Efetividade do tratamento endodôntico em sessão única x múltiplas sessões na periodontite apical pós-tratamento: sinais e sintomas; carga microbiana; níveis de endotoxinas e ácido lipoteicóico e volumetria da destruição óssea periapical por TCFC / Effectiveness of one-visit and two-visits endodontic treatment in posttreatment apical periodontitis: signs and symptoms; microbial load; endotoxin and lipoteichoic acid levels and bone destruction analysis by CBCT in 18-months follow-up

Os objetivos deste estudo foram: a) avaliar o sucesso clínico e por tomografia computadorizada de feixe cônico (TCFC) após 18 meses do retratamento em sessão única (RU) e múltiplas sessões (RM); b) monitorar carga (UFC/mL) e perfil microbiano; níveis de endotoxinas (EU/mL) e de ácido lipoteicóico [LTA (pg/mL)] em dentes com periodontite apical pós-tratamento (PAPT) submetidos a RU e RM; c) comparar a sintomatologia pós-operatória pela escala visual analógica de dor (EVA) em RU e RM; d) comparar os tratamentos quanto à redução de UFC/mL, EU/mL, LTA (pg/mL) e a volumetria da lesão periapical (LP) e) avaliar as correlações e associações entre os dados obtidos no estudo. Seguindo critérios de inclusão e não-inclusão, foram selecionados 40 dentes com PAPT, divididos em dois grupos: RM e RU. Os pacientes foram submetidos à TCFC. Foram realizadas coletas do conteúdo do canal radicular: após remoção do material obturador (S1), após preparo biomecânico (PBM) (S2) e após MIC (S3). Ao final da sessão, foi fornecida a EVA para avaliação da sintomatologia dolorosa apresentada nos períodos de 24hs, 48hs e 7 dias. O conteúdo dos canais radiculares foi avaliado por cultura microbiológica, perfil microbiano por Checkerboard DNA-DNA hybridization, níveis de endotoxinas pelo teste Lisado Amebócito de Limulus e de ácido lipoteicóico pelo ensaio de ELISA. Foi realizada a volumetria da destruição óssea periapical inicial e final por TCFC pelo software ITK snap. Os dados foram analisados estatisticamente. Os níveis de UFC/mL, EU/mL e LTA (pg/mL) diminuíram após o PBM, havendo a manutenção dos mesmos após o uso de MIC (p>0,05). As coletas apresentaram valores iniciais (S1) maiores que os residuais (antes da obturação) para os parâmetros avaliados. Quanto aos valores residuais, foram encontrados maiores valores de UFC/mL em RM e menores valores de LTA no mesmo grupo (p<0,05); porém sem diferença entre os grupos RU e RM quanto aos valores residuais de EU/mL. Os micro-organismos Gram-negativos mais encontrados foram o F. nucleatum, C. rectus, C. gingivalis, P. gingivalis, P. intermedia e L. buccalis, sendo os Gram-positivos: E. faecalis, E. faecium, S. constellatus e S. mitis. Não houve diferença entre os grupos RU e RM quanto à sintomatologia pósoperatória (p>0,05) pela EVA. O volume inicial das LP variou de 10 a 470 mm³, sendo que o final variou de 0 a 48 mm³. Houve redução da média dos volumes de 84,71% em RU e de 90.56% em RM, sendo esta redução significante em ambos os grupos (p< 0,0001), mas sem diferença estatística entre eles (p=0,9117). No período de 18 meses após o retratamento endodôntico não houve diferenças na regressão das lesões e análise dos demais sinais e sintomas entre RU e RM(AU)

This study aimed to: a) evaluate the success rates of one-visit (1-visit) and two-visit (2- visit) endodontic retreatment after 18 months by cone-beam computed tomography (CBCT) and analyze clinical signs and symptoms; b) monitor and compare the microbial load and profile; levels of endotoxins and lipoteichoic acid in teeth with posttreatment apical periodontitis (PTAP); c) compare the postoperative pain between the groups by the visual analog pain scale (VAS); d) correlate the variables with themselves. Forty teeth with PTAP were selected and submitted to CBCT. The sampling procedure was performed: after filling material removal (S1), after biomechanical preparation (S2), and after the intracanal medication placement (S3). VAS was provided for assessment of the postoperative pain at different time-points (24 h, 48 h, and 7 days). Root canal contents were submitted to microbiological assessment by culture technique (CFU/mL) and Checkerboard DNA-DNA hybridization, and the determination of LPS (UE/mL) and LTA (pg/mL) levels by Limulus amebocyte lysate and enzyme-linked immunosorbent assays, respectively. Periapical lesions volumes were obtained by the ITK snap program. Data were statistically analyzed. CFU/mL, UE/mL, and LTA (pg/mL) decreased after biomechanical preparation, with their maintenance after the use of intracanal medication (p>0.05). All root canal samples had their baseline values (S1) higher than those found before the root canal obturation (residual values) for all parameters. Regarding the residual values, higher values of CFU/mL and lower values of LTA were found in 2-visit groups (p<0.05). The most frequently Gram-negative microorganisms found during sampling procedures were F. nucleatum, C. rectus, C. gingivalis, P. gingivalis, P. intermedia and L. buccalis, the Gram-positive ones were E. faecalis, E. faecium, S constellatus and S. mitis. There was no difference between the 1 or 2-visit treatments regarding postoperative symptoms (p>0.05). The initial volume of the periapical lesions ranged from 10 to 470 mm³, and the final ones ranged from 0 to 48 mm³. A significant reduction of the periapical lesion was observed after 18-months in both groups (p<0.0001), but no statistical difference was found between them (p>0.05). No significant differences were observed in the outcome of the two modalities of endodontic retreatment(AU)

A Protocol to Perform Systemic Lipopolysacharide (LPS) Challenge in Rats / Protocolo para realizar reto sistémico con lipopolisacárido (LPS) en ratas

Abstract 19. Lipopolysaccharide (LPS) is a component of the outer membrane of Gram-negative bacteria. In animals, intraperitoneal administration of LPS, stimulates innate immunity and the production of proinflammatory cytokines. LPS provides an inflammatory stimulus that activates the neuroimmune and neuroendocrine systems resulting in a set of responses termed sickness behavior. The purpose of this protocol is to describe step-by-step the preparation and procedure of application of intraperitoneal injection of LPS in rats, as a guide for those researchers that want to use this assay to mount an inflammatory response. LPS intraperitoneal challenge in rats has been widely used to evaluate antiinflammatory reagents and to address basic scientific questions.

Resumen 23. El lipopolisacárido (LPS) es un componente de la membrana externa de las bacterias Gram negativas. En animales, la administración intraperitoneal de LPS estimula la inmunidad innata y la producción de citoquinas proinflamatorias. El LPS proporciona un estímulo inflamatorio que activa el sistema neuroinmunológico y el sistema neuroendocrino, lo que da como resultado un conjunto de respuestas denominadas conductas de enfermedad. El propósito de este protocolo es describir paso a paso la preparación y el procedimiento de aplicación de la inyección intraperitoneal de LPS en ratas, como una guía para aquellos investigadores que desean utilizar este método para estimular una respuesta inflamatoria en el animal. La estimulación con LPS en ratas, aplicada intraperitonealmente, se ha utilizado ampliamente para evaluar reactivos antiinflamatorios y para abordar preguntas básicas de investigación científica.

Redução de bactérias cultiváveis, lipopolissacarídeos e colagenase/mmp-8 no tratamento endodôntico associado à ativação ultrassônica na infecção endodôntica primária: estudo clínico randomizado / Cultivable bacteria, lipopolysaccharides and neutrophil collagenase/mmp-8 reduction on the endodontic treatment associated to ultrasonic activation in primary endodontic infection: a randomized clinical trial

O objetivo desse estudo clínico randomizado foi avaliar em dentes com infecção endodôntica primária (IEP) os microrganismos anaeróbios cultiváveis (UFC/mL), níveis de endotoxinas (LPS) (EU/mL) e colagenase/MMP-8 da região periapical antes e durante o tratamento endodôntico utilizando diferentes protocolos de irrigação final: irrigação convencional (CNI), ativação ultrassônica passiva (PUA) e ativação ultrassônica continua (CUA). Quarenta e cinco dentes com IEP foram submetidos ao tratamento endodôntico utilizando NaOCl 2.5% como solução irrigadora seguido do uso de EDTA 17%. Os protocolos de limpeza final foram realizados com irrigação com agulha convencional (controle), PUA e CUA; na sequência os canais foram preenchidos com pasta de Ca(OH)2 + SS por 14 dias. Foram feitas coletas do conteúdo do canal radicular após abertura coronária (S1), após diferentes protocolos de irrigação final (S2) e após uso de medicação intracanal com pasta de hidróxido de cálcio [Ca(OH)2] (S3). O conteúdo coletado do canal foi submetido as análises por cultura microbiológica (UFC/mL) e níveis de endotoxinas (EU/mL) pelo Lisado de Amebócitos de Limulus (LAL). Após preparo dos canais e após medicação com Ca(OH)2 foram realizadas coletas do fluido periapical para análise da expressão de MMP-8 por ELISA. A análise estatística dos dados foi realizada pelo testes Kruskal-Wallis e Dunn para analise intergrupos de UFC/mL, LPS e MMP-8, todos eles com nível de significância de 5% (P<0.05). Microrganismos anaeróbios cultiváveis foram detectados em 100 % das amostras iniciais (S1) com valor médio de 1.18 x 105 CFU/mL (20 ­ 1.84 x 106 CFU/mL). CUA apresentou maior efetividade na redução de microrganismos anaeróbios cultiváveis em S3 (97.27%) seguido pela PUA (96.56%) e CNI (96.2%). Endotoxinas foram identificadas em 100% das amostras em S1 com valor médio de 538.10 EU/mL (0.017 x 6190 EU/mL), CUA mostrou uma maior redução nos níveis de LPS em S3 (97.75 %), seguido pela PUA (97.11%) e CNI (90.42%). O protocolo de irrigação final com ativação ultrassônica PUA e CUA favoreceu a redução de MMP-8 em comparação ao grupo CNI. Houve correlação estatística positiva entre os níveis de LPS e MMP-8. Conclui-se que o preparo biomecânico produz a maior redução no número de microrganismos anaeróbios e endotoxinas; O protocolo de irrigação final com PUA e CUA em associação ao preparo biomecânico produz maior redução nos níveis de Endotoxinas e MMP-8 em comparação com CNI. Existe correlação estatística positiva entre os níveis de LPS e MMP-8 presentes nas infecções endodônticas primárias, mostrando a associação do LPS com o processo de destruição tecidual(AU)

The aim of this randomized clinical trial was to evaluate in cultivated anaerobic microorganisms (CFU / mL), endotoxin levels (LPS) (EU / mL) and periapical collagenase / MMP-8 in teeth with primary endodontic infection (EPI) before and during Endodontic treatment using different final irrigation protocols: conventional irrigation (CNI), passive ultrasonic activation (PUA) and continuous ultrasonic activation (CUA). Forty-five teeth with IEP were submitted to endodontic treatment using 2.5% NaOCl as an irrigating solution followed by 17% EDTA. Final cleaning protocols were performed with conventional needle irrigation (control), PUA and CUA; The root canals were then filled with Ca (OH)2 paste for 14 days. Root canal contents were collected after coronary opening (S1), after root canal preparation (S2) and after intracanal calcium hydroxide paste [Ca (OH)2] (S3). Samples of the root canal content was performed to analysis by microbiological culture (CFU / mL) and endotoxin levels (EU / mL) by Limulus Amebocyte Lysate (LAL). After canal preparation and after Ca (OH)2 medication, periapical fluid samples were collected for analysis of MMP-8 expression by ELISA. Statistical analysis of the data was performed by Kruskal-Wallis and Dunn tests for intergroup analysis of CFU / mL, LPS and MMP-8, all with a significance level of 5% (P <0.05). Cultivable anaerobic microorganisms were detected in 100% of the initial samples (S1) with a mean value of 1.18 x 105 CFU / mL (20 - 1.84 x 106 CFU / mL). CUA showed greater effectiveness in reducing anaerobic microorganisms cultivable in S3 (97.27%) followed by PUA (96.56%) and CNI (96.2%). Endotoxins were identified in 100% of samples in S1 with a mean value of 538.10 EU / mL (0.017 x 6190 EU / mL), CUA showed a greater reduction in LPS levels in S3 (97.75%), followed by PUA (97.11%). and CNI (90.42%). The final irrigation protocol with ultrasonic activation PUA and CUA favored the reduction of MMP-8 compared to the CNI group. There was a positive statistical correlation between LPS and MMP-8 levels. It is concluded that the biomechanical preparation produces the greater reduction in the number of anaerobic microorganisms and endotoxins; The final irrigation protocol with PUA and CUA in combination with biomechanical preparation produces greater reduction in Endotoxin and MMP-8 levels compared to CNI. There is a positive statistical correlation between the levels of LPS and MMP-8 present in primary endodontic infections, showing the association of LPS with the tissue destruction process(AU)

Comparação in vivo de HyFlex CM e ProTaper Next na remoção de bactérias e endotoxinas de infecções endodônticas / In Vivo Comparison of HyFlex CM and ProTaper Next in Bacteria and Endotoxin Removal from Endodontic Infections

O objetivo deste estudo clínico foi avaliar a eficácia de dois sistemas rotatórios: HyFlex CM e ProTaper Next na remoção de bactérias cultiváveis e endotoxinas de canais radiculares infectados. Vinte e quatro canais radiculares de molares e pré-molares com necrose pulpar e lesão periapical foram selecionados e divididos aleatoriamente em 2 grupos: HyFlex CM (n = 12); e ProTaper Next (n = 12). As amostras foram coletadas antes e após o preparo biomecânico e inoculadas em frascos específicos. A irrigação foi realizada com hipoclorito de sódio a 2,5%. Um teste turbidimétrico LAL (Pyrogent 5000 ­ Lonza, Walkersville, MD, EUA) foi utilizado para quantificar endotoxinas. Cultura microbiológica foi utilizada para determinar a contagem de unidades formadoras de colônias bacterianas (UFC/mL). Os dados coletados foram analisados estatisticamente usando SigmaPlot 12.0 para Windows (Systat Software Inc., San Jose, CA). Foi realizado o teste estatístico de Two-Way ANOVA e o nível de significância foi de 5%. Nas coletas antes do preparo biomecânico, bactérias cultiváveis e endotoxinas foram evidenciadas em 100% das amostras. A análise de cultura revelou que não houve uma diferença estatisticamente significativa na redução bacteriana entre os dois sistemas de instrumentação. As endotoxinas estavam presentes em 100% dos canais após a instrumentação e não houve diferença estatística entre os dois sistemas na redução de endotoxinas. Assim, concluímos que ambos os sistemas de instrumentação foram eficazes na redução de bactérias e endotoxinas de canais radiculares com infecção endodôntica primária e que não houve diferença estatística entre eles. Contudo, nenhum sistema foi capaz de eliminar 100% das bactérias e seus subprodutos(AU)

The aim of this clinical study was to compare the effectiveness of two rotary systems: HyFlex CM and ProTaper Next on the removal of cultivable bacteria and endotoxins from primarily infected root canals. Twenty-four root canals of molars and premolars with pulp necrosis were selected and randomly divided into 2 groups: HyFlex CM (n = 12); and ProTaper Next (n = 12). Samples were collected before and after the biomechanical preparation and inoculated in specific flasks. Irrigation was performed using 2.5% sodium hypochlorite. A kinetic turbidimetric lysate assay of limulus amoebocytes was used to quantify endotoxins. Microbiological culture was used to determine the count of bacterial colony forming units (CFU/mL). Data collected were statistically analyzed using SigmaPlot 12.0 for Windows (Systat Software Inc, San Jose, CA). The TwoWay ANOVA statistical test was performed and the level of significance was 5%. In the samples before the biomechanical preparation, cultivable bacteria and endotoxins were evidenced in 100% of the cases. The culture analysis revealed that there was no statistically significant difference in the bacterial reduction between the two instrumentation systems. Endotoxins were present in 100% of the canals after instrumentation, and there was no statistical difference between the two systems in endotoxin reduction. Thus, it was concluded that both instrumentation systems were effective in reducing root canal bacteria and endotoxins with primary endodontic infection and that there was no statistical difference between them. However, no system was able to eliminate 100% of the bacteria and their by-products(AU)

Avaliação clínica do efeito de diferentes medicações intracanais nos níveis de resolvinas e lipoxinas periapicais: novas perspectivas endodônticas / Clinical evaluation of the effect of different intracanal medications on levels of periapical resolvins and lipoxins: new endodontic perspectives

RESUMO O objetivo do estudo foi avaliar o efeito da terapia endodôntica utilizando NaOCl 2,5% e medicações intracanais a base de hidróxido de cálcio e de da Nacetil cisteína (NAC) na desinfecção dos canais radiculares, na redução de endotoxinas e na estimulação de liberação dos mediadores lipídicos Resolvina E1, D2 (RvE1, RvD2) e Lipxina A4 (LxA4). Foram selecionados quarenta dentes unirradiculares, com infecção endodôntica primária e periodontite apical. Os dentes foram aleatoriamente divididos em 3 grupos de acordo com a medicação intracanal a ser utilizada: G1: soro fisiológico + Ca(OH)2 (n=14),G2: N-Acetil Cisteína (n=13), G3: clorexidina (CLX) + Ca(OH)2 (n=14). Amostras bacterianas e de endotoxinas foram coletadas do canal radicular, após abertura coronária, após preparo dos canais com limas reciprocantes (Reciproc) selecionadas de acordo com o diâmetro do canal radicular e a solução irrigante (NaOCl 2,5%) e após medicação intracanal. A análise da atividade antimicrobiana foi através da contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL) de microrganismos remanescentes no canal radicular e quantificação de endotoxinas (EU/mL) através do teste Limulus Amebocyte Lysate ­ LAL. Após o preparo biomecânico (PBM) os dentes foram preenchidos com as medicações intracanais de acordo com os grupos por quatorze dias. O fluído intersticial foi coletado após preparo dos canais e após 14 dias de medicação e a quantificação dos mediadores lipídicos (RvE1, RvD2, LxA4) foi realizada através do teste imunoenzimático (ELISA). Os valores obtidos foram tabulados, analisados pelo software GraphPad Prism 6.01 e submetidos aos testes de normalidade de Kolmogorov-Smirnov e Lilliefors e em seguida aos testes Kruskal-Wallis e Dunn e Anova one-way e Tukey (P <0.05). Para carga microbiana, o PBM reduziu em média 96% dos microrganismos aeróbios e 92,5% dos anaeróbios em todos os grupos (p<0,05). A utilização de medicação intracanal à base de Ca(OH)2 manteve os níveis atingidos com o PBM (p>0,05), porém no grupo NAC houve aumento de bactérias. Os níveis de endotoxinas diminuíram após o preparo dos canais e o uso das medicações reduziu o nível de endotoxinas porém sem diferença estatística em relação à redução alcançada com o preparo biomecânico. Quanto aos mediadores lipídicos, somente no grupo NAC foi observado aumento de Rv D2. Concluiu-se que o PBM reduziu significantemente o número de bactérias e a quantidade de endotoxinas do canal, e as medicações à base de Ca(OH)2 foram eficientes na eliminação de microrganismos do canal, entretanto NAC não foi eficaz para a redução da carga microbiana; As três medicações avaliadas foram capazes de atuar no LPS bacteriano. Somente a NAC foi capaz de influenciar positivamente esse resultado com o aumento de RvD2 pós 14 dias da medicação. Os mediadores lipídicos têm grande potencial para uso nos diversos tipos de tratamento endodôntico(AU)

ABSTRACT The aim of this study was to evaluate the effect of endodontic therapy using 2.5% NaOCl and intracane medications based on calcium hydroxide and Nacetyl cysteine (NAC) on root canal disinfection, reduction of endotoxins and stimulation of release of the lipid mediators Resolvin E1, D2 (RvE1, RvD2) and Lipoxin A4 (LxA4). Forty uniradicular teeth were selected, with primary endodontic infection and apical periodontitis. The teeth were randomly divided into 3 groups according to the intracanal medication to be used: G1: saline + Ca (OH) 2 (n = 14), G2: N-Acetyl Cysteine (n = 13), G3: chlorhexidine CLX) + Ca (OH) 2 (n = 14). Bacterial and endotoxin samples were collected from the root canal after coronary opening after preparation of the channels with reciprocal files (Reciproc) selected according to the root canal diameter and the irrigating solution (NaOCl 2.5%) and after intracanal medication. The analysis of the antimicrobial activity was by count of colony forming units (CFU / mL) of microorganisms remaining in the root canal and quantification of endotoxins (EU / mL) using the Limulus Amebocyte Lysate - LAL test. After biomechanical preparation (PBM) the teeth were filled with intracanal medications according to the groups for fourteen days. The interstitial fluid was collected after preparation of the channels and after 14 days of medication and quantification of the lipid mediators (RvE1, RvD2, LxA4) was performed through the enzymelinked immunosorbent assay (ELISA). The values obtained were tabulated, analyzed by GraphPad Prism 6.01 software and submitted to Kolmogorov Smirnov and Lilliefors normality tests, followed by Kruskal-Wallis and Dunn and Anova one-way and Tukey tests (P <0.05). For microbial load, PBM reduced on average 96% of aerobic microorganisms and 92.5% of anaerobes in all groups (p <0.05). The use of intracanal medication based on Ca (OH) 2 maintained levels reached with PBM (p> 0.05), but in the NAC group there was an increase of bacteria. The endotoxin levels decreased after the preparation of the canals and the use of the medications reduced the endotoxin level, but without statistical difference in relation to the reduction achieved with the biomechanical preparation. As for the lipid mediators, only in the NAC group an increase of D2 Rv was observed. It was concluded that PBM significantly reduced the number of bacteria and the amount of endotoxins in the canal, and Ca (OH) 2-based medications were efficient in the elimination of microorganisms from the canal, however NAC was not effective for reducing the load microbial; The three medications evaluated were able to act on bacterial LPS. Only the NAC was able to positively influence this result with the increase of RvD2 after 14 days of the medication. Lipid mediators have great potential for use in various types of endodontic treatment(AU)

Infecções endodônticas primária x secundária: perfil microbiano, níveis de endotoxinas e ácido lipoteicóico, sinais e sintomas / Primary x secondary endodontic infections: microbial profile, endotoxins and lipoteichoic acid levels, signs and symptoms

Esta pesquisa clínica teve como objetivo comparar a carga e composição microbiana bem como as concentrações de LPS e LTA encontradas na infecção endodôntica primária (IEP) e na infecção endodôntica secundária (IES). Além disso, a correlação desses achados com características clínicas e tomográficas também foram investigadas. Sessenta dentes de pacientes com IEP (31) e IES (29) foram submetidos à avaliação clínica e tomográfica, seguido do tratamento endodôntico ou retratamento. Amostras foram coletadas de cada canal radicular utilizando cones de papel. Logo após a abertura coronária (IEP) ou após a desobturação dos canais (IES) o conteúdo coletado foi submetido à técnica de cultura microbiológica para determinar a carga microbiana de bactérias anaeróbias e ao método Checkerboard DNA-DNA hybridization para investigação de espécies bacterianas presentes. O teste de Lisado de Amebócito de Limulus e o Ensaio de Imunoabsorção Enzimática foram utilizados para quantificar os níveis de LPS e LTA. Os dados obtidos foram correlacionados com os achados clínicos e tomográficos. Maiores quantidades de bactérias cultiváveis e de LPS foram encontradas na IEP (p < 0,05). Não houve diferença nos níveis de LTA entre IEP e IES (p > 0,05). A mediana de espécies por canal radicular encontrada na IEP foi de 9 espécies e na IES foi de 22 (p < 0,05). As espécies bacterianas mais prevalentes detectadas na IEP foram P. gingivalis (14/31) e S. intermedius (14/31). Na IES, as espécies mais prevalentes foram P. gingivalis (21/29) e C. rectus (20/29). LPS foi correlacionado positivamente com um maior volume da lesão periapical (p < 0,05). Níveis de LTA não foram relacionados a sinais e sintomas ou ao volume da lesão periapical (p > 0,05). Concluiu-se que dentes com IEP tiveram maiores quantidades de carga microbiana e de LPS do que os dentes com IES. Uma maior quantidade de LPS foi correlacionada positivamente com um maior volume de destruição óssea periapical. Uma ampla interação de espécies bacterianas específicas resultou em diferentes características clínicas(AU)

This clinical research aimed to compare the microbial load and composition as well as the LPS and LTA concentrations found in Primary Endodontic Infection (PEI) and Secondary Endodontic Infection (SEI). In addition, the correlation of these findings with clinical and tomographic features was also investigated. Sixty patients' teeth with PEI (31) and SEI (29) were submitted to clinical and tomographic assessment, followed by endodontic treatment or retreatment. Samples were taken from each root canal using paper points. After the coronary opening (PEI) or after the removal of root filling material (SEI), the collected samples were submitted to the microbiological culture technique to determine the microbial load of anaerobic bacteria and to the Checkerboard DNA-DNA hybridization method for investigation of present bacterial species. The Limulus amebocyte lysate assay and enzyme-linked immunosorbent assay were used to quantify LPS and LTA levels. The data obtained were correlated with clinical and tomographic findings. A higher number of cultivable bacteria and LPS was found in PEI (p < 0.05). There was no difference in LTA levels between PEI and SEI (p> 0.05).The median number of species per root canal found in PEI was 9 and 22 in SEI (p < 0.05). The most prevalent bacterial species detected in PEI were P. gingivalis (14/31) and S. intermedius (14/31). In SEI, the most prevalent species were P. gingivalis (21/29) and C. rectus (20/29). LPS was positively correlated with a larger periapical lesion volume (P < 0.05). LTA levels were not related to signs and symptoms or periapical lesion volume (p> 0.05). It was concluded teeth with PEI had higher contents of microbial load and LPS than teeth with SEI. However, a more diverse microbiota was found in SEI than that of PEI. Higher content of LPS was positively correlated with larger periapical bone destruction. A widely interaction of specific microbial species resulted in different clinical features(AU)

Successful and failed mini-implants: microbiological evaluation and quantification of bacterial endotoxin

Abstract Objectives Using two groups of mini-implants (successful and failed) the objectives of this in vivo study were: to evaluate the microbial contamination by the checkerboard DNA-DNA hybridization technique and to quantify the bacterial endotoxin by the limulus amebocyte lysate assay. Material and Methods The 15 successful and 10 failed mini-implants (1.6 mm diameter × 7.0 or 9.0 mm long), placed in the maxilla and/or mandible, were obtained from 15 patients undergoing orthodontic treatment. Data were analyzed statistically by the Wilcoxon rank-sum test using the SAS software (a=0.05). Results All 40 microbial species were detected in both groups of mini-implants, with different frequencies. No differences were observed between the groups with respect to microbial complexes (blue, purple, yellow, green, orange, red and other species) and endotoxin quantification (p>0.05). Conclusion Neither microbial contamination nor endotoxin quantification was determinant for the early loss of stability of the mini-implants.

Tratamento endodôntico em sessão única x múltiplas sessões: correlação do sucesso após 1 ano de tratamento com níveis de endotoxinas, carga microbiana e sinais /sintomas / Single visit x multiple visit endodontic treatment: correlation of success after 1 year of treatment with endotoxin levels, microbial load and signs / symptoms

Os objetivos deste estudo foram: a) monitorar carga microbiana (UFC/mL) e níveis de endotoxinas (EU/mL) em dentes com infecção endodôntica primária submetidos a tratamento endodôntico em sessão única (SU) e múltipla sessões (SM); b) relacionar (EU/mL) e (UFC/mL) com sinais e sintomas clínicos, volume do canal radicular e da lesão periapical (mm³), através do uso de tomografia computadorizada de feixe cônico (TCFC); c) comparar o volume da lesão periapical (mm³) antes e após um ano de tratamento nos grupos SU e SM; d) comparar a redução do volume da lesão periapical (mm³) após um ano de tratamento com EU/mL e UFC/mL iniciais e antes da obturação; e) comparar taxa de sucesso encontrado após um ano de tratamento entre SU e SM. Foram selecionados vinte dentes com necrose pulpar e lesão periapical que foram submetidos à TCFC. Foram realizadas coletas do conteúdo do canal radicular: após abertura coronária (S1), após instrumentação com sistema reciprocante Reciproc® e irrigação com hipoclorito de sódio 2,5% (NaOCl) (S2), após uso de EDTA 17% (S3) e após medicação intracanal (MIC) a base de hidróxido de cálcio e solução salina fisiológica (S4). Os conteúdos foram avaliados quanto à atividade antimicrobiana por cultura microbiológica e quanto aos níveis de endotoxinas pelo teste Lisado Amebócito de Limulus. Foi realizada a volumetria dos canais radiculares e da destruição óssea periapical através da TCFC utilizando o software Nemotec®. Por fim, foi realizado controle do tratamento endodôntico, para comparar os tratamentos quanto ao processo de reparo da lesão periapical, relacionando o volume das lesões com os achados clínicos, radiográficos e da tomografia inicial. Os dados foram analisados estatísticamente. Os níveis de UFC/mL e EU/mL diminuíram após o PBM, porém a MIC e o EDTA 17% não interferiram nos resultados; UFC/mL e EU/mL não foram relacionadas a sinais/sintomas e volume da lesão periapical; porém houve correlação entre o volume da lesão periapical e os sinais e sintomas; não houve diferença estatística entre os tratamentos SU e SM na redução das lesões periapicais após um ano e não houve relação entre UFC/mL e EU/mL com a regressão da lesão. Conclue-se, portanto, que o tipo de intervenção (SU x SM) não influenciou no sucesso do tratamento endodôntico.

Estudo comparativo de sistemas rotatório, reciprocante e híbrido no preparo de canais radiculares em dentes com infecção endodôntica primária: perfil microbiano e quantificação de endotoxinas / Comparative estudy of rotatory, reciprocating and hybrid systems on the instrumentation of root canals in teeth with primary endodontic infection: microbiological profile and endotoxin quantification

Os objetivos deste trabalho são: 1) Quantificar por checkerboard a carga microbiana e pelo método de LAL endotoxinas (EU/mL) nas infecções endodônticas primárias; 2) Realizar o monitoramento dos níveis de endotoxinas (EU/mL) e de carga microbiana antes do tratamento, após o preparo biomecânico com sistemas de instrumentação rotatória, reciprocante e híbrida e após o uso da medicação intracanal; 3) Relacionar sinais e sintomas clínicos com níveis de endotoxinas, micro-orgnismos e com complexos bacterianos; 4) Relacionar volumetria dos canais radiculares por meio de TCFC com níveis de endotoxina, micro-organismos e complexos bacterianos. Trinta dentes com infecção endodôntica primária e presença de lesão periapical foram submetidos a TCFC antes do tratamento e avaliados quanto a presença de sinais e sintomas clínicos. Após abertura coronária, foi realizada a coleta inicial nos canais radiculares, e em seguida, procedeu-se com o tratamento endodôntico, sendo os dentes divididos em diferentes grupos experimentais de acordo com o sistema de instrumentação utilizado (n=10): rotatório Mtwo (MTWO), reciprocante Reciproc (REC), e híbrido Genius (GEN). Durante o preparo biomecânico, os canais foram irrigados com 24 mL de NaOCl 2,5%. Foram realizadas coletas do conteúdo dos canais radiculares: logo após a abertura coronária (1 col), após a instrumentação (2 col), e após a MIC por 14 dias, realizada com pasta de hidróxido de cálcio associada a solução salina fisiológica (3 col). A detecção de micro-organimos foi realizada pelo teste checkerboard DNA-DNA hybridization. A quantificação de endotoxinas foi realizada pelo teste cinético cromogênio do lisado de amebócito de Limulus. As volumetrias dos canais radiculares foram realizadas com auxílio do software Nemotec®. Todos os dados foram analisados estatisticamente. Os resultados mostraram a detecção de micro-organismos e endotoxinas em 100% das amostras iniciais, sendo as bactérias C. ochracea e F. nucleatum as mais prevalentes (53%). Após o PBM, os micro-organismos mais encontrados foram F. nucleatum e L. buccalis (50%); e após a MIC C. gracilis (53,3%). Não houve diferença estatística entre os grupos quanto à redução da carga microbiana. Quanto as endotoxinas, logo após o PBM, o grupo que mais reduziu foi o MTWO, seguido por GEN e REC; após a MIC, o grupo que mais reduziu foi o GEN, seguido pelo MTWO e REC, porém todos os grupos se comportaram de maneira semelhante. Dor espontânea foi relacionada com P. nigrescens; dor a percussão com P. gingivalis, V. parvula, S. sputigena, P. nigrescens e E. saburreum; presença de fístula foi relacionada com o complexo laranja, Grampositivas e anaeróbios facultativos, e micro-organismos E. corrodens, P. micra, C. showae e E. saburreum. O maior volume do canal radicular foi correlacionado fortemente com anaeróbios estritos, com o complexo laranja e o micro-organismo P. micra. O PBM foi efetivo na redução de bactérias e endotoxinas do canal radicular, mas sem diferença estatística entre os três sistemas utilizados. Conclui-se que o PBM com NaOCl 2,5% é eficaz na redução de endotoxinas e na remoção de micro-organimos do canal radicular; sinais e sintomas são relacionados com micro-organismos, assim como a volumetria do canal radicular (AU)

The aims of this study are: 1) Quantify by checkerboard test the microbial load and endotoxins through LAL method (EU/ml) in primary endodontic infections; 2) To monitore levels of endotoxin (EU/ml) and microbial load before treatment, after biomechanical preparation with rotatory, reciprocating and hybrid instrumentation systems, and after use of intracanal medication; 3) To associate clinical signs and symptoms with endotoxin levels, microorganism and bacterial complexes; 4) To relate volumes of root canals through cone beam computed tomography (CBCT), with endotoxin levels, microorganisms and bacterial complexes. Thirty teeth with primary endodontic infection and periapical lesion were submitted to endodontic treatment after CBCT and evaluated the presence of clinical signs and symptoms. After coronary opening, the initial samples were collected to verify the presence of infection in root canals. Then, teeth were divided into different experimental groups according to the instrumentation system used (n=10): rotatory Mtwo (MTWO), reciprocating Reciproc (REC), and hybrid Genius (GEN). During biomechanical preparation, the canals were irrigated with 24 mL of 2.5% NaOCl. Samples were collected: after coronary opening (S1), after the instrumentation (S2) and after intracanal medication for 14 days with calcium hydroxide paste and physiological saline solution (S3). The detection of microorganisms was performed by checkerboard DNA-DNA hybridization technique. The endotoxin quantification was performed by chromogenic kinetic test of the Limulus amoebocyte lysate. The root canal volumetries were performed by Nemotec® software. All data were analyzed statistically. The results showed the detection of microorganisms and endotoxins in 100% of the S1, with the most prevalent bacteria being C. ochracea and F. nucleatum (53%). After biomechanical preparation, the most found microorganisms were F. nucleatum and L. buccalis (50%); And after intracanal medication C. gracilis (53.3%). There was no statistical difference between the groups regarding the reduction of the microbial load. In relation to endotoxins, after biomechanical preparation, the group with greatest reduction was MTWO, followed by GEN and REC; after intracanal medication, the group with greatest reduction was GEN, followed by MTWO and REC, but there was no statistical difference between them. Spontaneous pain was associated to P. nigrescens; tenderness to percussion with P. gingivalis, V. parvula, S. sputigena, P. nigrescens and E. saburreum; sinus tract was related to the orange complex, Gram-positive and facultative anaerobes, and microorganisms E. corrodens, P. micra, C. showae and E. saburreum. The root canal volume was strongly correlated with strict anaerobes, with the orange complex and the P. micra microorganism. Biomechanical preparation was effective in decreasing bacteria and endotoxin, but with no statistical difference were found between the three systems. Microorganisms are related to signs and symptoms and to root canal volume. In conclusion, biomechanical preparation with 2.5% NaOCl was effective on reducing endotoxins and decreasing microorganisms from root canals; signs and symptoms are related to microorganisms as well as root canal volumetry (AU)

Efeito do ultrassom na eliminação de micro-oganismos e endotoxinas em dentes com infecção endodôntica primária / Ultrasound effect in eliminating microorganisms and endotoxins in teeth with primary endodontic infection

Os objetivos do presente estudo foram: a) Verificar a carga microbiana e quantificar endotoxinas presentes nos canais radiculares de dentes com infecção endodôntica primária; b) Comparar a efetividade antibacteriana e sobre endotoxinas do preparo biomecânico com dois métodos de irrigação final: com ou sem irrigação ultrassônica passiva; c) Correlacionar sinais e sintomas com a microbiota presente e complexos bacterianos; d) Relacionar níveis de endotoxinas e carga microbiana com sinais e sintomas clinicos. Foram selecionados para o estudo 20 dentes uniradiculares, que apresentavam infecção endodôntica primária e lesão periapical, sendo estes submetidos a TCFC. Os canais foram preparados com sistema reciprocante e irrigação com NaOCl 2.5%, seguido de dois protocolos de irrigação final: com e sem uso de ultrassom. Todos os canais foram preenchidos com MIC com hidróxido de cálcio + soro fisiológico e após 14 dias foram obturados com cones de guta-percha e cimento AH Plus. Foram realizadas coletas do conteúdo do canal, logo após a abertura coronária (1ª Coleta); após PBM (2ª Coleta) e após limpeza final dos canais com NaOCl seguido de EDTA por 5 min (grupo sem PUI); ou irrigação com NaOCl + PUI e EDTA + PUI (3ª Coleta) (grupo com PUI) . Foram avaliados sinais/sintomas clínicos previo ao tratamento.O conteúdo das coletas foi analisado a partir de sondas de DNA pelo método de hibridização DNA-DNA checkerboard e foi realizado teste de avaliação da atividade antimicrobiana por cultura microbiológica. Alem disso foi realizado quantificação de endotoxinas pelo Lisado de Amebócitos de Limulus (LAL). E a volumetria dos canais foi feita através da TCFC utilizando o software Nemotec®. Os resultados foram submetidos a análise estatístico pelos testes Mann Whitney e teste ANOVA a dois fatores de medidas repetidas (5%). Valor de p < 0.05 foi considerado estatisticamente significante. Houve associação entre dor à percussão e complexos laranja principal e laranja periférico. Fístula foi associada ao complexo laranja principal e laranja periférico. Foi observada redução de bactérias após o tratamento endodôntico. Ao utilizar o método de hibridização DNA-DNA checkerboard, as bactérias mais prevalentes foram S. constellatus, E faecalis, F. nucleatum, P. gingivalis, P. melaninogenica e S. intermedius na primeira coleta. Os métodos de irrigação diminuíram número de espécies bacterianas comparado à coleta inicial. A irrigação ultrassônica passiva apresentou diferença estatística significativa sobre bactérias anaeróbias. PUI não apresento diferença significativa sobre bactérias aeróbias nem endotoxinas comparado com irrigação convencional. Concluiu-se que todos os canais apresentaram micro-organismos sendo que anaeróbios estiveram presentes em grande quantidade. Após preparo biomecânico do canal radicular e irrigação com PUI, houve redução significante da carga de micro-organismos anaeróbios. Os micro-organismos mais resistentes ao preparo biomecânico com e sem PUI foram S. constellatus , E. faecalis, S. intermedius e L.bucalis. Houve associação positiva entre sinais e sintomas clínicos com complexo laranja e com micro-organismos. Os níveis de endotoxinas diminuíram após o preparo biomecânico não foram inferenciados por PUI a irrigação convencional. (AU)

The objective of this study were: a) to check the microbial load and to quantify endotoxin present in the root canals of teeth with primary endodontic infection; b) to compare the effectiveness of bacteria and endotoxin reduction of the biomechanical preparation with final irrigation methods: with or without passive ultrasonic irrigation (PUI); c) to correlate signs and symptoms with the present microbiota and bacterial complexes; d) to relate endotoxin and microbial load levels with signs and symptoms before biomechanical preparation. Twenty single-root teeth were selected for the study, presenting primary endodontic infections and periapical lesion, which underwent CBCT. The canals were prepared with reciprocating system and irrigation with 2.5% NaOCl, followed by two final irrigation protocols: with and without ultrasound. All canals were filled with MIC with calcium hydroxide + saline and after 14 days were filled with gutta percha and AH Plus. Samples from the content of canal were harvested, after coronal opening (1st Sample); after PBM (2nd Sample) and after final cleaning of the canals with NaOCl followed by EDTA for 5 min (group without PUI); or irrigation with NaOCl + PUI and EDTA + PUI (3rd Sample) (group with PUI). The contents of the samples were analyzed from DNA probes by the DNA-DNA checkerboard hybridization method and a test was performed to evaluate the antimicrobial activity by microbiological culture. In addition, quantification of endotoxins by Limulus Amebocyte Lysate (LAL) was performed. The canal volumetry was assessed through the CBCT using Nemotec® software. The results were submitted to statistical analysis by Mann Whitney and repeated measures two-way ANOVA (5%). Value of p <0.05 was considered statistically significant. There was an association between pain at percussion and main orange and peripheral orange complexes. Fistula was associated with the main orange and peripheral orange complex. A reduction of bacteria was observed after endodontic treatment. When using the DNA-DNA checkerboard hybridization method, the most prevalent bacterias were S. constellatus, E faecalis, F. nucleatum, P. gingivalis, P. melaninogenica and S. intermedius in the first collection. Irrigation methods decreased number of bacterial species compared to initial collection. The passive ultrasonic irrigation presents statistically significant difference on anaerobic bacteria. PUI did not present significant difference on aerobic bacteria or endotoxins compared to conventional irrigation. In conclusion, all canals had microorganisms, and anaerobes were present in large quantities. The most frequent microorganisms were S. constellatus, E. faecalis, F. nucleatum SP, P. gingivalis e S. intermedius. After biomechanical preparation of root canal and irrigation with PUI, there was a significant reduction of the anaerobic microorganism load. The microorganisms most resistant to biomechanical preparation with and without PUI were S. constellatus , E. faecalis, S. intermedius e L. bucalis. There was a positive association between clinical signs and symtoms with orange complex and with microorganisms. Endotoxi levels decreased after biomechanical preparation, while not influenced by PUI in comparison to conventional irrigation(AU)

Relação da diversidade bacteriana e quantidade de endotoxinas com a sintomatologia dolorosa de pulpite reversível em lesões cariosas profundas / Relationship of bacterial diversity and amount of endotoxins with the painful symptoms of reversible pulpitis in deep carious lesions

A cárie é uma doença infectocontagiosa multifatorial. Em cavidades profundas, as lesões cariosas geralmente estão associadas a quadros de sintomatologia pulpar dolorosa. O objetivo deste estudo foi determinar a diversidade bacteriana e a quantidade de endotoxinas e casos de cáries sintomáticas e assintomáticas. Para este estudo foram selecionados 20 pacientes com lesões cariosas profundas com sensibilidade dolorosa compatível com pulpite reversível (n=10) e sem sintomatologia dolorosa(n=10). As amostras de dentina cariada foram obtidas com o auxílio de colheres de dentina estéreis e apirogénicas e foram coletadas em dois momentos: antes e após a remoção convencional do tecido cariado. Estas amostras foram divididas em duas alíquotas, que foram em seguida submetidas ao teste Checker board (alíquotas contendo 150 ul de TE e100 uL de NaOH a 0,5 M) e teste cinético cromogénico LAL (Alíquotas com 1 ml de soro apirogênico) para determinação do perfil microbiano e quantificação de endotoxina, respectivamente. O teste estatístico Mann Whitney não mostrou diferença entre a camada de dentina superficial eprofunda para as bactérias estudadas. Em relação ao fator sensibilidade as bactérias Capnocytophaga sputigena, Leptotrichia buccalis e Lactobacillus species foram as que apresentaram diferenças estatisticas significantes, sendo mais presente em pacientes com sintomatologia. Para as endotoxinas, os dentes sintomáticos resultaram em maiores quantidades de endotoxinas (p = 0,047). Dentes sintomáticos apresentaram 4,13 log 10 EU / mg dentina, enquanto o nível de endotoxinas para os dentes dentes assintomáticos foi de 3,45 log 10 EU /mg dentina. Dentinas coletadas em diferentes áreas apresentaram quantidades similares de endotoxinas (p = 0,139). A quantidade de bactérias não parece estar relacionada com a sintomatologia de lesões cariosas profunda, enquanto a quantidade de endotoxinas é maior em cáries sintomáticas

Caries is a multifactorial infectious disease. In deep cavities, carious lesions are usually associated with scenarios of pulp painful symptoms.The objective is to determine bacterial diversity and endotoxin levels incases of sintomatic and assintomatic caries. Twenty patients with deepcarious lesions with soreness compatible with reversible pulpitis (n = 10)and without pain symptoms (n = 10). Carious dentine samples were obtained with the aid of sterile dentine and apyrogenic spoons andharvested in two steps: before and after conventional caries removal.These samples were divided into two aliquots, which were then subjectedto the checker board(aliquots contained in 150µl of TE and 100µl of 0.5 MNaOH) and kinetic chromogenic LAL test(aliquots with 1 ml of apirogenicserum) for determination of microbial profile and quantitation of endotoxin,respectively. By Mann Whitney test showed no difference between the superficial and deep dentin layer for the studied bacteria. In relation tofactor sensitivity bacteria Capnocytophaga sputigena, Leptotrichia buccalis e Lactobacillus species were the ones that showed statistically significant differences, being more present in patients with symptoms. For the endotoxins, symptomatic teeth resulted in greater quantity of endotoxins(p=0.047). Symptomatic teeth presented 4.13 log10 EU/mg dentin, while endotoxin level for no symptomatic teeth was 3.45 log10 EU/mg dentin.Dentin collected in different areas presented similar amount of endotoxins(p=0.139). The amount of bacteria does not seem to be related to symptomatology of deep carious lesions, while endotoxins quantity isgreater in symptomatic scenarios

Endotoxinas nas infecções endodônticas: revisão sistemática com metanálise e ensaio clínico randomizado / Endotoxins in endodontic infection: a systematic review with metaanalysis and a clinical trial

Sabe-se que as endotoxinas provenientes das bactérias grã-negativas desempenham um importante papel nas infecções endodônticas se relacionando à sinais e sintomas clínicos/radiográficos. Sendo assim, a redução ou eliminação de endotoxinas é fundamental para a resolução da inflamação periapical. Os objetivos do presente estudo foram: Artigo 1 - realizar uma revisão sistemática com metanálise com o intuito de avaliar a relação entre níveis de endotoxinas e a presença de sinais e sintomas clínicos, bem como de sinais radiográficos em pacientes com infecção endodôntica primária; Artigo 2 - fazer um ensaio clínico randomizado para avaliarmos estratégias clínicas para otimizar a eliminação microbianana e de lipopolissacarídeos (LPS) utilizando a Terapia Fotodinâmica (PDT) como tratamento suplementar ao PQM nas modalidades de terapia endodôntica em única e múltiplas sessões. Métodos: Artigo 1 - para a revisão sistemática uma busca eletrônica foi realizada por dois autores, no idioma inglês, nas bases de dados Medline/PubMed, Embase, Cochrane Library, Scielo, Science Direct, Web of Knowledge e Scopus. Após seleção dos artigos foi realizado uma metanálise com análises de sinais e sintomas clínicos/radiográficos. Artigo 2 - Selecionou-se 24 casos de dentes com infecção endodôntica primária que foram aleatoriamente divididos em 2 grupos (n=12): SU - sessão única e SM ­ sessão múltipla. Foram realizadas coletas microbiológica e de endotoxinas dos canais radiculares utilizando cone de papel estéril/ apirogênico em diferentes momentos operatórios. Foi realizado cultura microbiana para determinar a carga bacteriana em UFC/mL (Unidades Formadoras de Colônias/mL) e para quantificação de endotoxinas foi realizado o teste KQCL de "Lisado de Amebócito Limulus" (LAL). Resultados: Artigo 1 - A metanálise revelou que individuos com dor à percussão (TTP) (P=0,04; I2 57%) e episódio de dor prévio (PEP) (P=0,001; I2 81%) apresentaram maior nível de endotoxina que os casos que não apresentaram nenhum destes sintomas. O tamanho da área radiolucente (SRL) > 2 mm (P=0,02; I2 68%) e presença de exudação (EX) (P=0,0007; I2 0%) estavam associados com maior nível de endotoxinas. Artigo 2 - Para carga microbiana, a suplementação do tratamento em sessão única com PDT reduziu significativamente os níveis bacterianos (p<0,05), mas não nos casos de duas sessões (p>0,05). Para os níveis de endotoxinas, na sessão única e de duas sessões, não houve diferença significativa após uso de PDT (p>0,05). Foi possível concluir que Artigo 1 ­ A metanálise mostrou forte evidência que endotoxina está relacionada com a presence de sinais e sintomas clínicos/radiográficos em pacientes com infecção endodôntica. Artigo 2 - A terapia fotodinâmica melhorou o desempenho da desinfecção bacteriana dos canais radiculares em uma visita, mas não para a modadilidade de 2 visitas após uso de medicação à base de Ca(OH)2. PDT não foi efetivo contra endotoxinas(AU)

Endotoxins originating from gram negatives bacterias are related to signals and clinical/radiographic symptoms. Therefore, reduction or elimination of endotoxins is essential to solve periapical inflammation. The aim of this dissertation was: Article 1 - To relate endotoxin levels and presence of clinical signs/symptoms and radiographic features in endodontic infection. Article 2 - To evaluate the effectiveness of supplemental photodynamic therapy (PDT) in optimizing the removal of bacteria and endotoxins from primarily infected root canals after one-visit and twovisit treatments. Methodology: Article 1 - Electronic searches were performed on Medline/PubMed, Embase, Cochrane Library, Scielo, Science Direct, Web of Knowledge and Scopus databases for identification of relevant studies published up to July 2016. Only reports in English were included. The selected literature was reviewed by two authors and classified as either suitable or unsuitable for inclusion in this review. The relationship between endotoxin levels and presence of clinical signs/symptoms and radiographic features were determined. Additionally, a metaanalysis was performed. Article 2 - 24 primarily infected root canals with apical periodontitis were selected and randomly divided into one-visit (n=12) and two-visit (n=12). Samples were collected before and after root canal procedures. Endotoxins were quantified by chromogenic limulus amebocyte lysate assay. Culture techniques were used to determine bacterial colony-forming unit counts. The systematic review and meta-analysis aimed to evaluate the relationship between endotoxin levels and presence of clinical signs/symptoms and radiographic features in patients with endodontic infection. Results: Article 1 - Among the 285 articles identified in the initial search, 29 were included for full-text appraisal and only eight studies met the inclusion criteria for this systematic review. Meta-analysis revealed that individuals having teeth with tenderness to percussion (TTP) (P=0.04; I2 57%) and previous episode of pain (PEP) (P=0.001; I2 81%) had higher levels of endotoxin than their counterparts. Size of radiographic lesion (SRL) > 2 mm (P=0.02; I2 68%) and presence of root canal exudation (EX) (P=0.0007; I2 0%) were associated with higher levels of endotoxin. Article 2 - Bacteria and endotoxins were detected in 100% of the initial samples, with median values of 1.97 x 105 CFU/mL and 24.983 EU/mL, respectively. The CMP using single-file reciprocating technique was effective in the reduction of bacteria and endotoxins (All, p < .05). The supplemental PDT was effective in reducing bacterial load in the one-visit (p < .05) but not in the two-visit treatment after use of Ca(OH)2 medication for 14 days (p>.05). In the two-visit group, after 14 days of inter- appointment medication with Ca(OH)2, a significant reduction in the median levels of endotoxins was found in comparison to CMP alone (from 1.041 to 0.094 EU/mL)(p < .05). Despite the type of treatment, the supplemental PDT was not effective against endotoxins (p>.05). Conclusion: Article 1 - This meta-analysis provides strong evidence that endotoxin are related with the presence of clinical signs/symptoms and radiographic features in patients with endodontic infection. Article 2 - The photodynamic therapy optimized the disinfection of bacteria from root canals in one-visit but not for two visit treatment modality with the accomplishment of calcium hydroxide medication. Thus, PDT is not effective against endotoxins(AU)

QMix® irrigant reduces lipopolysacharide (LPS) levels in an in vitro model

AbstractThe presence of endotoxin inside the root canal has been associated with periapical inflammation, bone resorption and symptomatic conditions.Objectives To determine, in vitro, the effect of QMix® and other three root canal irrigants in reducing the endotoxin content in root canals.Material and Methods Root canals of single-rooted teeth were prepared. Samples were detoxified with Co-60 irradiation and inoculated with E. coli LPS (24 h, at 37°C). After that period, samples were divided into 4 groups, according to the irrigation solution tested: QMix®, 17% EDTA, 2% chlorhexidine solution (CHX), and 3% sodium hypochlorite (NaOCl). LPS quantification was determined by Limulus Amebocyte Lysate (LAL) assay. The initial counting of endotoxins for all samples, and the determination of LPS levels in non-contaminated teeth and in contaminated teeth exposed only to non-pyrogenic water, were used as controls.Results QMix® reduced LPS levels, with a median value of 1.11 endotoxins units (EU)/mL (p<0.001). NaOCl (25.50 EU/mL), chlorhexidine (44.10 EU/mL) and positive control group (26.80 EU/mL) samples had similar results. Higher levels were found with EDTA (176.00 EU/mL) when compared to positive control (p<0.001). There was no significant difference among EDTA, NaOCl and CHX groups. Negative control group (0.005 EU/mL) had statistically significant lower levels of endotoxins when compared to all test groups (p<0.001).Conclusion QMix® decreased LPS levels when compared to the other groups (p<0.001). 3% NaOCl, 2% CHX and 17% EDTA were not able to significantly reduce the root canal endotoxins load.

Quantificação de endotoxinas e sua relação com sinais /sintomas e volumetria da lesão periapical e do canal radicular em dentes com infecção endodôntica primária / Quantification of endotoxins and its relation with signals/symptoms and volume of periapical lesion and volume of the lumen of the canal in teeth with primary endodontic infection

Os objetivos do presente estudo foram: a) quantificar endotoxinas e cargamicrobiana nas infecções endodônticas primárias, antes e após o preparobiomecânico (PBM) e uso de diferentes medicações intracanais (MIC); b)relacionar níveis de endotoxinas e microrganismos cultiváveis com avolumetria da lesão periapical (VLP), através do uso de tomografiascomputadorizadas de feixe cônico (TCFC), verificando possíveis relaçõescom sinais e sintomas clínicos; c) relacionar os mesmos níveis com avolumetria dos canais radiculares (VCR); d) Comparar medidas das lesões utilizando radiografias periapicais (RP) e tomografias computadorizadas de feixe cônico (TCFC). Foram selecionados para o estudo trinta dentes com necrose pulpar e lesão periapical que foramsubmetidos a TCFC. Após abertura coronária, foi realizada coleta inicialpara verificação da presença de infecção nos canais radiculares. Após, procedeu-se o tratamento endodôntico utilizando solução de NaOCl 2,5% e divididos em 3 grupos de acordo com a MIC: Ca(OH)2 - hidróxido de cálcio P.A. + solução salina fisiológica; Ca(OH)2 + GEN - hidróxido de cálcio P.A. + extrato glicólico de gengibre 20% e Ca(OH)2 + CLX -hidróxido de cálcio P.A. + clorexidina gel 2%. Foram realizadas coletas docanal radicular após o PBM e após 14 dias de ação da MIC. Para todasas coletas foram realizados testes de atividade antimicrobiana por culturamicrobiológica e análise da quantificação de endotoxinas pelo lisado deamebócitos de Limulus. Foi realizada a VLP e a VCR através da TCFC; ecomparadas medidas de segmentação 2D das lesões periapicais das RP e das TCFC. Todos os dados foram analisados estatisticamente. Os resultados mostraram: a) presença de microrganismos na coleta inicialvariando de 0 – 8,16 x 106 UFC/mL e níveis de endotoxinas de 1,75 – 149EU/mL; havendo redução significante de seus níveis após PBM e uso de MIC; b) Houve correlação positiva entre a VLP com os níveis de endotoxinas e presença de dor prévia, além de forte...

The aims of the present study were: a) quantify endotoxins and bacterial CFU counts in primary endodontic infections before and after biomechanical preparation (BP) and after root canal medication (RCM); b) to correlate the levels of endotoxins and bacterial CFU counts with the volume of periapical bone destruction (VPBD) determined by Cone Beam Computed Tomography (CBCT) analysis as well as with the development of clinical signs and symptoms; c) to correlate the levels of endotoxins and bacterial CFU counts with the volume of the lumen of the canal (VLC); d) to correlate the size of periapical lesions determined by periapical radiographs images with the CBCT images. Thirty teeth with pulp necrosis and apical periodontitis were selected and submitted to CBCT analysis.After access to pulp cavity, a first root canal sampling was performed inorder to determine the presence of root canal infection. Afterwards, BP was performed using 2.5% NaOCl followed by the placement of RCM according to the selection group: Calcium Hydroxide [Ca(OH)2] – Ca(OH)2 + Saline Solution (SSL); Ca(OH)2 + Ginger – Ca(OH)2 + 20% glycolic Ginger extract ; Ca(OH)2 + Chlorhexidine (CHX). A second collect were made after the BP and then the third after 14-days of RCM. Cultureanalysis was performed in order to determine antimicrobial activity. Thelevels of endotoxins were determined by the Limulus Ameboyte Lysate assay. The VPBD and the VLC were determined by CBCT-analysis and compared to periapical radiographs. Data were typed on a spreadsheet and statistical analyzed. At the baseline samples, CFU counts and endotoxins levels ranged from 0 - 8.16 CFU/mL and 1.75 -149 EU/mL, respectively. Both contents were reduced after BP and after RCM. Positive correlations were found between the levels of endotoxins and VPBD as well as with previous episode of pain. Thereby, a positive correlation was found between the bacterial CFU counts with the endotoxins contents. ...

Quantificação de endotoxinas e sua relação com sinais /sintomas e volumetria da lesão periapical e do canal radicular em dentes com infecção endodôntica primária / Quantification of endotoxins and its relation with signals/symptoms and volume of periapical lesion and volume of the lumen of the canal in teeth with primary endodontic infection

Os objetivos do presente estudo foram: a) quantificar endotoxinas e cargamicrobiana nas infecções endodônticas primárias, antes e após o preparobiomecânico (PBM) e uso de diferentes medicações intracanais (MIC); b)relacionar níveis de endotoxinas e microrganismos cultiváveis com avolumetria da lesão periapical (VLP), através do uso de tomografiascomputadorizadas de feixe cônico (TCFC), verificando possíveis relaçõescom sinais e sintomas clínicos; c) relacionar os mesmos níveis com avolumetria dos canais radiculares (VCR); d) Comparar medidas das lesões utilizando radiografias periapicais (RP) e tomografias computadorizadas de feixe cônico (TCFC). Foram selecionados para o estudo trinta dentes com necrose pulpar e lesão periapical que foramsubmetidos a TCFC. Após abertura coronária, foi realizada coleta inicialpara verificação da presença de infecção nos canais radiculares. Após, procedeu-se o tratamento endodôntico utilizando solução de NaOCl 2,5% e divididos em 3 grupos de acordo com a MIC: Ca(OH)2 - hidróxido de cálcio P.A. + solução salina fisiológica; Ca(OH)2 + GEN - hidróxido de cálcio P.A. + extrato glicólico de gengibre 20% e Ca(OH)2 + CLX -hidróxido de cálcio P.A. + clorexidina gel 2%. Foram realizadas coletas docanal radicular após o PBM e após 14 dias de ação da MIC. Para todasas coletas foram realizados testes de atividade antimicrobiana por culturamicrobiológica e análise da quantificação de endotoxinas pelo lisado deamebócitos de Limulus. Foi realizada a VLP e a VCR através da TCFC; ecomparadas medidas de segmentação 2D das lesões periapicais das RP e das TCFC. Todos os dados foram analisados estatisticamente. Os resultados mostraram: a) presença de microrganismos na coleta inicialvariando de 0 – 8,16 x 106 UFC/mL e níveis de endotoxinas de 1,75 – 149EU/mL; havendo redução significante de seus níveis após PBM e uso de MIC; b) Houve correlação positiva entre a VLP com os níveis de endotoxinas e presença de dor prévia, além de forte...

The aims of the present study were: a) quantify endotoxins and bacterial CFU counts in primary endodontic infections before and after biomechanical preparation (BP) and after root canal medication (RCM); b) to correlate the levels of endotoxins and bacterial CFU counts with the volume of periapical bone destruction (VPBD) determined by Cone Beam Computed Tomography (CBCT) analysis as well as with the development of clinical signs and symptoms; c) to correlate the levels of endotoxins and bacterial CFU counts with the volume of the lumen of the canal (VLC); d) to correlate the size of periapical lesions determined by periapical radiographs images with the CBCT images. Thirty teeth with pulp necrosis and apical periodontitis were selected and submitted to CBCT analysis.After access to pulp cavity, a first root canal sampling was performed inorder to determine the presence of root canal infection. Afterwards, BP was performed using 2.5% NaOCl followed by the placement of RCM according to the selection group: Calcium Hydroxide [Ca(OH)2] – Ca(OH)2 + Saline Solution (SSL); Ca(OH)2 + Ginger – Ca(OH)2 + 20% glycolic Ginger extract ; Ca(OH)2 + Chlorhexidine (CHX). A second collect were made after the BP and then the third after 14-days of RCM. Cultureanalysis was performed in order to determine antimicrobial activity. Thelevels of endotoxins were determined by the Limulus Ameboyte Lysate assay. The VPBD and the VLC were determined by CBCT-analysis and compared to periapical radiographs. Data were typed on a spreadsheet and statistical analyzed. At the baseline samples, CFU counts and endotoxins levels ranged from 0 - 8.16 CFU/mL and 1.75 -149 EU/mL, respectively. Both contents were reduced after BP and after RCM. Positive correlations were found between the levels of endotoxins and VPBD as well as with previous episode of pain. Thereby, a positive correlation was found between the bacterial CFU counts with the endotoxins contents...

Estudo da diversidade microbiana e níveis de endotoxinas em lesões endo-periodontais / Study of microbiology diversity and endotoxin levels in endoperiodontal lesions

A lesão endo-periodontal é caracterizada pela associação da doença endodôntica e periodontal no mesmo elemento dentário. A evolução dessa lesão ocorre pela infecção por microrganismos, na sua grande maioria gram-negativas anaeróbias. O presente estudo teve como objetivo, identificar os microrganismos presentes em lesões endo-periodontais pelo método do DNA-DNA checkerboard hybridization, avaliar os níveis de endotoxinas pelo ensaio LAL e correlacionar com sinais e sintomas clínicos de pacientes com lesões endo-periodontais. Dez pacientes com lesões endo-periodontais foram selecionados do ICT-UNESP, foram coletadas 10 amostras endodônticas e 10 periodontais, as amostras foram armazenadas e posteriormente realizado os ensaios laboratoriais(LAL para endotoxinas e Checkerboard para microbiológico). Os resultados mostraram maiores níveis de endotoxinas na bolsa periodontal com média e desvio padrão de 39096 ± 39312. A média e desvio padrão dos valores de endotoxinas no canal radicular foram 3240 ± 4001 (significativamente menores p = 0,002). O teste de correlação de Pearson mostrou correlação moderada, com p = 0,084. A espécie P. nigrescens foi associada com a microbiota periodontal (p = 0,0198) enquanto na microbiota endodôntica as espécies E. faecium(p =0,0031), P. acnes(p= 0,0325), G. morbillorum(p=0,0108), C. sputigena(p = 0,0031) e L. buccalis(p = 0,0055), foram fortemente relacionadas. Os microrganismos P. intermedia, V parvula e P. endodalis tiveram pequena correlação quando associadas as microbiotas endodônticas e periodontais. O estudo concluiu que a bolsa periodontal apresenta maiores níveis de endotoxinas em relação ao canal radicular. O estudo sugere que a microbiota das lesões endo-periodontais parece a mesma presente em lesões endodônticas e periodontais separadamentes. No entanto,devido a sua grande prevalência, o complexo laranja parece exercer um papel importante neste tipo de lesão

The endo-periodontal lesion is characterized by the association of endodontic and periodontal disease in the same tooth. The evolution of this lesion occurs by the presence of microorganisms with vast majority gram-negative anaerobes. Therefore this study aims to identify the microorganisms in endo-periodontal lesions by DNA-DNA checkerboard hybridization method, evaluate and compare the levels of endotoxins with clinical signs and symptoms. 10 teeth with endo-periodontal lesions in agree with the inclusion criteria were selected from patients in the ICT-UNESP, 10 endodontic and 10 periodontal samples were collected, stored and subsequently performed the laboratory assays. The results showed higher levels of endotoxin in periodontal pockets with mean and standard deviation of 39096 ± 39312. The mean and standard deviation values of endotoxins in root canals were 3240 ± 4001 (significantly lower p = 0.002). The Pearson correlation test showed moderate correlation, with p = 0.084. P. nigrescens species was associated with periodontal microflora (p = 0.0198) whereas in endodontic microbiota the species E. faecium (p = 0.0031), P. acnes (p = 0.0325), G. morbillorum (p = 0.0108) C. sputigena (p = 0.0031) and L. buccalis (p = 0.0055) were strongly correlated. The species P. intermedia, V parvula and P. endodontalis showed low correlation in endo-periodontal microflora. The study concluded that the periodontal pocket has higher levels of endotoxins in relation to the root canal. The microbiota of endo-periodontal lesions seems to be almost the same in their infections separated. The study suggests that the orange complex must play an important role in this type of infection

Effect of Zingiber officinale and propolis on microorganisms and endotoxins in root canals

The purpose of this study was to evaluate the effectiveness of glycolic propolis (PRO) and ginger (GIN) extracts, calcium hydroxide (CH), chlorhexidine (CLX) gel and their combinations as ICMs (ICMs) against Candida albicans,Enterococcus faecalis, Escherichia coli and endotoxins in root canals. Material and Methods: After 28 days of contamination with microorganisms, the canals were instrumented and then divided according to the ICM: CH+saline; CLX, CH+CLX, PRO, PRO+CH; GIN; GIN+CH; saline. The antimicrobial activity and quantification of endotoxins by the chromogenic test of Limulus amebocyte lysate were evaluated after contamination and instrumentation at 14 days of ICM application and 7 days after ICM removal. Results and Conclusion: After analysis of results and application of the Kruskal-Wallis and Dunn statistical tests at 5% significance level, it was concluded that all ICMs were able to eliminate the microorganisms in the root canals and reduce their amount of endotoxins; however, CH was more effective in neutralizing endotoxins and less effective against C. albicans and E. faecalis, requiring the use of medication combinations to obtain higher success.

Detecção e ação antimicrobiana e antiendotóxica do extrato glicólico de gengibre utilizado como substância química auxiliar durante o retratamento endodôntico / Detection and antimicrobial action and antiendotoxic of glycolic ginger extract used as auxiliary chemical substance during endodontic retreatment

O presente estudo teve como objetivo detectar espécies bacterianas, quantificar microrganismos e endotoxinas em canais radiculares com insucesso endodôntico e presença de lesão periapical, correlacionando-os com os sinais e sintomas clínicos e, avaliar a ação do hipoclorito de sódio 1% e extrato glicólico de gengibre 20% sobre estes microrganismos e endotoxinas. Foram selecionados para o estudo dez dentes tratados endodonticamente com lesões periapicais persistentes que foram divididos em 2 grupos (n=5), de acordo com a substância química auxiliar utilizada durante o preparo biomecânico (PBM): hipoclorito de sódio 1% e extrato glicólico de gengibre 20% intercalado com solução salina fisiológica. Foram realizadas coletas do conteúdo do canal radicular imediatamente após a desobturação do dente, imediatamente após a instrumentação e, imediatamente após 14 dias da ação da medicação intracanal (MIC) de hidróxido de cálcio. Para todas as coletas foram realizados os seguintes testes: a)avaliação da atividade antimicrobiana por cultura microbiológica e através do método molecular - PCR; b) quantificação de endotoxinas verificada pelo lisado de amebócitos de Limulus. Os resultados foram submetidos a análise estatística de Wilcoxon e Mann-Whitney e mostraram que tanto o PBM quanto à MIC foram capazes de reduzir a quantidade de microrganismos e de endotoxinas, independente da solução utilizada. No entanto, endotoxinas não foram completamente neutralizadas. Espécies de E. faecalis, T. denticola, T. forsythia, P.endodontalis, P. gingivalis, P. nigrescens, P. intermedia, P. micra foram detectadas nos canais radiculares. Observou-se correlação positiva entre a quantidade de endotoxinas e o diâmetro das lesões. Concluiu se que as substâncias testadas foram eficazes na redução de microrganismos e de endotoxinas

The aim of the present study was to detect bacterial species, quantify microorganisms and endotoxins within failed root canals presenting periapical lesion, to correlate them with clinical signs and symptoms,and to evaluate the effect of 1% sodium hypochlorite and 20% glycolicginger extract on microorganisms and endotoxins. Ten endodontically treated teeth presenting persistent periapical lesion were selected for this study and divided into 2 groups (n=5), according to the auxiliary chemical substance employed during the biomechanical preparation(BMP): 1% sodium hypochlorite and 20% glycolic ginger extract interposed with saline solution. Root canal contents were collected right after root canal filling removal, right after instrumentation, and 14 day sof calcium hydroxide intracanal medication (ICM) activity. The following tests were performed for every collection: a) antimicrobial activity evaluation by means of microbiologic culture and molecular biology –PCR; b) endotoxins quantification assessed by Limulus amebocytelysate. The results were submitted to statistical analysis by Wilcoxon and Mann-Whitney tests. Both BMP and ICM were able to reduce microorganisms and endotoxins quantity, regardless the employed solution. However, endotoxins were not completely neutralized. E.faecalis, T. denticola, T. forsythia, P. endodontalis, P. gingivalis, P.nigrescens, P. intermedia, P. micra species were detected within root canals. A positive correlation was detected for the endotoxin quantityand the diameter of lesion. It can be concluded the tested substances were efficient for endotoxin and microorganisms reduction

Detecção de microrganismos, quantificação de endotoxinas e ação in vivo do Zingiber officinale em dentes com necrose pulpar e lesão periapical / Detection of microorganisms, quantification of endotoxins and in vivo action of Zingiber officinale in teeth with necrotic pulp and periapical lesion

A proposta deste trabalho foi detectar microrganismos e avaliar in vivo a ação do extrato glicólico de gengibre 20% (GENG), do hipoclorito de sódio1% (NaOCl), da clorexidina gel 2% (CLX) como soluções irrigadoras e da medicação intracanal (MIC) de hidróxido de cálcio sobre microrganismos e endotoxinas em dentes com necrose pulpar e lesão periapical. Para isso 36 pacientes portadores de dente com necrose pulpar e lesão periapical visível radiograficamente foram submetidos ao tratamento endodôntico e divididos em 3 grupos (n=12), de acordo com a substância química auxiliar utilizada durante o preparo biomecânico: GENG; NaOCl ou CLX intercalado com solução salina fisiológica. Foram realizadas coletas do conteúdo do canal radicular com cones de papel absorvente após a abertura do dente, após a instrumentação e, após 14 dias da ação da MIC. Para todas as coletas foram realizados os seguintes testes: a) avaliação da atividade anti microbiana pela contagem de UFC/mL e método molecular – PCR e; b) análise da quantidade de endotoxina verificada pelo lisado de amebócitos de Limulus. Os resultados foram submetidos à análise descritiva e estatística de Kruskal-Wallis e teste deDunn. Os resultados mostraram presença de DNA bacteriano em todas as coletas, sendo que Parvimonas micra foi a espécie mais frequente. A instrumentação com as substâncias testadas reduziram significativamente microrganismos e endotoxinas dos canais radiculares. A utilização da MIC não foi capaz de potencializar os efeitos antimicrobianos nem sobre endotoxinas. Pôde-se concluir que o preparo biomecânico com GENG foi eficiente tanto em reduzir microrganismos quanto endotoxinas dos canais radiculares. A MIC de Ca(OH)2 não foi capaz de potencializar a neutralização de endotoxinas após PBM

The purpose of this study was to detect microorganisms and to evaluate invivo the action of 20% ginger glycolic extract (GENG), 1% sodium hypochlorite (NaOCl) and 2% chlorhexidine gel (CLX) as irrigating solutions and intracanal medication (ICM) of calcium hydroxide on microorganisms and endotoxins in teeth with necrotic pulp and periapical lesions. Thirty six patients with tooth with pulp necrosis and radiographically visible periapical lesion were submitted to endodontic treatment and divided into 3 groups (n = 12), according to the auxiliary chemical substance used during the biomechanical preparation: GENG,NaOCl or CHX interspersed with saline solution. Samples of the root canal were taken with paper cones immediately after exposure of the canal,immediately after instrumentation and 14 days after MIC. For all samples were performed the following tests: a) evaluation of antimicrobial activityby counting the CFU / mL and molecular method - PCR and b)quantification of endotoxins verified by the Limulus amoebocyte lysate.The results showed the presence of bacterial DNA in all samples, and Parvimonas micra was the most frequent species. The instrumentation with all substances tested reduced significantly microorganisms and endotoxins from root canals. The use of ICM was not able to potentiate the antimicrobial effects either on endotoxins. It was concluded that biomechanical preparation with glycolic extract of ginger was effective in reducing microorganisms and endotoxins from root canals with no significant differences from Na OCl or chlorhexidine. The Ca(OH)2 ICM could not enhance the neutralization of endotoxins after biomechanical preparation