (P>0.05). In all experimental conditions, Softone and Trusoft PFs were significantly lower when immersed in S50 compared to distilled water (P<0.05). It was concluded that the addition of the nystatin, chlorhexidine and ketoconazole at MICs for C. albicans biofilm resulted in no harmful effects on the ultimate tensile strength and elongation percentage of the temporary soft denture liners up to 14-day period. The addition of antifungals at MICs resulted in no detrimental effects for the porosity of both temporary soft liners in different periods of water immersion, except for chlorhexidine and nystatin in Softone and chlorhexidine in Trusoft at 14 days. No deleterious effect was observed for the porosity of both soft liners modified by the drugs at MICs over 14 days of S50 immersion.(AU)

Impact of brief exposure to antifungal agents on the post-antifungal effect and hemolysin activity of oral Candida albicans

AbstractPost-antifungal effect (PAFE) of Candida and its production of hemolysin are determinants of candidal pathogenicity. Candida albicans is the foremost aetiological agent of oral candidosis, which can be treated with polyene, azole, and echinocandin antifungals. However, once administered, the intraoral concentrations of these drugs tend to be subtherapeutic and transient due to the diluent effect of saliva and cleansing effect of the oral musculature. Hence, intra-orally, Candidamay undergo a brief exposure to antifungal drugs.Objective Therefore, the PAFE and hemolysin production of oral C. albicans isolates following brief exposure to sublethal concentrations of the foregoing antifungals were evaluated.Material and Methods A total of 50 C. albicans oral isolates obtained from smokers, diabetics, asthmatics using steroid inhalers, partial denture wearers and healthy individuals were exposed to sublethal concentrations of nystatin, amphotericin B, caspofungin, ketoconazole and fluconazole for 60 min. Thereafter, the drugs were removed and the PAFE and hemolysin production were determined by previously described turbidometric and plate assays, respectively.Results Nystatin, amphotericin B, caspofungin and ketoconazole induced mean PAFE (hours) of 2.2, 2.18, 2.2 and 0.62, respectively. Fluconazole failed to produce a PAFE. Hemolysin production of these isolates was suppressed with a percentage reduction of 12.27, 13.47, 13.33, 8.53 and 4.93 following exposure to nystatin, amphotericin B, caspofungin, ketoconazole and fluconazole, respectively.Conclusions Brief exposure to sublethal concentrations of antifungal drugs appears to exert an antifungal effect by interfering with the growth as well as hemolysin production of C. albicans.

Efeito do óleo essencial de Melaleuca alternifolia e de seu principal componente Terpinen-4-ol sobre isolados clínicos de Candida albicans resistentes / Effect of Melaleuca alternifolia essential oil and its main component Terpinen-4-ol against clinical isolates of Candida albicans resistant

O óleo essencial de Melaleuca alternifolia (TTO) é um extrato de ação antifúngica e preventiva em escala farmacêutica ou cosmética. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do TTO e Terpinen-4-ol sobre isolados clínicos de Candida albicans. Este estudo foi realizado em três fases: 1- Identificação da CIM (Concentração Inibitória Mínima) e CFM (Concentração Fungicida Mínima) do TTO (0,25 a 2%) e Terpinen-4- ol (0,11 a 0,95%) sobre C. albicans na forma planctônica. 2- Análise das diferentes concentrações do óleo sobre biofilme monoespécie de C. albicans por meio da contagem das UFC/mL e avaliação da atividade metabólica das células pelo método colorimétrico de XTT. 3- Análise da ação inibitória das soluções de TTO e Terpinen-4- ol sobre biofilmes de C.albicans (cepa padrão e isolados clínicos) formados em corpos de prova de resina acrílica termopolimerizável previamente cobertos com saliva humana, por meio do teste de XTT e por microscopia confocal de varredura à laser (MCVL). A nistatina (Sigma) foi utilizada como controle positivo. Os resultados mostraram que isolados de C. albicans planctônicos foram sensíveis ao TTO 1%, Terpinen-4-ol 0,47% e Nistatina 8 ?g/mL. As menores concentrações fungicidas para os isolados foram TTO 2 %, Terpinen-4-ol 0,95 % e Nistatina 16 ?g/mL. Quando analisado em biofilme através da quantificação (UFC/mL) e teste de XTT as concentrações de TTO 2 % e Terpinen-4-ol 0,95 % foram eficazes quando comparado ao controle, sendo que as amostras da genotipagem A2 e B1 foram as mais resistentes. Os resultados de MCVL mostraram que todos os biofilmes desenvolvidos em corpos de resina acrílica apresentaram-se semelhantes à ação da Nistatina. Os extratos avaliados apresentaram ação antifúngica para os isolados clínicos e podem ser considerados tratamento alternativo para paciente com candidíase.

The essential oil of Melaleuca alternifolia (TTO) is an extract of antifungal action and preventive in pharmaceutical or cosmetic scale. The aim of this study was to evaluate the efficacy of TTO and Terpinen-4-ol against clinical isolates of Candida albicans. This study was conducted in three phases: 1- Identification of MIC (Minimum Inhibitory Concentration) and CFM (Minimum Fungicidal Concentration) of TTO (0.25 to 2%) and Terpinen-4-ol (0.11 to 0.95 %) on C. albicans in planktonic form . 2- Analysis of different concentrations of oil on C. albicans biofilm single species by counting CFU/mL and evaluation of the metabolic activity of cells by XTT colorimetric method. 3- Analysis of the inhibitory action of TTO and Terpinen-4-ol solutions on C. albicans biofilms (standard strain and clinical isolates) formed in specimens of polymerizable resin acrylic microwave previously coated with human saliva , by means of the XTT test and confocal laser scanning microscopy (CLSM) . The nystatin (Sigma) was used as a positive control. The results showed that isolates of C. albicans planktonic were sensitive to TTO 1%, Terpinen-4-ol 0.47% and Nystatin 8 mg/mL. The smaller fungicidal concentrations for the isolates were TTO 2%, Terpinen-4-ol 0.95% and Nystatin 16 mg / mL. When analyzed by quantifying biofilm (CFU / ml) and XTT test, the concentrations TTO 2% and Terpinen-4-ol 0.95% were effective when compared to the control, and genotyping of samples A2 and B1 were more resistant. The CLSM results showed that all biofilms developed in bodies of acrylic resin were similar to the action of Nystatin. The extracts showed antifungal action for the clinical isolates and can be considered an alternative treatment for patients with candidiasis

Antifungal effect of plant extracts on Candida albicans biofilm on acrylic resin / Efeito antifúngico de extratos vegetais sobre biofilme de Candida albicans em resina acrílica

Objetivo: Avaliar potencial antifúngico dos extratos de Equisetum arvense L. (cavalinha), Glycyrrhiza glabra L. (alcaçuz), Punica granatum L. (romã) e Stryphnodendron barbati-mam Mart. (barbatimão) sobre biofilme de Candida albicans em resina acrílica. Material e métodos: Cepa-padrão de C. albicans foi cultivada em ágar Sabouraud-dextrose por 24 h a 37°C. Após padronização do inóculo (106 células/mL) em espectrofotômetro, foram mantidos em caldo Brain Heart Infusion suplementado comsacarose (5%) um disco de resina acrílica estéril com 100 μL do inóculo padronizado, por 5 dias a 37 °C. As amostras dos grupos tratados (n = 10) foram expostas separadamente à concentração de 50 mg/mL de cada extrato por 5 min e ao antifúngico nistatina (48.83 UI/mL). Para o grupo não tratado (controle, n = 10) foi utilizada solução fisiológica estéril (NaCl 0,9%). Os biofilmes foram desagregados dos discos de resina acrílica por homogeneizador ultrassônico por 30 s. Após diluições decimais, foram feitas semeaduras em placas de Sabouraud-dextrose e incubação por 48 h a 37 ºC. Posteriormente, foram contadas as UFC/mL e os valores foram convertidos em log10 e realizada análise estatística (ANOVA e Tukey Test; p ≤ 0,05). Resultados: Todos os extratos naturais e a nistatina proporcionaram reduções significativas (p < 0,01) do biofilme de C. albicans em comparação ao grupo controle (NaCl 0,9%), no entanto, não houve diferença estatística entre os extratos (p = 0,1567). Conclusões: Houve formação de biofilme de C. albicans em resina acrílica e todos os extratos vegetais foram efetivos para esta levedura, atuando semelhantemente à nistatina.

Objective: Evaluating the antifungal potential of Equisetum arvense L. (horsetail), Glycyrrhiza glabra L. (licorice), Punica granatum L. (pomegranate) and Stryphnodendron barbatimam Mart. (barbatimão) extracts, after Candida albicans biofilm formation on acrylic resin. Material and methods: C. albicans standard strain was cultured on Sabourauddextrose agar for 24 h at 37 °C. After standardized in a spectrophotometer, 100 μL of the inoculums (106 cells/mL) and a sterile acrylic resin disc were maintained in Brain Heart Infusion broth supplemented with sucrose (5%), for 5 days at 37ºC. The samples of the treated groups (n = 10) were separately exposed to a concentration of 50 mg/mL of each extract for 5 minutes or to nystatin (48.83 IU/mL). For the untreated group (control, n = 10), it was used sterile saline (0.9% NaCl). Biofilms were disaggregated from the acrylic resin discs by an ultrasonic homogenizer for 30 s. After decimal dilutions, sowings in Sabouraud-dextrose plates were made with incubation for 48 h at 37°C. Later, CFU/mL was verified and the values were converted to log10 and they had their statistical analysis done (ANOVA and Tukey Test, p ≤ 0.05). Results: It was found that all plant extracts and nystatin resulted in significant reduction of C. albicans biofilm (p < 0.01) compared to the control group (0.9% NaCl). However, all of them showed similar reductions to each other (p = 0.1567). Conclusion: There was biofilm formation of C. albicans on acrylic resin and all plant extracts were effective against this yeast, acting similarly to nystatin.

Análise da ação de nanopartículas de prata sobre o biofilme de espécies de Candida / Analysis of the antifungal activity of silver nanoparticles on biofilms of Candida species

O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antifúngica de nanopartículas de prata (NP) contra os biofilmes de Candida albicans e Candida glabrata. NP foram sintetizadas por meio da redução do nitrato de prata com citrato de sódio e estabilizadas com amônia ou polivinilpirrolidona. Os testes de concentração inibitória mínima (CIM) das NP contra células de Candida foram baseados no método da microdiluição. NP foram aplicadas sobre os biofilmes de Candida (48 horas) e após 24 horas de contato sua atividade antifúngica foi determinada por meio da quantificação da biomassa total (coloração com violeta cristal (VC)) e por meio da enumeração das unidades formadoras de colônias (UFCs). Após o tratamento com NP, as matrizes dos biofilmes foram extraídas e analisadas em termos de proteínas, carboidratos e DNA, e a estrutura dos biofilmes foi analisada por meio da microscopia eletrônica de varredura e de epifluorescência. A atividade antibiofilme da combinação de NP com nistatina e clorexidina foi avaliada por meio dos ensaios de VC e UFCs. Leveduras viáveis foram recuperadas a partir dos biofilmes previamente tratados com NP e adicionadas às células epiteliais HeLa e aos poços de placas de poliestireno e, após 2 horas de contato, a adesão foi determinada usando VC. A eficácia de NP submetidas às variações de temperatura (50, 70 e 100ºC) e pH (5 e 9) também foi avaliada, assim como a susceptibilidade às NP dos biofilmes de Candida em diferentes fases de crescimento. Os resultados de CIM mostraram que NP foram fungicidas contra os isolados testados em concentrações baixas (0,4-3,3 μg/mL). NP foram mais efetivas na redução da biomassa para os biofilmes de C. glabrata (reduções de 90% na concentração de 108 μg/mL) do que para C. albicans, e promoveram reduções significativas no log10 do número de UFCs em concentrações iguais ou superiores a 108 µg/mL. Os resultados demonstraram que o tipo de agente estabilizante e o tamanho das partículas não influenciaram na...

The aim of this study was to evaluate the antifungal activity of silver nanoparticles (SN) against Candida albicans and Candida glabrata biofilms. Colloidal suspensions of SN were synthesized by reducing silver nitrate with sodium citrate and stabilized with ammonia or polyvinylpyrrolidone. Minimal inhibitory concentrations (MIC) were performed for Candida cells grown in suspension following the microbroth dilution method. Candida biofilms (48 h) were treated with SN for 24 h and then the total biomass quantification (by crystal violet (CV) staining) and the colony forming units (CFUs) were determined. Also, after treating with SN, extracellular matrices were extracted from Candida biofilms and analyzed chemically in terms of proteins, carbohydrates and DNA. To investigate the biofilm structure, scanning electron microscopy and epifluorescence microscopy were carried out. The antibiofilm activity of SN in combination with nystatin and chlorhexidine was also assessed by CV and CFU. Moreover, viable yeasts were recovered from the biofilms pretreated with SN and added to HeLa epithelial cells or to empty wells of polystyrene plates and, after 2 h of contact, the adhesion capacity of the yeasts was determined by using CV staining. The antibiofilm efficacy of SN subjected to variations of temperature (50, 70 and 100ºC) and pH (5 and 9) was also evaluated. Finally, the susceptibility to SN of biofilms in different stages of growth was analyzed. MIC results showed that SN were fungicidal against the tested strains at very low concentrations (0.4- 3.3 μg/mL). SN were more effective in reducing the total biomass of C. glabrata (reductions around 90% at 108 μg/mL SN) than C. albicans biofilms, and provided significant log10 reduction of the number of CFUs after having being exposured to SN concentrations at or higher than 108 µg/mL. The results either demonstrated the particle size and the type of stabilizing agent used for producing SN did not interfere in their…

Análise da ação de nanopartículas de prata sobre o biofilme de espécies de Candida / Analysis of the antifungal activity of silver nanoparticles on biofilms of Candida species

O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antifúngica de nanopartículas de prata (NP) contra os biofilmes de Candida albicans e Candida glabrata. NP foram sintetizadas por meio da redução do nitrato de prata com citrato de sódio e estabilizadas com amônia ou polivinilpirrolidona. Os testes de concentração inibitória mínima (CIM) das NP contra células de Candida foram baseados no método da microdiluição. NP foram aplicadas sobre os biofilmes de Candida (48 horas) e após 24 horas de contato sua atividade antifúngica foi determinada por meio da quantificação da biomassa total (coloração com violeta cristal (VC)) e por meio da enumeração das unidades formadoras de colônias (UFCs). Após o tratamento com NP, as matrizes dos biofilmes foram extraídas e analisadas em termos de proteínas, carboidratos e DNA, e a estrutura dos biofilmes foi analisada por meio da microscopia eletrônica de varredura e de epifluorescência. A atividade antibiofilme da combinação de NP com nistatina e clorexidina foi avaliada por meio dos ensaios de VC e UFCs. Leveduras viáveis foram recuperadas a partir dos biofilmes previamente tratados com NP e adicionadas às células epiteliais HeLa e aos poços de placas de poliestireno e, após 2 horas de contato, a adesão foi determinada usando VC. A eficácia de NP submetidas às variações de temperatura (50, 70 e 100ºC) e pH (5 e 9) também foi avaliada, assim como a susceptibilidade às NP dos biofilmes de Candida em diferentes fases de crescimento. Os resultados de CIM mostraram que NP foram fungicidas contra os isolados testados em concentrações baixas (0,4-3,3 μg/mL). NP foram mais efetivas na redução da biomassa para os biofilmes de C. glabrata (reduções de 90% na concentração de 108 μg/mL) do que para C. albicans, e promoveram reduções significativas no log10 do número de UFCs em concentrações iguais ou superiores a 108 µg/mL. Os resultados demonstraram que o tipo de agente estabilizante e o tamanho das partículas não influenciaram na...

The aim of this study was to evaluate the antifungal activity of silver nanoparticles (SN) against Candida albicans and Candida glabrata biofilms. Colloidal suspensions of SN were synthesized by reducing silver nitrate with sodium citrate and stabilized with ammonia or polyvinylpyrrolidone. Minimal inhibitory concentrations (MIC) were performed for Candida cells grown in suspension following the microbroth dilution method. Candida biofilms (48 h) were treated with SN for 24 h and then the total biomass quantification (by crystal violet (CV) staining) and the colony forming units (CFUs) were determined. Also, after treating with SN, extracellular matrices were extracted from Candida biofilms and analyzed chemically in terms of proteins, carbohydrates and DNA. To investigate the biofilm structure, scanning electron microscopy and epifluorescence microscopy were carried out. The antibiofilm activity of SN in combination with nystatin and chlorhexidine was also assessed by CV and CFU. Moreover, viable yeasts were recovered from the biofilms pretreated with SN and added to HeLa epithelial cells or to empty wells of polystyrene plates and, after 2 h of contact, the adhesion capacity of the yeasts was determined by using CV staining. The antibiofilm efficacy of SN subjected to variations of temperature (50, 70 and 100ºC) and pH (5 and 9) was also evaluated. Finally, the susceptibility to SN of biofilms in different stages of growth was analyzed. MIC results showed that SN were fungicidal against the tested strains at very low concentrations (0.4- 3.3 μg/mL). SN were more effective in reducing the total biomass of C. glabrata (reductions around 90% at 108 μg/mL SN) than C. albicans biofilms, and provided significant log10 reduction of the number of CFUs after having being exposured to SN concentrations at or higher than 108 µg/mL. The results either demonstrated the particle size and the type of stabilizing agent used for producing SN did not interfere in their...

Poly (Methyl Methacrylate) absorption and releasing of nystatin and fluconazole / Absorção e liberação de nistatina e fluconazol por polimetilmetacrilato

Objectives: The aim of this study was to verify if there are poly (methyl methacrylate) (PMMA) absorptionand releasing of nystatin (NYS) and fluconazole (FLZ) after simulated treatment of oral candidosis. Materialsand methods: Specimens (30 × 25 × 5 mm) prepared with PMMA polymerized by hot water bath or microwaveenergy were immersed into NYS (3.12 μg/mL), FLZ (2.56 μg/mL) or deionized water (control) during14 days at 35 ± 2 °C. After treatment simulation, specimens were immersed into distilled water during 3, 7, 10and 14 days. The immersion liquid was changed after each analysis. Higher performance liquid chromatographywas used in order to detect antifungal compounds. In order to determine if there was surface depositionof drugs on PMMA resin, specimens were analyzed with electronic microscopy (SEM). Results: None of theantifungal agents was released from the PMMA resins. Conclusion: Within the limitations of this study, itcould be concluded that PMMA resins had no drug absorption with posterior release.

Objetivos: O objetivo deste estudo foi verificar se o poli (metil metacrilato) (PMMA) é capaz de absorver e liberar nistatina (NYS) e fluconazol (FLZ) após simular um tratamento para candidose oral. Materiais e métodos:Espécimes (30 × 25 × 5 mm) foram preparados em resina de PMMA por banho de água quente ou energia demicro-ondas e, em seguida, imersos em solução contendo NYS (3.12 μg/mL), FLZ (2.56 μg/mL) ou água deionizada(controle) durante 14 dias a 35 ± 2 °C. Após a simulação de tratamento, os espécimes foram imersos em água destilada durante 3, 7, 10 e 14 dias. O líquido de imersão foi trocado após cada análise. Cromatografia líquida de alta performance foi utilizada para detectar a presença dos agentes antifúngicos. Para determinar se houve deposição dos agentes antifúngicos na superfície de PMMA, os espécimes foram analisados por microscopia eletrônica de varredura(MEV). Resultados: Não houve liberação de agentes antifúngicos dos espécimes. Conclusão: Considerando as limitações deste estudo, pode-se concluir que a resina de PMMA não absorve ou libera agentes antifúngicos.

Avaliação microbiológica, física e mecânica de materiais resilientes modificados pela adição de antimicrobianos para tratamento de estomatite protética / Microbiological, physical and mechanical evaluation of resilient materials modified by the addition of antimicrobial agents for denture stomatitis' treatment

No presente estudo, a proposta foi avaliar a ação antimicrobiana sobre o biofilme de Candida albicans (SC 5314) e determinar a mínima concentração inibitória (MCI) de cinco fármacos utilizados no tratamento de estomatite protética (nistatina, miconazol, cetoconazol, itraconazol e diacetato de clorexidina), quando incorporados em reembasadores resilientes temporários à base de resina acrílica (Trusoft e Softone) bem como o efeito dessa modificação sobre as propriedades de dureza Shore A e rugosidade superficial dos materiais. Para determinação das MCIs, o biofilme fúngico foi formado sobre corpos de prova circulares (10 mm x 1 mm) dos materiais (n = 6) modificados (experimentais) ou não (controle) pela adição dos fármacos. Diferentes concentrações dos antimicrobianos foram testadas e a viabilidade celular determinada espectrofotometricamente pelo ensaio de redução de sais de tetrazólio- XTT, nos períodos de 24 h, 48 h, 7 e 14 dias. As medidas espectrofotométricas foram convertidas em porcentagens de redução fúngica e as MCIs determinadas como aquelas suficientes para inibir 90% ou mais do crescimento de C. albicans. Para os ensaios de dureza e rugosidade, corpos de prova retangulares (36 mm x 7 mm x 6 mm) dos materiais resilientes (n= 8) foram confeccionados sem (controle) ou com incorporação dos fármacos nas MCIs previamente definidas. Após armazenamento em água destilada a 37°C por 24 h, 7 e 14 dias, foram realizados os testes de dureza em durômetro Shore A (Woltest, GSD-709A) e de rugosidade superficial em rugosímetro (Surftest SJ-301). Os resultados foram analisados estatisticamente por ANOVA 3 fatores, seguida pelo teste de Tukey (=0,05). De acordo com os resultados, as MCIs determinadas para fármacos incorporados aos materiais resilientes foram: 0,032, 0,256, 0,128, 0,256 e 0,064 g/mL para nistatina, miconazol, cetoconazol, itraconazol e clorexidina, respectivamente. A adição dos antimicrobianos em ambos os materiais não alterou os valores de dureza...

The purpose of this study was to evaluate the antimicrobial action on Candida albicans biofilm (SC5314) and determine the minimum inhibitory concentration (MIC) of five drugs for denture stomatitis' treatment (nystatin, miconazole, ketoconazole, itraconazole, and chlorhexidine diacetate) incorporated into temporary denture relines (Trusoft e Softone) as well the effect of this addition on the Shore A hardness and surface roughness of the materials. For MIC determination, the fungal biofilm was formed on disc specimens (10mm x 1 mm) of the materials (n= 6) modified (experimental) or not (control) by the addition of drugs. Different dosages of the antimicrobials were tested and cellular viability was determined by spectrophotometric tetrazolium salt XTT reduction assay at 24 h, 48 h, 7 and 14 days of incubation. The spectrophotometric measurements were converted to percentage reduction in candidal growth and the MICs were determined as the concentrations necessary to inhibit 90% or more of fungal viability. For hardness and surface tests, rectangular specimens (36 mm X 7 mm X 6 mm) of the resilient materials (n= 8) were made without (control) or with incorporation of the MIC drugs. After storage in distilled water at 37°C for 24h, 7 and 14 days, the hardness tests were performed using a Shore A hardness tester (Woltest, GSD-709A) and the roughness assay was conducted in a surface roughness tester (Surftest SJ-301). Data were statistically analyzed by 3-way ANOVA followed by Tukeys test (=.05). According to the results, MICs of the drugs incorporated into the material were: 0.032, 0.256, 0.128, 0.256 e 0.064 g/mL for nystatin, miconazole, ketoconazole, itraconazole and chlorhexidine, respectively. The addition of the tested antimicrobial agents in both materials demonstrated no evident hardness change or resulted in its decrease compared to the control, except for miconazole incorporation into Softone, which increased the hardness values after 14 days...

Estomatite protética em pacientes com Diabetes mellitus: prevalência de Candida spp. e eficiência dos tratamentos com nistatina e desinfecção de próteses por micro-ondas / Denture stomatitis in diabetic patients: Candida spp. prevalence and efficacy of treatments with nystatin and denture microwave disinfection

Este estudo in vivo teve como objetivos avaliar: 1. a prevalência das diferentes espécies de Candida em pacientes diabéticos portadores de estomatite protética e compará-la àquela de pacientes não diabéticos com/sem estomatite protética; 2. a eficiência de dois tratamentos para estomatite protética em pacientes diabéticos: terapia antifúngica com nistatina e desinfecção de próteses totais por micro-ondas. Para isso, 210 pacientes usuários de prótese totais foram selecionados e distribuídos em três grupos de estudo. O grupo controle - GC foi formado por 90 pacientes não diabéticos e com mucosa oral saudável; os grupos experimentais foram formados por portadores de estomatite protética, sendo 80 pacientes não diabéticos - EPND e 40 diabéticos do tipo 2 controlados - EPD. Uma avaliação intra-oral dos pacientes dos grupos experimentais foi realizada e a aparência clínica da mucosa inflamada foi classificada de acordo com os critérios de Newton em graus I, II ou III. Coletas microbiológicas das próteses totais foram realizadas com swab estéril e plaqueadas em meio CHROMagar Candida. Em seguida, os procedimentos de identificação foram realizados: análise de microcultivo, teste de triagem fenotípica em caldo hipertônico e testes bioquímicos (ID-32C). Os resultados obtidos foram analisados por Intervalo de Confiança de Bonferroni e testes Exato de Fisher e Qui Quadrado (α=0,05). Os 40 pacientes diabéticos foram, então, submetidos ao tratamento da estomatite protética. Para isso, foram aleatoriamente distribuídos em 2 grupos (n=20): grupo NIS ­ tratamento com antifúngico tópico nistatina (suspensão oral - 100.000UI/mL), 4 vezes ao dia, por 14 dias; grupo MIC ­ tratamento por meio da irradiação das totais por micro-ondas (650W / 3 minutos), 3 vezes por semana, por 14 dias. Dois parâmetros foram utilizados para avaliar a efetividade dos tratamentos: microbiológico (coletas de material das próteses e das mucosas palatinas com swab estéril para quantificação de colônias viáveis ­ ufc/mL e identificação de Candida spp.) e clínico (tomadas fotográficas intra-orais das mucosas palatinas infectadas). Todos os pacientes foram submetidos a estes procedimentos previamente ao início dos tratamentos, ao seu final, e 30, 60 e 90 dias decorridos do seu início. Os valores de log10ufc/mL foram analisados estatisticamente por ANOVA subjacente a um modelo linear com efeitos aleatórios. A prevalência das espécies de Candida foi avaliada pelo teste Qui Quadrado. As avaliações qualitativas das fotografias intra-bucais e a análise da inflamação ao longo do tempo foram avaliadas, respectivamente, pelos testes Exato de Fisher e Mann-Whitney (α>05). Os resultados observados demonstraram que a C. albicans foi a espécie predominante em todos os grupos de estudo (p<0,016), seguida por C. tropicalis e C. glabrata (p>0,05). Não foram verificadas diferenças significantes (p>0,05) na prevalência de Candida spp. entre os grupos EPND e EPD. As prevalências de C. albicans e C. tropicalis foram significativamente superiores (p<0,01) nos grupos de pacientes com estomatite protética e a de C. tropicalis foi superior (p<0,05) nos pacientes diagnosticados com infecção grau III de Newton. Com relação aos tratamentos instituídos nos pacientes diabéticos, ambos reduziram significativamente (p<0,001) os valores de log10ufc/mL após 15 e 30 dias, não tendo sido encontradas diferenças estatisticamente significantes (p>0,05) entre os grupos de estudo. Não foram verificadas diferenças significantes (p>0,05) entre o número de pacientes curados e com recidivas, após a condução dos dois tratamentos. Com base nestes resultados, foi concluído que a prevalência de Candida spp. foi similar entre os pacientes diabéticos e não-diabéticos com estomatite protética. Apesar de a C.albicans ter sido a espécie mais frequentemente identificada em todos os pacientes avaliados, a prevalência de C. tropicalis foi superior nos pacientes com estomatite protética e naqueles com maior grau de inflamação, sugerindo que esta espécie pode estar envolvida com o início e a progressão da infecção. Além disso, a irradiação de próteses totais por micro-ondas pode ser utilizada com sucesso para tratar e prevenir o aparecimento de estomatite protética em pacientes diabéticos, apresentando a mesma efetividade de um método clássico de tratamento com antifúngico tópico

The aim of this in vivo study was to evaluate: 1. the prevalence of Candida spp. in well-controlled type 2 diabetic patients and compare it to that found in non-diabetics with/without denture stomatitis; 2. the efficacy of two treatments of denture stomatitis in diabetic patients: topical nystatin and denture microwave disinfection. Two hundred and ten denture wearer patients were divided into three groups of study. The control group - CG was formed by 90 individuals without diabetes or denture stomatitis and the experimental groups were formed by patients with denture stomatitis, being 80 non-diabetics - DSND and 40 well-controlled type 2 diabetics - DSD. Mucosal characteristics of denture stomatitis patients were classified in types I, II, and III, according to Newton's criteria. Mycological samples were taken from the dentures and cultured in CHROMagar's plates. Candida spp. were identified by micro-cultivation, hypertonic Sabouraud broth, and bioMérieux ID32C assays. Results were analyzed by means of Bonferroni corrected confidence interval, Fisher's exact test, and Chi-square analysis of several proportions (α=0.05). The 40 diabetic patients were divided into two groups (n=20) and submitted to two treatments for denture stomatitis: NYS group ­ patients were treated with topical nystatin, 4 times a day, for 14 days; MW group ­ patients had their dentures microwaved (650W / 3 minutes), 3 times per week, for 14 days. Mycological samples were taken from the palates and the tissue surface of the dentures for quantification and identification of Candida spp. and standardized photographs of the palates were taken for the clinical analysis. Microbiological and clinical evaluations were repeated at baseline, the end of treatments (day-14), and follow up (day-30, day60, day-90). Microbiological data were evaluated by ANOVA using a random effects statistical model,Tukey's post hoc test, and Chi-square test, while clinical results were analyzed by Mann-Whitney and Fisher's exact tests (α=0.05). According to the results, C. albicans was the most predominant species isolated in CG, DSND, and DSD groups (p<0.016), followed by C. tropicalis and C. glabrata (p>0.05). No significant differences were found in Candida spp. prevalence between DSND and DSD (p>0.05). The percentage frequencies of C. albicans and C. tropicalis in denture stomatitis groups (DSND and DSD) were significantly higher (p<0.01) than those in CG and the prevalence of C. tropicalis was significantly higher (p<0.05) in Newton's type III patients. Both NYS and MW treatments were considered successful in reducing the clinical signs of denture stomatitis and significantly reduced the values of cfu/mL from the palates and dentures at day-14 and day-30. Forty percent of patients had no signs of denture stomatitis at the end of both treatments. No significant differences (p>0.05) in the microbiological and clinical outcomes were revealed between the two treatments. It was concluded that the prevalence of Candida spp. was similar between diabetic and non-diabetic patients with denture stomatitis. Despite C. albicans was the most commonly isolated organism, the prevalence of C. tropicalis increased in patients with denture stomatitis and in those with the highest degree of inflammation, suggesting that this species may play an important role in the progression of this infection. In addition, denture microwave disinfection was as effective as nystatin on the treatment of well-controlled type 2 diabetic patients with denture stomatitis

Atividade antifúngica in vitro de enxaguatórios bucais sobre Candida spp / In vitro antifungal activity of mouthwashes against Candida spp

Este estudo objetivou avaliar a atividade antifúngica de enxaguatórios bucais disponíveis no comércio brasileiro sobre as cepas de Candida tropicalis (ATCC 13803) e de Candida krusei (ATCC 6538). Avaliaram-se cinco diferentes enxaguatórios, a saber: Oral-B®, Colgate Plax Overnight®, Equate®, Cepacol® e Periogard®. Foi adotada a Nistatina® como controle positivo. Para determinação da atividade antifúngica, foi utilizado o método de difusão em meio sólido (Ágar Sabouraud Dextrose), de modo que foram inseridos 50 µL de cada solução pronta para uso nos poços confeccionados no meio de cultura. As placas foram incubadas em estufa bacteriológica por 48 horas a 37 °C. A análise dos dados foi feita por meio da mensuração dos halos com uma escala milimétrica, sendo estes considerados quando iguais ou superiores a 10 mm de diâmetro. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente pelo teste de ANOVA e pós-teste de Tukey, com nível de signifcância de 5%, utilizando-se o software GraPhad Prism 4.0. Foram observadas diferenças signifcativas na atividade antifúngica do Oral-B® (p < 0,001), Colgate Plax® (p < 0,01) e Cepacol® (p < 0,01) sobre Candida tropicalis, quando comparada com a apresentada pela nistatina. Sobre C. krusei, não foi observada atividade antifúngica da Nistatina®, evidenciando-se, assim, uma cepa resistente. Porém, todos os enxaguatórios foram capazes de inibir o crescimento da levedura avaliada, não havendo diferenças estatísticas entre Oral-B® e Periogard®/Cepacol®/Equate® (p > 0,05), Colgate plax® e Cepacol® (p > 0,05), Periogard® e Equate®/Cepacol® (p > 0,05), bem como entre Equate® e Cepacol® (p > 0,05). Os resultados sugerem que o cloreto de cetilpiridínio e o gluconato de clorexidina, principais compostos ativos dos enxaguatórios bucais, constituem importantes agentes que são, possivelmente, responsáveis pela atividade antifúngica sobre as cepas utilizadas neste estudo.

The aim of this study was to evaluate the antifungal activity of mouthwashes available in Brazil on Candida tropicalis (ATCC 13803) and Candida krusei (ATCC 6538) strains. Five different brands of mouthwashes were assessed: Oral-B®, Colgate Plax Overnight®, Equate®, Cepacol® and Periogard®. Nystatin® was used as a positive control. The antifungal activity was evaluated by the agar diffusion method (Agar Sabouraud Dextrose). Fifty microliters of each ready-to-use solution were poured into wells made in the solid culture medium. The plates were incubated in bacteriologic incubators at 37 °C for 48 hours. The results were obtained by measuring the zones of microbial growth inhibition (in mm) and only those with a diameter of 10 mm or more were considered. The data were analyzed by ANOVA and Tukey's post-test, with a 5% signifcance level. Statistically signifcant differences were observed in the antifungal activity of Oral-B® (p < 0.001), Colgate Plax® (p < 0.01) and Cepacol® (p < 0.01) against Candida tropicalis, as compared to nystatin. Nystatin did not show antifungal activity against C. krusei, which appears as a resistant strain. However, all the mouthwashes were able to inhibit the growth of the evaluated yeast, showing no differences between Oral-B® and Periogard®/Cepacol®/Equate® (p > 0.05), Colgate Plax® and Cepacol® (p > 0.05), Periogard® and Equate®/Cepacol® (p > 0.05), or between Equate® and Cepacol® (p > 0.05). These results suggest that cetylpyridinium chloride and chlorhexidine gluconate, which are the most important active components of the mouthwashes, are important agents that are possibly responsible for the antifungal activity against the strains used in this study.

Desinfecção de próteses totais por micro-ondas: efeito da frequência de irradiação no tratamento da estomatite protética / Disinfection of complete dentures using microwaves: effect of irradiation frequency in the treatment of denture stomatitis

A estomatite protética é uma infecção fúngica que acomete entre 60% e 72% dos indivíduos portadores de próteses removíveis, sobretudo idosos do gênero feminino. Atualmente, a desinfecção de próteses totais por meio da irradiação por micro-ondas tem sido recomendada para tratamento e prevenção da estomatite protética. Considerando esses aspectos, esse estudo in vivo avaliou a efetividade da frequência da desinfecção de próteses totais por micro-ondas (3 min/650 W) em relação à terapia antifúngica tópica para o tratamento da estomatite protética, além de verificar a prevalência de Candida nos pacientes avaliados. Para isso, foram selecionados 60 indivíduos, portadores de próteses totais superiores e com diagnóstico clínico de estomatite protética. Esses pacientes foram aleatoriamente distribuídos em 3 grupos (n=20), de acordo com o tratamento instituído: Terapia Antifúngica Tópica (Grupo I) - utilização de nistatina (suspensão oral, 100.000 UI/mL), 4 vezes ao dia durante 15 dias; Irradiação por Micro-ondas ­ imersão das próteses totais em água e irradiação das próteses por micro-ondas durante 3 minutos a 650 W, 1 ou 3 vezes por semana (Grupos II e III, respectivamente) por um período de 15 dias. Para avaliação da efetividade dos tratamentos instituídos, foram realizadas culturas micológicas quantitativas e identificação das espécies de Candida, utilizando-se o meio CHROMagar Candida, análise de microcultivo, teste de triagem em caldo hipertônico e o sistema bioquímico de identificação ID 32C. Coletas de biofilme das superfícies internas das próteses totais superiores e das mucosas palatinas de todos os pacientes, foram realizadas previamente ao tratamento (dia 0) e após 15 dias do seu início. Com o objetivo de avaliar a efetividade dos tratamentos em longo prazo, a quantificação de colônias viáveis de Candiada spp. foram repetidas após 30, 60 e 90 dias do início do tratamento. Em cada consulta (dias 0, 15, 30, 60 e 90) foi realizada ainda, uma avaliação clínica por meio de fotografias intrabucais da mucosa palatina dos indivíduos. Os resultados obtidos por meio das culturas micológicas quantitativas foram analisados estatisticamente pelos testes de Wilcoxon e de Kruskal-Wallis (α=0,05). Os resultados das identificações bioquímicas das espécies de Candida foram interpretados por meio de uma análise qualitativa. Para as avaliações clínicas foi utilizado o índice Kappa de concordância e em seguida, a análise qualitativa duplo-cega das fotografias intrabucais. No décimo quinto dia de avaliação os tratamentos aplicados nos grupos Grupos I, II, III foram efetivos (p<0,05) para redução das células viáveis (valores de ufc/mL) de Candida spp. referentes à mucosa palatina e a superfície interna das próteses totais superiores. Enquanto, após 30, 60 e 90 dias do início dos tratamentos os resultados demonstraram em todos os grupos avaliados (Grupos I, II, III), um aumento gradativo nos valores de ufc/mL, porém sem diferenças estatisticamente significativa entre os períodos de avaliação. A comparação entre grupos de tratamento indicou aos 90 dias, uma diferença estatisticamente significativa (p<0,05) entre o Grupo III e os demais grupos (I e II). As identificações bioquímicas revelaram que as espécies predominantes em ambos os sítios de coleta foram a C. albicans, a C. tropicalis e a C. glabrata. No término do tratamento foi verificado um aumento na frequência de C. albicans no Grupo I. Enquanto, para os Grupos II e III a frequência de C. glabrata aumentou e a de C. tropicalis diminuiu. A avaliação das fotografias intrabucais indicou melhora nos sinais clínicos da estomatite protética no 15º dia em todos os Grupos do estudo, porém nos períodos subsequentes de avaliação áreas eritematosas tornaram-se visíveis na mucosa palatina de muitos indivíduos. A redução na frequência da desinfecção de próteses totais por micro-ondas (3 min/650 W) foi tão efetiva quanto à terapia antifúngica tópica (nistatina) para o tratamento da estomatite protética

Denture stomatitis is a fungal infection that affects 60% to 72% of individuals who use removable dentures, primarily elderly women. Currently, the disinfection of complete dentures using microwave irradiation has been recommended to treat and prevent denture stomatitis. Considering these aspects, this in vivo study evaluated the effectiveness of the frequency of complete denture disinfection using microwaves (3 min/650 W) compared to antifungal therapy for the treatment of denture stomatitis. It also verified the prevalence of Candida spp. in the evaluated patients. This study used a sample of 60 healthy individuals who use complete upper dentures and have received a clinical diagnosis of denture stomatitis. Patients were randomly distributed into three groups (n=20), based on the treatment used: Topical Antifungal Therapy (Group I) ­ use of nystatin (oral suspension, 100.000 UI/mL), four times a day for 15 days; Irradiation with Microwaves ­ irradiation of the dentures by microwaves for three minutes at 650 W, one time or three times per week (Groups II and III, respectively) for a period of 15 days. In order to evaluate the effectiveness of the treatments used, quantitative mycological cultures were collected and the Candida species were identified using the CHROMagar Candida method, microculture analysis, screening test in hypertonic broth and the ID 32C biochemical identification system. Biofilm samples were collected from the inner surfaces of the complete upper dentures and from the palatal mucosa of all patients before (day 0) and after 15 days of treatment. In order to evaluate the effectiveness of the treatments over the long term, the quantification of the viable Candiada spp. colonies was repeated 30, 60 and 90 days after starting the treatment. For each consultation (days 0, 15, 30, 60 and 90), a clinical evaluation was also performed through intra-oral photography of the palatal mucosa of the individuals. The results from quantitative mycological cultures were statistically analyzed using Wilcoxon and Kruskal-Wallis tests (α=0.05). Biochemical identification results for the Candida species were interpreted through qualitative analysis. The Kappa concordance coefficient was used for the clinical evaluations, and then a qualitative doubleblind analysis was conducted on the intra-mouth photograph. On the 15th day of the evaluation, the treatments applied to Groups I, II and III were effective (p<0.05) in reducing the mycological cultures (ufc/mL values) of Candida spp. associated with the palatal mucosa and inner surface of the complete upper dentures. However, 30, 60 and 90 days after starting the treatment, all evaluated groups (GI, GII, GIII) demonstrated a gradual increase in the values of ufc/mL, although without statistically significant differences between the evaluation periods. The comparison among treatment groups indicated no statistically significant differences (p<0.05) among groups, except between Group III and the other groups (GI and GII) at 90 days. The biochemical identifications revealed that the predominant species in both collection sites were C. albicans, C. tropicalis and C. glabrata. Furthermore, an increase in the frequency of C. albicans was found at the end of the treatment in Group I. The frequency of C. glabrata increased for Groups II and III and that of C. tropicalis decreased. The evaluation of the intra-oral photography indicated an improvement in the clinical signs of denture stomatitis on the 15th day in all study groups, although erythematous areas became visible on the palatal mucosa of many individuals during the periods following the evaluation. Based on the results of this study, it can be concluded that, regardless the frequency of irradiation, microwave disinfection (3 min/650 W) was as effective as topic antifungal therapy for treating denture stomatitis

Viabilidade da utilização da terapia fotodinâmica no tratamento da estomatite protética: estudos in vitro / Viability of photodynamic therapy on the treatment of denture stomatitis: in vivo studies

Estes estudos in vivo tiveram como objetivos: 1 – avaliar a efetividade da terapia fotodinâmica (PDT) na inativação de Candida albicans em um modelo murino de candidose bucal; 2 – comparar a eficácia clínica e microbiológica da PDT com a da terapia antifúngica tópica (nistatina suspensão oral) no tratamento da estomatite protética, assim como identificar e determinar a prevalência das espécies de Candida dessa patologia. Na primeira investigação, camundongos foram imunossuprimidos com injeções subcutâneas de prednisolona. Tetraciclina foi fornecida na água de beber para promover alteração da microbiota bucal dos camundongos. Os animais foram sedados com injeção de cloridrato de clorpromazina e um swab oral embebido em uma suspensão de C. albicans (107 UFC/mL) foi esfregado na cavidade bucal dos animais. Quatro dias após a inoculação, a PDT foi realizada no dorso lingual utilizando administração tópica de Photogem® a 400, 500 ou 1000 mg/L e, após 30 minutos, iluminação com 305 J/cm² de luz de LED a 455 ou 630 nm. Posteriormente, a quantidade de fungos viáveis foi determinada (UFC/mL) e analisada pelos testes de ANOVA e Holm- Sidak (P < 0,05). Os camundongos foram sacrificados, e as línguas foram removidas e processadas para avaliação histológica de presença de fungos e reação inflamatória. No estudo clínico, pacientes (n = 40) foram aleatoriamente atribuídos a um dos seguintes grupos de 20 indivíduos cada; grupo NYS: pacientes receberam tratamento tópico com nistatina (100.000 UI) quatro vezes ao dia por 15 dias e; grupo PDT: prótese total superior e o palato dos pacientes foram borrifados pelo Photogem® a 500 mg/L e, após 30 minutos de incubação, iluminado por luz de LED a 455 nm (37,5 e 122 J/cm2, respectivamente) três vezes por semana durante 15 dias. Culturas micológicas de amostras das próteses e das mucosas palatinas e fotografias...

These in vivo studies evaluated 1 – the effectiveness of photodynamic therapy (PDT) on the inactivation of Candida albicans in a murine model of oral candidosis; 2 – compared the clinical and mycological efficacy of PDT with that of topical antifungal therapy (nystatin oral suspension) for the treatment of denture stomatitis (DS) as well as to identify and determine the prevalence of Candida species in DS. In the first investigation, mice were immunosupressed with subcutaneous injections of prednisolone. Tetracycline hydrochloride on drinking water was managed to change the oral microflora. They were kept in a sedative state after injection of chlorpromazine chloride and a suspension of C. albicans (107 CFU/mL) was swabbed in the oral cavity. Four days after oral infection, PDT was performed on the dorsum of the tongue using a topical administration of Photogem® at 400, 500 or 1000 mg/L and, after 30 minutes, illumination with 305 J/cm² of LED light at 455 or 630 nm. Then, the number of surviving yeast was determined (CFU/mL) and analyzed by ANOVA and Holm- Sidak tests (P < 0.05). Animals were sacrificed, the tongues surgically removed and processed for histological evaluation of yeast presence and inflammatory reaction. In the clinical trial, patients (n = 40) were randomly assigned to one of two groups of 20 subjects each; NYS group: patients received topical treatment with nystatin (100,000 IU) four times daily for 15 days; PDT group: maxillary denture and palate of patients were sprayed with 500 mg/L of Photogem® and, after 30 min of incubation, illuminated by LED light at 455 nm (37.5 and 122 J/cm2, respectively) three times a week for 15 days. Mycological cultures taken from dentures and palates and standard photographs of the palates were performed at baseline (day 0), at the end of the treatment (day 15) and at the follow-up (days 30, 60 and 90 after the beginning...

Análise in vitro da eficácia do bicarbonato de sódio e da nistatina na inibição de Candida albicans / In vitro analysis of the effectiveness of nistatina and sodium bicarbonate in the inhibition of Candida albicans

A cavidade oral alberga uma grande variedade de microrganismos, sendo que o equilíbrio entre microbiota bucal e hospedeiro pode ser alterado, favorecendo a patogenicidade, por parte de microorganismo. É em pacientes imunodeprimidos por HIV e por câncer que nas últimas décadas pude-mos perceber as manifestações da candidíase oral. O trabalho visou à verificação da ação antifúngica da Nistatina, solução de bicarbonato de sódio a 30% e dentifrício com bicarbonato de sódio, através datécnica de difusão em Ágar com posterior leitura do halo de inibição, constatando qual desses agentes émais efetivo no tratamento da candidíase oral. Nos resultados, houve uma similaridade da eficácia dasolução de bicarbonato de sódio e da Nistatina quanto à inibição do crescimento de Candida albicans.O dentifrício contendo bicarbonato de sódio produziu discreta inibição. Assim, constatou-se que asolução de bicarbonato de sódio apresenta, in vitro, uma eficácia semelhante à Nistatina, aliando custo reduzido e eficácia clínica.

The oral cavity lodges a great variety of microorganisms, being that the buccal balance microbiota and host can be modified, favoring the pathogenicity on the part of the microorganisms. It is patients immunedejectedes for HIV and cancer that in the last decades we could perceive the manifestations of oral candidiasis. The work aimed at the verification of the antifungal action of the Nistatina, sodium bicarbonate solution 30% and dentifrice with sodium bicarbonate, through the technique of diffusion inAgar with posterior reading of the inhibition halo, evidencing which is more effectiveness of sodium bicarbonate and the Nistatina how much to the inhibition of the growth of Candida albicans. The dentifrice contend bicarbonate produced discrete inhibition. Thus, in was evidenced that sodium bicarbonate presents, in vitro, a similar effectiveness to the Nistatina, uniting reduced cost and clinical effectiveness.

Tratamento do paciente HIV com fratura de mandíbula / Treatment of mandibular fractures in immunodeficiency patients

O tratamento conservador das fraturas mandibulares, que näo apresentam deslocamento significativo, pode ser indicado em algumas situaçöes peculiares como em pacientes HIV positivo. O risco de infeccöes oportunistas inerentes a esta imunodeficiência, associado às manifestaçöes bucais próprias da doença, dentre elas a periodontite úlcero necrosante aguda que causa mobilidade dentária, contra-indicam a utilizaçäo de métodos consagrados de tratamento, como o uso de fixaçäo interna rígida ou o bloqueio maxilomandibular através da aplicaçäo de arcos de Erich com fios de aço. Além destes aspectos, o risco de contaminaçäo acidental do cirurgiäo e a predisposiçäo à infecçäo pós-operatória nestes pacientes, justificam a escolha de um método alternativo e conservador no tratamento das faturas mandibulares

Atividade antifúngica de produtos químicos empregados no tratamento das candidíases bucais / Antifungal activity of the drugs used in treatment of candidiasis

A candidíase, em suas variadas apresentações clínicas, representa frequente e potencialmente perigoso processo patológico, especialmente em pacientes imunossuprimidos ou sob prolongado tratamento com antimicrobianos e/ou corticosteróides. Desta forma, para uma terapia adequada necessita-se agentes antifúngicos de comprovada eficiência. Assim foi objetivo deste trabalho avaliar a atividade antifúngica de vários compostos empregados na terapia de infecções micóticas (violeta de genciana, bicarbonato de sódio, iodo, cetoconazol, griseofulvina, nistatina, anfotericina B), frente a 50 isolados de C. Albicans obtidos de pacientes portadores de candidíase oral e frente a 50 isolados oriundos de indivíduos sádios. Utilizou-se o método da macrodiluição em caldo. O inóculo final foi de 10(5) leveduras por tubo, em duplicata. Pôde-se concluir que, a anfotericina B, o cetoconazol e a nistatina foram os agentes mais afetivos, embora sua aplicação na clínica odontológica se mostre problemática