Efecto de las células de Müller en la supervivencia y neuritogénesis de las células ganglionares de la retina / Effect of Müller cells on the survival and neuritogenesis in retinal ganglion cells

OBJETIVO: Las células ganglionares de la retina (RGC) son las células que se afectan primero en neuropatologías como el glaucoma, por eso es importante investigar nuevas estrategias neuroprotectoras. Las células de Müller son células gliales que proporcionan a las neuronas factores tróficos y soporte físico. El propósito del presente estudio fue analizar el efecto de las células de Müller en la supervivencia y la formación de neuritas en las RGC. MÉTODO: Se cultivaron células de Müller de rata hasta obtener un cultivo confluente sobre el que se añadieron RGC. Cultivos puros de RGC fueron usados como control. Se marcaron las RGC con anticuerpos anti-βIII-tubulina y las células de Müller con antiglutamina sintetasa, los núcleos se tiñeron con DAPI. Se cuantificó el número de RGC y número y longitud de las neuritas. RESULTADOS: No hay diferencias en el número de RGC entre el control y las células crecidas sobre el sustrato de Müller. Aumenta la proporción de neuritas en RGC que crecieron sobre células de Müller, el número RGC con 1-3 neuritas pasa de un 19 a un 43%. También aumenta la longitud de las neuritas, el número de RGC con neuritas de entre 50-200 μm aumenta de un 21 en control a un 41% en cocultivo y con más de 200 μm pasa de un 6 a un 20%. CONCLUSIONES: Las células de Müller mantienen la supervivencia de las RGC e inducen un aumento tanto del número como de la longitud de las neuritas de las RGC

OBJECTIVE: The purpose of this study is to assess the effectiveness of the topical application of cacicol regenerating agent (RGTA) in an experimental model of corneal ulcer after photorefractive keratectomy (PRK) in mice. METHODS: Mice were subjected to PRK surgery with a 2.0 mm ablation zone on the central cornea and 45 mm of depth on a VISX Star S2 excimer laser. Corneas were treated topically with cacicol drops 1 hour and 48 hours after injury. Control groups received balanced salt solution (BSS) in the same dosage. Clinical and histopathological events were evaluated at 1, 2, 3 and 7 days after surgery. Sections obtained through the central region of the corneas were used to analyze the histopathological events of injured and healed corneas. αSMA (myofibroblast transformation), E cadherin (assembly of epithelial cells) and neuronal class III β-tubulin (innervation) were performed. RESULTS: Corneas treated topically with cacicol for 7 days showed a greater degree of transparency compared to controls. cacicol treated corneas showed improved epithelial cytoarchitecture. Analysis of αSMA profiles in the stroma showed that cacicol reduced or delayed the presence of myofibroblasts in the stroma compared to BSS (P<0.001). Finally, a putative neuroregenerative effect of cacicol was found in corneas subjected to an experimental PRK lesion. In some cases some interindividual variability could be observed due to the design of the experimental model. This is a limitation to consider, despite the statistical significance of the data. CONCLUSIONS: In a model of laser induced surgical lesions in the cornea, topical application of an RGTA (i.e. cacicol) could be involved in avoiding myofibroblast scarring formation and promoting nerve regeneration

Neuroprotección de las células ganglionares de la retina / Retinal ganglion cell neuroprotection in culture

Objetivo: Estudiar la supervivencia de las células ganglionares de la retina (CGR) de cerdo en cultivo, analizando el posible efecto neuroprotector de las células de Müller de la retina (CMR) y del factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF).Métodos: Las retinas de cerdo adulto fueron disociadas y cultivadas en diferentes condiciones: 1) sobre sustrato de laminina/poli-D-lisina en medio de cultivo químicamente definido; 2) sobre sustrato de laminina/poli-D-lisina en medio químicamente definido al que se añadió BDNF; 3) sobre monocapas de CMR en medio químicamente definido; 4) sobre sustrato de laminina/poli-D-lisina en medio condicionado procedente del sobrenadante de las CMR. Las CGR fueron identificadas mediante inmunocitoquímica, utilizando anticuerpos contra el neurofilamento de 68 kDa, y observadas con un microscopio de fluorescencia. Se analizó la supervivencia para cada condición de cultivo y se clasificaron las CGR en función de su tamaño y del número y longitud de las neuritas. Resultados: La supervivencia de las CGR aumentó cuando las células fueron cultivadas sobre monocapas confluentes de CMR o en medio condicionado. Estas condiciones produjeron un incremento en el área media de las células y un aumento en el número de neuritas emitidas por cada célula, así como en la longitud de las neuritas. Cuando el medio de cultivo se suplementó con BDNF no se obtuvo ningún efecto sobre la supervivencia de las CGR aunque aumentó el tamaño, y el número y longitud de sus neuritas. Conclusión: Nuestro trabajo demuestra que algún/os factor/es secretados por las células de Müller tienen un efecto neuroprotector sobre las CGR in vitro. El BDNF produce también un incremento en el área media de las células y favorece la formación de neuritas, sin embargo no aumenta la supervivencia (AU)

The influence of carbon dioxide concentration on the neurite outgrowth of mouse embryonic cortical neurons in vitro / La influencia de la concentración de dióxido de carbono en el crecimiento in vitro de neuritas de las neuronas corticales embrionarias del ratón

The carbon dioxide (CO2) concentration of the incubation medium in nerve cell culturing has always been a matter of debate and is usually adjusted in a somewhat empirical manner. In the many laboratory protocols and manuals published to date, the data concerning this aspect differ. The goal of this study was thus to follow up the neurite outgrowth of cortical neurons in dissociated primary cultures obtained from seventeen-day-old embryonic mouse brains incubated in 90% air and 10% CO2, and in 95% air and 5% CO2 respectively. We recorded the density and confluence of the neuronal distribution in vitro on the second, third and fifth day after establishing the cultures. Morphological evaluation to demonstrate viable cells was carried out by applying immunocytochemistry for microtubule-associated protein-2 due to its ubiquity in neurons. The results showed that neuronal survival, the rate of neurite outgrowth and the establishment of intercellular networks and synaptic contacts were more pronounced in cortical cultures raised in 10% CO2-containing incubation medium than in 5% CO2-containing incubation medium. From these results, it can be inferred that CO2 at a higher concentration plays a significant role in influencing the metabolic activities of embryonic cortical neurons in vitro, thus probably determining their synaptogenesis and viability (AU)

La concentración de dióxido de carbono (CO2) del medio de incubación en el cultivos de células nerviosas siempre ha sido debatible y normalmente es ajustada de una manera un tanto empírica. En los muchos protocolos y manuales de laboratorio que han sido publicados hasta la fecha, los datos relativos a este aspecto difieren. Por tanto, nuestro objetivo en el presente trabajo ha sido de llevar a cabo un seguimiento del crecimiento de neuritas de neuronas corticales in cultivos primarios disociados obtenidas de los cerebros de ratones embrionarios de 17 días de edad incubadas en 90 por ciento aire y 10 por ciento CO2 y en 95 por ciento aire y 5 por ciento CO2 respectivamente. Registramos la densidad y confluencia de la distribución neuronal in vitro en el segundo, tercer y quinto día después de establecer los cultivos. La evaluación morfológica encaminada a demostrar células viables fue llevada a cabo aplicando métodos inmunocitoquímicos para la proteína-2 asociada a los microtúbulos debido a su ubicuidad en las neuronas. Los resultados revelaron que la supervivencia neuronal, la velocidad de crecimiento de las neuritas así como el establecimiento de redes intercelulares y contactos sinápticos eran más pronunciados en los cultivos corticales derivados del medio que contenía una concentración de CO2 del 10 por ciento que con el que contenía 5 por ciento CO2. De estos resultados, se puede deducir que, a concentraciones mayores, el CO2 juega un papel significativo en influir en las actividades metabólicas de las neuronas corticales embrionarias in vitro, así probablemente determinando su sinaptogénesis y viabilidad. (AU)