Histology and structure of the testicles in three species of Atelopus frogs (Anura: Bufonidae) endemic to the Sierra Nevada de Santa Marta, Colombia / Histología y estructura de los testículos en tres especies de ranas Atelopus (Anura: Bufonidae) endémicas de la Sierra Nevada de Santa Marta, Colombia

Abstract Introduction: Testicular histology constitutes one of the least explored aspects in frogs of the genus Atelopus. This taxonomic group shows an alarming population decline; therefore, its reproductive biology is one of the greatest topics of interest for its conservation. Objective: To describe the testicular morphology and the spermatogenetic lineage cells in adult males of Atelopus laetissimus, Atelopus nahumae, and Atelopus carrikeri in the Sierra Nevada de Santa Marta, Colombia. Methods: During June - July 2017 and 2018, sampling was conducted in the localities of San Lorenzo and Páramo Cebolletas, Sierra Nevada de Santa Marta (SNSM), to collect 15 adult males, 5 per species. Testes samples were fixed in Bouin to be processed by the standard paraffin-embedding technique. Histological sections (3 μm) were stained with Hematoxylin-eosin and Mallory-Heidenhain-Azan-Gomori's. For the description and photographic register of the germ cells, the photonic microscopy technique was used with the differential interference contrast system. Results: The testes are oval organs, compact, light yellow color, and with little vascularization. Externally, they are surrounded by a thin albuginea tunic constituted by regular dense connective tissue. Inside this layer, they are composed of numerous seminiferous tubules of hexagonal contour, in which germ cell cysts are distinguished at different stages of spermatogenesis (spermatogonia I and II, spermatocyte I and II, and early and late spermatids) and spermiogenesis (spermatozoa in fascicles and free spermatozoa). Separating the seminiferous structures is the interstitial tissue in which Leydig cells and blood vessels stand out. Additionally, in the cranial part of the testis, the Bidder's organ was found, formed by two distinguishable regions, the cortex and the medulla. In the cortex, there are previtellogénic oocytes of different sizes surrounded by a monolayer of flat follicular cells. For its part, the medullary region is the connective tissue that nourishes the oocytes and is constituted by blood capillaries. Conclusions: The gonads of the three species analyzed present a cystic cellular organization similar to other anurans, where all stages of spermatogenesis and spermiogenesis were identified, possibly indicating a continuous reproductive activity. Likewise, the Bidder's organ is reported for the first time in the three Atelopus species, which allows suggesting a possible sexual reversion in case of a population decrease of females as a reproductive strategy.

Resumen Introducción: La histología testicular constituye uno de los aspectos menos explorados en las ranas del género Atelopus. Este grupo taxonómico ostenta un declive poblacional alarmarte, es por ello, que su biología reproductiva resulta uno de los temas de mayor interés para su conservación. Objetivo: Describir la morfología testicular y las células del linaje espermatogénico en machos adultos de Atelopus laetissimus, Atelopus nahumae y Atelopus carrikeri en la Sierra Nevada de Santa Marta, Colombia. Métodos: Durante Junio - Julio de 2017 y 2018 se realizaron muestreos en las localidades de San Lorenzo y Páramo Cebolletas, Sierra Nevada de Santa Marta (SNSM), para recolectar 15 machos adultos, 5 por especie. Las muestras de testículo se fijaron en Bouin para ser procesadas mediante la técnica estándar de inclusión en parafina. Las secciones histológicas (3 μm) se tiñeron con Hematoxilina-eosina y Mallory-Heidenhain-Azan-Gomori's. Para la descripción y registro fotográfico de las células germinales, se utilizó la técnica de microscopía fotónica con el sistema de contraste diferencial de interferencia. Resultados: Los testículos son órganos ovalados, compactos, de color amarillo claro y con poca vascularización. Externamente, están rodeados por una delgada túnica albugínea constituida por tejido conectivo denso regular. Al interior de esta capa se componen por numerosos túbulos seminíferos de contorno hexagonal, en los que se distinguen quistes de células germinativas en diferentes etapas de la espermatogénesis (espermatogonia I y II, espermatocito I y II y espermátidas tempranas y tardías) y espermiogénesis (espermatozoides en fascículos y espermatozoides libres). Separando las estructuras seminíferas se halla el tejido intersticial en el que se destacan las células de Leydig y los vasos sanguíneos. Adicionalmente, en la parte craneal del testículo se encontró el órgano de bidder formado por dos regiones diferenciables, la corteza y la medula. En la corteza se aprecian ovocitos previtelogénicos en diferente tamaño rodeados por una monocapa de células foliculares planas. Por su parte, la región medular es el tejido conectivo que nutre los ovocitos y está constituido por capilares sanguíneos. Conclusiones: Las gónadas de las tres especies analizadas presentan una organización celular quística de manera similar con otros anuros, donde se identificó todos los estadios de la espermatogénesis y espermiogénesis indicando posiblemente una actividad reproductiva continua. Así mismo, se reporta por primera vez el órgano de bidder en las tres especies de Atelopus, lo cual permite sugerir una posible reversión sexual en caso de una disminución poblacional de las hembras como una estrategia reproductiva.

Parásitos nematodos de la rana de piscina (Pelophylax lessonae) en la cuenca del Río Volga / Parasitic nematodes of Pool Frog (Pelophylax lessonae) in the Volga Basin

RESUMEN Objetivo. Presentar una revisión moderna de la fauna de nematodos de la rana esculenta Pelophylax lessonae (Camerano, 1882) de las poblaciones de la cuenca del Río Volga. Materiales y métodos. Este trabajo consolida los datos de diferentes trabajos helmintológicos de los últimos 80 años, respaldados por los resultados de nuestras propias investigaciones. Durante el período de 1936 a 2016 diferentes autores examinaron 1460 especímenes de rana esculenta, utilizando el método de autopsia helmintológica completa de 13 regiones de la cuenca del Río Volga. Resultados. En total se registraron 9 especies de nematodos. Nematodo Icosiella neglecta encontrado por primera vez en el huésped estudiado en el territorio de Rusia y la cuenca del Río Volga. Tres especies parecían estar más extendidas: Oswaldocruzia filiformis, Cosmocerca ornata e Icosiella neglecta. Para cada especie de helmintos se incluyó la siguiente información: posición sistemática, áreas de detección, localización, biología, lista de hospederos definitivos, nivel de especificidad del hospedero. Conclusiones. Los nematodos de la rana esculenta, excepto I. neglecta, pertenecen al grupo de helmintos transmitidos por el suelo (geohelmintos) y parasitan en estadios adultos. Algunas especies (O. filiformis, C. ornata, I. neglecta) están muy extendidas en el área de distribución del hospedador. Estos dos últimos son capaces de alcanzar altos índices de invasión y también de ser los parásitos subyacentes de la rana esculenta. Esto sucede debido a la especificidad del ciclo de vida de estas especies de nematodos y a la conexión a largo plazo del anfibio con el agua.

ABSTRACT Objetive. Present a modern review of the nematodes fauna of the pool frog Pelophylax lessonae (Camerano, 1882) from Volga basin populations on the basis of our own research and literature sources analysis. Materials and methods. Present work consolidates data from different helminthological works over the past 80 years, supported by our own research results. During the period from 1936 to 2016 different authors examined 1460 specimens of pool frog, using the method of full helminthological autopsy, from 13 regions of the Volga basin. Results. In total 9 nematodes species were recorded. Nematode Icosiella neglecta found for the first time in the studied host from the territory of Russia and Volga basin. Three species appeared to be more widespread: Oswaldocruzia filiformis, Cosmocerca ornata and Icosiella neglecta. For each helminth species the following information included: systematic position, areas of detection, localization, biology, list of definitive hosts, the level of host-specificity. Conclusions. Nematodes of pool frog, excluding I. neglecta, belong to the group of soil-transmitted helminthes (geohelminth) and parasitize in adult stages. Some species (O. filiformis, C. ornata, I. neglecta) are widespread in the host range. The latter two are able to reach high invasion indices and also to be the background parasites of the pool frog. It happens due to these nematode species life cycle specificity and the long-term connection of the amphibian with water.

Influence of the number of feeding environments on the performance of bullfrog tadpoles / Influência do número de ambientes de alimentação no desempenho de girinos de rã-touro

Feeding is one of the major factors that influences the growth and development of animals, justifying thus the present experiment that analyzed the effect of the number of feeding environments on the performance of bullfrog tadpoles through the growth (weight and length) and performance (food remains, average feed intake, average weight gain, and feed conversion). The treatments consisted of subunits of two, four, and eight feeding environments in the experimental units at disposal for the tadpole population, and one without subdivisions, comprising a single environment, during 60 experimental days. The design was completely randomized, with four treatments and three replications. The values were tested using an analysis of variance and Duncan test (α = 0.05). The growth in weight and length and the indices of animal performance were influenced by the number of feeding environments, with the best results found for the treatments with four and eight environments, and the worst, for the treatment with a single environment. The increased number of feeding environments may be an alternative to improve the performance of bullfrog tadpoles.

Alimentação íntegra a um conjunto de fatores que influenciam o crescimento e o desenvolvimento dos animais. Com isso, foi realizado o experimento com o objetivo de verificar pelo crescimento (peso e comprimento) e o desempenho (sobras diárias de ração, consumo médio de ração, ganho de peso médio e conversão alimentar) dos girinos de rã-touro a influência do número de ambientes de alimentação no desempenho de girinos de rã-touro. Os tratamentos foram subdivisões em dois, quatro e oito ambientes de alimentação das unidades experimentais em relação à população de girinos e um sem subdivisões com único ambiente, durante 60 dias experimentais. O delineamento foi inteiramente casualizado, com quatro tratamentos e três repetições. Os valores encontrados foram submetidos à análise de variância e ao teste de Duncan (α = 0,05). O crescimento em peso e comprimento e os índices de desempenho zootécnicos foram influenciados pelo número de ambientes de alimentação, sendo que os melhores resultados foram para os tratamentos com quatro e oito ambientes e o piores para com único ambiente. O aumento do número de ambientes de alimentação pode ser uma alternativa para melhorar o desempenho dos girinos de rã-touro.

Liver histopathological changes in breeding bullfrogs / Alterações histopatológicas do fígado de reprodutores de rã-touro

In order to complement the histopathological study of juveniles and tadpoles of the bullfrog, Lithobathes catesbeianus, fed commercial diet used by frog farms in Rio de Janeiro, containing 40% crude protein, we performed necropsy and histopathology of the liver to establish a relationship between the quality of crude protein in the diet and animal health. For this, it was used twenty breeding male bullfrogs, with average weight 591.30 g (± 91.90 g) and length 165.02 mm (± 14.22 mm), and ten females with average weight and length of 629.80 g (± 134.47 g) and 169.32 mm (± 21.82 mm). The liver histopathology showed hyperemia, high number of elanomacrophages and cytoplasmic rarefaction, probably due to protein deficiency and fatty liver degeneration and presence of inflammatory processes. These lesions indicate a degenerative nutritional process. These findings suggest that the animals were fed with proteins of low biological value, indicating poor quality of feed, undermining the sanity. The impairment of liver function by these injuries will lead to reduced availability of precursors of sex hormones, since the liver is important in the metabolism of the same, and reproductive performance of these animals may be impaired.

Em complementação ao estudo histopatológico de girinos e imagos da rã-touro, Lithobates catesbeianus, alimentados com ração comercial utilizada pelos ranários do Rio de Janeiro, contendo 40% de proteína bruta, realizou-se necropsia e histopatologia do fígado de reprodutores, procurando uma relação entre a qualidade de proteína bruta na ração e a sanidade do animal. Foram utilizados 20 reprodutores de rã-touro, dez machos com peso de 591,30 g (± 91,90 g) e comprimento médios de 165,02 mm (± 14,22 mm), e dez fêmeas com peso e comprimento médios de 629,80 g (± 134,47 g) e 169,32 mm (± 21,82 mm). Os resultados da histopatologia mostraram que o fígado dos reprodutores, tanto machos quanto fêmeas apresentavam hiperemia, grande número de melanomacrófagos e rarefação citoplasmática provavelmente por deficiência proteica e quadro de degeneração hepática gordurosa. Tais lesões indicam quadro degenerativo nutricional. Também presente processos inflamatórios focais. Estes achados sugerem uma alimentação com proteínas de baixo valor biológico, indicando má qualidade da ração, comprometendo sua sanidade. Pode-se inferir que o comprometimento das funções hepáticas, irá diminuir a disponibilidade de precursores dos hormônios sexuais, pois o fígado é importante na metabolização dos mesmos, e a performance reprodutiva destes animais poderá ser prejudicada.

Evaluation of the semen characteristics after induced spermiation in the bullfrog Lithobates catesbeianus / Características e avaliação do sêmen de rã-touro Lithobates catesbeianus induzidos à espermiação

Evaluation of semen characteristics after hormonal induction of the bullfrog could provide valuable information on the gametes of this species, which may be useful for projects related to artificial fertilization, animal improvement, and cryopreservation. Bullfrog males were induced to spermiate with buserelin acetate (GnRHa), and their semen was subsequently analyzed. GnRHa (0.4 µg) was administered to the bullfrog males with secondary sexual characteristics such as weight > 200 g, yellow chin, nuptial callus, and amplexus reflex, being the semen collected after 60 min. The semen volume was 5.76 mL, light-colored. The other characteristics of the semen were: vigor of 4.80, motility of 93%, concentration of 14.24 × 106 mL-1, and content of normal spermatozoa of 70%. The volume, color, vigor, motility, sperm concentration, and content of normal spermatozoa were adequate in these bullfrog semen samples. Evaluation of the bullfrog semen samples based on this set of parameters is essential for decision-making about the quality and destination of the semen.

Avaliação de que as características do sêmen, após a indução hormonal da rã-touro, pode fornecer informações valiosas sobre os gametas desta espécie, podendo ser útil para projetos relacionados à fertilização artificial, melhoramento animal, e criopreservação. Machos de rã-touro foram induzidos à espermiação com acetato de buserelina (GnRHa) e o sêmen foi posteriormente analisado. GnRHa (0,4 mg) foi administrado à rã- touro do sexo masculino com características sexuais secundárias, tais como peso superior a 200 g, papo amarelo, calo nupcial, e reflexo amplexo, e seu sêmen foi coletado após 60 min. O sêmen da rã-touro apresentou volume de 5,76 mL, coloração turva, vigor espermático de 4,80; motilidade espermática de 93%, concentração de 14,24 x 106 SPTZ mL-1 e 70% de espermatozoides normais. O volume, cor, vigor, motilidade, concentração espermática e o número de espermatozoides normais das amostras do sêmen de rã-touro são adequados. O conjunto dos parâmetros para avaliação das amostras de sêmen de rã-touro é indispensável para a tomada de decisão sobre a qualidade e destino do mesmo.

Buserelin acetate-induced spermiation in Leptodactylus ocellatus and evaluation of semen characteristics / Espermiação com acetato de buserelina em Leptodactylus ocellatus e avaliação de características seminais

By understanding the hormonal action behind the induction of spermiation in Leptodactylus ocellatus can help in the collection of semen for artificial insemination and cryopreservation. The experiments were conducted at the Experimental Frog Farm of the Federal University of Viçosa. Seven L. ocellatus males with the following secondary sexual characteristics were selected: black thorns, developed forelimbs, and amplexus reflex. Spermiation was induced in these animals by applying daily 0.4 µg buserelin acetate hormone (GnRHa) for 7 days, being the semen collected 90 min after the application. The volume, color, vigor, motility, sperm concentration, and spermatozoa morphology were subsequently evaluated. Three animals responded to GnRHa induction, enabling the collection of seven samples of semen, and the first sample was collected 97.5h after the first application. The semen of the creole frog presented the following characteristics: an average volume of 0.38 mL, murky color, sperm vigor of 3.71, sperm motility of 77.14%, sperm concentration of 6.60 x 106 SPTZ mL-1, and 69% of normal sperm. GnRHa can induce spermiation in the creole frog. Although the volume of collected semen was low, the color, vigor, motility, concentration, and spermatozoa content showed to be adequate.

O conhecimento da ação de hormônios na indução à espermiação de Leptodactylus ocellatus pode permitir a coleta de sêmen para estudos de fertilização artificial e criopreservação. O experimento foi realizado no Ranário Experimental da Universidade Federal de Viçosa, onde sete machos de L. ocellatus com as características sexuais secundárias: acúleos negros, membros anteriores desenvolvidos e reflexos ao amplexo foram induzidos à espermiação com aplicação do hormônio acetato de buserelina (GnRHa) na dosagem de 0,4 µg, durante sete dias a cada 24h e o sêmen coletado após 90 min. O volume, cor do sêmen, vigor espermático, motilidade espermática, concentração espermática e morfologia dos espermatozoides foram avaliados. Três animais responderam à indução pelo acetato de buserelina permitindo a coleta de sete amostras de sêmen, a primeira após 97,5h da primeira aplicação. O sêmen da rã-manteiga apresentou volume médio de 0,38 mL, coloração turva, vigor espermático de 3,71; motilidade espermática de 77,14%, concentração de 6,60 x 106 SPTZ mL-1 e 69% de espermatozoides normais. O acetato de buserelina pode induzir à espermiação da rã-manteiga. O volume seminal coletado foi baixo, mas a coloração, vigor, motilidade, concentração e número de espermatozoides de L. ocellatus foram adequados.

Phenotypic and molecular variation in the green and black poison-dart frog Dendrobates auratus (Anura: Dendrobatidae) from Costa Rica / Variación fenotípica y molecular en la rana dardo venenoso verde y negra Dendrobates auratus (Anura: Dendrobatidae) de Costa Rica

The green and black poison-dart frog Dendrobates auratus exhibits high intraspecific variation in hue color and pattern throughout its range, making it a very popular species in the pet trade. We analyzed the correspondence between color variation and molecular variation of D. auratus from Costa Rica using RAPD analysis. Twenty-six random primers were analyzed for variation in 99 individuals from seven populations. Color pattern was scored from digital images of the dorsal and ventral views. In general, frogs from the Caribbean coast had significantly more light coloration than black color but cannot be grouped by population based only on hue pattern. Only 3 RAPD primers were found to be polymorphic, representing a total of 16 loci. Most of the molecular variation encountered here occurs within populations, thus making unclear the degree of population structure and differentiation. Further examination of COI mtDNA sequences from our samples also supports these results. Partial Mantel correlations suggested that the pattern of molecular variation is not congruent with the variation in color pattern in this species, an outcome that is discussed in terms of phenotypic evolution. Rev. Biol. Trop. 57 (Suppl. 1): 313-321. Epub 2009 November 30.

La rana venenosa Dendrobates auratus posee una gran variación intraespecífica en tonos y patrones de coloración a lo largo de toda su distribución, lo que la hace una especie muy reconocible entre las especies de dendrobátidos. Analizamos la correspondencia entre variación de coloración y variación molecular de D. auratus de Costa Rica empleando análisis de RAPDs. La variación resultante en veintiséis "primers" aleatorios fue analizada en 93 individuos de siete localidades en Costa Rica. El patrón de coloración fue evaluado de imágenes digitales del dorso y vientre para los mismos individuos. En general, las ranas provenientes de localidades en la costa Caribe tienen significativamente una coloración más clara, con menos proporción de color negro que las de localidades en la vertiente Pacífica, pero no pueden ser agrupadas por localidad basadas simplemente en el patrón de coloración. Solamente tres RAPD "primers" fueron encontrados polimórficos, representando un total de 16 loci. Mucha de la variación molecular encontrada habita dentro de poblaciones, lo que hace difícil determinar el grado de estructura poblacional y diferenciación. La reexaminación posterior de secuencias del gen mitocondrial CO1 también apoya estos resultados. Correlaciones parciales de matrices (test de Mantel) sugieren que el patrón de variación molecular no es congruente con la variación en el patrón de coloración en esta especie, un resultado que es discutido en términos de evolución fenotípica.

Caracterizaçäo microbiológica e clínica de surtos de ®red leg¼ em Minas Gerais e avaliaçäo do efeito bactericida in vitro do VANTOCIL IB para Aeromonas hydrophila / Microbiological and clinical characterization of ®red leg¼ outbreaks in Minas Gerais, Brazil, and evaluation of in vitro bacterial effects of VANTOCIL IB for Aeromonas hydrophila

Com o objetivo da caracterizaçäo da ocorrência de ®red leg¼ em Minas Gerais, avaliaram-se räs jovens e adultas que apresentavam úlceras nas patas e dedos, derrame hemorrágico na pele da regiäo ventral, incoordenaçäo motora, altas taxas de mortalidade em adultos e abscessos hepáticos à necropsia. No cultivo de fragmentos de pele lesada e abscessos, foi isolado e identificado Aeromonas hydrophila. O efeito bactericida do VANTOCIL IB foi superior ao permanganato de potássio, determinado pela concentraçäo inibitória mínima para colônias isoladas.

Peróxido de hidrógeno en el humor acuoso: 1992-1997 / Hydrogen peroxide in the aqueous humor: 1992-1997

Ideas prevailing in 1991 on hydrogen peroxide in the aqueous humor are outlined. They are critically examined under the light of our finding that the method used to establish aqueous humor levels of peroxide generates itself peroxide during the short time span of the analysis. This is due to the fact that the probe used, dichlorophenol indophenol (DCPIP), spontaneously auto-oxidizes in the presence of oxygen. It was concluded then that the level of hydrogen peroxide in the aqueous humor cannot be higher than about 0.3 microM, the detection limit of the DCPIP method. It was also concluded that the statement commonly made in the literature that aqueous humor hydrogen peroxide derives from the oxidation of ascorbate, an abundant component of that fluid, is based solely on the use of the DCPIP method, and so could easily be due to a methodological artifact. The same applies to the statement that the levels of hydrogen peroxide are very high in human senile cataracts. The surprising resistance to accept the results and conclusions of our 1992 publication is documented. Finally, the content is discussed of an oral presentation made at the 1997 ARVO Annual Meeting in which an important portion of our results and conclusions was confirmed, perhaps signaling a shift towards a wider acceptance of our findings.

Alteraciones de la nefrogénesis y vasculogénesis renal en anfibios tratados con inhibidores de la enzima convertidora de la Angiotensina 1 / Alterations of the renal nephrogenesis and vasculogenesis in amphibia treat with of the Angiotensin 1 converting enzyme inhibitors

El sistema renina-angiotensina (SRA) parece influir en el desarrollo renal fundamentalmente en su vasculogenésis. Recientes trabajos indican que el SRA es estimulado durante la organogenésis renal y el crecimiento renal neonatal, las células del SRA son activadas y/o redistribuidas en muchas situaciones que evidencian crecimiento renal. Con el objeto de evaluar este efecto veinte ejemplares de Rana Catesbeiana en período de prometamofosis, cuyo peso medio fue de 4,8 + - 0,1g fueron criados en bateas plásticas con agua libre de cloro a una temperatura que osciló entre 22 y 25 grados C con un fotoperíodo de 12 horas día 12 horas noches. A diez de estos animales se los mantuvo en condiciones similares pero al agua se le agregó 20 mg/litro de enalapril (ENAL). Dos semanas después del período denominado climax metamórfico los animales se pesaron y se sacrificaron por decapitación. Se realizaron estudios morfométricos e inmunohistoquímicos

Modulación de las corrientes de potasio en células cardiacas por el antiarritmico etacizin (dietilamino etmozin) / Modulation of potasium currents in cardiac cells due to the antirrhythmic agent etacizin (diethylamine etmozin)

Se estudiaron los efectos del etacizin (dietilamino etmozin), un nuevo antiarritmico clase I, sobre el potencial de acción y las corrientes de K en fibras auriculares de rana. De forma general, a las 3 concentraciones utilizadas (1, 2 y 5 *g/mL) la droga acortó la duración del potencial de acción, auque en algunos casos pudo registrarse un alargamiento. La corriente de fondo independiente del tiempo, ik1 se redujo en todo el rango de potenciales de membrana estudiado por la acción de la droga, auque mostró un mayor porcentaje de inhibición a potenciales positivos. Por su parte, la corriente de rectificación retardada ix fue reducida por la droga y su grado de activación (Xoo) se desplazó hacia potenciales más positivos, lo cual puede explicar la reducción en la corriente. Los resultados explican, en parte, los cambios observados en el potencial de acción, teníendo en cuenta la conocida reducción en la corriente de Ca por el etacizin. Se discuten las potencialidades antiarritmicas y proarritmicas de la droga