Analysis of biofilm production and expression of adhesion structures of circulating Clostridioides difficile strains from Mexico / Análisis de la producción de biopelícula y expresión de estructuras de adhesión de cepas circulantes de Clostridioides difficile en México

Introduction: Clostridioides difficile biofilms are believed to protect the pathogen from antibiotics, in addition to potentially contributing to recurrent infections. Methodology: Biofilm production of 102 C. difficile isolates was determined using the crystal violet staining technique, and detachment assays were performed. The expression levels of cwp84 and slpA genes were evaluated by real-time PCR on selected isolates. Results: More than 70% of isolates (75/102) were strong biofilm producers, and the highest detachment of biofilm was achieved with the proteinase K treatment (>90%). The overall mean expression of cwp84 was higher in RT027 than in RT001 (p=0.003); among strong biofilm-producing strains, the slpA expression was lower in RT027 than in RT001 (p<0.000). Conclusions: Proteins seem to have an important role in the biofilm's initial adherence and maturation. slpA and cwp84 are differentially expressed by C. difficile ribotype and biofilm production level.(AU)

Introducción: Se cree que las biopelículas de Clostridioides difficile (C. difficile) protegen al patógeno de los antibióticos, además de contribuir potencialmente a las infecciones recurrentes. Metodología: Se determinó la producción de biopelículas de 102 aislados de C. difficile, mediante la técnica de tinción con violeta cristal y se realizaron ensayos de desprendimiento. Los niveles de expresión de los genes cwp84 y slpA se evaluaron mediante PCR en tiempo real en aislados seleccionados. Resultados: Más del 70% de los aislados (75/102) fueron fuertes productores de biopelículas y el mayor desprendimiento de biopelícula se logró con el tratamiento con proteinasa K (> 90%). La expresión media global de cwp84 fue mayor en RT027 que en RT001 (p = 0,003); entre las cepas productoras fuertes de biopelícula, la expresión de slpA fue menor en RT027 que en RT001 (p < 0,000). Conclusiones: Las proteínas parecen tener un papel importante en la adhesión y maduración inicial de las biopelículas; slpA y cwp84 se expresan de forma diferente según el ribotipo de C. difficile y el nivel de producción de biopelículas.(AU)

The classification of Staphylococcus aureus strains by biofilm production differs depending on the method used / La clasificación de cepas de Staphylococcus aureus según la producción de biopelícula varía dependiendo del método utilizado

IntroductionStrains can be classified in terms of biofilm production from quantitative absorbance values collectively by dividing strains into tertile ranks or individually by calculating the optical density for the negative control. However, these methods have not been compared in a large sample of Staphylococcus aureus strains. Therefore, our objective was to analyze the agreement between both methods in terms of biomass production and metabolic activity of their biofilm.MethodsWe classified 233 S. aureus strains by biomass production and metabolic activity using the crystal violet and XTT assays, respectively. Strains were classified as low, moderate, or high biofilm producers according to tertile or optical density.ResultsWe found no agreement between both methods (p<0.001 and p=0.028, respectively).ConclusionsWe consider strains’ biofilm classification by optical density to be a more reliable method, as it depends on the individual absorbance of each strain.

IntroducciónLas cepas se pueden clasificar en términos de producción de biopelícula a partir de valores cuantitativos de absorbancia dividiendo de forma colectiva las cepas en rangos por terciles o individualmente calculando la densidad óptica para el control negativo. Sin embargo, estos métodos no se han comparado en una gran muestra de cepas de Staphylococcus aureus. Por lo tanto, nuestro objetivo fue analizar la concordancia entre ambos métodos en términos de producción de biomasa y actividad metabólica de la biopelícula.MétodosSe clasificaron 233 cepas de S. aureus por producción de biomasa y actividad metabólica utilizando los ensayos de cristal violeta y de XTT, respectivamente. Las cepas se clasificaron como altamente, moderadamente o bajamente productoras de biopelícula según terciles o densidad óptica.ResultadosNo encontramos concordancias entre ambos métodos (p<0,001 y p=0,028, respectivamente).ConclusionesConsideramos que la clasificación del biofilm de cepas por densidad óptica es un método más fiable, ya que depende de la absorción individual de cada cepa.

Utilidad de la técnica de Gram en exudados uretrales en la consulta de atención primaria / Usefulness of the Gram stain in urethral exudates in the Primary Care Unit

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Assessment of biofilm production in Candida isolates according to species and origin of infection / Determinación de la producción de biopelícula en aislados de Candida de acuerdo con las especies de Candida y el origen de la infección

The biofilm production (BP) of 200 clinical strains of Candida isolated during 2010-2013 were assessed using an in vitro model and a comparison of the results was made between species and between origins of the infections. The BP was assessed using the crystal violet assay, and the strains were classified as low, moderate, or high biofilm producers. Candida tropicalis had the highest values for BP, which varied depending on the origin of the infection. Assessment of BP is a key diagnostic tool that enables us to better understand Candida infections

Desde 2010 a 2013 evaluamos la producción de biopelícula (PB) en 200 cepas clínicas de Candida y comparamos los resultados de las especies de Candida entre los orígenes de la infección mediante un modelo in vitro. La PB se determinó con el ensayo de cristal violeta y las cepas se clasificaron como baja, moderada o altamente productoras de biopelícula. C. tropicalis tuvo los valores más altos de PB, y la PB en Candida varió dependiendo del origen de la infección. La determinación de la PB es una herramienta diagnóstica importante para entender mejor las infecciones por Candida

Biofilm formation and genetic variability of BCR1 gene in the Candida parapsilosis complex / / Formación de biopelícula y variabilidad genética del gen BCR1 en el complejo Candida parapsilosis

Background. Candida parapsilosis sensu stricto, Candida orthopsilosis, and Candida metapsilosis are cryptic species that belong to the C. parapsilosis complex, which has been increasingly associated to fungemia in various geographic regions, principally due to the capability of these yeasts to form biofilms on indwelling medical devices. BCR1 is one of the most studied genes related to Candida spp. biofilms. Aims. To evaluate the biofilm forming capability of a subset of 65 clinical isolates of the C. parapsilosis complex using two conventional approaches, and to look for an association between the biofilm forming phenotype and genetic variants of a fragment of BCR1. Methods. The biofilm determination was carried out by crystal violet staining and tetrazolium reduction assay. On the other hand, a segment of BCR1 gene was sequenced by Sanger methodology. Results. C. parapsilosis sensu stricto was statistically associated with a low biofilm production phenotype, while C. orthopsilosis was significantly associated with both phenotypes (high and low biofilm producers). According to the BCR1 sequence analysis, genetic variability was detected in C. orthopsilosis and C. metapsilosis without a particular biofilm formation phenotype association. Conclusions. Under the adopted experimental design, C. parapsilosis sensu stricto was associated with the low biofilm phenotype and C. orthopsilosis with both phenotypes (high and low biofilm producers). On the other hand, an association between a biofilm forming phenotype and a particular genetic variant of the analyzed BCR1 fragment was not found (AU)

Antecedentes. Candida parapsilosis sensu stricto, Candida orthopsilosis y Candida metapsilosis son especies crípticas que integran el complejo C. parapsilosis, asociado de forma creciente a fungemia en diversas regiones geográficas. Dicho crecimiento se debe principalmente a la capacidad de estas levaduras de crear biopelículas en los dispositivos médicos. El gen BCR1 es uno de los más estudiados en las biopelículas de Candida spp. Objetivos. Evaluar la capacidad de formación de biopelícula de un conjunto de 65 aislamientos clínicos del complejo C. parapsilosis mediante dos metodologías convencionales, así como establecer una posible asociación entre el fenotipo productor de la biopelícula y las variantes genéticas de un fragmento de BCR1. Métodos. La determinación de la presencia de biopelícula se llevó a cabo mediante tinción con cristal violeta y el análisis de reducción de la sal de tetrazolio. Además, se secuenció un segmento del gen BCR1 mediante el método Sanger. Resultados. C. parapsilosis sensu stricto presentó una asociación estadísticamente significativa con un fenotipo de baja producción de biopelícula, mientras que C. orthopsilosis tuvo una asociación estadísticamente significativa con ambos fenotipos (alta y baja producción de biopelícula). Según el análisis de la secuencia de BCR1, existe variabilidad genética en C. orthopsilosis y C. metapsilosis sin ninguna asociación particular a los fenotipos relacionados con la formación de biopelícula. Conclusiones. Bajo el diseño experimental adoptado, C. parapsilosis sensu stricto se asoció con un fenotipo de baja producción de biopelícula y C. orthopsilosis con ambos fenotipos (alta y baja producción de biopelícula). Por otra parte, no se encontró ninguna asociación estadísticamente significativa entre los fenotipos de formación de biopelícula y variantes genéticas particulares en el fragmento analizado de BCR1 (AU)

Utilidad diagnóstica de los nódulos de osler en la endocarditis infecciosa en usuarios de drogas por vía parenteral (UDVP) / Diagnostic utility of osler's nodes in the infective endocarditis in intravenous drug users

Fundamento: Se describen los datos clínicos, microbiológicos e histológicos de cinco episodios de endocarditis infecciosa (EI) con nódulos de Osler en usuarios de drogas por vía parenteral (UDVP).Pacientes y métodos: Se han estudiado de forma prospectiva 43 casos de EI en UDVP. En 4 pacientes se realizó punción aspiración y en otro biopsia de un nódulo de Osler, con tinción de Gram y cultivo de la muestra. Resultados: De los 43 episodios de EI 33 fueron derechas, 9 izquierdas y 1 mixta. Cinco de los 10 (50 por ciento) pacientes con endocarditis izquierda o mixta presentaron nódulos de Osler, pero no se encontraron en ninguno de los pacientes con EI derecha. En todas las muestras tomadas por punción aspiración se observaron cocos grampositivos en racimos en la tinción de Gram y se obtuvo crecimiento de Staphylococcus aureus con el mismo antibiotipo que los aislados en los hemocultivos. En el único caso en el que se realizo biopsia del nódulo se apreciaba trombos sépticos en la microcirculación. Conclusiones: La tinción de Gram y el cultivo del material aspirado de los nódulos de Osler tiene una alta rentabilidad en el diagnóstico etiológico de la EI en los usuarios a drogras por vía parenteral. La presencia de nódulos de Osler en un paciente con EI nos debe sugerir que la localización es izquierda. Estos datos sugieren que los nódulos de Osler, en la EI por S. aureus en los UDVP se origina como consecuencia de embolismos sépticos microvasculares (AU)

Tinción de gram y tira reactiva como métodos diagnósticos de la infección deltracto urinario del lactante con fiebre / Urinary Gram stain and dipstick for detection of urinary tract infection in febrile infants objetive

OBJETIVO: Comparar la tinción de Gram y la tira reactiva en orina, como métodos para el diagnóstico de la infección del tracto urinario (ITU), en el lactante con fiebre. MÉTODOS: Estudio prospectivo de 175lactantes con fiebre, con edades comprendidas entre 1y 24meses, en los que se analizó la orina para descartar la presencia de ITU. Además del análisis de orina mediante tira reactiva para detectar la presencia de leucocitos y nitritos, se envió una muestra para tinción de Gram y urocultivo. La orina se recogió mediante sondaje uretral. Se consideró urocultivo positivo al crecimiento de más de 50.000col./ml del mismo germen. RESULTADOS: La edad media de los pacientes fue de 9,8meses. El urocultivo resultó positivo en 87pacientes (49,5 por ciento). El diagnóstico de ITU se estableció en 91pacientes (51,9 por ciento) siendo hospitalizados 74de ellos con sospecha clínica de pielonefritis (81,3 por ciento). La prueba más sensible fue la leucocituria (90,8 por ciento) y la más específica la tinción de Gram (98,9 por ciento). Destacó como prueba de mayor rendimiento global la suma de aplicar como método diagnóstico la leucocituria más la tinción de Gram: sensibilidad, 93,1 por ciento; especificidad, 98,4 por ciento; valor predictivo positivo (VPP), 98,5 por ciento, y valor predictivo negativo (VPN), 92,5 por ciento. CONCLUSIÓN: La tinción de Gram en orina es un método diagnóstico de mayor rendimiento que la tira reactiva para detectar ITU en el lactante febril pero debe interpretarse conjuntamente con los resultados de esta última (AU)

Antisépticos / Antiseptics

Los antisépticos son productos químicos que se aplican sobre tejidos vivos con el objetivo de eliminar microorganismos potencialmente patógenos o inhibir su crecimiento. La selección del antiséptico debe realizarse en función de las propiedades e indicaciones del producto. Se describen los principales antisépticos utilizados en la práctica clínica, prestando atención a su espectro de actividad, indicaciones y toxicidad (AU)

Evaluación de un instrumento de medición de la bilirrubina transcutánea / Evaluation of a transcutaneous bilirubinometer

OBJETIVO: Los bilirrubinómetros transcutáneos son instrumentos que permiten detectar y monitorizar la hiperbilirrubinemia neonatal, reduciendo el número de extracciones sanguíneas necesarias para su control. Estos dispositivos, de uso rutinario, presentan, no obstante, un amplio rango de error que debe ser evaluado. Nos planteamos establecer la precisión y validez en nuestro medio de un bilirrubinómetro transcutáneo clásico. MÉTODOS: Estudio transversal, observacional, descriptivo sobre una muestra de 117 determinaciones simultáneas de bilirrubina transcutánea y sérica, en 82 neonatos ictéricos. Análisis de la concordancia entre mediciones repetidas y de distintas localizaciones. Desarrollo de modelos predictivos de la bilirrubina sérica y análisis de la validez de dichas predicciones. RESULTADOS: Todos los puntos de medición presentaron una concordancia entre medidas repetidas excelente (coeficiente de correlación intraclase superior a 0,92). Las mediciones en frente tenían un coeficiente de correlación lineal de 0,75; en esternón variaba en función de la ausencia o presencia de fototerapia (0,86 y 0,54, respectivamente). Los intervalos de error en los que se encontraban las predicciones de bilirrubina sérica eran de ñ2 mg/dl para valores bajos y ñ4 mg/dl para valores altos >= 15 mg/dl). CONCLUSIÓN: El bilirrubinómetro transcutáneo evaluado presenta una alta precisión, pero su validez debe ser cuestionada por la existencia de un importante margen de error respecto a la bilirrubina sérica, especialmente en los pacientes con concentraciones elevadas (AU)