Identification of new human mesenchymal stem cell biomarker by aptamers / Identificação de novos biomarcadores de células tronco mesenquimais de origem humana por meio de aptâmeros

Stem cells are undifferentiated cells that can be distinguished from others by their ability to self-renew and to differentiate into new specific cell types. Mesenchymal stem cells (MSC) are adult stem cells that can be obtained from different sources, such as adipose tissue, bone marrow, dental pulp, and umbilical cord. They can either replicate, originating new identical cells, or differentiate into cells of mesodermal origin and from other germ layers. MSC have been studied as new tools for regenerative therapy. Although encouraging results have been demonstrated, MSC-based therapies still face a great barrier: the difficulty of isolating these cells from heterogeneous environments. MSC are currently characterized by immunolabelling through a set of multiple surface membrane markers, including CD29, CD73, CD90 and CD105, which are also expressed by other cell types. Hence, the present work aimed to identify new specific biomarkers for the characterization of human MSC using DNA aptamers produced by the SELEX (Systematic Evolution of Ligands by EXponential Enrichment) technique. Our results showed that MSC from different origins bound to DNA candidate aptamers, that is, DNA or RNA oligonucleotides selected from random libraries that bind specifically to biological targets. Aptamer-bound MSC could be isolated by fluorescenceactivated cell sorting (FACS) procedures, enhancing the induction of differentiation into specific phenotypes (chondrocytes, osteocytes and adipocytes) when compared to the whole MSC population. Flow cytometry analyses revealed that candidate aptamers bound to 50% of the MSC population from dental pulp and did not present significant binding rates to human fibroblasts or lymphocytes, both used as negative control. Moreover, immunofluorescence images and confocal analyses revealed staining of MSC by aptamers localized in the surfacemembrane of these cells. The results also showed internal staining of human monocytes by our investigated aptamers. A non-specific control aptamer (CNTR APT) obtained from the random pool was then utilized to compare the specificity of the aptamers bound to the analyzed non-apoptotic cells, showing no staining for MSC. However, 40% of the monocytes bound to the CNTR APT. Normalized data based on the cells bound to candidate aptamers compared to those bound to the CNTR APT, revealed a 10 to 16-fold higher binding rate for MSC against 2-fold for monocytes. Despite its low specificity, monocyte-aptamer binding occurs probably due to the expression of shared markers with MSC, since monocytes are derived from hematopoietic stem cells and are important for the immune system ability to internalize/phagocyte external molecules. Given that, we performed a pull-down assay followed by mass spectrometry analysis to detect which MSC-specific protein or other target epitope not coexpressed by monocytes or the CNTR APT would bind to the candidate aptamer. Distinguishing between MSC and monocyte epitopes is important, as both cells are involved in immunomodulatory effects after MSC transplantations. ADAM17 was found to be a target of the APT10, emerging as a possible biomarker of MSC, since its involvement in the inhibition of the TGF signaling cascade, which is responsible for the differentiation of MSC. Thus, MSC with a higher stemness profile should overexpress the protein ADAM17, which presents a catalytic site with affinity to APT10. Another target of Apt 10 is VAMP3, belonging to a transmembrane protein complex that is involved in endocytosis and exocytosis processes during immune and inflammatory responses. Overall, proteins identified as targets of APT10 may be cell surface MSC biomarkers, with importance for MSC-based cell and immune therapies

Células tronco são células indiferenciadas que podem ser distinguidas de outros tipos celulares por meio da habilidade de se auto renovarem e de se diferenciarem em novos tipos celulares. Células tronco mesenquimais (MSC) são células tronco adultas encontradas em diferentes tecidos como tecido adiposo, polpa de dente e cordão umbilical. Estas células podem se autodividir em células idênticas ou se diferenciarem em células de origem mesodermal. Estas células têm sido estudadas em novas aplicações que envolvem terapia regenerativas. Embora resultados encorajadores tenham sido demonstrados, terapias que utilizam MSC ainda encontram uma grande barreira: a dificuldade no isolamento destas células a partir de um ambiente heterogêneo. MSC são caracterizadas por populações positivas em ensaios de imunomarcação para os epítopos membranares CD29, CD73, CD90 e CD105, presentes também em outros tipos celulares. Assim, o presente trabalho tem o objetivo de identificar novos biomarcadores de MSC de origem humana, utilizando aptâmeros de DNA produzidos pela técnica SELEX (Systematic Evolution of Ligands by EXponential Enrichment) como ferramenta. Nossos resultados mostraram que MSC de diferentes origens ligam-se a aptâmeros (oligonucleotídeos de DNA ou RNA que atuam como ligantes específicos de alvos moleculares) de DNA candidatos que atuam no isolamento de MSC por meio da técnica FACS de separação celular, promovendo uma maior indução de diferenciação em células específicas (condrócitos, osteócitos e adipócitos) comparada com a população total de MSC. Análises de citometria de fluxo mostraram que os aptâmeros candidatos se ligam a 50% das MSC de polpa de dente e não apresentam taxa de ligação significante para fibroblastos e linfócitos de origem humana - utilizados como controles negativo. Além domais, imagens de imunofluorescência e confocal mostraram ligação na superfície da membrana de MSC e a marcação interna de monócitos a estes aptâmeros. Portanto, um aptâmero controle (CNTR APT) foi utilizado para comparar a especificidade dos aptâmeros ligados a células viáveis, mostrando a não ligação deste aptâmero a MSC. Porém, 40% da população de monócitos ligou-se ao CNTR APT. Uma normalização baseada na comparação entre as taxas de ligação entre células ligadas com aptâmeros candidatos e o aptâmero controle gerou uma taxa de especificidade entre 10-16 vezes maior para MSC contra 2,5 vezes para os monócitos. Deste modo, embora os resultados tenham mostrado uma taxa de ligação entre monócitos e aptâmeros, as MSC ligadas aos aptâmeros candidatos possuem uma maior taxa de especificidade devido a uma maior presença de antígenos que são expressos em ambas as células. Um ensaio de Pull Down seguido de espectrometria de massas foi utilizado para a identificação de biomarcadores que se ligariam aos aptâmeros candidatos, e que não seriam co-expressos por monócitos e por antígenos ligados ao aptâmero controle. Deste modo, a proteína ADAM17 foi identificada nas amostras de APT10 ligadas às MSC. Tal proteína está relacionada à inibição de uma cascata de sinalização da família de proteínas TGF, responsável pela diferenciação de MSC. Assim, MSC com maior potencial tronco deveriam expressar ADAM17 em maior quantidade. Tal proteína apresenta um sítio catalítico que demonstra interagir com o APT10, de acordo com predição Docking entre proteína e DNA. Foi identificada também, a proteína VAMP3, que pertence a um complexo proteico transmembranar responsável pelos processos de endocitose e exocitose, e que podem ter um papel importante na liberação de citocinas e outras moléculas relacionadas às respostas imune e inflamatórias. Deste modo, o APT10 identificou proteínas importantes que devem estar relacionas com a melhora de imunoterapias que utilizam MSC

Teratoma quístico maduro de tiroides: a propósito de un caso / Mature cystic teratoma of thyroid: a purpose of a case

Los Teratomas son tumores que están compuestos de tejidos derivados de las tres capas germinales. La localización más común en los niños son las sacrococcígeas (40 por ciento), mientras que los ubicados en cabeza y cuello, solo representan el 3,5 por ciento. Desde el punto de vista clínico, los pacientes consultan por la presencia de una masa en el cuello. Los estudios incluyen radiografía simple, ultrasonido, scan de la glándula tiroides, medición de AFP y ß-HCG. La extirpación quirúrgica es el tratamiento de elección. El presente caso clínico trata de un lactante mayor masculino de 12 meses de edad, quien presenta desde el nacimiento, aumento de volumen en la cara antero-lateral izquierda del cuello. Se solicita ecograma cervical reportando: Tumoración ecomixta latero cervical izquierda y ganmagrama tiroideo evidenciándose: bocio multinodular. A los 7 meses de edad se aprecia un aumento mayor de la tumoración y se indica nuevo ecograma: Lóbulo tiroideo izquierdo de tamaño aumentado, con gran imagen nodular, ecomixta. Por lo que se indica Cintilograma tiroideo con I131: Glándula deformada, con una zona hipocaptante que se relaciona con nódulo tiroideo. Se realiza Tiroidectomía ezquierda total con istmectomía. Encontrando hallazgos compatibles con TERATOMA QUÍSTICO MADURO. Los Teratomas de tiroides son tumores muy raros. La mayor incidencia se aprecia en recién nacidos hasta los 2 años de edad. Los pacientes con diagnóstico de malignidad, son tratados con quimioterapia, radioterapia o ambos. Actualmente el niño tiene 10 meses de haber sido intervenido y se encuentra clínicamente estable y sin recidivas.

Influence of microclimate at different canopy heights on the germination of ficus (urostigma): seeds dispersed by mexican howler monkeys (alouatta palliata mexicana)

Diversos factores microclimáticos influyen en el éxito de la germinación de semillas de Ficus estranguladores (F.perforata y F.lundelli) consumidas por monos aulladores (Alouatta palliata mexicana) en el sureste de Veracruz, México. La germinación de semillas de estas especies fue comparada entre dos estratos arbóreos en dos diferentes sitios de estudio; perturbado (Playa Escondida; 40ha) y conservado (Reserva Carolino Anaya, Coatzacoalcos; 600ha). Los resultados muestran que la germinación varió con el estrato arbóreo donde fueron depositadas las semillas y con la calidad (grado de conservación) del habitat (conservado o perturbado), Bajo estas diferentes condiciones de habitat fueron evidentes las variaciones en humedad, intensidad de luz y temperatura de los árboles hospederos para los Ficus hemiepífitos, que podrían estar afectando el porcentaje de germinación. Se registró mayor germinación de ambas especies en los estratos superiores. La germinación fue significativamente mayor en el sitio conservado para las semillas que provenían de las heces contra aquellas no dispersadas de esta manera. Esto último es, probablemente, resultante de una mayor humedad relativa y bajos niveles de luz y temperatura que influyen positivamente en la germinación en el sitio conservado

Manifestações oculares em pacientes com alopécia areata / Ocular manifestations in patients with alopecia areata

Fizemos este estudo com o objetivo de confirmar as manifestações oftalmológicas citadas em outros trabalhos em pacientes com alopécia areata, uma dermatopatia caracterizada por queda dos cabelos, uma vez que os relatos existentes na literatura mostram-se ainda controversos...Concluímos que nossos achados diferem dos da literatura em relação às alterações pgmentares, filme lacrimal e função do epetélio da retina, sendo necessário novos estudos para confirmação desses achados.