Effect of Huangkui on mouse podocytes under high glucose environment / Efecto de Huangkui en podocitos de ratón en un entorno de glucosa alta

To explore a new underlying molecular mechanism of Huangkui Extract Powder (HKEP) in the alleviation of diabetic nephropathy (DN). Murine immortalized podocytes were divided into (i) normal glucose (NG, 5.6 mM), (ii) NG + HKEP (0.45 g/L), (iii) HG, and (iv) HG + HKEP (0.45 g/L) groups. MTT assay and flow cytometry were used to detect the podocyte proliferation, apoptosis and cell cycle. Cell viability was inhibited, and apoptosis increased in(iii) HG group compared with (i) NG group (p<0.05). mRNA and protein expression of nephrin and podocin significantly decreased in (iii) HG group compared with (i) NG group (p<0.05). When compared with (iii) HG group, (iv) HG + HKEP group had higher cell viability, lower apoptotic rate and higher mRNA and protein expression of nephrin and podocin (p<0.05). HKEP can attenuate HG-induced podocyte damage, which may be one of the mechanisms of HKEP for attenuating DN.

Explorar un nuevo mecanismo molecular subyacente del extracto del polvo de Huangkui (HKEP) en el alivio de la nefropatía diabética (ND). Los podocitos murinos inmortalizados se dividieron en (i) grupos de glucosa normal (NG, 5,6 mM), (ii) NG + HKEP (0,45 g/L), (iii) HG y (iv) HG + HKEP (0,45 g/L). Se utilizaron el ensayo MTT y la citometría de flujo para detectar la proliferación de podocitos, la apoptosis y el ciclo celular. La viabilidad celular se inhibió y la apoptosis aumentó en el grupo (iii) HG en comparación con el grupo (i) NG (p<0,05). La expresión de ARNm y proteínas de nefrina y podocina disminuyó significativamente en el grupo (iii) HG en comparación con el grupo (i) NG (p<0,05). En comparación con el grupo (iii) HG, el grupo (iv) HG + HKEP tuvo una mayor viabilidad celular, una tasa de apoptosis más baja y una expresión de ARNm y proteínas más altas de nefrina y podocina (p<0,05). HKEP puede atenuar el daño de los podocitos inducido por HG, que puede ser uno de los mecanismos de HKEP para atenuar la DN.

MicroRNA-770-5p contributes to podocyte injury via targeting E2F3 in diabetic nephropathy

Diabetic nephropathy (DN) has been identified as the major cause of end-stage renal disease (ESRD) in most developed countries. MicroRNA-770-5p depletion could repress high glucose (HG)-triggered apoptosis in podocytes, and downregulation of E2F transcription factor 3 (E2F3) could facilitate podocyte injury. Nevertheless, whether E2F3 is involved in miR-770-5p knockdown-mediated improvement of DN is still unclear. The expression levels of miR-770-5p and E2F3 were detected in HG-treated podocytes by RT-qPCR. The expression levels of E2F3, apoptosis-related proteins Bcl-2 related X protein (Bax), B-cell lymphoma-2 (Bcl-2), Bad, apoptotic peptidase activating factor 1 (APAF1), C-caspase3, C-caspase7, and C-caspase9 were detected by western blot assay. The effects of miR-770-5p and E2F3 on HG-treated podocytes proliferation and apoptosis were detected by CCK-8 and flow cytometry assays. The interaction between miR-770-5p and E2F3 was predicted by Targetscan, and then verified by the dual-luciferase reporter assay. MiR-770-5p was upregulated and E2F3 was downregulated in HG-treated podocytes. MiR-770-5p inhibited proliferation and promoted apoptosis and E2F3 promoted proliferation and suppressed apoptosis in HG-treated podocytes. E2F3 is a target gene of miR-770-5p and it partially abolished the effect of miR-770-5p in HG-triggered proliferation and apoptosis of podocytes. MiR-770-5p deficiency blocked HG-induced APAF1/caspase9 pathway via targeting E2F3 in podocytes. We firstly confirmed that E2F3 was a target of miR-770-5p in podocytes. These findings suggested that miR-770-5p expedited podocyte injury by targeting E2F3, and the miR-770-5p/E2F3 axis might represent a pathological mechanism of DN progression.

Long term follow up of biomarkers of podocyte damage and renal function in patients with and without preeclampsia / Seguimento de longo prazo com biomarcadores de dano podocitário e função renal em pacientes com e sem pré-eclâmpsia

ABSTRACT Introduction: preeclampsia can be associated with future renal disease. Objectives: To measure changes in renal function overtime in patients with preeclampsia. Methods: urine and serum samples from eleven patients with preeclampsia and eight patients with a normal pregnancy were obtained during pregnancy, postpartum, and 3 years after delivery. Urine podocalyxin, protein, and serum creatinine were measured. Results: after 3 years, there were no significant differences in urinary podocalyxin in patients with or without preeclampsia: 4.34 ng/mg [2.69, 8.99] vs. 7.66 ng/mg [2.35, 13], p = 0.77. The same applied to urinary protein excretion: 81.5 mg/g [60.6, 105.5] vs. 43.2 mg/g [20.9, 139.3] p = 0.23. Serum creatinine was 0.86 mg/dL [0.7, 0.9] vs. 0.8 mg/dL [0.68, 1] p = 0.74 in those with and without preeclampsia. In normal patients, urinary podocalyxin decreased from 54.4 ng/mg [34.2, 76.9] during pregnancy to 7.66 ng/mg [2.35, 13] three years after pregnancy, p = 0.01. Proteinuria decreased from 123.5 mg/g [65.9, 194.8] to 43.2 mg/g [20.9, 139.3], p = 0.12. In preeclampsia patients, urinary podocalyxin decreased from 97.5 ng/mg [64.9, 318.4] during pregnancy to 37.1 ng/mg within one week post-partum [21.3, 100.4] p = 0.05 and 4.34 ng/mg [2.69, 8.99] three years after, p = 0.003. Proteinuria was 757.2 mg/g [268.4, 5031.7] during pregnancy vs. 757.2 mg/g [288.2, 2917] postpartum, p = 0.09 vs. 81.5 mg/g [60.6, 105.5] three years later, p = 0.01. Two patients still had proteinuria after 3 years. Conclusions: in preeclampsia patients, postpartum urinary podocalyxin decreased before proteinuria. After three years, serum creatinine, urinary podocalyxin, and protein tended to normalize, although some patients still had proteinuria.

RESUMO Introdução: a pré-eclâmpsia pode estar associada à doença renal no futuro. Objetivos: medir mudanças na função renal ao longo do tempo em pacientes com pré-eclâmpsia. Métodos: amostras de urina e soro de onze pacientes com pré-eclâmpsia e oito pacientes com gravidez normal foram obtidas durante a gravidez, pós-parto e 3 anos após o parto. Medimos podocalixina na urina, proteína e creatinina sérica. Resultados: após 3 anos, não houve diferenças significativas na podocalixina urinária em pacientes com ou sem pré-eclâmpsia: 4,34 ng/mg [2,69, 8,99] versus 7,66 ng/mg [2,35, 13], p = 0,77. O mesmo se aplicou à excreção urinária de proteínas: 81,5 mg/g [60,6, 105,5] vs. 43,2 mg/g [20,9, 139,3] p = 0,23. A creatinina sérica foi de 0,86 mg/dL [0,7, 0,9] vs. 0,8 mg/dL [0,68, 1] p = 0,74 naqueles com e sem pré-eclâmpsia. Em pacientes normais, a podocalixina urinária diminuiu de 54,4 ng/mg [34,2, 76,9] durante a gestação para 7,66 ng/mg [2,35, 13] três anos após a gravidez, p = 0,01. A proteinúria diminuiu de 123,5 mg/g [65,9, 194,8] para 43,2 mg/g [20,9, 139,3], p = 0,12. Em pacientes com pré-eclâmpsia, a podocalixina urinária diminuiu de 97,5 ng/mg [64,9, 318,4] durante a gravidez para 37,1 ng/mg em uma semana de pós-parto [21,3, 100,4] p = 0,05 e 4,34 ng/mg [2,69, 8,99] três anos depois, p = 0,003. A proteinúria foi de 757,2 mg/g [268.4, 5031.7] durante a gravidez vs. 757,2 mg/g [288.2, 2917] pós-parto, p = 0.09 vs. 81.5 mg/g [60.6, 105.5] três anos depois, p = 0.01. Dois pacientes ainda apresentavam proteinúria após 3 anos. Conclusões: em pacientes com pré-eclâmpsia, a podocalixina urinária pós-parto diminuiu antes da proteinúria. Após três anos, a creatinina sérica, a podocalixina urinária e a proteína tenderam a se normalizar, embora alguns pacientes ainda tivessem proteinúria.

APOL1 risk variants and kidney disease: what we know so far / Variantes de risco APOL1 e doença renal: o que sabemos até agora

ABSTRACT There are striking differences in chronic kidney disease between Caucasians and African descendants. It was widely accepted that this occurred due to socioeconomic factors, but recent studies show that apolipoprotein L-1 (APOL1) gene variants are strongly associated with focal segmental glomerulosclerosis, HIV-associated nephropathy, hypertensive nephrosclerosis, and lupus nephritis in the African American population. These variants made their way to South America trough intercontinental slave traffic and conferred an evolutionary advantage to the carries by protecting against forms of trypanosomiasis, but at the expense of an increased risk of kidney disease. The effect of the variants does not seem to be related to their serum concentration, but rather to local action on the podocytes. Risk variants are also important in renal transplantation, since grafts from donors with risk variants present worse survival.

RESUMO Existem importantes diferenças na doença renal crônica entre caucasianos e afrodescendentes. Foi amplamente aceito que isso ocorreu devido a fatores socioeconômicos, mas estudos recentes mostraram que as variantes gênicas da apolipoproteína L-1 (APOL1) estão fortemente associadas à glomeruloesclerose segmentar e focal, nefropatia associada ao HIV, nefroesclerose hipertensiva e nefrite lúpica na população afrodescendente. Essas variantes chegaram à América do Sul através do tráfico intercontinental de escravos, e proporcionaram uma vantagem evolutiva aos portadores, protegendo contra formas de tripanossomíase, mas à custa de um maior risco de doença renal. O efeito das variantes não parece estar relacionado à sua concentração sérica, mas sim à sua ação local sobre os podócitos. Variantes de risco também são importantes no transplante renal, já que enxertos de doadores com variantes de risco apresentam pior sobrevida.

Podocitopatía lúpica / Lupus podocytopathy

El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad sistémica autoinmune que puede afectar a múltiples órganos. Aproximadamente el 50% de los pacientes con LES desarrollan enfermedad renal clínicamente evidente, la cual es una causa importante de morbimortalidad. El síndrome nefrótico (SN) es frecuente en los pacientes con nefritis lúpica (NL) y usualmente se asocia a depósitos de complejos inmunes en las paredes capilares, acompañados de proliferación endocapilar y necrosis. No obstante, existe un número creciente de casos reportados de pacientes con LES y SN cuyas biopsias se caracterizan por injuria podocitaria, consistente en fusión pedicelar en la microscopía electrónica y un patrón morfológico idéntico a la enfermedad por cambios mínimos (ECM), a la esclerosis focal y segmentaria primaria o a una glomerulonefritis proliferativa mesangial, en ausencia de depósitos inmunes en las paredes capilares. Este hallazgo podría deberse a la coexistencia de NL y ECM, sin embargo, la mayoría de las investigaciones consideran que esto no es una mera coincidencia. De allí surge una nueva entidad, la "podocitopatía lúpica", patología posiblemente mediada por la activación de células T y la presencia de un factor de permeación glomerular. Esto permite diferenciar al grupo de pacientes con LES y SN, que en la biopsia carecen de depósitos inmunes en las paredes capilares o de signos de actividad lúpica renal, se evidencia fusión pedicelar difusa en la ME y presentan además una alta sensibilidad al tratamiento con corticoides. El diagnóstico de esta nueva entidad, requiere de la interpretación de los hallazgos histopatológicos con la correcta integración de los datos de la inmunofluorescencia y la microscopía electrónica

Lupus Erythematosus (SLE) is a systemic autoimmune disease which may affect several organs. Approximately 50% of SLE patients develop clinically overt renal disease, an important cause of morbidity and mortality. Nephrotic syndrome (NS) is frequent in patients suffering from lupus nephritis (LN) and it is usually associated with immune complex deposition on capillary walls accompanied by endocapillary proliferation and necrosis. However, a growing number of reported cases of SLE and NS patients show biopsies which reveal podocyte injury, consisting of pedicel fusion upon electron microscopy and a morphological pattern identical to minimal change disease (MCD), primary focal segmental glomerulosclerosis or mesangial proliferative glomerulonephritis, in absence of immune complex deposition on capillary walls. Although this finding could be explained by the coexistence of LN and MCD, most researchers consider that this fact is not pure coincidence. A new term, lupus podocytopathy, therefore appears to define a distinct entity characterized by T cell activation and the presence of a glomerular permeability factor. This allows to distinguish the group of SLE and NS patients whose biopsies do not show immune complex deposition on capillary walls or signs of renal lupus activity; electron microscopy reveals diffuse pedicel fusion and patients show high responsiveness to corticosteroid treatment. In order to diagnose this new entity, it is necessary to interpret histopathological findings together with data gathered from immunofluorescence and electron microscopy

El síndrome urémico hemolítico y manejo renal de proteínas / Hemolytic uremic syndrome and renal handling of proteins

El síndrome urémico hemolítico (SUH) está definido por la tríada de anemia hemolítica microangiopática, trombocitopenia e insuficiencia renal aguda. En Argentina constituye la primera causa de insuficiencia renal aguda en pediatría. Aproximadamente, del 2% al 4% de los pacientes mueren durante la fase aguda de la enfermedad, y solo un tercio del 96% restante que sobrevive lo hace con secuelas renales, como la persistencia de la proteinuria. Un individuo adulto sano filtra alrededor de 5000 mg/día de proteínas, si bien la excreción en orina es escasa (150 mg/día). La escasa cantidad de proteínas excretadas indica la presencia de un mecanismo de reabsorción a nivel del túbulo proximal. Por lo tanto, la reabsorción tubular renal desempeña un papel muy importante ya que, ante una función glomerular normal, es el principal mecanismo encargado de evitar la depleción proteica corporal. Desde hace aproximadamente 30 años se sabe que la albúmina es reabsorbida en el túbulo proximal. La reabsorción proteica se produce por un mecanismo de endocitosis mediada por el receptor dependiente de clatrina y por endocitosis de fase líquida. Clásicamente se ha descrito que el mecanismo básico del daño renal en el SUH típico y en el atípico es una microangiopatía trombótica, pero de diferentes causas. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que la fisiopatología de esta enfermedad es más compleja de lo que se creía, ya que la alteración tubular que surge va a evolucionar en fallas en el mecanismo de endocitosis de proteínas que se suman a las eliminadas por las alteraciones a nivel de la barrera de filtración glomerular.

Hemolytic uremic syndrome (HUS) is defined by the triad of hemolytic anemia microangiopathic, thrombocytopenia and acute renal failure. In Argentina it constitutes the first cause of acute renal failure in Pediatrics. Approximately 2-4% of patients die during the acute phase of the disease, and only a third of the remaining 96% survive with renal sequelae, such as the persistence of proteinuria. A healthy adult filters around 5000 mg/day of proteins, with an excretion in urine of 150 mg/day. The little quantity of proteins excreted indicates the presence of a reabsorption mechanism at the level of the proximal tubule. Therefore, the tubular reabsorption plays a very important role since it is the main mechanism responsible for preventing the depletion of protein. For approximately 30 years, it has been known that albumin is reabsorbed in the proximal tubule. Protein reabsorption occurs by a clathrin-dependent receptor mediated endocytosis mechanism and by fluid phase endocytosis. The basic mechanism of renal damage in typical and atypical HUS has been described as a thrombotic microangiopathy, but of different causes. However, the pathophysiology of this disease is more complex than what was believed since the emerging tubular alteration will ewvolve into failures of the protein endocytosis mechanism that are added to the alterations at the level of the glomerular filtration barrier.

Efeito da suplementação de colecalciferol nos RNA mensageiros urinários associados ao podócito em pacientes com doença renal crônica / Effect of cholecalciferol supplementation on urine podocyte-associated messenger RNAs in patients with chronic kidney disease

RESUMO Introdução: A vitamina D reduz a albuminúria em pacientes com doença renal crônica (DRC), mas o seu efeito sobre os podócitos glomerulares ainda não é claro. Objetivos: Avaliar se a suplementação de colecalciferol reduz os RNAm urinários associados ao podócito em pacientes com DRC. Métodos: Vinte e sete pacientes com DRC estágios 2 a 4 e níveis sub-ótimos de 25-hidroxi-vitamina D [25(OH)D] sérica foram tratados com colecalciferol por seis meses. Foram medidos antes e após a intervenção a 25(OH)D sérica e o RNAm urinário da nefrina, podocina, podocalixina, receptor transitório potencial do canal de cátions, subfamília C, membro 6 (TRPC6), fator A de crescimento do endotélio vascular (VEGF-A) e fator de crescimento transformador beta (TGF-β1). Resultados: A TFGe reduziu em média 4,71 mL/min/1,73 m2 (p = 0,010 vs. basal), sendo 28 ± 16 mL/min/1,73 m2 aos seis meses. Os RNAm dos produtos do podócito na urina não tiveram alteração significativa após o tratamento. Entretanto, pacientes que atingiram níveis de 25(OH)D ≥ 20 ng/mL aos 6 meses tiveram tendência de redução do RNAm da nefrina e da podocina na urina; nos pacientes em que a 25(OH)D permaneceu < 20 ng/mL houve aumento significativo da podocalixina, e tendência de maior expressão do RNAm da nefrina e da podocina. Conclusão: A reposição de colecalciferol por seis meses não teve efeito sobre os RNAm associados ao podócito nestes pacientes com DRC avançada. O efeito protetor da vitamina D ou seus análogos sobre o podócito glomerular deve ser investigado em estágios mais precoces da DRC e com maior tempo de tratamento.

ABSTRACT Introduction: Vitamin D reduces albuminuria in patients with chronic kidney disease (CKD) but its effects on glomerular podocytes are not entirely understood. Objective: To evaluate if cholecalciferol supplementation reduces the levels of podocyte-associated urine mRNAs in patients with CKD. Methods: A total of 27 patients with stages 2 to 4 CKD and suboptimal serum vitamin D [25(OH)D] levels were treated with cholecalciferol for 6 months. Serum 25(OH)D level, estimated glomerular filtration rate (eGFR), proteinuria, and urine mRNA of nephrin, podocin, podocalyxin, transient receptor potential cation channel 6, vascular endothelial growth factor A, and transforming growth factor beta were assessed before and after intervention. Results: eGFR declined at an average rate of -4.71 mL/min/1.73 m2 (p = 0.010 vs. baseline), being 28 ± 16 mL/min/1.73 m2 at six months. No changes in proteinuria or mineral and bone metabolism parameters were observed after cholecalciferol supplementation. Urinary podocyte-associated mRNAs did not change significantly after treatment. However, patients who achieved 25(OH)D level > 20 ng/mL at six months showed a trend of reduction of urinary nephrin and podocin mRNA levels; in patients with 25(OH)D that remained < 20 ng/mL there was a significant increase in urinary podocalyxin, and a trend of higher expression of urinary nephrin and podocin mRNA. Conclusion: Six months of cholecalciferol supplementation had no effect on urine podocyte-associated mRNA profile of patients with advanced CKD. The protective effect of vitamin D or its analogues on the glomerular podocyte should be investigated in early stages of CKD with a longer treatment period.

Podocitúria na doença de Fabry / Podocyturia in Fabry disease

Resumo Introdução: A doença de Fabry (DF) é uma desordem lisossômica ligada ao cromossomo X ocasionada por mutações no gene que codifica a enzima lisossômica α-galactosidase A (α-GAL). A redução ou ausência da atividade dessa enzima leva ao acúmulo progressivo de gb3. A doença renal é uma importante consequência clínica da acumulação de Gb3. Podócito é o tipo celular mais afetado na doença renal, que mostra apenas uma resposta parcial à Terapia de Reposição Enzimática. Além disso, a disfunção podocitária é a principal contribuinte para a perda progressiva da função renal e pode ser encontrada alterada mesmo antes do início da microalbuminúria. Assim, a podocitúria na DF pode ser uma ferramenta importante para prever a doença renal. Objetivo: O objetivo deste estudo foi quantificar a excreção urinária de podócitos em pacientes com DF (V269M, n = 14) e controles saudáveis (n = 40), e relacioná-las com as variáveis sexo, idade, tempo de terapia e a razão albumina: creatinina (AUC). Métodos: Podócitos urinários foram identificados utilizando imunofluorescência para podocalixina e DAPI. O número de células podocalixina positivo foi contado e o número médio foi utilizado (faixa normal 0-0.6 podócitos/mL). Resultados: O número médio de podócitos na urina de pacientes com DF foi significativamente maior do que os controles saudáveis (p < 0.0001). Observou-se uma correlação positiva entre podocitúria e AUC (p = 0.004; r2 = 0.6417). Conclusão: A podocitúria pode ser uma ferramenta adicional para avaliar a progressão da doença renal em pacientes que se espera que tenha um fenótipo mais agressivo.

Abstract Introduction: Fabry disease is a lysosomal storage disorder due to abnormalities in the GLA gene (Xq22). Such changes result in the reduction/absence of activity of the lysosome enzyme α-GAL, whose function is to metabolize globotriaosylceramide (Gb3). Renal disease is a major clinical outcome of the accumulation of Gb3. Podocyte injury is thought to be a major contributor to the progressive loss of the renal function and may be found altered even before the onset of microalbuminuria. Objective: The aim of this study was to quantify the urinary excretion of podocytes in Fabry disease patients (V269M, n = 14) and healthy controls (n = 40), and to correlate podocyturia with the variables gender, age, time of therapy and albumin: creatinine ratio (ACR). Methods: Urinary podocytes were stained using immunofluorescence to podocalyxin and DAPi. The number of podocalyxin-positive cells was quantified and the average number was taken (normal range 0-0.6 podocytes/mL). Results: The average number of podocytes in the urine of Fabry disease patients was significantly higher than in healthy controls (p < 0.0001). We observed a positive correlation between podocyturia and ACR (p = 0.004; (r2 = 0.6417). We found no correlation between podocyturia and gender, age or duration of therapy. Conclusion: Podocyturia is an important parameter in the assessment of renal disease in general, and it may serve as an additional early tool for monitoring Fabry disease nephropathy even before changes in ACR are seen. This may prove to be a useful tool to assess disease progression in patients expected to have a more aggressive phenotype.

High prevalence of methicillin resistance and PVL genes among Staphylococcus aureus isolates from the nares and skin lesions of pediatric patients with atopic dermatitis

Staphylococcus aureus is highly prevalent among patients with atopic dermatitis (AD), and this pathogen may trigger and aggravate AD lesions. The aim of this study was to determine the prevalence of S. aureus in the nares of pediatric subjects and verify the phenotypic and molecular characteristics of the isolates in pediatric patients with AD. Isolates were tested for antimicrobial susceptibility, SCCmec typing, and Panton-Valentine Leukocidin (PVL) genes. Lineages were determined by pulsed-field gel electrophoresis and multilocus sequence typing (MLST). AD severity was assessed with the Scoring Atopic Dermatitis (SCORAD) index. Among 106 patients, 90 (85%) presented S. aureus isolates in their nares, and 8 also presented the pathogen in their skin infections. Two patients had two positive lesions, making a total of 10 S. aureus isolates from skin infections. Methicillin-resistant S. aureus (MRSA) was detected in 24 (26.6%) patients, and PVL genes were identified in 21 (23.3%), including 6 (75%) of the 8 patients with skin lesions but mainly in patients with severe and moderate SCORAD values (P=0.0095). All 24 MRSA isolates were susceptible to trimethoprim/sulfamethoxazole, while 8 isolates had a minimum inhibitory concentration (MIC) to mupirocin >1024 μg/mL. High lineage diversity was found among the isolates including USA1100/ST30, USA400/ST1, USA800/ST5, ST83, ST188, ST718, ST1635, and ST2791. There was a high prevalence of MRSA and PVL genes among the isolates recovered in this study. PVL genes were found mostly among patients with severe and moderate SCORAD values. These findings can help clinicians improve the therapies and strategies for the management of pediatric patients with AD.

Podocitúria em gestantes hipertensas crônicas pode predizer dano renal? / Podocyturia in pregnant women with chronic hypertension may predict kidney injury?

OBJETIVO: Avaliar a presença de podocitúria em gestantes hipertensas crônicas no terceiro trimestre da gestação e a associação com doença renal. MÉTODOS: Estudo observacional descritivo em uma amostra de conveniência de 38 gestantes hipertensas crônicas. Os podócitos foram marcados com técnica de imunofluorescência indireta com antipodocina e diamidino-fenilindol (DAPI). A contagem foi feita a partir de 30 campos analisados de forma aleatória, corrigida pela creatinina urinária (podócitos/mg de creatinina). Foram assumidos dois grupos: grupo GN (função glomerular normal), com até 100 podócitos, e grupo GP (provável glomerulopatia), com mais de 100 podócitos. A dosagem de creatinina foi realizada com uso da técnica do picrato alcalino. As variáveis de análise foram o índice de massa corpórea, a idade gestacional na coleta, a pressão arterial sistólica e a pressão arterial diastólica no momento da coleta. Para a análise dos dados, foi utilizado o programa SPSS - versão 16.0. (IBM - USA). Nas análises estatísticas, foi utilizado o teste do χ2, sendo consideradas diferenças significantes valores de p<0,05. RESULTADOS: A contagem de podócitos no grupo GN teve mediana de 20,3 (0,0 a 98,1), e no grupo GP, de 176,9 (109,1 a 490,6). A média do índice de massa corpórea foi 30,2 kg/m2 (DP=5,6), a média da idade gestacional foi de 35,1 semanas (DP=2,5), a mediana da pressão arterial sistólica foi de 130,0 mmHg (100,0-160,0) e a mediana da pressão arterial diastólica de 80,0 mmHg (60,0-110,0). Não houve correlação significativa entre podocitúria e índice de massa corpórea (p=0,305), idade gestacional na coleta (p=0,392), pressão arterial sistólica (p=0,540) e pressão arterial diastólica (p=0,540). CONCLUSÕES: Não foi identificado um padrão de podocitúria compatível com a presença de glomerulopatia ativa, ainda que algumas das gestantes (15,8%) tenham exibido perda podocitária expressiva. Consideramos ser prematuro recomendar para a prática ...

PURPOSE: To evaluate the presence of podocyturia in chronic hypertensive pregnant women in the third trimester of pregnancy and its possible association with renal disease. METHODS: This was an observational study of a convenience sample of 38 chronic hypertensive pregnant women. The podocytes were labeled by the indirect immunofluorescence technique with anti-podocin and diamidino-phenylindole (DAPI). The count was made on 30 random fields analyzed and corrected according to urinary creatinine (podocytes/mg creatinine). The patients were assigned to two groups: NG (normal glomerular function), up to 100 podocytes, and GP (probable glomerulopathy), more than 100 podocytes. Urinary creatinine was measured by the alkaline picrate method. The variables analyzed were body mass index, gestational age, and systolic and diastolic blood pressure at the time of sample collection. Data were analyzed using the SPSS - version 16.0 (IBM - USA). Statistical analysis was performed by the χ2 test, and significant differences were considered when p<0.05. RESULTS: The median podocyte count was 20.3 (0.0-98.1) for group GN, and 176.9 (109.1-490.6) for GP. The mean body mass index was 30.2 kg/m2 (SD=5.6), mean gestational age was 35.1 weeks (SD=2.5), median systolic blood pressure was 130.0 mmHg (100.0-160.0) and median diastolic blood pressure was 80.0 mmHg (60.0-110.0). There was no significant correlation between podocyturia and body mass index (p=0.305), gestational age (p=0.392), systolic blood pressure (p=0.540) or diastolic blood pressure (p=0.540). CONCLUSIONS: In this study, there was no podocyturia pattern consistent with the presence of active renal disease, although some of the women studied (15.8%) exhibited a significant loss. We believe that it is premature to recommend the inclusion of the determination of podocyturia in routine prenatal clinical practice in chronically hypertensive pregnant women. .

Hydrochloride pioglitazone protects diabetic rats against podocyte injury through preserving glomerular podocalyxin expression / O cloridrato de pioglitazona protege ratos diabéticos contra a injúria aos podócitos por meio da preservação da expressão de podocalixina glomerular

Objective: We sought to test the effect of different dosages of pioglitazone (PIO) on the glomerular expression of podocalyxin and urinary sediment podocalyxin excretion and to explore the potential renoprotective mechanism. Materials and methods: Type 1 diabetes induced with streptozotocin (65 mg/kg) in 36 male Sprague-Dawley rats were randomly allocated to be treated with vehicle or 10, 20, 30 mg/kg/d PIO respectively for 8 weeks. Eight rats were enrolled in the normal control group. Results: At 8th week, rats were sacrificed for the observation of kidney injury through electron microscope. Glomerular podocalyxin production including mRNA and protein were determined by RT-PCR and immunohistochemistry respectively. Levels of urinary albumin excretion and urinary sediment podocalyxin, kidney injury index were all significantly increased, whereas expression of glomerular podocalyxin protein and mRNA were decreased significantly in diabetic rats compared to normal control. Dosages-dependent analysis revealed that protective effect of PIO ameliorated the physiopathological changes and reached a peak at dosage of 20 mg/kg/d. Conclusion: PIO could alleviate diabetic kidney injury in a dose-dependent pattern and the role may be associated with restraining urinary sediment podocalyxin excretion and preserving the glomerular podocalyxin expression. .

Objetivo: Buscamos testar os efeitos de diferentes doses de pioglitazona (PIO) sobre a expressão glomerular de podocalixina e sobre a excreção de podocalixina em células do sedimento urinário, além de explorar o potencial mecanismo de proteção renal. Materiais e métodos: O diabetes tipo 1 foi induzido em 36 ratos Sprague-Dawley machos com estreptozotocina (65 mg/kg). Os animais foram tratados apenas com o veículo, ou com 10, 20, 30 mg/kg/d de PIO por 8 semanas. Oito ratos foram colocados no grupo controle. Resultados: Na oitava semana, os ratos foram sacrificados para se observar a lesão renal em microscopia eletrônica. A produção de podocalixina glomerular, incluindo mRNA e proteína, foi determinada por RT-PCR e imuno-histoquímica, respectivamente. Os níveis urinários de albumina e podocalixina nas células do sedimento urinário e o índice de lesão renal estavam todos significativamente aumentados, enquanto a expressão glomerular da proteína podocalixina e do mRNA estava significativamente diminuída em ratos diabéticos comparados com o controle normal. A análise dos efeitos dose-dependentes revelou que o efeito protetor da PIO melhorou as mudanças fisiopatológicas e atingiu um pico na dose de 20 mg/kg/dia. Conclusão: A PIO pode melhorar a injúria renal de forma dose-dependente e este papel pode estar associado com a prevenção da excreção de podocalixina nas células do sedimento urinário e com a preservação da expressão glomerular de podocalixina. .

Lesão podocitária na nefrite lúpica membranosa pura e proliferativa: mecanismos distintos de proteinúria? / Podocyte injury in pure membranous and proliferative lupus nephritis: distinct underlying mechanisms of proteinuria?

Proteinúria é a principal manifestação da nefrite lúpica (NL) e reflete lesão no podócito. Análise dos biomarcadores do podócito foi realizada com o objetivo de identificar se o fenótipo podocitário é distinto na NL membranosa pura e proliferativa. Expressão de sinaptopodina, proteína 1 do tumor de Wilms (Wilms tumor protein 1 - WT1), proteína epitelial glomerular 1 (glomerular epitelial protein 1 - GLEPP1) e nefrina foi avaliada em 52 biópsias de NL por imunohistoquímica. Expressão preservada de sinaptopodina foi observada em apenas 10 (19,2%) de todas as biópsias enquanto que 42 (80,8%) apresentavam expressão reduzida. Ambos os grupos tinham proteinúria semelhante no momento da biópsia (p = 0,22), porém, no seguimento médio de quatro anos houve uma tendência para menores níveis médios de proteinúria nos pacientes com marcação preservada de sinaptopodina (0,26 ± 0,23 vs 0,84 ± 0,90 g/24 h, p = 0,05) do que naqueles com expressão reduzida. Trinta e nove (75%) biópsias foram classificadas como proliferativa e treze (25%) como membranosa pura. Comparação dos biomarcadores do podócito demonstrou predomíno de marcação preservada de sinaptopodina (69,2%), WT1 (69,2%), GLEPP1 (53,9%) e nefrina (60%) no grupo membranosa pura enquanto apenas < 10% das proliferativas apresentaram expressão preservada. Nossos dados sugerem que nas classes proliferativas parece haver lesão estrutural do podócito, enquanto que na membranosa pura o padrão predominantemente preservado sugere uma lesão funcional do podócito que pode ser responsável pelo melhor prognóstico a longo prazo do desfecho da proteinúria.

Proteinuria is a major feature of lupus nephritis (LN) and reflects podocyte injury. Analysis of podocyte biomarkers was performed attempting to identify if podocyte phenotype is distinct in pure membranous and proliferative LN. Expression of synaptopodin, Wilms tumor protein 1 (WT1), glomerular epithelial protein 1 (GLEPP1) and nephrin was evaluated in 52 LN biopsies by immunohistochemistry. Preserved synaptopodin expression was observed in only 10 (19,2%) of all biopsies while 42 (80,8%) had a reduced expression. Both groups had comparable proteinuria at the time of biopsy (p=0,22), however, in the mean follow-up of four years there was a tendency to lower mean levels of proteinuria in patients with preserved synaptopodin staining (0,26 ± 0,23 vs. 0,84 ± 0,90 g/24 h, p=0,05) than those with diminished expression. Thirty-nine (75%) biopsies were classified as proliferative and thirteen (25%) as pure membranous. Comparison of podocyte biomarkers demonstrated a predominance of preserved staining of synaptopodin (69,2%), WT1 (69,2%), GLEPP1 (53,9%) and nephrin (60%) in the pure membranous group whereas only < 10% of the proliferative showed preserved expression. Our data suggest that in proliferative forms there seems to occur structural podocyte damage, whereas in the pure membranous the predominant preserved pattern suggests a dysfunctional podocyte lesion that may account for the better long-term prognosis of proteinuria outcome.

Detecção de podocitúria em pacientes com nefrite lúpica / Detection of podocyturia in patients with lupus nephritis

INTRODUÇÃO: A podocitúria tem sido detectada em doenças glomerulares, tais como em nefrite lúpica (NL), em que a proteinúria é uma manifestação importante, e sua ocorrência parece limitar-se à fase ativa da doença. OBJETIVO: Avaliar a podocitúria por imunofluorescência em pacientes portadores de NL e verificar possível associação com atividade clínica da doença. MÉTODOS: Foram avaliados 56 pacientes com NL. Os pacientes foram divididos em três grupos de acordo com o grau de atividade clínica: Grupo B, sem atividade (n = 17); Grupo C, com atividade discreta (n = 29) e Grupo D, moderada a grave (n = 10). Como grupo controle, foram incluídos 29 indivíduos saudáveis (Grupo A). A podocitúria foi estudada por meio de imunofluorescência indireta, usando-se anticorpos primários antipodocina, nefrina e sinaptopodina, e anticorpo secundário conjugado à FITC. Também foram avaliados os níveis de creatinina sérica e da relação proteína/creatinina (P/C) urinária, assim como a presença de hematúria e leucocitúria. RESULTADOS: A podocitúria com antipodocina e com antissinaptopodina correlacionou-se estatisticamente com a relação P/C (p = 0,001 e p = 0,013, respectivamente). Tanto a podocitúria com antipodocina, quanto a relação P/C, apresentaram correlação significante (p < 0,001) com a graduação de atividade da doença na NL, diferentemente do que se observou com os outros dois anticorpos, antinefrina e antissinaptopodina. CONCLUSÃO: Nossos achados sugerem que a pesquisa de podocitúria com anticorpos antipodocina poderia ser útil no acompanhamento de pacientes com NL, fornecendo dados relevantes quanto à atividade da doença.

INTRODUCTION: The podocyturia has been detected in glomerular diseases, such as lupus nephritis (LN), in which proteinuria is an important manifestation, and its occurrence seems to be limited to the active phase of the disease. OBJECTIVE: To evaluate podocyturia in LN patients, and the possible association with clinical disease activity. METHODS: We evaluated 56 patients with LN, that were classified in three groups according to the degree of clinical activity: Group B, no activity (n = 17), Group C with mild (n = 29) and Group D, moderate to severe activity (n = 10). The control group was composed by 29 healthy subjects (Group A). The podocyturia was studied by indirect immunofluorescence using primary antibodies to podocyte: anti-podocin, nephrin and synaptopodin, and a secondary antibody conjugated with FITC. We also evaluated serum creatinine levels, urinary protein/creatinine (P/C) ratio, hematuria and leucocituria. RESULTS: The podocyturia with anti-podocin and anti-sinaptopodin correlated statistically with the P/C ratio (p = 0.001 and p = 0.013, respectively). The podocyturia with anti-podocin, as well as the P/C ratio showed significant correlation (p < 0.001) with the degree of lupus disease activity, unlike the other two antibodies, anti-nephrin and anti-synaptopodin. CONCLUSION: Our findings show that podocyturia with anti-podocin could be useful in monitoring disease activity in LN patients.

Esclerosis focal y segmentaria glomerular primaria: ubi sumus et quo eamus? / Primary focal segmental glomerulosclerosis: ubi sumus et quo eamus?

La esclerosis focal y segmentaria glomerular primaria es una causa frecuente de sindrome nefrótico con alta morbilidad que con frecuencia lleva a la insuficiencia renal terminal debido a que sus esquemas terapeúticos no son exitosos, ya que sus mecanismos fisiopatológicos a la actualidad han sido parcialmente descifrados. Éstos son heterogéneos, complejos de integrar, y además el término agrupa bajo la misma denominación -la cual evoca una descripción histológica- a un variado número de causas moleculares con distinta fisiopatogenia. En esta revisión se describen los últimos adelantos respecto a la fisiopatología de esta compleja entidad y los últimos adelantos en su terapéutica.

Primary focal and segmental glomerulosclerosis is a common cause of nephrotic syndrome with high morbidity that often leads to end-stage renal failure as the different available therapeutic approaches are unsuccessful, due in part to the fact that the pathophysiological mechanisms have not been fully deciphered, are heterogeneous and complex to integrate, and more important, the denomination employed evokes a histological description shared by a number of different causes with different molecular pathogenesis. This review describes the latest developments regarding the pathophysiology of this complexentity and describes recent advances in therapy.

Efecto de la administración de espironolactona sobre la pérdida de podocitos y la progresión de la nefropatía diabética experimental / Effects of spironolactone administration on the podocytes loss and progression of experimental diabetic nephropathy

Objetivos. Evaluar el efecto de espironolactona (SPL) sobre la pérdida de los podocitos durante la progresión de la nefropatía diabética (ND) experimental. Materiales y métodos. Aleatoriamente un grupo de ratas macho Holtzman recibieron estreptozotocina (grupo diabético) o citrato buffer (grupo control). Las ratas diabéticas fueron tratadas con SPL (50 mg/kg/día). El área glomerular y la celularidad fueron evaluadas por métodos histomorfométricos. La lesión y pérdida de podocitos fue evaluada por la expresión de desmina y Wt-1, respectivamente. La expresión génica del TGF-β1 se evaluó mediante RT-PCR. Resultados. Los niveles de glucosa, el área glomerular, la expansión mesangial y el contenido de colágeno se incrementaron significativamente en las ratas diabéticas. La administración de SPL previno estos cambios sin modificar los niveles de glucosa. La inmunotinción para Wt-1 se redujo significativamente, mientras que la inmunotinción para desmina se incrementó drásticamente en las ratas diabéticas. El tratamiento con SPL previno el incremento de expresión de desmina y la pérdida de expresión de Wt-1. Asimismo, la administración de SPL previno el incremento de la expresión del mRNA del TGF-β1 en las ratas diabéticas. Conclusiones. El tratamiento con SPL, a través de efectos glucosa independientes, atenúa la perdida de podocitos y la progresión de los cambios morfológicos de la ND. Los presentes resultados sugieren que estos efectos son mediados, al menos en parte, por la inhibición de la la expresión del mRNA del TGF-β1.

Objectives. Evaluate the effect of spironolactone (SPL) on the loss of podocytes during the progression of experimental diabetic nephropathy (DN). Materials and methods. A group of male Holtzman rats randomly received streptozotocin (diabetic group) or a buffer citrate (control group). Diabetic rats were treated with SPL (50 mg/kg/day). The glomerular area and the cellularity were evaluated by histomorphometric methods. The injury and loss of podocytes was assessed by desmin expression and Wt-1, respectively. The gene expression of TGF-β1 was assessed by RT-PCR. Results. Glucose levels, the glomerular area, the mesangial expansion and collagen content increased significantly in diabetic rats. The administration of SPL prevented these changes without changing glucose levels. Immunostain for Wt-1 decreased significantly while immunostain for desmin increased dramatically in diabetic rats. Treatment with SPL prevented the increase of desmin expression and the loss of Wt-1 expression. Furthermore, the administration of SPL prevented the increase of TGF-β1 mRNA expression in diabetic rats. Conclusions. Treatment with SPL, through independent glucose effects, reduces the loss of podocytes and the progression of DN morphological changes. These results suggest that these effects are mediated, at least in part, by the inhibition of TGF-β1 mRNA expression.

Estudo de aspectos moleculares podocitários nas variantes histológicas da glomerulosclerose segmentar e focal / Podocytes molecular expression in the variants of focal segmental glomerulosclerosis

INTRODUÇÃO: A Glomerulosclerose Segmentar e Focal (GESF) é a glomerulopatia primária mais prevalente no Brasil e sua incidência vem aumentando no mundo inteiro. Na sua forma primária, caracteriza-se clinicamente por acometer pessoas jovens e causar proteinúria acentuada, geralmente acompanhada de síndrome nefrótica. O mecanismo patogênico tem como evento principal a lesão ao podócito, desencadeado por fatores de natureza variada: vírus, drogas/medicamentos, imunológicos, etc. Em 2004, foi publicada a classificação de Columbia, propondo 5 variantes morfológicas distintas na GESF: colapsante (COL), usual (NOS), apical ou tip lesion (TIP), perihilar (PHI) e variante celular (CEL). Diversos estudos comprovam alterações moleculares em podócitos na GESF. Essas alterações são observadas em diversos sítios podocitários: em moléculas envolvidas na fenda de filtração (slit diaphragm), por exemplo, nefrina, podocina e CD2AP; em moléculas do citoesqueleto podocitário, como a -actinina-4 e sinaptopodina; em moléculas marcadoras de diferenciação dos podócitos, como CD10 e WT-1; e ainda em marcadores de divisão celular como Ki-67 e PCNA. Os objetivos desse estudo foram: 1-) classificar as lesões morfológicas de GESF em biópsia renais nas 5 variantes da GESF propostas na Classificação de Columbia; e 2-) analisar a ocorrência de alterações moleculares podocitárias nestes casos. MÉTODOS: Foram selecionados 131 casos de biópsias renais com diagnóstico de GESF primária no período de 1996 a 2006. Os casos foram classificados de acordo com os critérios de Columbia e posteriormente submetidos a reações imuno-histoquímicas para os marcadores CD10, WT-1, vimentina, sinaptopodina, -actinina-4, GLEPP-1, citoqueratina 8/18, citoqueratina 19 e Ki-67. Os resultados foram submetidos à análise estatística através do teste qui-quadrado. RESULTADOS: A classificação das variantes da GESF se distribuiu da seguinte forma: 38,2% de variante NOS, 36,6% de variante COL, 14,5%...

INTRODUCTION: Focal segmental glomerulosclerosis (FSGS) is the most prevalent primary glomerulopathy in Brazil and its incidence is increasing worldwide. Primary FSGS is characterized clinically by affecting young people and causing severe proteinuria, often accompanied by nephrotic syndrome. The pathogenesis is related to podocyte injury, which may be due to several factors: viruses, drugs, immunological, etc. In 2004, the Columbia classification of FSGS identified five histological variants of the disease: collapsing (COL), usual (NOS), tip lesion (TIP), perihilar (PHI) and cellular variant (CEL). Several studies have demonstrated molecular changes in podocytes of FSGS patients, which were observed in molecules involved in the filtering function of these cells (nephrin, podocina and CD2AP), in podocyte cytoskeleton molecules (-actinin-4, and synaptopodin), as well as in molecular markers of podocyte differentiation (CD10 and WT-1) and of cell division (Ki-67 and PCNA). The aim of this study was to classify the FSGS biopsies according to the Columbia classification and to analyze the occurrence of molecular changes in the five morphological variants. METHODS: 131 cases of renal biopsies with a diagnosis of primary FSGS in the period 1996 to 2006 were classified according to the criteria of Columbia and then submitted to immunohistochemical reactions with the following antibodies: CD10, WT-1, Vimentin, Synaptopodin, -actinin-4, GLEPP-1, cytokeratin 8-18, cytokeratin 19, and Ki-67. RESULTS: FSGS cases were classified into five variants as follows: 38.2% of NOS variant, 36.6% COL, 14.5% TIP, 6.9% PHI and 3.8% CEL. The COL variant cases distinguished themselves among the other for having lost the expression of CD10 and WT-1 (p <0.01), and also of -actinin-4 (p <0, 01). Furthermore, they gained expression of the cytokeratin 8-18 (p <0.05) and 19 (p <0.01). The group of CEL and COL variants together differed...

Reduction of podocytes number in late diabetic alloxan nephropathy: prevention by glycemic control

PURPOSE: To determine podocyte number and GBM thickness in diabetic rats either under glycemic control or without glycemic control at 6 and 12 months after diabetes induction. METHODS: 100 wistar rats weighing 200-300g were divided into 6 groups: Normal group (N6 and N12- 25 rats); Diabetic group (D6 and D12- 25 rats), diabetic treated group ( DT 6 and DT 12- 25 rats) on insulin 1,8- 3,0 IU/Kg associated with acarbose (50mg to 100g of food) daily mixed in chow. Alloxan was injected intravenously in a dose of 42 mg/Kg of weight. Body weight, waterintake, 24-h diuresis, glycemia and glucosuria were determined before induction, 7 and 14 days after induction and monthly thereafter. Treatment started at day 14. Three groups were sacrificed at 6 months (N6,D6, DT6) and 3 groups at 12 months (N12, D12, DT12) with the renal tissue being prepared for electron microscopy. RESULTS: Glycemia in DT6¨and in DT12 was significantly different from that in D6 and D12 rats and similar to that in N6 and N12 animals. The number of podocytes in DT6 was not different from that in N6 and D6 (median = 11); the number of podocytes in DT12 (median = 11) differed from that in D12 (median = 8), but not from that in N12 (median = 11). GBM thickness in D6 (0.18 micrometers) was lower than in D12 (0.29 micrometers); while in DT6 (0.16 micrometers) it was lower than in D6 (0.18 micrometers). In DT12 (0.26 micrometers), it was lower than in D12 (0.29 micrometers). CONCLUSION: The control of hyperglycemia prevented GBM thickening in early and late (12 mo) alloxan diabetic nephropathy and podocyte number reduction.

OBJETIVO: Avaliar o número de podócitos e espessamento da membrana basal glomerular (MBG) em ratos diabéticos com e sem controle glicêmico com 6 e 12 meses da indução. MÉTODOS: 100 ratos Wistar com 200-300g compuseram 6 grupos: Normal (N6, N12 - 25 animais) Diabético (D6,D12 - 25 animais) e diabético tratado com insulina 1,8 a 3,0 U/Kg e acarbose misturada a ração (50g para cada 100g de ração) (DT6 e DT12 - 25 animais). Aloxana foi ministrada via endovenosa na dose de 42mg/Kg. Peso, ingestão hídrica e diurese de 24 horas e glicemia e glicosúria foram determinados antes da inoculação, 7 e 14 dias após e mensalmente. No 14ª dia foi iniciado o tratamento. Três grupos de animais (N6, D6 e DT6) foram sacrificados no 6° mês e três grupos (N12, D12 e DT12), no 12ª mês sendo o tecido renal processado para estudo à microscopia eletrônica. RESULTADOS: A glicemia dos animais DT6 e DT12 diferiram significativamente, dos ratos D6 e D12, e não diferiram dos grupos N6 e N12. O número de podócitos do grupo DT6 não diferiu de N6 e D6 (mediana=11); o número de podócitos de DT12 (mediana=11) diferiu de D12 (mediana=8) e não diferiu de N12 (mediana=11). O espessamento da MBG de D6 (0,18 micrômetros) foi menor que D12 (0,29 micrômetros); de DT6 (0,16 micrômetros) foi menor que D6 (0,18 micrômetros) e de DT12 (0,26 micrômetros) foi menor que D12 (0,29 micrômetros). CONCLUSÃO: O controle da hiperglicemia preveniu o espessamento da MBG na nefropatia diabética aloxânica precoce (6 meses) e tardia (12 meses), e a diminuição do número de podócitos.

Fisiopatología da síndrome nefrótica em crianças e adolescentes / Pathophysiology of nephrotic syndrome in children and adolescents

A Síndrome nefrótica (SN), caracterizada por proteinúria, hipoalbuminemia e edema, é a glomerulopatia mais comum em crianças. Apesar dos avanços, sua fisiopatologia permanece desconhecina. Considera-se que a SN é um distúrbio complexo e multifatorial, envolvendo agentes desencadeadores, alteraçôes genéticas e do sistema imune. Alteraçôes genéticas podem aumentar a susceptibilidade à SN ou provocar distúrbios de permeabilidade que se manifestam logo após o nascimento. Várias evidências sugerem também um papel significativo do sistema imne na fisiopatologia dessa doença, com uma aparente resposta anormal dos linfócitos T, Participaçâo de citocinas e quimiocinas, com destaque para o TGFß. Outros echaos sugerem a existência de algum fator circulante de permeabilidade, provavelmente derivado do sistema imune, relacionado às recidivas pós-transplante. O estudo mais aprofundado da fisiopatología da SN poderia proporiconar o desemvolvimiento de fármacos com maior respecificidade e menos efectos adversos

The number of podocyte and slit diaphragm is decreased in experimental diabetic nephropathy

OBJETIVO: Determinar o número de podocitos e fendas diafragmáticas, a extensão das fendas diafragmáticas e a espessura da Membrana Basal Glomerular (MBG) na nefropatia diabética. MÉTODOS: Sessenta "Rattus Wistar" de ambos os sexos, pesando entre 200-300g, foi dividido em dois grupos experimentais: grupo normal 10 animais, e grupo diabético induzido por aloxana – 50 animais. A Aloxana foi administrada em dose única endovenosa de 42mg/kg de peso. Medimos o peso, ingestão de água e comida, diurese e glucose sérica e urinária em ambos os grupos antes da injeção de aloxana e 2 (duas) semanas, seis e dose meses após a injeção. A proteinúria foi mensurada aos dose meses em ambos os grupos, no momento do sacrifício, onde removemos o rim direito para estudo ultraestrutural. RESULTADOS: Observamos sinais clínicos e laboratoriais de diabetes severo, nos animais diabéticos aloxânicos em todos os períodos de seguimento. Foi determinado o espessamento da membrana basal glomerular (MBG), número de podocitos, número de fendas diafragmáticas e sua extensão. A membrana basal glomerular do rato diabético mostrou espessamento significativo (mediana=0.29µm; amplitude semi-interquartilica = 0,065µm) em relação ao animal normal (0,23µm; 0,035µm). O número de podocitos do animal diabético (8; 1), número de fenda diafragmática (4; 1), e extensão das fendas diafragmáticas (0,021µm; 0,00435µm) foi significativamente menor em relação aos animais normais (11; 1) e (7; 1.5), e (0,031µm; 0,0058µm). A taxa da proteinúria (0,060mg/24h; 0,037mg/24h) foi maior que nos animais normais (0,00185mg/24h; 0,00055mg/24h). CONCLUSÃO: O diabetes experimental está associado com significativas alterações (p< 0,05) no número de processos podálicos e fendas diafragmáticas e extensão das fendas diafragmáticas e espessamento da membrana basal glomerular (MBG).