Avaliação dos eixos ECA / ANG II / AT1 e ECA-2 / ANG (1-7) / MAS em fibroblastos de gengiva e ligamento periodontal humanos estimulados por IL-1ß e sua contribuição na produção e regulação de citocinas e quimiocinas / Evaluation ACE /ANG II /AT1 and ACE-2 /ANG (1-7) /MAS axis in gingival and periodontal ligament human fibroblasts stimulated with IL-1ß and its contribution in the production of cytokines and chemokines

O Sistema renina-angiotensina (SRA) tem sido relatado como um importante modulador de processos inflamatórios e imunológicos, incluindo a doença periodontal (DP). Estudos sugerem neste sistema um eixo alternativo (ECA-2 /ANG(1-7) /MAS) que atuaria como um contra-regulador de efeitos mediados pelo clássico eixo (ECA /ANGII /AT1). Sabe-se que bactérias periodontopatogênicas, como a Porphyromonas gingivalis (Pg), possuem componentes bioativos de membrana (ex. lipopolissacarídeos-LPS) capazes de induzir uma forte resposta imune no hospedeiro devido à liberação de citocinas nas células, entre elas Interleucina (IL)- 1ß. Neste contexto, fibroblastos são as células mais abundantes nos tecidos periodontais e possuem em sua superfície celular receptores necessários para o reconhecimento da invasão bacteriana, ativando cascatas intracelulares, que levam à produção de citocinas. O objetivo deste estudo foi verificar se os eixos ECA/ ANGII/ AT1 e ECA-2/ ANG(1-7)/ MAS contribuem para a produção e/ ou regulação de citocinas inflamatórias (CI) por fibroblastos de gengiva humana (HGF) e ligamento periodontal humano (HPLF) estimulados por IL-1ß. Após o pré-tratamento com Losartan e Ang (1-7) ou silenciamento mediado por RNA de interferência (RNAi) de AT1, HGF e HPLF foram estimulados por IL-1ß por 3 horas (RNAm) ou 24 horas (proteína). Expressão de RNAm para AT1, MAS, ECA, ECA-2, IL-1ß, TNF-α, IL-6, IL-8, IL-10, TGF-ß, CXCL12, RANK-L e OPG foram avaliados por RT-qPCR e das proteínas IL-6, IL-8, ECA e ECA-2 por ELISA. Foi realizado também Western Blot para detecção de AT1 e ECA nos extratos celulares e dosagem de nitrito no sobrenadante das culturas. Ambos os subtipos de fibroblastos mostraram aumento da expressão de RNAm para AT1, IL-1ß, IL-6, IL-8, TNF-α e OPG, quando estimulados por IL-1ß. No entanto, apenas em HPLF foi observado aumento para MAS, ECA e TGF-ß. Losartan e Ang (1-7) não modularam o transcrito, a secreção de CI e nem a produção de nitrito no sobrenadante das culturas, tanto em HGF como em HPLF. O silenciamento do receptor AT1 reduziu a secreção de IL-6 e IL-8 induzida por IL-1ß em cultura de HGF e HPLF e aumentou a expressão gênica de OPG somente em HGF. Estes resultados sugerem que o silenciamento de AT1, mas não o bloqueio farmacológico deste receptor pelo antagonista Losartan, em HGF e HPLF, pode controlar a produção de IL-6 e IL-8, que por sua vez contribuem para a patogênese periodontal.(AU)

The renin-angiotensin system (RAS) has been reported as an important modulator of inflammatory and immune responses, including periodontal disease (PD). Studies suggest an alternative axis as part of this system (ACE-2 / ANG (1-7) / MAS) that would act as counter-regulatory to the classical axis (ECA / ANGII / AT1). It is known that periodontal bacteria such as Porphyromonas gingivalis (Pg) have bioactive components in their membrane (such as lipopolysaccharide-LPS) capable of inducing a strong immune response in the host due to the release of cytokines in cells, including interleukin (IL) - 1ß. In this regard, fibroblasts are the most abundant cells in periodontal tissues and receptors needed for the recognition of bacterial invasion by activating intracellular cascades that lead to cytokine production. The aim of this study was to determine whether the axes ACE / ANGII / AT1 and ACE-2 / ANG (1-7) / MAS contribute to the production and / or regulation of inflammatory cytokines (IC) by fibroblasts of human gingiva (HGF) and human periodontal ligament (HPLF) stimulated IL-1ß. After pre-treatment with Losartan, Ang (1-7) or silencing mediated by RNA interference (RNAi) of AT1, HGF and HPLF were stimulated by IL-1ß for 3 hours (RNAm) or 24 hours (protein). Expression mRNA for AT1, MAS, ACE, ACE-2, IL-1ß, TNF-α, IL-6, IL-8, IL-10, TGF-ß, CXCL12, RANK-L and OPG was assessed by RT- qPCR and proteins IL-6, IL-8, ACE and ACE-2 by ELISA. Western Blot for the detection of AT1 and ECA and dosage of nitrite was also performed. Experiments stimulated by IL-1ß showed a positive control for gene expression AT1, IL-1ß, IL-6, IL-8, TNF-α and OPG in HGF and HPLF and MAS, ACE and TGF-ß only HPLF. Losartan and Ang (1-7) did not modulate the transcription and secretion of IC and no nitrite production in the culture supernatant of HGF and HPLF. The silencing AT1 reduced IL-6 secretion and IL-8 induced by IL- ß in cultured HGF and HPLF and increased OPG gene expression only HGF. These results suggest that silencing AT1, but not pharmacological blockade of this receptor by Losartan in HPLF and HGF, can control the production of IL-6 and IL-8, which in turn contribute to the pathogenesis of periodontal disease.(AU)

Expressão imunoistoquímica das proteínas p53 e MDM2 em carcinoma espinocelular de boca / p53 and MDM2 proteins immunohistochemical expression in oral squamous cell carcinoma

A proposta deste estudo foi avaliar a correlação entre duas proteínas associadas ao ciclo celular com grau histológico de malignidade dos carcinomas orais. Por meio da técnica imunoistoquímica, 30 casos de carcinoma espinocelular de boca foram estudados . Anticorpos monoclonais DO-7 e 1B10, direcionados à p53 e MDM2, respectivamente, foram utilizados. O acúmulo nuclear da proteína p53 foi encontrado em aproximadamente 80% dos carcinomas orais. A proteína MDM2 foi detectada em 90% dos casos. foi observada correlação estatística significante entre ambos os marcadores (p = 0,046), mas não foi encontrada associação significante entre estes e o grau histológico de malignidade. Não foi encontrada correlação entre p53 e MDM2 com o grau histológico de malignidade. Em adição, embora alterações na expressão da p53 representem um evento bem estabelecido em carcinogênese oral, outros mecanismos distintos podem ser considerados, como aqueles envolvendo seu principal regulador, o gene MDM2

Análise da via do Akt em neoplasias benignas e malignas de glândulas salivares / Analisys of Akt pathway in benign and malignant salivary galnd tumours

A proteína Akt modula a função de numerosos substratos envolvidos na regulação da sobrevivência celular, progressão do ciclo celular e crescimento celular. Estudos prévios realizados em nosso laboratório demonstraram a superexpressão de Akt em adenoma pleomórfico, mioepitelioma e carcinoma adenóide cístico. O objetivo deste estudo foi analisar a via da proteína Akt através da avaliação da expressão das proteínas NFkB e PTEN em neoplasias benignas e malignas de glândulas salivares através das técnicas de imunohistoquímica, western blotting e imunofluorescência, e a possível interação protéica direta entre p-Akt/Mdm2 e p-Akt/PTEN em linhagem de carcinoma adenóide cístico. A superexpressão nuclear na proteína PTEN foi encontrada nas duas neoplasias malignas estudadas. Além disso, não foi observada interação direta entre as proteínas p-Akt/Mdm2 e p-Akt/PTEN, as quais apresentam localização nuclear em neoplasias de glândulas salivares.

The Akt protein modulates the function of numerous substrates involved in the regulation of cell survival, cell cycle progression and cell growth. Previous studies from our laboratories showed overexpression of Akt and Mdm2 followed by the lack of p53 expression in pleomorphic adenoma, myoepithelioma and adenoid cystic carcinoma. The aim of this study was to analyze the Akt pathway through evaluation of expression of NFkB and PTEN proteins in pleomorphic adenoma, carcinoma ex pleomophic adenoma and adenoid cystic carcinoma by western blotting, immunofluorescence and immunohistochemical techniques, and we have intended to analyse a possible direct interaction between p-Akt/Mdm2 and p-Akt/ PTEN protein in salivary gland tumours. Overexpression of nuclear PTEN was present in both carcinomas studied. In addition, there was no direct interaction between p-Akt/Mdm2 and p-Akt/ PTEN protein, which presents a nuclear localization in salivary gland tumours.

Avaliaçäo da expressäo imuno-histoquímica do c-fos, c-jun e ciclina D1 em lesöes epiteliais com variados graus de atipia e em carcinomas epidermóides da cavidade bucal / Evaluation of immunohistochemical expression of c-fos, c-jun and cyclin D1 in oral epithelial lesions with different degrees of dysplasia, and oral squamous cell carcinomas

A proliferaçäo celular descontrolada é uma das principais características do câncer em geral, e as células tumorais apresentam na grande maioria das vezes a aquisiçäo de um defeito genético nos genes que regulam diretamente seus ciclos celulares. Portanto, tornam-se extremamente importantes os estudos que tentam desvendar os mecanismos moleculares envolvidos tanto na fase do ciclo celular propriamente dito, como também nos processos de regulaçäo da transcriçäo dos genes envolvidos no comando desse ciclo. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo avaliar a expressäo imuno-histoquímica do c-fos, c-jun e ciclina D1 em lesöes epiteliais com diferentes graus de atipia e em carcinomas epidermóides bucais a fim de identificar possíveis alteraçöes no padräo de expressäo das mesmas, como também correlacionar a expressäo das referidas proteínas entre si. Foram utilizados 18 casos de atipia leve, 23 casos envolvendo atipia moderada a intensa e 24 carcinomas epidermóides, tendo sido utilizados 15 casos de mucosa bucal normal para controle. A análise estatística revelou haver uma alteraçäo no padräo de expressäo das proteínas nos diferentes grupos estudados e também uma correlaçäo positiva e com significância estatística entre as mesmas

Expressão do gene p53 no carcinoma bucal: revista da literatura / p53 gene expression in oral squamous cell carcinomas: brief review of the literature

A busca por marcadores biológicos que auxiliem no diagnóstico, prognóstico e tratamento das neoplasias é intensa. O diagnóstico precoce é importantíssimo para a sobrevida do paciente e o p53 tem sido amplamente estudado. O gene p53 está localizado no cromossomo 17p13.1 e sua mutação é a alteração mais comum nas neoplasias humanas. A maioria das mutações ocorre em células somáticas, porém formas herdadas também foram encontradas. Neste artigo é feita uma breve revista sobre a carcinogênese bucal e a expressão de p53