Citotoxicidade e efeito indutor de mineralização de flavonoides sobre células osteoblásticas / Cytotoxicity and inducing effect of mineralization of flavonoids on osteoblastic cells

A perda óssea dentária e a formação de lesões periapicais surgem como uma consequênc ia do desequilíbrio da homeostase óssea. Os osteoblastos, juntamente com os osteoclastos e osteócitos, atuam na formação e na reabsorção óssea. Vários marcadores de formação óssea são produzidos por osteoblastos ativos e refletem diferentes aspectos da dif erenciação osteoblástica e da remodelação óssea. Com isso, muitos autores têm explorado o uso de fitoterápicos, visando obter novos compostos que apresentem propriedades terapêuticas, como os flavonoides, e que estimulem a neoformação óssea e o reparo da r egião periapical. O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a citotoxicidade e efeito indutor de mineralização de flavonoides sobre células osteoblásticas humanas. Para isso, células osteoblásticas da linhagem Saos expostas aos seguintes flavono2 foram ides: quercetina, miricetina e seus derivados taxifolina, isoquercitrina, rutina, ampelopsina e EGCG, além de pinocembrina, crisina e canferol, de forma isolada e combinada. Foi avaliado o efeito citotóxico, a atividade de fosfatase alcalina e indução de n mé todo de Shapiroódulos de mineralização. Os resultados foram analisados p elo Wilk, e as variáveis foram submetidas à análise de ANOVA seguida pelo teste de Tukey para comparar entre os grupos e/ou concentrações ou teste de Dunnett para comparar entre cada grupo e o controle, com nível de significância de 5%. A viabilidade da cultura de osteoblastos não teve uma redução estatisticamente significativa na presença da maioria dos compostos, exceto crisina a 100µM. Taxifolina, isoquercitrina, rutina, ampelopsina e EGCG foram os compostos que estimularam significativamente a atividade da fosfatase alcalina, juntamente com as combinações taxifolina+isoquercitrina, taxifolina+ampelopsina e taxifolina+rutina a 25/25 µM. Quanto a formação de nódulos de mine ralização, ampelopsina, isoquercitrina, rutina, pinocembrina e miricetina isolados e taxifolina+isoquercitrina, taxifolina+ampelopsina e taxifolina+rutina combinados obtiveram os melhores resultados, variando de acordo com as concentrações. Concluise que a taxifolina, isoquercitrina, rutina e ampelopsina e combinações de taxifolina com esses flavonoides são citocompatíveis e apresentam efeito indutor de mineralização em osteoblastos Saos-2(AU)

Dental bone loss and the formation of periapical lesions arise as a consequence of imbalance of bone homeostasis. Osteoblasts, together with osteoclasts and osteocytes, act in bone formation and resorption. Several markers of bone formation are produced by active osteoblasts and reflect different aspects of osteoblastic differentiation and bone remodeling. Thus, many authors have explored the use of phytotherapics in order to obtain new compounds with therapeutic properties, such as flavonoids, and also stimulate bone neoformation and periapical region repair. The objective of this study was to evaluate in vitro the cytotoxicity and inducing effect of flavonoid mineralization on human osteoblastic cells. For this, osteoblastic cells of the Saos-2 lineage were exposed to the following flavonoids: quercetin, myricetin and its derivatives taxifoline, isoquercitrin, rutin, ampelopsin and EGCG, in addition to pinocembrin, chrysin and kaempferol, in an isolated and combined manner. The cytotoxic effect, the activity of alkaline phosphatase and the induction of mineralization nodules were evaluated. The results were analyzed using the Shapiro-Wilk method, and the variables were submitted to ANOVA analysis followed by the Tukey test to compare between groups and/or concentrations or Dunnett's test to compare between each group and the control, with a level of 5% significance. The viability of the osteoblast culture did not have a statistically significant reduction in the presence of most compounds, except 100 µM chrysin. Taxifoline, isoquercitrin, rutin, ampelopsin and EGCG were the compounds that significantly stimulated the activity of alkaline phosphatase, together with the combinations taxifoline+isoquercitrin, taxifoline+ampelopsin and taxifoline+rutin at 25/25 µM. As for the formation of mineralization nodules, ampelopsin, isoquercitrin, rutin, pinocembrin and myricetin alone and taxifoline+isoquercitrin, taxifoline+ampelopsin and taxifoline+rutin combined obtained the best results, varying according to the concentrations. It is concluded that taxifoline, isoquercitrin, rutin and ampelopsin and combinations of taxifolin with these flavonoids are cytocompatible and have a mineralization-inducing effect on Saos-2 osteoblasts(AU)

In vitro homeostasis of rat oral epithelial cell cultures following withdrawal of periodontal pathogens

Abstract Inflammation of periodontal tissues is the consequence of interaction between periodontal pathogens and immune system. This is associated with increased expression of inflammatory cytokines, which may exert destructive effect to the periodontal tissues when released over long period. The aim of this study was to chronologically track the homeostasis of oral keratinocytes following removal of periodontal pathogens. This was done by investigating expression of selected inflammatory markers and integrity of epithelial monolayers in vitro. Rat oral keratinocytes were stimulated with heat-killed Fusobacterium nucleatum and Porphyromonas gingivalis over 7-days then bacteria were washed away and epithelial cells re-cultured for 3-days. Expression of IL-1β, IL-6, and IL-8 was measured by ELISA while transcription of tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1) and matrix metalloproteinase -8 (MMP-8) was measured by polymerase chain reaction before and after removal of bacteria. Integrity of epithelial sheet was investigated by using transepithelial electrical resistance. Data showed general downregulation of IL-1b, IL-6, and IL-8 associated with restoring transcription of TIMP-1 and MMP-8 to normal level following removal of bacteria from epithelial cultures. However, expression of IL-8 and MMP-8 remained significantly higher than unstimulated epithelial cells despite withdrawal of F. nucleatum and P. gingivalis respectively from oral keratinocytes cultures. In addition, integrity of epithelial barrier function remained compromised even after removal of P. gingivalis. Results suggest that even after three days following removal of periodontal pathogens, oral keratinocytes sustained persistent upregulation of certain inflammatory markers that could compromise integrity of epithelial barrier function.

Resumo A inflamação dos tecidos periodontais é a consequência da interação entre patógenos periodontais e o sistema imunológico. Isso está associado ao aumento da expressão de citocinas inflamatórias, que podem exercer efeito destrutivo nos tecidos periodontais quando liberadas por um longo período. O objetivo deste estudo foi rastrear cronologicamente a homeostase dos queratinócitos orais após a remoção dos patógenos periodontais. Isto foi feito através da investigação da expressão de marcadores inflamatórios selecionados e da integridade de monocamadas epiteliais in vitro. Os queratinócitos orais de rato foram estimulados com Fusobacterium nucleatum e Porphyromonas gingivalis destruídas pelo calor por 7 dias, depois as bactérias foram lavadas e as células epiteliais foram cultivadas novamente por 3 dias. A expressão de IL-1b, IL-6 e IL-8 foi medida por ELISA, enquanto a transcrição do inibidor tecidual de metaloproteinase-1 (TIMP-1) e matriz metalopeptidase-8 (MMP-8) foi medida por reação em cadeia da polimerase antes e após a remoção de bactérias. A integridade da folha epitelial foi investigada usando resistência elétrica transepitelial. Os dados mostraram uma regulação negativa geral de IL-1b, IL-6 e IL-8 associada à restauração da transcrição de TIMP-1 e MMP-8 para o nível normal após a remoção de bactérias de culturas epiteliais. No entanto, a expressão de IL-8 e MMP-8 permaneceu significativamente maior que as células epiteliais não estimuladas, apesar da retirada de F. nucleatum e P. gingivalis, respectivamente, das culturas de queratinócitos orais. Além disso, a integridade da função da barreira epitelial permaneceu comprometida mesmo após a remoção de P. gingivalis. Os resultados sugerem que, mesmo após três dias após a remoção dos patógenos periodontais, os queratinócitos orais sustentaram uma regulação positiva persistente de certos marcadores inflamatórios que poderiam comprometer a integridade da função da barreira epitelial.

Microbial species associated with dental caries found in saliva and in situ after use of self-ligating and conventional brackets

Abstract Objectives Enamel demineralization is among the main topics of interest in the orthodontic field. Self-ligating brackets have been regarded as advantageous in this aspect. The aim of this study was to evaluate the break homeostasis in the oral environment and the levels of microorganisms associated with dental caries among the different types of brackets. Material and Methods Twenty patients received two self-ligating brackets: In-Ovation®R, SmartClipTM, and one conventional GeminiTM. Saliva was collected before bonding (S0), 30 (S1) and 60 (S2) days after bonding. One sample of each bracket was removed at 30 and 60 days for the in situ analysis. Checkerboard DNA-DNA Hybridization was employed to evaluate the levels of microbial species as-sociated with dental caries. Data were evaluated by nonparametric Friedman and Wilcoxon tests at 5% significance level. Results The salivary levels of L. casei (p=0.033), S. sobrinus (p=0.011), and S. sanguinis (p=0.004) increased in S1. The in situ analyses showed alteration in S. mutans (p=0.047), whose highest levels were observed to the In-Ovation®R. Conclusions The orthodontic appliances break the salivary homeostasis of microorganisms involved in dental caries. The contamination pattern was different between self-ligating and conventional brackets. The In-Ovation®R presented worse performance considering the levels of cariogenic bacterial species.

Osteoradionecrosis of the jaws: case series treated with adjuvant low-level laser therapy and antimicrobial photodynamic therapy

Abstract Background: Osteoradionecrosis of the jaw (ORNJ) is the most severe and complex sequel of head and neck radiotherapy (RT) because of the bone involved, it may cause pain, paresthesia, foul odor, fistulae with suppuration, need for extra oral communication and pathological fracture. We treated twenty lesions of ORNJ using low-level laser therapy (LLLT) and antimicrobial photodynamic therapy (aPDT). The objective of this study was to stimulate the affected area to homeostasis and to promote the healing of the oral mucosa. Methods: We performed aPDT on the exposed bone, while LLLT was performed around the bone exposure (red spectrum) and on the affected jaw (infrared spectrum). Monitoring and clinical intervention occurred weekly or biweekly for 2 years. Results: 100% of the sample presented clinical improvement, and 80% presented complete covering of the bone exposure by intact oral mucosa. Conclusion: LLLT and aPDT showed positive results as an adjuvant therapy to treat ORNJ.

Uma nova perspectiva sobre a biologia da osseointegração / A new perspective in the biology of osseointegration

O termo osseointegração refere-se à ancoragem de um implante no tecido ósseo, de forma que esse implante possa suportar carga funcional. O processo de osseointegração envolve vários mecanismos biológicos e o entendimento desses mecanismos e do papel da superfície dos implantes nesse processo, auxiliará o clínico de duas maneiras importantes: 1) na escolha dos implantes mais apropriados para os seus pacientes; e 2) no reconhecimento de problemas que possam surgir após a colocação de um implante. Nesse artigo, abordaremos uma nova perspectiva sobre a osseointegração, baseada em um trabalho recente que demonstrou que a reparação peri--implantar pode ser considerada um processo de restauração da homeostasia óssea. Esse processo representa um fenômeno universal, com vários exemplos nas ciências naturais e biológicas. O crescimento exponencial da ancoragem do implante no tecido ósseo através do tempo leva a um novo equilíbrio que pode ser representado por uma simples equação, onde dois parâmetros são importantes: 1) o valor máximo da ancoragem entre o implante e osso (novo equilíbrio tecidual)e 2) o período através do qual esse equilíbrio é adquirido. Portanto, em condições experimentais,é importante monitorar o processo de reparo por um longo período de tempo para que esse novo equilibrio seja obtido. Esse período de tempo necessário para que a hemostasia seja adquirida é descrito por um parâmetro matemático chamado “Tau”, que surge como uma maneira única de quantificar e comparar a performance do processo de osseointegração dos implantes. Essa nova perspectiva sobre a osseointegração será discutida em detalhes nesse artigo.

Osseointegration refers to the anchorage of an implant in bone, to a degree that can with stand functional loading. Osseointegration comprises several distinct biological mechanisms. An under standing these phenomena, and the role of implant surface topography in this process,will assist the clinician in two important ways: 1) It will inform their choice of the most appropriate implant designs for their patients, and 2) It will facilitate their recognition of problemsthat may arise after implant placement. We describe herein a new perspective on osseointegration.It is based on recent work that has demonstrated that peri-implant healing may beregarded as a restoration of bony homeostasis. Restoration of homeostasis is a universal phenomenon of which there are a multitude of examples in the natural and biological worlds. Applied to bone healing, the exponential rise in bone anchorage with time reaches the new equilibrium.This can be modeled using a simple equation where two important parameters emerge: 1) The ultimate value of implant/bone anchorage, which represents the new tissue equilibrium and 2)The rate at which this equilibrium is reached. Thus, experimentally, it is important to monitorhealing over a relatively long time so that the new bony equilibrium, can be achieved. However,the rate at which homeostasis is reached, described by a single mathematical parameter “tau”,emerges as a unique means by which the osseointegration performance of implants can bequantified and compared. This new perspective on osseointegration will be discussed in moredetails herein.

Avaliação in vitro de bactérias e fungos na superfície de aparelhos ortodônticos removíveis / Evaluation in vitro of bacteria and fungi in surface removable orthodontic appliances

O acometimento do indivíduo por patologias, como a cárie e doenças periodontais, pode ser traumático e extremamente devastador, podendo levá-lo a situações de grande comprometimento da saúde bucal e sistêmica. A introdução dos aparelhos removíveis pode predispor o desenvolvimento destas de modo que, além de aumentar o número populacional destes microrganismos, induz uma grande queda do pH intrabucal, favorecendo o processo de desmineralização dos tecidos duros e agredindo concomitantemente os tecidos moles. Logo, é necessário pesquisar e entender a fixação destes na superfície de aparelhos ortodônticos. A coleta foi realizada antes e 15 dias após a instalação dos aparelhos ortodônticos removíveis na cavidade bucal, mediante um esfregaço com swab estéril, aplicando movimentos anteroposteriores sob pressão manual na região do acrílico e na região dos parafusos expansores, quando houvesse. Na coleta inicial, houve crescimento de microrganismos em 15% dos casos para o Agar Mitis Salivarius, e 5% para o Ágar Sabouraud. Já na coleta após os 15 dias de instalação, verificou-se aumento para 100% de contaminação nas placas de Agar Mitis Salivarius, e as placas de Ágar Sabouraud permaneceram com os 5% de contaminação. Um padrão de limpeza mais bem elaborado desses aparelhos deve ser praticado pelos que o utilizam, além de estar indicada a substituição do aparato após algum tempo de uso, pois a inserção do aparelho modifica o ambiente da cavidade bucal.

The involvement of the individual by diseases such as caries and periodontal disease can be traumatic and extremely devastating and can lead one to situations of great commitment of oral and systemic health. Also, the introduction of removable appliances may predispose the development of these so that in addition to increasing the population of these microorganisms, it induces a large drop in the intraoral pH value, favoring the process of demineralization of hard tissues and simultaneously attacking the soft tissue, thus it is important to research and understand the fixation of these on the surface of orthodontic appliances. Data collection was conducted prior to installation of removable orthodontic appliances and 15 days after by a swipe with a sterile swab, applying movements from front to back under manual pressure in acrylic region and the region of expander bolts. At the first exam, 15% of cases had Agar Mitis Salivarius and 5% Agar Sabouraud. Fifteen days later, all appliances were contaminated with Agar Mitis Salivarius, while only 5% of devices were contaminated with Agar Sabouraud. A detailed cleaning must be exercised over these devices, along with replacement of the orthodontic device after some period because it can change the oral environment.

Caracterização morfométrica e molecar do papel da iNOS no processo de reparo ósseo alveolar em condições homeostáticas e infecciosas / Morphometric and molecular characterization of the role of iNOS in alveolar bone repair process in homeostatic and infectious conditions

A óxido nítrico sintase induzível (iNOS) é uma enzima responsável pela síntese do óxido nítrico, envolvido na regulação de vários processos fisiológicos, com destaque para relevantes efeitos sobre o tecido ósseo. Entretanto, o papel da iNOS no reparo ósseo alveolar permanece pouco conhecido. Assim, o objetivo deste estudo foi caracterizar o papel da iNOS no processo de reparo ósseo alveolar pósexodontia em condições homeostáticas (controle) e infecciosas em camundongos. Para isso, foram utilizados animais das linhagens WT (C57Bl/6) e iNOSKO, divididos em 2 grupos, condição homeostática (exodontia do incisivo superior direito) e alveolite experimental (induzida pela inoculação de uma suspensão de cultura bacteriana), e analisados de acordo com os diferentes períodos experimentais (0, 7, 14 e 21 dias pós-exodontia), através da análise histomorfométrica e molecular. Na análise histomorfométrica, avaliou-se a densidade de volume das estruturas referentes ao coágulo sanguíneo, tecido conjuntivo e tecido ósseo. Na análise molecular, quantificou-se a expressão de mRNA codificando genes de marcadores do metabolismo ósseo; marcadores de osteoclastos; citocinas e quimiocinas, através de reações de RealTimePCR. A expressão de iNOS esteve presente durante todo o processo de reparo ósseo alveolar nos camundongos C57Bl/6, porém de maneira mais expressiva no período de 7 dias pós-exodontia, e se mostrou aumentada pela indução de alveolite. A análise histomorfométrica demonstrou discretas alterações no processo de reparo ósseo alveolar, na ausência de iNOS, tanto em condições homeostáticas quanto infecciosas. Em condições homeostáticas, a ausência de iNOS não impactou de forma significativa o processo de reparo ósseo alveolar pósexodontia, mas se mostrou associada à modulação de vasos sanguíneos. Já em condições infecciosas, a ausência de iNOS se mostrou associada à modulação de células inflamatórias, osteoblastos e osteoclastos. De forma geral, conclui-se que embora...

The inducible nitric oxide synthase (iNOS) is an enzyme responsible for the synthesis of nitric oxide, a reactive molecule involved in the regulation of several physiological processes, highlighting relevant effects on bone tissue. However, the role of iNOS in alveolar bone repair remains unknown. The aim of this study was to characterize the role of iNOS in alveolar bone healing process after dental extraction in homeostatic and infectious conditions in mice. With this aim, WT (C57Bl/6) and iNOSKO mice strains were divided into 2 groups, homeostatic condition (extraction of the upper right incisor) and experimental alveolitis (induced by inoculation of a suspension of bacterial culture), and analyzed according to the different experimental periods (0, 7, 14 and 21 days post-extraction), through molecular and histomorphometric analysis. In histomorphometric analysis, the volume density of structures related to blood clot, tissue and bone were evaluated. The molecular analysis quantified the expression of mRNA encoding genes of defined as bone metabolism markers; osteoclast markers, as well cytokines and chemokines through RealTimePCR reactions. The expression of iNOS was detected during the all process of the alveolar bone repair in C57Bl/6 mice, with an expression peak at 7 days post-extraction time point, and was significantly enhanced by alveolitis induction. Histomorphometric analysis showed small changes in alveolar bone repair process in the absence of iNOS, in both homeostatic as infectious conditions. Under homeostatic conditions, the absence of iNOS did not impact significantly the process of alveolar bone healing after dental extraction, but it was associated with modulation of blood vessels formation. In the infectious conditions scenario, the absence of iNOS was associated with modulation of inflammatory cells, osteoblasts and osteoclasts counts. In general, it is concluded that even the enzyme iNOS module some aspects of alveolar bone...

Princípios ortodôntico-periodontais para homeostasia periodontal e harmonia estética / Orthodontic-periodontal principles for periodontal homeostasis and aesthetic harmony

Introdução: a reabilitação de pacientes periodontais encontra sérios inconvenientes devido ao aumento da coroa clínica gerado por procedimentos cirúrgicos quando se almeja sulco gengival fisiológico. Objetivos: apresentar, por meio de casos clínicos, uma metodologia de tratamento que inclui a integração de Ortodontia, Periodontia e Odontologia Reconstrutiva para preencher requisitos de estética, fonética, função oclusal, fisiologia periodontal e higiene na reabilitação de pacientes periodontais. Métodos: serão apresentados quatro casos clínicos ilustrando como a tração coronal lenta e rápida de dentes com envolvimento das distâncias biológicas pode possibilitar a cirurgia periodontal sem alterar suas coroas clínicas, porém levando ao restabelecimento de sulco gengival raso, viabilizando a obtenção dos requisitos propostos com a reconstrução dentária. Resultados: achados clínicos e radiográficos longitudinais mostraram que pode-se mobilizar a topografia óssea e gengival com o movimento ortodôntico, favorecendo a recomposição das estruturas periodontais de conformidade com os desígnios da natureza, culminando com a obtenção de condições propícias para a reconstrução odontológica restauradora. Conclusões: as metodologias de tração coronal lenta e rápida são meios eficazes para viabilizar o tratamento periodontal restaurador da homeostasia marginal dos tecidos, favorecendo a reconstrução restauradora dentro dos princípios mecânicos, estéticos, fonéticos, funcionais e preventivos e, com isso, reintegrando o paciente à sociedade.

Participação do grupamento catecolaminérgico A2 do núcleo do trato solitário comissural nos ajustes cardiovasculares e do equilíbrio hidroeletrolitíco induzidos por alterações da osmolaridade ou volume plasmático / Participation of A2 catecholaminergic neurons of nucleus of tract solitary on cardiovascular and hydroelectrolytic balance adjustments induced by plasmatic osmolality or volume changes

É de extrema importância para o funcionamento do organismo a manutenção da osmolaridade e volume dos líquidos corporais. O sistema nervoso central (SNC) tem um papel fundamental para esta manuntenção. O núcleo do trato solitário (NTS) é o sítio primário das aferências cardiovasculares e de osmorreceptores periféricos e se projeta à areas prosencefálicas envolvidas com a regulação cardiovascular e do equilíbrio hidroeletrolítico. Desta forma, o NTS pode fazer a ligação entre as aferências viscerais e o SNC e participar dos ajustes necessários a regulação da osmolaridade e da volemia. A maior porção dos neurônios do grupamento catelocaminérgicos A2 do bulbo está localizada na porção comissural no NTS (NTScom). Assim, os objetivos deste estudo foram: a) estudar os efeitos na pressão arterial, na ingestão de água e na excreção renal subsequentes a administração de NaCl 2 M, estímulo osmótico agudo, em ratos com lesão seletiva dos neurônios A2 do NTScom; b) estudar os efeitos na expressão da proteína c-FOS subsequente a administração de NaCl 2 M, em ratos com lesão seletiva dos neurônios A2 do NTScom, c) estudar alterações na expressão de RNAm no NTS após a administração de NaCl 2 M, d) estudar os efeitos na pressão arterial subsequentes a hemorragia hipotensiva, em ratos com lesão seletiva dos neurônios A2 do NTScom. Ratos Holtzman (280-320 g) ou ratos Sprague-Dawley (230-280 g) foram utilizados neste estudo. Para a lesão seletiva dos neurônios A2 do NTScom ou lesão fictícia (LF), os animais foram submetidos a uma craniotomia parcial e a superfície dorsal do bulbo foi exposta. A lesão seletiva dos neurônios noradredérgicos foi realizada por meio da injeção no NTScom da toxina anti-dopamina-ß-hidroxilase-saporina. Nos ratos LF foi injetado anti-IgGsaporina. Em ratos com lesão do grupamento A2 do commNTS observamos que as respostas reflexas do barorreflexo bem como as respostas pressora e bradicárdica do quimiorreflexo estavam intactas, assim como o reflexo cardiopulmonar, ativado com fenilbiguanida. Nos ratos com lesão A2 mas não nos ratos LF, a sobrecarga de NaCl 2 M ig, que promove aumento da osmolaridade sem alterar o volume plasmático, promoveu aumento da pressão arterial, que foi dependente de vasopressina, e perdurou por pelo menos 60 min. Observamos também nos ratos com lesão A2 um incremento na resposta dipsogênica, enquanto que a excreção renal foi semelhante entre os ratos com lesão A2 e ratos LF. Após a gavagem com NaCl 2 M observamos que a expressão de c-Fos na região magnocelular do núcleo paraventricular do hipotálamo (PVNm) foi significantemente maior nos ratos com lesão A2 comparados com os ratos com lesão fictícia, sendo que parte desses neurônios eram vasopressinérgicos ou ocitocinérgicos. Em ratos intactos, observamos que a gavagem de NaCl 2 M foi capaz de aumentar a expressão do RNAm no NTS para o fator inibitório da migração de macrófagos, DßH e vesícula transportadora de glutamato indicando que a gavagem hipertônica é capaz de promover alterações na expressão gênica em determinadas áreas do SNC, visando um controle da osmolaridade a longo prazo. Observamos também que ratos com lesão A2 ou LF submetidos ao protocolo de hemorragia hipotensiva, (4 retiradas de sangue consecutivas com intervalos de 10 minutos entre elas) que a hipotensão causada pela hemorragia foi semelhante em ambos os grupos. Entretanto, os animais com lesão A2 apresentaram uma melhor recuperação da hemorragia, retornando os valores de pressão arterial média (PAM) aos níveis pré-hemorragia, enquanto animais LF não recuperam os valores de PAM até o final do experimento (60 min). Observamos também que nos animais com lesão A2 a melhor recuperação da resposta hipotensiva da hemorragia é devida a mecanismos angiotensinérgicos periféricos e centrais. Nossos resultados sugerem que os neurônios do grupamento A2 do NTScom fazem parte de uma circuitaria neural inibitória que controla a pressão arterial, secreção de vasopressina e ingestão de água induzida pelo aumento da osmolaridade plasmática, bem como possuem um papel inibitório sobre as vias angiotensinérgicas ativadas pela hemorragia

The central nervous system has an important role controlling the mechanisms involved in the regulation of body fluid osmolality. The nucleus of the solitary tract (NTS) is the primary site of cardiovascular and peripheral osmoreceptors afferents and projects to prosencephalic areas involved in hydroelectrolytic balance and cardiovascular regulation. The great part of the catecholaminergic neurons of the A2 group is located in the commissural part of the NTS (NTScom). Thus, the aims of this study were: a) to verify the effects in the arterial pressure, water intake and renal excretion observed after intragastric (ig) 2 M NaCl in rats with lesion of the A2 neurons of the NTScom, b) to verify the effects in the c-Fos expression after ig 2 M NaCl in rats with lesion of the A2 neurons of the NTScom, c) to study changes in gene expression on NTS after ig 2 M NaCl, d) to study the effects in arterial pressure after hypotensive hemorrhage in rats with lesion of the A2 neurons of the NTScom.Male Holtzman rats (280-320 g) or Sprague-Dawley (250-280 g) were used. For the A2 lesion of the NTScom, a partial craniotomy of the occipital bone was performed, and the dorsal surface of the brainstem was exposed. The lesion was performed by the injection of the toxine antidopamine-ß-hydroxylase-saporin into the NTScom to destroy A2 neurons in this region. Sham lesioned rats anti-IgG-saporin was injected into the NTScom. We observed that in A2 lesioned rats, ig 2 M NaCl induced a vasopressin dependent-pressor response, for at least 60 min. The water intake induced by sodium overload was also incremented in A2 lesioned rats, however the natriuresis and dieresis after 2 M NaCl were similar in both groups. After 2 M NaCl, we observed that the number of the c-FOS expressing cells in the magnocelular paraventricular nucleus (mPVN) was greater in the NTScom lesioned rats, and part of these neurons was either vasopressinergic or oxytocinergic. In intact animals, the intragastric 2 M NaCl load promoted an increase in the RNAm expression levels for macrophage inhibitory factor, DßH and vesicular glutamate transporter that indicate a possible chronic mechanism to control changes in osmolality. We observed that hemorrhage (4 consecutive blood withdraw) promoted a similar hypotension in both groups, but A2-lesioned rats showed a greater recovery in blood pressure levels than sham rats. Sham animals did not recover from hypotension until the end of the recording (60 min). The greater recovery of the hypotensin in A2 lesioned rats were due to an increase in central and peripheral angiotensinergic mechanism, and not vasopressin mechanisms. The present data suggest that the A2 neurons of the NTScom are part of an inhibitory neural circuitry controlling arterial pressure, vasopressin secretion and water intake induced by increasing plasma osmolality. In addition, A2 noradrenergic neurons of the NTScom have an inhibitory role upon angiotensinergic pathways activated by hemorrhage

Ajustes cardiovasculares e do equilibrio hidroeletrolítico induzidos por soluções hipertônicas em ratos com lesão do núcleo do trato solitário comissural / Cardiovascular and hydroelectrolytic balance adjustments induced by hypertonic solutions in rats with commissural nucleus of tract solitary lesions

O sistema nervoso central (SNC) tem um papel fundamental na regulação de mecanismos que controlam a osmolaridade dos líquidos corporais. O núcleo do trato solitário (NTS) é o sítio primário das aferências cardiovasculares e de osmorreceptores periféricos e se projeta à áreas prosencefálicas envolvidas com a regulação cardiovascular e do equilíbrio hidroeletrolítico. Demonstramos anteriormente que animais com lesão da porção comissural do NTS (commNTS) tem maior ingestão de água, natriurese e resposta pressora frente a sobrecarga intragástrica (ig) de NaCl 2 M. Os mecanismos responsáveis por estas alterações ainda não foram determinados. Uma vez que o estímulo com NaCl 2 M ig (2 ml) ativa osmorreceptores centrais e periféricos, não sabemos até o momento os efeitos da lesão do commNTS sobre as respostas observadas após a estimulação específica de osmorreceptores periféricos, que pode ser feita com NaCl 0,6 M ig. (2 ml). Desta forma os nossos objetivos foram: a) estudar os mecanismos que medeiam o aumento da pressão arterial e da natriurese após a sobrecarga de NaCl 2 M em animais com lesão do commNTS; b) verificar as alterações na expressão da proteína c-Fos após NaCl 2 M ig em ratos com lesão fictícia (sham) ou lesão do commNTS; c) verificar as alterações na expressão gênica no PVN após NaCl 2 M ig, d) estudar os efeitos na pressão arterial, na ingestão de água e na excreção renal subseqüentes a administração de NaCl 0,6 M ig, bem como os mecanismos responsáveis pelas alterações, em ratos com lesão fictícia (sham) ou lesão do commNTS; e) verificar as alterações na expressão da proteína c-Fos após NaCl 0,6 M ig em ratos com lesão fictícia (sham) ou lesão do commNTS. Ratos Holtzman (280-320 g) foram utilizados. A lesão eletrolítica ou lesão fictícia (sham) do commNTS, e todos os experimentos foram realizados na fase crônica da lesão (14 a 21 dias. Para a lesão do commNTS, uma craniotomia parcial foi realizada e a superfície dorsal do bulbo foi exposta. A lesão eletrolítica foi realizada por meio de duas correntes de 1 mA por 5 s, com intervalo de 30 s entre elas. Nos ratos sham, o eletrodo foi posicionado nas mesmas coordenadas, exceto que não foi passada corrente elétrica. Observamos que os ratos com lesão eletrolítica do commNTS a resposta pressora do quimiorreflexo, testado com KCN (iv), foi reduzida, enquanto que o barorreflexo manteve-se inalterado. Nos ratos com lesão do commNTS, a sobrecarga de NaCl 2 M promoveu aumento da pressão arterial, que foi dependente de vasopressina. A gavagem com NaCl 2 M também promoveu pronunciada expressão de c-Fos nas regiões magnocelular do núcleo paraventricular do hipotálamo (mPVN) e no núcleo supra-óptico (SON) e essa foi significantemente maior nos ratos com lesão do commNTS do que nos ratos sham. Ambos os grupos tiveram aumento da secreção de vasopressina e ocitocina após NaCl 2 M ig, embora ratos com lesão do commNTS a secreção de vasopressina foi maior. Após a sobrecarga de NaCl 0,6 M, que ativa osmorreceptores periféricos, observamos que os ratos com lesão do commNTS tiveram resposta pressora mediada por vasopressina, incremento da resposta dipsogênica, bem como um maior aumento na expressão de c-Fos no SON comparado com animais sham. Em conclusão, nossos resultados mostram que a lesão do commNTS facilita a ingestão de água e a hipertensão dependente de vasopressina após aumento sobrecarga de NaCl hipertônico, seja a solução hipertônica capaz de alterar a osmolaridade plasmática (ativação de osmorreceptores centrais e periféricos) ou apenas a osmolaridade da região hepato-portal (ativação de osmorreceptores periféricos). As alterações na natriurese em ratos lesados submetidos a gavagem com NaCl 2 M parece ser dependente do aumento na pressão arterial nestes animais. Esses resultados sugerem que o commNTS faz parte de uma circuitaria neural inibitória que controla a pressão arterial, secreção de vasopressina, ingestão de água e ativação de áreas prosencefálicas frente à hiperosmolaridade, que ativa os osmorreceptores centrais e/ou periféricos

The central nervous system has an important role controlling the mechanisms involved in the regulation of body fluid osmolality. The nucleus of the solitary tract (NTS) is the primary site of cardiovascular and peripheral osmoreceptors afferents and projects to prosencephalic areas involved in hydroelectrolytic balance and cardiovascular regulation. We have demonstrated that commissural NTS (commNTS) lesioned rats had an increase in arterial pressure and a greater increase in water intake and natriuresis after 2 M NaCl intragastric (ig) load. The mechanisms involved in these responses are not known. Since 2 M NaCl ig (2 ml) activates central and peripheral osmoreceptors, it is not known the effects of the commNTS lesion on the responses induced only by the activation of the peripheral osmoreceptors, which can be done by 0.6 M NaCl (2 ml) ig. Thus, the aims of this study were: a) to study the mechanisms involved in the increase of the arterial pressure and natriuresis in commNTS lesioned rats after 2 M NaCl ig; b) to verify the changes in c-Fos expression after 2 M NaCl ig in sham and commNTS lesioned rats; c) to verify the changes in gene expression in PVN after 2 M NaCl ig in naïve rats; d) to study the effects on arterial pressure, water intake and renal excretion after 0.6 M NaCl, as well as, the mechanisms involved in these responses, in sham and in commNTS lesioned rats; e) to verify the changes in c-Fos expression after 0.6 M NaCl ig in sham and commNTS lesioned rats. Male Holtzman rats (280-320 g) were used. Electrolytic lesion of the commNTS and all experiments were be performed in chronic period of lesion (14 to 21 days. For the lesion, a partial craniotomy of the occipital bone was performed, and the dorsal surface of the brainstem was exposed. The electrolytic lesion was performed using a cathodal current (1 mA during 5 seconds, for two times). Sham lesioned rats had the electrode placed along the same coordinates, except that no current was passed. We observed that the pressor response to chemoreflex, tested with KCN (iv), was reduced in commNTS lesioned rats, while baroreflex remained intact. In the commNTS lesioned rats, 2 M NaCl ig induced a vasopressin dependent-pressor response for at least 60 min. After 2 M NaCl, we observed that the number of the cFos expressing cells in the magnocelular paraventricular nucleus (mPVN) and in the supra-optic nucleus of the hypothalamus were greater in the commNTS lesioned rats, indeed both groups had increase in vasopressin and oxcitocin in plasma after 2 M NaCl load, but in commNTS lesioned animals the increase in vasopressin was bigger. After 0.6 M NaCl that activates only peripheral osmoreceptors, it was observed that commNTS lesioned rats presented an increase in arterial pressure dependent on vasopressin, a greater increase in water intake, and also a greater cFos expression in SON compared to sham. In conclusion, the present data demonstrated that the commNTS lesion facilitates the water intake and the hypertension dependent on vasopressin secretion after hypertonic NaCl overload, regardless the hypertonic solution is able to activate central and/or peripheral osmorreceptors. The changes in the natriuresis observed in lesioned rats after 2 M NaCl seems to be dependent on the increase in arterial pressure in these animals. These results suggest that the commNTS is parte of an inhibitory circuitry that controls arterial pressure, vasopressin secretion and water intake and activation of prosencephalic areas after hyperosmotic stimuli, which activate central and/or peripheral osmoreceptors

Vitamina D: uma abordagem molecular / Vitamin D: A Molecular Boarding

Introdução: A expressão vitamina D é uma denominaçãoempregada para designar os diversos compostos que possuem apropriedade de prevenir e curar o raquitismo, Os mais importanteso ergocalciferol (D2) e o colecalciferol (D3), embora cerca de dezcompostos expressem atividade de vitamina D. Todas são vitaispara manutenção e controle da homeostase do cálcio e do fósforo.São formadas a partir de suas pró-vitaminas no organismo, pelaação da radiação ultra-violeta (UV) da luz solar. O 7-dehidrocolesterol é convertida na vitamina D3. A forma ativa é a1,25-diidroxicolecalciferol, ou calcitriol. De origem exógena ouendógena, esta forma ativa tem comportamento de hormônioesterólico. Importantes atividades da vitamina D, em particular nointestino, rim e osso colocam-na na condição de um hormônio paraa manutenção da homeostase do cálcio e do fosfato. A ocorrênciade receptores desse hormônio nos tecidos do homem se constituinuma relevante constatação que justifica as outras ações a elaatribuídas, independente da atividade específica sobre ometabolismo mineral. A vitamina D dispõe de uma via endógena deformação – ação da radiação ultra-violeta da luz solar sobre ocolesterol na pele – embora seu aporte exógeno seja um importantefator para a manutenção de níveis considerados ideais. Alteraçõesou deficiências no seu mecanismo de ativação e de controle daabsorção, resultam em distúrbios orgânicos, podendo evoluir paraimportantes patologias como o raquitismo e a osteomalácia.Objetivo: Analisar a relevância da vitamina D, atualmenteconsiderada como um hormônio esterólico,...

Mecanismos celulares e moleculares do estrógeno na reabsorção óssea / Cellular and molecular mechanisms of the estrogen in the bone resorption

O osso é um tecido conjuntivo mineralizado cuja homeostase está sob a influência de diversos fatores sistêmicos e locais. Entre os fatores sistêmicos, sabe-se que o estrógeno é um hormônio que inibe a reabsorção óssea e, por essa razão, tem sido amplamente utilizado no tratamento e na prevenção da osteoporose. Os mecanismos de ação do estrógeno na reabsorção óssea não estão completamente esclarecidos. Assim, nesta revisão, está descrito o papel do estrógeno no tecido ósseo, enfocando alguns mecanismos celulares e moleculares de ação desse hormônio. Informações clínicas a respeito da possível relação entre osteoporose, homeostase dos ossos maxilares e tratamentos dentários foram também incluídas nesta revisão. De acordo com os dados da literatura, o estrógeno atua na via RANK/RANKL/OPG, inibindo a formação de osteoclastos. Também tem sido mostrado que o estrógeno promove a apoptose de osteoclastos e, assim, diminui a reabsorção óssea. Esse hormônio também reduz a reabsorção óssea inibindo proteases produzidas por osteoclastos. Se o estrógeno age diretamente em osteoclastos, ou indiretamente por meio dos osteoblastos, ainda é controverso. Porém, pode-se concluir que o estrógeno inibe a reabsorção óssea agindo em vias relacionadas à formação, à atividade e à sobrevivência dos osteoclastos. Considerando-se que tem sido observada uma correlação entre osteoporose e perda óssea nos maxilares, o conhecimento dos mecanismos do estrógeno na reabsorção óssea, pelo cirurgião-dentista, pode contribuir para o sucesso de diversos tratamentos dentários. Além disso, o cirurgião-dentista pode contribuir para o diagnóstico dessa patologia, bem como encaminhar o paciente para um tratamento especializado.

Bone is a mineralized connective tissue that depends upon numerous interacting systemic and local factors for its homeostasis. Among systemic factors, it is known that estrogen is a hormone, which exerts an inhibitory function on bone resorption and, for this reason, it has been widely used in the treatment and prevention of osteoporosis. The mechanisms of action of the estrogen on bone resorption are not completely understood. Thus, in this review, we described the role of the estrogen in the bone, focusing on some cellular and molecular mechanisms of action of this hormone. Clinical information concerning possible association among osteoporosis, oral bone homeostasis and dental treatments were also included in this review. According to literature, estrogen acts on the RANK/RANKL/OPG system, inhibiting osteoclastogenesis. It has also been shown that estrogen promotes osteoclasts apoptosis and thereby decreases bone resorption. Moreover, estrogen reduces bone resorption by inhibiting proteases produced by osteoclasts. Whether estrogen acts directly on osteoclasts, or indirectly through osteoblasts, is still controversial. However, we may conclude that estrogen inhibits bone resorption by acting on pathways associated with the formation, activity and survival of osteoclasts. Since a relationship between osteoporosis and oral bone loss has been observed, the knowledge of the mechanisms of the estrogen on bone resorption by the dentist may contribute to the prognosis and success of several dental treatments. Besides, the dentist can contribute to diagnosis of the osteoporosis and to indicate the pacient to an specialized treatment.

Componentes das imunidades inata e adaptativa presentes na saliva humana / Components of the innate and adaptative immunity present in human saliva

A cavidade bucal é a porta principal de entrada de patógenos para o corpo humano. No entanto, devido a um complexo mecanismo de defesa, os inúmeros agentes infecciosos que colonizam ou penetram a cavidade bucal não ocasionam patologias. A saliva, além de desempenharas funções de hidratação e lubrificação dos tecidos da cavidade bucal, atua diretamente na regulação da microbiota e na proteção contra microrganismos. A função de proteção é desempenhada por componentes celulares e moleculares pertencentes às imunidades inata e adaptativa que atuam sobre bactérias, fungos e vírus. As proteínas da imunidade inata constituem a primeira linha de defesa do organismo, e as imunoglobulinas, secretadas pelos linfócitos B1 da imunidade inata e pelos linfócitos B da imunidade adaptativa, potencializam esse mecanismo protetor. Nesta revisão foram destacados os principais componentes celulares e moleculares pertencentes ao Sistema Imune Inato e ao Sistema Imune Adaptativo que atuam na proteção e na manutenção da homeostasia da cavidade bucal

The oral cavity is the main pathway through which pathogens enter the human body. However, as a result of a complex defense mechanism, the numerous infectious agents that enter and colonize the oral cavity do not cause pathologies. Besides moisturizing and lubricating the oral cavity tissues, the saliva acts directly in the regulation of the microbiota and in the protection against microorganisms. The protective function is performed by the cellular and molecular components of the innate and adaptive immunity, which act against bacteria, fungi and viruses. The proteins of the innate immunity are the organism first line of defense and the immunoglobulin, which are secreted by the B1 lymphocytes of the innate immunity and B lymphocytes of the adaptive immunity, boost the protective mechanism. In this review we emphasize the main cellular and molecular components that belong to the Innate Immune System and to the Adaptive Immune System, which act in the protection and the maintenance of the oral cavity homeostasis

Alterações endócrinas frente ao trauma / Endocrine alterations with trauma

Uma resposta comum do organismo frente a uma agressão, independente do agente causador, desencadeia uma liberação de uma gama de hormônios, exacerbando por conseguinte, as suas funções. Avaliando a importância desta descarga hormonal, observamos que, numa situação de trauma, as catecolaminas são ativadas diretamente pela via neural e supra-renal, provocando um aumento no débito cardíaco e orientando o fluxo sangüíneo para os órgãos nobres, garantindo, assim, os subsídios necessários para a realização de suas funções. Este trabalho tem por objetivo, mostrar ao cirurgião e traumatologista bucomaxilofacial que a ocorrência dessas alterações endócrinas, é parte da resposta orgânica no metabolismo pós-traumático visto que podem, indubitavelmente, causar a morte e devem ser compreendidas para que se possa analisar o tratamento e, assim, garantir a manutenção da vida