Development of a Device to Obtain Platelet-Rich Plasma (PRP) / Desenvolvimento de um dispositivo para obter plasma rico em plaquetas (PRP)

Abstract Objective To present an innovative device that applies the double centrifugation method to obtain platelet-rich plasma (PRP), assessing whether there was an effective increase in the concentration of platelets. Method Ten volunteers underwent blood collection. The samples were separated in 20 ml syringes, sealed and subjected to the double centrifugation protocol at 1,100 revolutions per minute (rpm) for 15 minutes, resulting in the separation of red blood cells, plasma with platelets, and leukocytes. Then, 10 ml syringes were added to remove 9 ml, respecting the "buffy coat" parameter, collecting 8 ml above and 1 ml below for the second centrifugation and transferring again to the 20 ml syringe. The plasma was again centrifuged at 1,550 rpm for 10 minutes; as a result, it was divided into two parts: at the top, consisting of low platelet plasma (LPP), and at the bottom, by the platelet button. Part of the LPP was discarded, leaving only 3 ml with the platelet button. The cells were then counted. Results This innovative device was able to increase the concentration of platelets by almost three times compared with the baseline. In addition, the preparation time for the PRP was adequate, lasting only 35 to 40 minutes. Conclusions Platelet-rich plasma was successfully obtained by the double centrifuge protocol, allowing its clinical use. In addition, obtaining through the presented device promotes greater applicability in the preparation of PRP in specific centers, furthermore, being a quick and economical way to obtain PRP.

Resumo Objetivo Apresentar um dispositivo inovador que aplique o método de centrifugação dupla para obter plasma rico em plaquetas (PRP), avaliando se houve um aumento efetivo na concentração de plaquetas. Método Dez voluntários foram submetidos a coleta de sangue. As amostras foram separadas em seringas de 20 mL, seladas e submetidas ao protocolo de centrifugação dupla a 1.100 revoluções por minuto (rpm) por 15 minutos, resultando na separação de hemácias, plasma com plaquetas e leucócitos. Em seguida, foram adicionadas seringas de 10 mL para remover 9 mL, tendo como parâmetro a "buffy coat", coletando 8 mL acima e 1 mL abaixo para a segunda centrifugação e transferindo novamente para a seringa de 20 mL. O plasma foi novamente centrifugado a 1.550 rpm por 10 minutos; como resultado, foi dividido em duas partes: na parte superior, consistindo em plasma pobre em plaquetas (PPP), e na parte inferior, pelo botão plaquetário. Parte do PPP foi descartada, restando apenas 3 mL com o botão de plaquetas. As células foram então contadas. Resultados Este dispositivo inovador foi capaz de aumentar a concentração de plaquetas em quase 3 vezes relação a linha de base. Além disso, o tempo de preparo do PRP foi adequado, com duração de apenas 35 a 40 minutos. Conclusões O PRP foi obtido com sucesso pelo protocolo de centrifugação dupla, permitindo seu uso clínico. Além disso, a obtenção através do dispositivo apresentado promove maior aplicabilidade no preparo do PRP em centros específicos, além de ser, uma forma rápida e econômica de obter PRP.

Determinación de la viabilidad de los concentrados plaquetarios obtenidos de capa leucocitaria (buffy coat) durante siete días de almacenamiento / Monitoring of the Viability of Platelet Concentrates Obtained from Buffy Coat during Seven Days of Storage / Determinação da viabilidade de concentrados de plaquetas obtidos de camada leucocitária (buffy coat) durante sete dias de armazenamento

Introducción: los concentrados plaquetarios (CPG) son hemocomponentes lábiles afectados por varios factores, desde el método de obtención hasta las condiciones de almacenamiento, que provocan una paulatina pérdida de funcionalidad, por lo que es necesario evaluar parámetros de calidad que garanticen la viabilidad de las plaquetas durante los días de almacenamiento, con el propósito de monitorear el mantenimiento de las características funcionales de las plaquetas. Materiales y métodos: estudio descriptivo transversal, con un tamaño muestral de 64 cpq, evaluados a los 3, 5 y 7 días de almacenamiento. Los parámetros monitoreados fueron físicos, de almacenamiento y porcentaje de la activación plaquetaria mediante la medición de P-selectina (cd62) por citometría de flujo. Se aplicó el estadístico de chi cuadrado, Anova de un factor, Kruskall-Wallis y correlación de Pearson. Resultados: existen diferencias significativas al séptimo día con relación al tercer y quinto día de almacenamiento, especialmente en el parámetro de formación de remolino plaquetario o swirling (p < 0.005) y agregados plaquetarios (p = 0.001). La activación plaquetaria aumentó significativamente (p = 0.001) desde el quinto día. Conclusiones: la viabilidad de los cpq difiere con los días de almacenamiento, por lo que es necesario evaluar pH, formación de remo-linos y agregados a todos los cpq antes de ser transfundidos como indicativos de activación plaquetaria y disminución de su funcionalidad

Introduction: Platelet concentrates (cpq) are labile blood components affected by several factors from the method of production to storage conditions that cause a gradual loss of functionality. For this reason, it is necessary to evaluate the platelet quality parameters that guarantee the viability during the storage days, with the purpose of monitoring the maintenance of the functional characteristics of the platelets. Materials and methods: This cross-sectional descriptive study had a sample size of 64 platelet concen-trates, evaluated at 3, 5, and 7 days of storage. The monitored parameters were the physical storage parameters and percentage of platelet activation by measuring P-selectin (cd62) via flow cytometry. The chi-square statistic, one-way Anova, Kruskal­Wallis test, and Pearson correlation were applied. Results: Significant differences were observed on the 7th day in relation to the 3rd and 5th day of storage, espe-cially in the swirling parameter (p < 0.005) and platelet aggregates (p = 0.001). The platelet activation increased significantly (p = 0.001) on the 5th day. Conclusions: Based on the findings of this study, the viability of the platelet concentrates differs with the days of storage. For this reason, it is necessary to evaluate the swirling, pH, and aggregates to all platelet concentrates before being transfused as an indication of platelet activation and decreased functionality

Introdução: os concentrados de plaquetas (cpq) são hemocomponentes lábeis afetados por diversos fato-res, desde o método de obtenção até as condições de armazenamento que ocasionam uma perda grada-tiva de funcionalidade, sendo necessário avaliar os parâmetros de qualidade que garantem a viabilidade das plaquetas ao longo dos dias de armazenamento, a fim de monitorar a manutenção das características funcionais das plaquetas. Materiais e métodos: estudo descritivo transversal, com tamanho de amostra de 64 cpq, avaliados aos três, cinco e sete dias de armazenamento. Os parâmetros monitorados foram físicos, de armazenamento e porcentagem de ativação plaquetária pela dosagem de P-selectin (cd62) por citometria de fluxo. Os testes estatísticos aplicados incluíram o teste qui-quadrado, anovade um fator, teste de Kruskall-Wallis e correlação de Pearson. Resultados: há diferenças significativas no sétimo dia em relação ao terceiro e quinto dia de armazenamento, principalmente no parâmetro formação de rede-moinhos ou swirling de plaquetas (p < 0.005) e agregados plaquetários (p = 0.001). A ativação plaquetária aumentou significativamente (p = 0.001) a partir do quinto dia. Conclusões: a viabilidade dos concentra-dos de plaquetas difere com os dias de armazenamento, por isso é necessário avaliar o pH, a formação de redemoinhos e agregados a todos os concentrados de plaquetas antes de serem transfundidos como indicativo de ativação plaquetária e diminuição de sua funcionalidade

Parámetros de calidad de concentrados plaquetarios obtenidos por buffy coat en un hospital general del Perú / Quality parameters of platelet concentrates obtained by buffy coat in a general hospital of Perú

Objetivo: Verificar si los concentrados plaquetarios obtenidos por buffy coat cumplen con los parámetros de calidad en el banco de sangre de un Hospital General del Perú. Materiales y métodos: Se realizó un estudio descriptivo transversal. La población estuvo constituida por los donantes que acudieron al Banco de sangre del Hospital Regional de Ica durante los meses de febrero y marzo del 2017, de donde se obtuvo un tamaño muestral de 67 concentrados plaquetarios que cumplieron con los criterios de inclusión según el PRONAHEBAS, con un nivel de confianza del 95%, proporción esperada del 5% y un error del 5%. Los datos evaluados fueron Inspección visual, presencia de remolino, medición de volumen, medición del potencial de Hidrógeno (pH), recuentos de plaquetas, leucocitos residuales; y a través de cultivos microbiológicos, la contaminación bacteriana, las mismas que fueron llenadas en un Instrumento de evaluación de datos, que luego fueron procesados a través del programa estadístico SPSS vs 22, aplicándoseles después estadística descriptiva con medidas de frecuencia para las variables cualitativas, y medidas de tendencia central para las variables cuantitativas. Resultados: El 68% de las muestras evaluadas tuvieron una coloración normal. Sólo el 48% tuvo un aspecto aceptable con swirling demostrando presencia de plaquetas en forma indirecta. La gran mayoría presentó volúmenes inadecuados de plasma sobrepasando el límite superior. EL pH presentó una amplia gama de variación; sólo la quinta parte de ella tuvo una medida óptima con respecto a este ítem. Los recuentos de plaquetas estuvieron por debajo del recuento aceptable (74%). La leucorreducción y la presencia de contaminación bacteriana, fueron las características óptimas en un 100% de la muestra estudiada. Conclusiones: La mayoría de parámetros calidad en el banco de sangre del Hospital Regional de Ica no cumplieron con los requisitos establecidos según estándares establecidos, por lo que el presente estudio sirve de base para continuar con otras investigaciones donde se identifique la falla probable en el procedimiento o patología de nuestros donantes que redunde en una inadecuada obtención de concentrados plaquetarios por el método de buffy coat. (AU)

Objective: To verify if the platelet concentrates obtained by buffy coat comply with the quality parameters in the blood bank of a General Hospital of Peru. Materials and methods: A cross-sectional descriptive study was carried out. The population was made up of donors who went to the Blood Bank of the Ica Regional Hospital during the months of February and March 2017, where a sample size of 67 platelet concentrates was obtained that met the inclusion criteria according to PRONAHEBAS, with a confidence level of 95%, expected proportion of 5% and an error of 5%. The data evaluated were visual inspection, swirling presence, volume measurement, hydrogen potential measurement (pH), platelet counts, residual leukocytes; and through microbiological cultures, the bacterial contamination, the same ones that were filled in a Data Evaluation Instrument, which were then processed through the statistical program SPSS vs 22, then applied descriptive statistics with frequency measures for the qualitative variables, and measures of central tendency for quantitative variables. Results: 68% of the samples evaluated had a normal coloration. Only 48% had an acceptable appearance with swirling demonstrating the presence of platelets indirectly. The vast majority presented inadequate volumes of plasma exceeding the upper limit. The pH presented a wide range of variation; Only one fifth of it had an optimal measure with respect to this item. Platelet counts were below the acceptable count (74%). Leukoreduction and the presence of bacterial contamination were the optimal characteristics in 100% of the sample studied. Conclusions: The majority of quality parameters in the blood bank of the Regional Hospital of Ica did not comply the requirements established according to established standards, so the present study serves as a basis to continue with other investigations where the probable failure in the procedure is identified or pathology of our donors that results in an inadequate obtaining of platelet concentrates by the method of buffy coat. (AU)

Citoinclusão de capa leucocitária e medula óssea de cães: padronização da técnica / Cell block of canine buffy coat and bone marrow in paraffin blocks: technique standardization

A técnica de citoinclusão é amplamente utilizada e reconhecida por profissionais da área da saúde, em particular médicos patologistas, porém as informações sobre a aplicação desse método em medicina veterinária ainda são raras. Análises citológicas de medula óssea e da capa leucocitária (porção do sangue formada por concentrados de leucócitos) são amplamente utilizadas no diagnóstico de patologias de origem neoplásica e não neoplásica e de agentes infecciosos. Embora a importância do uso da técnica seja amplamente reconhecida, não há registro da utilização de amostras citológicas de medula óssea e capa leucocitária na confecção de citoinclusões em blocos de parafina, como meio de diagnóstico no segmento médico veterinário. Assim, este trabalho tem como objetivo elaborar um protocolo de citoinclusão em parafina para amostras citológicas de medula óssea e capa leucocitária de cães. Foram submetidas à técnica de citoinclusão 110 amostras de capa leucocitária e 44 de medula óssea de cães portadores ou não de enfermidade sistêmica, sendo que em 68% destas, tanto para a capa leucocitária quanto para a medula óssea, as amostras se mostraram viáveis. A utilização do álcool 95% como fixador e de etapas no processamento histológico de 20 minutos (álcool absoluto, xilol e parafina, três banhos cada) foi crucial para a qualidade dos cortes histológicos e para a análise microscópica dos espécimes corados pela hematoxilina-eosina. A separação mecânica da capa leucocitária e a centrifugação do aspirado de medula óssea foram eficientes e de baixo custo no preparo das citoinclusões. Ressalta-se a importância na padronização da técnica de citoinclusão, em particular para amostras de capa leucocitária e medula óssea, visando à obtenção de espécimes de qualidade independentemente das limitações de equipamentos...

The cell block technique is widely used and recognized by health professionals, but lacks in information regarding the specific contribution of this method to veterinary medicine. The cytology of bone marrow and buffy coat (cellular portion of the hole blood) are widely used in the diagnosis of neoplastic and non-neoplastic diseases, and also for the detection of infectious agents. Although the importance of these samples is widely recognized, there is no information about the use of buffy coat and bone marrow samples in the cell block procedure among the research material used for this paper. This work aims for the cell block standardization for canine buffy coat and bone marrow samples. We collected 110 buffy coat samples and 44 bone marrow samples for the cell block preparation, and 68.2% of buffy coat and bone marrow proved to be viable at the end of the procedure. The 95% ethanol fixatives along with the 20 minute processing steps (absolute ethanol, xilol and paraffin, 3 of each) were crucial for the quality of the material both in microtomy and optical microscopy. Mechanical separation of the buffy coat proved to be easy and cheap and was used to compose the cell block technique. In this research we emphasized the importance of cell block standardization in order to develop and easy, inexpensive and reproducible method, regardless of any of the professionals' limitations...

Concentrados de plaquetas obtenidos a partir de sangre entera vs por aféresis / Platelet concentrates: random vs apheresis

En la actualidad disponemos de tres tipos de concentrados de plaquetas (CP): CP procesados por el método de plasma rico en plaquetas (CP-PRP) o por el método de capa leucocitaria "buffycoat" (CP-BC) a partir de unidades de sangre entera donadas al azar (CPR) y CP obtenido por aféresis (CP-aféresis). La calidad y caracerísticas de las plaquetas durante el almacenamiento se afectan por una serie de factores, tales como el anticoagulante, la centrifugación y procesamiento después de la colecta, y el agrupamiento antes o después del almacenamiento. Por último, el uso de cada uno de estos componentes ya sean originales, o leucorreducidos, o suspendidos en solución de almacenamiento, o procesados con una técnica de inactivacion de patógenos agrega nuevos factores de complejidad para compararlos. Aunque está claro que el CP-BC retiene mucho más funciones in vitro que el CP-PRP, lo que indica que no se debería utilizar más este último, es mucho más difícil encontrar diferencias con los CP-aféresis. Otro factor que puede afectar la decisión política es la aparición de reacciones adversas en los receptores. Si se consideran solamente los datos comparables, por ejemplo CPR leucorreducida en comparación con CP-aféresis leucorreducida, hay pruebas de que este último está más asociado con reacciones adversas en los receptores. Muy pocos estudios se han publicado comparando la eficacia clínica de los CPR frente a CP-aféresis, considerando como resultado final principalmente el incremento del recuento corregido de plaquetas (IRC). De manera similar a los estudios in vitro, aunque el CP-PRP muestra IRC más bajos, no existe una diferencia clara entre CP-BC y CP-aféresis. Otros aspectos que pueden afectar la decisión es el hecho de que el uso de CP-aféresis en lugar de CPR reduce la exposición total de los pacientes a los donantes, lo cual se considera crítico en algunos países para reducir el riesgo de transmisión de infecciones transmisibles por la sangre...

Comparison of cytokine levels and metabolic parameters of stored platelet concentrates of the Fundação Hemominas, Belo Horizonte, Brazil

BACKGROUND: Prolonged storage of platelets could improve availability and logistical management and decrease wastage. Immunobiochemical methods can be used to guarantee the quality of platelets after prolonged storage. OBJECTIVE: The aim of this study was to compare storage-related changes in buffy coat-derived platelet concentrations versus platelet-rich plasma. METHODS: Units of whole blood were drawn using a quadruple-bag blood container system. Platelet-rich plasma and buffy coat prepared from whole blood following standard methods were stored for 9 days. During this period test samples were aseptically collected for analysis on Days 1, 2, 3, 5, 7 and 9. RESULTS: The highest CD42b expression was greater than 95%. The percentage of CD62p was significantly lower than the CD42b expression. The pH remained fairly stable during storage. Measurement of pO2 and pCO2 showed that oxygen levels were significantly higher than carbon dioxide levels. There were no significant differences in bicarbonate levels, glucose consumption and lactate production between the groups. The swirling effect with platelet-rich plasma samples decreased after 5 days of storage and after 7 days of storage for buffy coat samples. There was a significant twenty-fold increase in the mean IL-1β after 5 days of storage for both groups. Slight increases in IL-6 and IL-8 levels were seen at 5 days. CONCLUSION: The quality of platelet concentrates remained acceptable during 7 days of storage in respect to the swirling effect, pH and platelet activation. There were no significant differences between buffy coat-derived platelets and platelet-rich plasma in this study.