B1-Integrin blockade prevents podocyte injury in experimental models of minimal change disease / El bloqueo de la integrina B1 previene la lesión de los podocitos en modelos experimentales en la enfermedad de cambios mínimos

Introduction Activation of the focal adhesion kinase (FAK) in podocytes is involved in the pathogenesis of minimal change disease (MCD), but the pathway leading to its activation in this disease is unknown. Here, we tested whether podocyte β1 integrin is the upstream modulator of FAK activation and podocyte injury in experimental models of MCD-like injury. Methods We used lipopolysaccharide (LPS) and MCD sera to induce MCD-like changes in vivo and in cultured human podocytes, respectively. We performed functional studies using specific β1 integrin inhibitors in vivo and in vitro, and integrated histological analysis, western blotting, and immunofluorescence to assess for morphological and molecular changes in podocytes. By ELISA, we measured serum LPS levels in 35 children with MCD or presumed MCD (idiopathic nephrotic syndrome [INS]) and in 18 healthy controls. Results LPS-injected mice showed morphological (foot process effacement, and normal appearing glomeruli on light microscopy) and molecular features (synaptopodin loss, nephrin mislocalization, FAK phosphorylation) characteristic of human MCD. Administration of a β1 integrin inhibitor to mice abrogated FAK phosphorylation, and ameliorated proteinuria and podocyte injury following LPS. Children with MCD/INS in relapse had higher serum LPS levels than controls. In cultured human podocytes, β1 integrin blockade prevented cytoskeletal rearrangements following exposure to MCD sera in relapse. Conclusions Podocyte β1 integrin activation is an upstream mediator of FAK phosphorylation and podocyte injury in models of MCD-like injury (AU)

Antecedentes La activación de la quinasa de adhesión focal (FAK) en podocitos juega un papel en la patogénesis de la enfermedad de cambios mínimos (ECM), pero su mecanismo de activación en dicha enfermedad es desconocido. En este estudio investigamos si la integrina β1 de los podocitos modula la activación de FAK y del daño podocitario en modelos experimentales de la ECM. Métodos Utilizamos lipopolisacárido (LPS) y suero de pacientes con ECM para inducir daño podocitario in vivo e in vitro, respectivamente. Realizamos estudios funcionales usando inhibidores específicos de la integrina β1 in vivo e in vitro, así como estudios histológicos, western blots y técnicas de inmunofluorescencia para evaluar cambios morfológicos y moleculares en podocitos. Usando ELISA medimos los niveles séricos de LPS en 35 niños con ECM o sospecha de ECM (síndrome nefrótico idiopático [SNI]) y en 18 individuos sanos. Resultados Los ratones inyectados con LPS desarrollaron cambios morfológicos (fusión de pedicelos, con apariencia normal de los glomérulos) y moleculares (pérdida de la expresión de sinaptopodina, cambio en la localización de la nefrina fosforilada y fosforilzación de FAK), que son característicos de la ECM en humanos. La administración de un inhibidor de la integrina β1 en ratones disminuyó la fosforilación de FAK, proteinuria y daño podocitario que ocurre tras la inyección de LPS. En niños con ECM/SNI, los niveles séricos de LPS fueron más elevados que en controles. En cultivos de podocitos humanos, la adicción de un inhibidor de la integrina β1 al suero de niños con ECM en recaída evitó cambios en el citoesqueleto. Conclusiones La integrina β1 de los podocitos actúa como mediador de la activación de la FAK y del daño podocitario en modelos experimentales de la ECM (AU)

Aging and asthma - changes in CD45RA, CD29 and CD95 T cells subsets

Background Aging is associated with thymus involution leading to a reduction in naive T cells and to an accumulation of effector-memory cells. Apoptosis is a key mechanism to clear the immune system from activated and harmful cells. In asthma the stimulation of T cells by environmental antigens can decrease naive cells and sustain activated cells. The aim of this work was to evaluate the imbalance between CD45RA and CD29 cells during the aging process and their changes in elderly asthma and to evaluate how elderly and chronic diseases like asthma can affect susceptibility to apoptosis. Methods Elderly and young adult healthy volunteers and elderly asthmatic patients were submitted to skin prick tests, immunoglobulin determination and flow cytometry analyses of CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD29, and CD95. Results Serum IgE was increased in allergic patients (p=0.0001). Asthmatics presented an increase in CD4 cells (p<0.05). CD45RA was significantly decreased in elderly individuals (p<0.05) and this decrease was higher in asthmatics (p<0.05). CD29 was increased in elderly healthy individuals compared to the control young group (p=0.0001). A negative correlation between CD29 and CD45RA (p<0.05) was observed. CD95 lymphocytes increased in elderly (p=0.0001) and a positive correlation between age and CD95 (p<0.05) was found. Asthmatic patients showed significant decreases in CD95 (p=0. 0001). Conclusions Naive cells are key cells in the defence against infections and their decrease in the elderly and in asthma is a bad prognosis factor. The reduction of apoptosis markers can promote the persistence of activated cells involved in chronic conditions(AU)

The effect of dithiothreitol on VLA-4 detection in peripheral blood and induced sputum cells

Background: Induced sputum has been shown to be a reliable technique for investigating airway inflammation non-invasively. Flow cytometry could provide useful information in this area. However, the viscosity of the sample entails the use of a mucolytic agent. Dithiothreitol (DDT) is the most frequently used agent although it could affect detection of different inflammatory markers. Methods: To measure the effect of DDT on the detection of certain adhesion molecules in eosinophils and lymphocytes, sputum was induced from seven non-smoking asthmatic and non-asthmatic subjects treated with 0.1 M DDT. The samples were analyzed by flow cytometry. Whole blood samples from the same subjects were also processed with DTT and analyzed by flow cytometry. Results: Very late activated antigen-4 (VLA-4) levels on eosinophils in intracellular and surface staining were much lower than expected. VLA-4 on lymphocytes was also altered but less so than on eosinophils. VLA-4 levels were also decreased on blood cells after DTT treatment. No abnormalities were found in the detection of CD29 on eosinophils and the β7-chain in lymphocytes. Conclusions: Flow cytometry could be used as a complementary method to induced sputum in the investigation of airway inflammation. However, DTT could interfere with the detection of some inflammatory markers, as is the case with VLA-4 (AU)

Antecedentes: El esputo inducido se ha mostrado como una técnica fiable para estudiar de un modo no invasivo, la inflamación de la vía respiratoria en el asma bronquial. La citometría de flujo puede aportar información útil en este campo. No obstante, la viscosidad de la muestra implica la utilización de una gente mucolítico, siendo el Ditiotreitol (DTT) uno de los más usados, a pesar de que puede alterar la expresión de diferentes mediadores inflamatorios. Métodos: Se indujo esputo de 7 sujetos asmáticos y no asmáticos, todos no fumadores. Se trataron las muestras con DTT 0.1M y se analizaron concitometría de flujo. Muestras de sangre de los mismos sujetos igualmente fueron procesadas con DTT 0.1M y analizadas. Resultados: Los niveles de detección de VLA-4 en la superficie y a nivel intracelular en los eosinófilos, fue más baja de lo esperado. La alteración de los niveles de VLA-4 en linfocitos fue menor que en los eosinófilos. En sangre, la detección de VLA-4 disminuyó en las muestras tratadas con DTT. No se observaron anormalidades en la detección de CD29 en eosinófilos ni en la cadena 7 en linfocitos. Conclusiones: La citometría de flujo puede ser usada en el estudio de la inflamación en la vía aérea aunque se debe tener en cuenta que el DTT altera la detección de algunos marcadores, como así se comprueba para el VLA-4 (AU)

Adhesión y movilidad de los queratinocitos humanos: integrinas 1 y tetraspaninas / Adhesion and mobility of human keratinocytes.1 integrins and tetraspanins

Las integrinas son glicoproteínas heterodiméricas transmembrana que participan en la adhesión célula con célula y célula con matriz extracelular. Las tetraspaninas (CD9 y CD81) son proteínas transmembrana que colaboran en la transducción de señales y coprecipitan con la cadena ß1 de las integrinas. Hemos estudiado la regulación de la actividad de las integrinas ß1 monitorizando la conformación activa de dichas integrinas con anticuerpos monoclonales en queratinocitos humanos normales y hemos evaluado el papel de las tetraspaninas en el queratinocito.Hemos encontrado que los queratinocitos expresan integrinas ß1 en conformación activa, que esta expresión es modulable y que se correlaciona con un aumento en la adhesión. Además, en cultivo, la conformación activa se localiza exclusivamente en los contactos focales. Dado que en la psoriasis existe una expresión suprabasal anómala de integrinas 1, hemos estudiado la conformación activa y hemos encontrado que presenta una disminución en su expresión comparado con piel sana. Hemos visto que las tetraspaninas se colocalizan con integrinas 1 y 3 en las uniones intercelulares, filopodios y rastros de los queratinocitos, lugares donde las integrinas 1 están en conformación inactiva. Sin embargo, las tetraspaninas no se localizan con la conformación activa en los contactos focales. En un modelo de curación de heridas observamos que los anticuerpos antitetraspaninas eran capaces de inhibir la migración de los queratinocitos humanos normales. Es necesario reinterpretar el papel de las integrinas 1 en la psoriasis, así como su papel en las uniones intercelures. Las tetraspaninas parecen jugar un papel en la adhesión célula con célula y célula con matriz extracelular y en la migración (AU)