Estudo da diferenciação semelhante à lactacional no carcinoma secretório com origem em glândula salivar / Lactational-like differentiation in secretory carcinoma of salivary gland origin

O carcinoma secretório em glândula salivar é uma neoplasia recentemente descrita que tem os mesmos aspectos morfológicos, imuno-histoquímicos e genéticos do carcinoma secretório de origem mamária. O carcinoma secretório tem características celulares reminiscentes de uma célula secretora lactacional, isto é, um citoplasma vacuolado repleto de gotas lipídicas e um material secretado, por vezes de forma apócrina, que pode lembrar o leite. Mais recentemente, algum nível de diferenciação lactacional foi sugerida no carcinoma secretório de origem salivar. O objetivo do estudo foi verificar se existe uma diferenciação do tipo lactacional em carcinomas secretórios de origem salivar, comparando a outros tipos de carcinomas salivares mais comuns. Foram realizadas reações imuno-histoquímicas para as seguintes proteínas: receptores hormonais (receptor de prolactina e receptor do hormônio do crescimento), proteínas associadas ao produto de secreção da glândula mamária lactacional (mucina-1 (MUC-1), MUC4, globulina de gordura 1 do leite humano, lactoferrina) e proteínas associadas à via Akt-mTOR (PTEN, p-Akt, p-mTOR, p4EBP1, eIF4E, pS6). A maioria dos casos de carcinoma secretório foi negativa para receptor de prolactina e de hormônio do crescimento. Lactoferrina foi positiva em todos os grupos tumorais, porém somente em carcinoma secretório observou-se um padrão de marcação intensa, difuso tanto em célula como em secreção. Todos os casos de carcinoma secretório foram positivos para globulina de gordura do tipo 1, porém o mesmo padrão de marcação foi observado em outros tumores. A maioria dos casos de carcinoma secretório foram positivos para MUC1 e MUC4. Nenhum caso de carcinoma secretório foi positivo para Akt, mas PTEN foi difusamente expresso em 57,1% dos casos. mTOR foi expresso em mais da metade dos casos de carcinoma secretório e dos outros tumores salivares. Entre as proteínas à jusante de mTOR, somente eIF4E demonstrou alta expressão no grupo de estudo. A expressão de marcadores lactacionais não é exclusiva do carcinoma secretório, porém a expressão de lactoferrina é distinta neste grupo de tumores quando comparado aos demais tumores salivares estudados.

Estudo da diferenciação semelhante à lactacional no carcinoma secretório com origem em glândula salivar / Lactational-like differentiation in secretory carcinoma of salivary gland origin

O carcinoma secretório em glândula salivar é uma neoplasia recentemente descrita que tem os mesmos aspectos morfológicos, imuno-histoquímicos e genéticos do carcinoma secretório de origem mamária. O carcinoma secretório tem características celulares reminiscentes de uma célula secretora lactacional, isto é, um citoplasma vacuolado repleto de gotas lipídicas e um material secretado, por vezes de forma apócrina, que pode lembrar o leite. Mais recentemente, algum nível de diferenciação lactacional foi sugerida no carcinoma secretório de origem salivar. O objetivo do estudo foi verificar se existe uma diferenciação do tipo lactacional em carcinomas secretórios de origem salivar, comparando a outros tipos de carcinomas salivares mais comuns. Foram realizadas reações imuno-histoquímicas para as seguintes proteínas: receptores hormonais (receptor de prolactina e receptor do hormônio do crescimento), proteínas associadas ao produto de secreção da glândula mamária lactacional (mucina-1 (MUC-1), MUC4, globulina de gordura 1 do leite humano, lactoferrina) e proteínas associadas à via Akt-mTOR (PTEN, p-Akt, p-mTOR, p4EBP1, eIF4E, pS6). A maioria dos casos de carcinoma secretório foi negativa para receptor de prolactina e de hormônio do crescimento. Lactoferrina foi positiva em todos os grupos tumorais, porém somente em carcinoma secretório observou-se um padrão de marcação intensa, difuso tanto em célula como em secreção. Todos os casos de carcinoma secretório foram positivos para globulina de gordura do tipo 1, porém o mesmo padrão de marcação foi observado em outros tumores. A maioria dos casos de carcinoma secretório foram positivos para MUC1 e MUC4. Nenhum caso de carcinoma secretório foi positivo para Akt, mas PTEN foi difusamente expresso em 57,1% dos casos. mTOR foi expresso em mais da metade dos casos de carcinoma secretório e dos outros tumores salivares. Entre as proteínas à jusante de mTOR, somente eIF4E demonstrou alta expressão no grupo de estudo. A expressão de marcadores lactacionais não é exclusiva do carcinoma secretório, porém a expressão de lactoferrina é distinta neste grupo de tumores quando comparado aos demais tumores salivares estudados.

Estudo da diferenciação semelhante à lactacional no carcinoma secretório com origem em glândula salivar / Lactational-like differentiation in secretory carcinoma of salivary gland origin

O carcinoma secretório em glândula salivar é uma neoplasia recentemente descrita que tem os mesmos aspectos morfológicos, imuno-histoquímicos e genéticos do carcinoma secretório de origem mamária. O carcinoma secretório tem características celulares reminiscentes de uma célula secretora lactacional, isto é, um citoplasma vacuolado repleto de gotas lipídicas e um material secretado, por vezes de forma apócrina, que pode lembrar o leite. Mais recentemente, algum nível de diferenciação lactacional foi sugerida no carcinoma secretório de origem salivar. O objetivo do estudo foi verificar se existe uma diferenciação do tipo lactacional em carcinomas secretórios de origem salivar, comparando a outros tipos de carcinomas salivares mais comuns. Foram realizadas reações imuno-histoquímicas para as seguintes proteínas: receptores hormonais (receptor de prolactina e receptor do hormônio do crescimento), proteínas associadas ao produto de secreção da glândula mamária lactacional (mucina-1 (MUC-1), MUC4, globulina de gordura 1 do leite humano, lactoferrina) e proteínas associadas à via Akt-mTOR (PTEN, p-Akt, p-mTOR, p4EBP1, eIF4E, pS6). A maioria dos casos de carcinoma secretório foi negativa para receptor de prolactina e de hormônio do crescimento. Lactoferrina foi positiva em todos os grupos tumorais, porém somente em carcinoma secretório observou-se um padrão de marcação intensa, difuso tanto em célula como em secreção. Todos os casos de carcinoma secretório foram positivos para globulina de gordura do tipo 1, porém o mesmo padrão de marcação foi observado em outros tumores. A maioria dos casos de carcinoma secretório foram positivos para MUC1 e MUC4. Nenhum caso de carcinoma secretório foi positivo para Akt, mas PTEN foi difusamente expresso em 57,1% dos casos. mTOR foi expresso em mais da metade dos casos de carcinoma secretório e dos outros tumores salivares. Entre as proteínas à jusante de mTOR, somente eIF4E demonstrou alta expressão no grupo de estudo. A expressão de marcadores lactacionais não é exclusiva do carcinoma secretório, porém a expressão de lactoferrina é distinta neste grupo de tumores quando comparado aos demais tumores salivares estudados.

Avaliação molecular e imuno-histoquímica de malformações linfáticas orais / Molecular and immunohistochemistry evaluation of oral lymphatic malformations

As malformações linfáticas são distúrbios do desenvolvimento caracterizados pelo crescimento excessivo de vasos linfáticos. Essa condição acontece principalmente em região de cabeça e pescoço devido à presença fisiológica de grande concentração de vasos linfáticos na região. As malformações linfáticas podem ocorrer de maneira isolada ou associadas a síndromes como de CLOVES e Klippel-Trènaunay. A presença de mutações no gene PIK3CA e a ativação das vias PI3K/AKT e MAPK/ERK pode ocorrer tanto nas malformações linfáticas esporádicas, como naquelas associadas a síndromes. As mutações em PIK3CA ocorrem nos éxons 10 e 20, sendo as mutações no códon 1047 (éxon 20) as mais frequente nas malformações linfáticas esporádicas. No entanto, em malformações linfáticas orais não se sabe se estes fenômenos ocorrem. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de mutações no códon 1047 do gene PIK3CA e avaliar a ativação das vias PI3K/AKT e MAPK/ERK em amostras de malformações linfáticas orais. Uma amostra de conveniência de 14 tecidos de malformações linfáticas orais fixados em formol e embebidos em parafina foram submetidas a reações de imuno-histoquímica para as formas fosforiladas de AKT1 (pAKT-Ser473) e ERK1/2 (pERK1/2-Thr202/Tyr204), marcadores de ativação das vias PI3K/AKT e MAPK/ERK, respectivamente. Quatro destas amostras foram submetidas a Sequenciamento de Sanger para o códon 1047 do gene PIK3CA. Foram observados padrões de marcação positivas para pAKT1 e pERK1/2 nas células endoteliais de todas as amostras de malformações linfáticas orais avaliadas. Todas as amostras submetidas ao Sequenciamento de Sanger apresentaram sequência selvagem para a região de interesse. Com os resultados obtidos sugere-se que as vias PI3K/AKT e MAPK/ERK estão envolvidas na patogênese das malformações linfáticas orais.

Lymphatic malformations are developmental disorders characterized by excessive growth of lymphatic vessels. This condition occurs mainly in the head and neck region due to the physiological presence of high concentration of lymphatic vessels in the region. Lymphatic malformations may occur in isolation or associated with syndromes such as CLOVES and Klippel-Trènaunay. Mutations in the PIK3CA gene and activation of the PI3K/AKT and MAPK/ERK pathways may occur both in sporadic lymphatic malformations and in those associated with syndromes. Mutations in hotspot 1047 are the most frequently found in isolated lymphatic malformation. However, in oral lymphatic malformations it is not known whether these mutations occur. The aim of this study was to evaluate the presence of mutations in codon 1047 of the PIK3CA gene and to evaluate the activation of PI3K/AKT and MAPK/ERK pathways in samples of oral lymphatic malformations. A convenience sample of 14 tissues of oral lymphatic malformations formalin fixed paraffin embedded were submitted to immunohistochemistry reactions to the phosphorylated forms of AKT1 (pAKT-Ser473) and ERK1/2 (pERK1/2-Thr202/Tyr204), activation markers of PI3K/AKT and MAPK/ERK pathways, respectively. Four of these samples were submitted to Sanger Sequencing for codon 1047 of the PIK3CA gene. Positive marking patterns for pAKT1 and pERK1/2 were observed in the endothelial cells of all samples of oral lymphatic malformations evaluated. All samples submitted to Sanger Sequencing were wild type for the region of interest. With the results obtained it is suggested that the PI3K/AKT and MAPK/ERK pathways are involved in the pathogenesis of oral lymphatic malformations.

Estudo comparativo do uso do gel de própolis e da geleia real no tratamento da mucosite oral induzida quimicamente? Estudo experimental in vivo / Comparative study of the use of propolis gel and royal jelly in the treatment of chemically induced oral mucositis? In vivo experimental study

Objetivo: Avaliar os efeitos da própolis(P) e da geleia real(GR) em comparação a terapia de fotobiomodulação (FBM) com laser de baixa intensidadeem um modelo animal de mucosite oral (MO) quimioinduzida por 5-fluorouracil (5-FU). Adicionalmente, verificar por meio de uma revisão sistemática da literatura o efeito da fitoterapia no tratamento da MO quimioinduzida 5-FU em modelo animal. Material e Métodos: Trata-se de um estudo in vivo, experimental, controlado e cego. Setenta e dois ratos Wistar foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos (n = 18): controle (C) (sem tratamento), terapia de fotobiomodulação (FBM) (laser intraoral 6 J/cm2 ), gel de própolis (P) e geleia real (GR). Nos dias 0 e 2, os animais receberam uma injeção intraperitoneal de 5-FU. Nos dias 3 e 4, a mucosa bucal foi escarificada. As terapias foram iniciadas no dia 5. Seis animais por grupo foram eutanasiados nos dias 8, 10 e 14. A análise fitoquímica da própolis e da geleia real foi realizada por Cromatografia em Camada Delgada (CCD). As análises clínica e histopatológica (baseada nos escores de reepitelização e inflamação) foram realizadas por fotografias e lâminas coradas em Hematoxilina e Eosina, respectivamente. Os estudos imuno-histoquímicos (pAKT, p-S6 e NFκB) e do estresse oxidativo (Superóxido Dismutase-SOD, Glutationa reduzida-GSH e Malonaldeído-MDA) foram realizados.Em seguida, uma busca sistemática da literatura foi realizada por meio da pesquisa nas bases de dados PubMed/Medline, CENTRAL (The Cochrane Library), EMBASE e Web of Science, a partir dos registros iniciais até janeiro de 2020. Resultados: A análise da CCD revelou à presença de compostos como terpenos, saponinas, óleos essenciais e flavonoides no P e de alta quantidade de sacarose (Rf 0,34) na RG. Nos dias 8 e 10, os animais dos grupos FBM, P e GR apresentaram melhora clínica da MO e cicatrização acelerada com menores escores morfológicos, aumento da imunoexpressão das proteínas pS6 (exceto no dia 10), pAKT (ANOVA e teste de Tukey; p <0,05) e fator de transcrição NF-kB (teste de Mann Whitney; p <0,05) quando comparados ao grupo controle. No dia 14, o grupo P aumentou os níveis do antioxidante GSH quando comparado ao grupo controle (ANOVA e teste de Tukey; p <0,05). Treze artigos foram incluídos na revisão sistemática da literatura (todos utilizando o 5-FU para indução de MO em animais), de um total de 503 artigos. A formulação dos tratamentos variou de aplicação tópica de pomada, gel e extrato, até a ingestão de fitoterápicos. Todas as pesquisas investigadas exibiram resultados promissores no uso de fitoterápicos no manejo da MO. Conclusões: Nossos resultados evidenciaram que a P e a GR, assim como a FBM, são terapias eficazes no tratamento da MO. A presença de açúcares na GR e de flavonoides, terpenos e óleos essenciais na P justifica a excelente ação cicatrizante de feridas e seus efeitos antiinflamatórios. Adicionalmente, o grupo P, exibiu redução do estresse oxidativo tecidual, em comparação aos grupos FBM, GR e controle.Nas 13 pesquisas avaliadas, pôde-se observar excelentes resultados na cicatrização tecidual, ação antiinflamatória, antimicrobiana e antioxidante, com o uso de fitoterápicos no tratamento da MO. Diante disso, pode-se sugerir que o uso de fitoterápicos é uma alternativa promissora no tratamento da MO quimioinduzida (AU).

Objective: To evaluate the effects of propolis (P) and royal jelly (RJ) compared to photobiomodulation therapy (PBMT) with low intensity laser in an animal model of oral mucositis (OM) chemically induced by 5-fluorouracil (5-FU). Additionally, to verify by means of a systematic review of the literature the effect of phytotherapy in the treatment of chemoinduced OM 5-FU in an animal model. Material and Methods: This is an in vivo, experimental, controlled and blind study. Seventy-two male and female Wistar rats were randomly assigned to four groups (n = 18): control (C) (without treatment), photobiomodulation therapy (PBMT) (6 J / cm2 intraoral laser), propolis gel (P) and royal jelly (RJ). On days 0 and 2, the animals received an intraperitoneal injection of 5-FU. On days 3 and 4, the oral mucosa was scarified. Therapies were started on day 5. Six animals per group were euthanized on days 8, 10 and 14. Phytochemical analysis of P and RJ were performed by Thin Layer Chromatography (TLC). The clinical analysis was performed using photographs and the histopathological evaluation (hematoxylin / eosin) was based on the reepithelization and inflammation scores. Immunohistochemical studies (pAKT, p-S6 and NFκB) and oxidative stress (Superoxide Dismutase-SOD, Glutathione reduced-GSH and Malonaldehyde-MDA) were performed. Then, a systematic search of the literature was performed, by searching the PubMed / Medline, CENTRAL (The Cochrane Library), EMBASE and Web of Science databases, from the initial records until January 2020). Results: The TLC analysis revealed the presence of compounds such as terpenes, saponins, essential oils and flavonoids in P and a high amount of sucrose (Rf 0.34) in RJ. On days 8 and 10, animals in the PBMT, P and RJ groups showed clinical improvement of OM and accelerated healing with lower morphological scores, increased immunoexpression of pS6 proteins (except on day 10), pAKT (p <0.05, ANOVA and Tukey test) and NF-kB transcription factor (Mann Whitney test; p <0.05) when compared to the control group. On day 14, the P group increased the levels of the antioxidant GSH when compared to the control group (p <0.05, ANOVA and Tukey's test). Thirteen articles were included in the systematic literature review (all using the 5-FU to induce OM in animals), out of a total of 503 articles. The formulation of treatments ranged from topical application of ointment, gel and extract, to the intake of herbal medicines. All investigations showed promising results in the use of herbal medicines in the management of OM. Conclusions: Our results showed that P and RJ, as well as PBMT, are effective therapies in the treatment of OM. The presence of sugars in RJ and flavonoids, terpenes and essential oils in P justifies the excellent wound healing action and its anti-inflammatory effects. In addition, the P group exhibited a reduction in tissue oxidative stress compared to the PBMT, RJ and control groups. In the 13 studies evaluated, it was possible to observe excellent results in tissue healing, antiinflammatory, antimicrobial and antioxidant action with the use of herbal medicines in the treatment of OM. Therefore, it can be suggested that the use of herbal medicines is a promising alternative in the treatment of chemically induced OM (AU).

Perfil proteômico de bactérias presentes em canais radiculares de dentes com periodontite apical sintomática ou assintomática / Proteomic profile of bacteria present in root canals of teeth with symptomatic or asymptomatic apical periodontitis

As infecções endodônticas são causadas por uma comunidade multiespécie de bactérias. Com os métodos de identificação microbiológica e quantificação de endotoxinas, é difícil inferir a fisiologia, a função e a patogenicidade microbiana. Assim, a análise proteômica é uma técnica que pode revolucionar o estudo da patogênese das infecções endodônticas. O presente estudo tem por objetivo analisar o perfil proteômico de infecções endodônticas relacionadas a dentes com periodontite apical sintomática ou assintomática utilizando cromatografia líquida associada à espectrometria de Massas. A análise deste perfil proteômico visa a proporcionar a compreensão dos aspectos ecológicos e patogênicos do comportamento de comunidades bacterianas endodônticas através da identificação de proteínas expressas no referido ambiente no momento da coleta e a determinação da função dessas proteínas. Foram coletadas amostras de 18 pacientes encaminhados para tratamento de canal radicular ou tratamento de emergência na Faculdade de Odontologia de Araçatuba FOA ­ UNESP. Foram incluídos dentes com infecção endodôntica primária, sintomáticos ou assintomáticos. A identificação dos peptídeos foi feita num sistema nanoACQUITY UPLC-Xevo QTof MS system (Waters), a identificação das proteínas foi obtida utilizando o software Protein Lynx Global Server (PLGS) versão 3.0, utilizando o banco de dados de proteínas UniProtKB. A diferença de expressão entre os grupos foi obtida através do mesmo software, considerando-se p<0,05 para as proteínas subreguladas e 1-p>0,95 para as proteínas suprareguladas. Foram identificados um total de 2181 números de acessos entre fragmentos, isoformas e proteínas completas humana e 51 proteínas bacterianas e ambas foram classificadas quanto a sua função biológica, em relação às proteínas exclusivas de cada grupo, 347 proteínas foram identificadas no grupo sintomático. As funções biológicas mais prevalentes foram comunicação celular e transdução de sinais, seguidas pela resposta imune, observou-se diversas proteínas exclusivamente expressas no grupo sintomático, indicando a influência direta da periodontite sintomática na resposta do hospedeiro(AU)

Endodontic infections are caused by a multispecies community of bacteria. With microbiological identification methods and endotoxin quantification, it is difficult to infer physiology, function and microbial pathogenicity. Thus, proteomic analysis is a technique that can revolutionize the study of the pathogenesis of endodontic infections. The present study aims to analyze the proteomic profile of endodontic infections related to teeth with symptomatic or asymptomatic apical periodontitis using liquid chromatography associated with mass spectrometry. The analysis of this proteomic profile aims to provide an understanding of the ecological and pathogenic aspects of the behavior of endodontic bacterial communities by identifying proteins expressed in the said environment at the time of collection and determining the function of these proteins. Samples were collected from 18 patients referred for root canal treatment or emergency treatment at the School of Dentistry of Araçatuba FOA - UNESP. Teeth with primary endodontic infection, symptomatic or asymptomatic were included. The identification of peptides was made in a nanoACQUITY UPLC-Xevo QTof MS system (Waters) system, the identification of proteins was obtained using protein lynx global server (PLGS) software version 3.0, using the UniProtKB protein database. The difference in expression between the groups was obtained through the same software, considering p<0.05 for subregulated proteins and 1-p>0.95 for the superregulated proteins. A total of 2,181 access numbers were identified between human fragments, isoforms and complete proteins and 51 bacterial proteins, and both were classified as their biological function, in relation to the exclusive proteins of each group, 347 proteins were identified in the symptomatic group. The most prevalent biological functions were cellular communication and signal transduction, followed by the immune response, and several proteins were observed exclusively expressed in the symptomatic group, indicating the direct influence of symptomatic periodontitis on the host response(AU)

Effect of focal adhesion kinase inhibition on osteoblastic cells grown on titanium with different topographies

Abstract Objective The present study aimed to investigate the participation of focal adhesion kinases (FAK) in interactions between osteoblastic cells and titanium (Ti) surfaces with three different topographies, namely, untreated (US), microstructured (MS), and nanostructured (NS). Methodology Osteoblasts harvested from the calvarial bones of 3-day-old rats were cultured on US, MS and NS discs in the presence of PF-573228 (FAK inhibitor) to evaluate osteoblastic differentiation. After 24 h, we evaluated osteoblast morphology and vinculin expression, and on day 10, the following parameters: gene expression of osteoblastic markers and integrin signaling components, FAK protein expression and alkaline phosphatase (ALP) activity. A smooth surface, porosities at the microscale level, and nanocavities were observed in US, MS, and NS, respectively. Results FAK inhibition decreased the number of filopodia in cells grown on US and MS compared with that in NS. FAK inhibition decreased the gene expression of Alp, bone sialoprotein, osteocalcin, and ALP activity in cells grown on all evaluated surfaces. FAK inhibition did not affect the gene expression of Fak, integrin alpha 1 ( Itga1 ) and integrin beta 1 ( Itgb1 ) in cells grown on MS, increased the gene expression of Fak in cells grown on NS, and increased the gene expression of Itga1 and Itgb1 in cells grown on US and NS. Moreover, FAK protein expression decreased in cells cultured on US but increased in cells cultured on MS and NS after FAK inhibition; no difference in the expression of vinculin was observed among cells grown on all surfaces. Conclusions Our data demonstrate the relevance of FAK in the interactions between osteoblastic cells and Ti surfaces regardless of surface topography. Nanotopography positively regulated FAK expression and integrin signaling pathway components during osteoblast differentiation. In this context, the development of Ti surfaces with the ability to upregulate FAK activity could positively impact the process of implant osseointegration.

Modulation of cell proliferation, survival and gene expression by RAGE and TLR signaling in cells of the innate and adaptive immune response: role of p38 MAPK and NF-KB

Objective: The aim of this study was to evaluate a possible synergism between AGE-RAGE and TLR4 signaling and the role of p38 MAPK and NF-kB signaling pathways on the modulation of the expression of inflammatory cytokines and proliferation of cells from the innate and adaptive immune response. Material and Methods: T lymphocyte (JM) and monocyte (U937) cell lines were stimulated with LPS and AGE-BSA independently and associated, both in the presence and absence of p38 MAPK and NF-kB inhibitors. Proliferation was assessed by direct counting and viability was assessed by a biochemical assay of mitochondrial function. Cytokine gene expression for RAGe, CCL3, CCR5, IL-6 and TNF-α was studied by RT-PCR and RT-qPCR. Results: RAGE mRNA expression was detected in both cell lines. LPS and AGE-BSA did not influence cell proliferation and viability of either cell line up to 72 hours. LPS and LPS associated with AGE induced expression of IL-6 and TNF-α in monocytes and T cells, respectively. Conclusions: There is no synergistic effect between RAGE and TLR signaling on the expression of IL-6, TNF-α , RAGE, CCR5 and CCL3 by monocytes and lymphocytes. Activation of RAGE associated or not with TLR signaling also had no effect on cell proliferation and survival of these cell types. .

Mecanismos de transdução de sinais como um fator preditivo para o desenvolvimento de biomateriais inteligentes / Signal transduction as a predictive factor for smart biomaterials development

Os biomateriais desempenham um importante papel no sucesso da regeneração de tecidos e órgãos. Atualmente, pesquisadores buscam métodos alternativos que possam predizer a biocompatibilidade de um material, bem como seu potencial em promover a adesão celular. Transdução de sinal envolve o estudo dos mecanismos intracelulares que regulam as respostas celulares a estímulos externos, tais como hormônios, citocinas e também adesão de células a superfícies de biomateriais. Vários eventos têm sido apontados como responsáveis pela adaptação celular e adesão a superfícies diferentes. Por exemplo, rearranjos do citoesqueleto durante a adesão celular requerem o recrutamento de proteínas tirosina quinases em estruturas de adesão focal que promovem a ativação transiente de FAK e Src. Além disso, a fosforilação de resíduos de tirosina (Y) tem sido aceita como um regulador crítico de uma série de eventos bioquímicos, incluindo proliferação celular, migração, diferenciação, sinalização, sobrevivência e metabolismo energético. O entendimento da sinalização envolvida nos mecanismos de adesão, proliferação e diferenciação de osteoblastos em superfícies utilizadas na confecção de implantes é fundamental para o projeto bem-sucedido de novos materiais inteligentes, que pode reduzir o tempo de reparo, permitindo a reabilitação mais rápida do paciente

Biomaterials play an important role in the successful regeneration of tissues and organs. Currently, researchers over the world are seeking alternative methods able to predict the biocompatibility of a material, as well as its potential to guide cell fate, from adhesion to differentiation. In this sense, signal transduction involves the study of the intracellular mechanisms that regulate the cellular response to external stimuli, such as those involved with cell adhesion on biomaterial surfaces and overall bringing a global intracellular mechanism over the cell adaptation. In this context, we have shown that during osteoblast adhesion there is a rigorous cytoskeletal rearrangement, requiring a efficient recruitment of protein tyrosine kinases in focal adhesion structures promoting the transient activation of both FAK and Src. Furthermore, phosphorylation at tyrosine residues (Y) has been accepted as a critical regulator of a series of biochemical events including cell proliferation, migration, differentiation, survival signaling and energy metabolism. The understanding of signaling mechanisms involved in adhesion, proliferation and differentiation of osteoblasts on different surfaces must be critical to the successful design of new “smart” materials, impacting on patient rehabilitation

Estudo da participação de reguladores negativos endógenos da atividade de STAT1 e STAT3 (SOCS1 e SOCS3) na doença periodontal experimental / Role of endogenous negative regulators of STATI and STAT3 (SOCS1 and SOCS3 during experimental periodontal disease

A expressão de citocinas inflamatórias é um processo estritamente regulado por mecanismos variados, incluindo o controle da sinalização intracelular e da atividade transcricional por inibidores endógenos, os quais são pouco estudados e compreendidos. Três grupos de proteínas: SHP, PIAS e SOCS inibem de maneira distinta e específica a transdução de sinais pela via JAK/STAT, bem como a atividade dos fatores de transcrição, eventos que modulam a expressão de diversas citocinas. As doenças periodontais estão associadas à inflamação persistente, com elevados níveis de citocinas proinflamatórias, no entanto praticamente não existem informações sobre a participação destes mecanismos de regulação nas diferentes condições clínicas periodontais. Os objetivos deste projeto incluíram avaliar a cinética de expressão das proteínas SOCS1 e SOCS3 e suas proteínas-alvo, STAT1 e STAT3, respectivamente, durante a evolução da doença periodontal. Foram utilizados 36 ratos Wistar divididos em 2 grupos: DP - doença periodontal induzida por 2 métodos: ligaduras ao redor dos 1os molares inferiores e injeções de 60 µg de LPS de E. coli no tecido gengival palatino dos molares superiores, 3x/semana; Grupo controle negativo - recebeu apenas injeções de PBS (veículo). Os ratos foram sacrificados 7, 15 e 30 dias após a indução da doença periodontal para avaliação histológica e análise macroscópica da perda óssea alveolar. A expressão de SOCS1 e SOCS3 e a ativação de STAT1 e STAT3 foram avaliadas nas biópsias gengivais por PCR em tempo real e Western blot. Ambos os modelos apresentaram significante e progressiva perda óssea dos 7 aos 30 dias. A inflamação foi evidente já no período de 7 dias em ambos os modelos, porém enquanto manteve-se similar nos demais períodos no modelo de indução por LPS, apresentou uma diminuição na severidade da inflamação no modelo de ligadura aos 30 dias. Houve um significante (p<0.05) aumento na expressão gênica de SOCS1 e SOCS3 no grupo DP comparado com o grupo controle aos 15 dias (ambos os modelos) e aos 30 (modelo de indução por ligadura). A ativação de STAT1 e -3 foram aumentadas nos períodos iniciais no modelo por ligadura e nos períodos mais tardios no modelo de LPS. Estes resultados sugerem que SOCS1 e -3 participam na regulação do processo inflamatório responsável pela destruição periodontal

Inflammatory cytokine gene expression is a process strictly regulated by various mechanisms, including the negative regulation of signaling of cytokine receptors and of the activity of transcription factors such as STATs. These mechanisms involve endogenous proteins and are largely unknown, especially in periodontal diseases. Three groups of proteins, SHP, PIAS and SOCS modulate in a fairly specific manner JAK/STAT signaling and/or STAT activity. Periodontal diseases are infectious-inflammatory conditions of the supporting tissues of the teeth associated with increased levels of proinflammatory cytokines, but there are no information regarding the role of these endogenous mediators of JAK/STAT during its course. The aims of this study included the evaluation of the expression kinetics of inducible negative regulators and their target proteins during the course of experimentally induced periodontal disease. 36 Wistar rats were divided into two groups: PD - experimental periodontal disease induced by two methods: ligature placement around the first mandibular molars and E. coli lipopolysaccharide (LPS) injections into the palatal gingival tissues of the maxillary molars, 3x/week, and Negative Control group. Rats were sacrificed 07, 15 and 30 days after disease induction for histological evaluation of periodontal inflammation and macroscopic analysis of alveolar bone loss. SOCS expression and the activation status of STAT1 and STAT3 were evaluated in gingival biopsies by real time PCR and Western Blot. Both disease models presented significant progressive bone loss from 7 to 30 days. Inflammation was evident and similar for all the periods in LPS injected sites; however, a decrease on severity at the end of the experimental period was observed in the ligature model. There was a significant (p<0.05) increase on SOCS1 and SOCS3 gene expression in PD compared to control group at 15 (both disease models) and 30 days (ligatureinduced model). The activation of STAT1 and STAT3 were increased in earlier periods in the ligature model and in later periods in the LPS model. This study suggests that SOCS 1 and 3 participate in the regulatory mechanism of the inflammatory process responsible for the periodontal disease destruction