RESUMO
The study reveals the prevalence of a potential rodent-borne zoonotic helminth species, Hymenolepis diminuta in commensal rodents caught from irrigated and rain-fed areas of Swat, Pakistan. Three hundred and fifty rodents (269 rats and 81 mice) trapped during vegetative, flowering/fruiting and mature/harvesting stages of crops were studied from 2011-2013. Hymenolepisdiminuta eggs were identified on the basis of their shape, size, colour and markings on the surface of the egg shell and three pairs of embryonic hook-lets. Overall prevalence of H. diminuta was 3.14% (n=11/350). The highest prevalence 3.49% (n=5/143) of H. diminuta was noted at harvesting stages of the crops whereas the lowest 2.59% (n=2/77) during vegetative stage. Infection was higher in males 3.25% (n=7/215) than females 2.96% (n=4/135). Adult rodents were highly infected while no sub-adult was found infected. Infection was higher in mice 3.70% (3/81) than rats 2.69% (8/269) while no significance (p=1.0000:0.1250 to 32.00 CI). Rats and mice appears to show the most suitable reservoirs by hosting H. diminuta a zoonotic helminth. The presence of these rodents in all possible habitats can act as a main channel of transferring parasites through various habitats and can pose a hazard to humans in the area.
O estudo revela a prevalência de uma espécie potencial de helmintos zoonóticos transmitidos por roedores, Hymenolepis diminuta, em roedores comensais capturados em áreas irrigadas e alimentadas pela chuva de Swat, Paquistão. Trezentos e cinquenta roedores (269 ratos e 81 camundongos) presos durante os estágios vegetativo, floração/frutificação e maturidade/colheita das safras foram estudados de 2011-2013. Ovos de Hymenolepis diminuta foram identificados com base em sua forma, tamanho, cor e marcações na superfície da casca do ovo e três pares de anzóis embrionários. A prevalência geral de H. diminuta foi de 3,14% (n = 11/350). A maior prevalência 3,49% (n = 5/143) de H. diminuta foi observada na fase de colheita das lavouras, enquanto a menor 2,59% (n = 2/77) durante a fase vegetativa. A infecção foi maior nos homens 3,25% (n = 7/215) do que nas mulheres 2,96% (n = 4/135). Roedores adultos foram altamente infectados, enquanto nenhum subadulto foi encontrado infectado. A infecção foi maior em camundongos 3,70% (3/81) do que em ratos 2,69% (8/269), embora sem significância (p = 1,0000: 0,1250 a 32,00 CI). Ratos e camundongos parecem mostrar os reservatórios mais adequados hospedando H. diminuta um helmintos zoonótico. A presença desses roedores em todos os habitats possíveis pode atuar como um canal principal de transferência de parasitas através de vários habitats e pode representar um perigo para os humanos na área.
Assuntos
Animais , Feminino , Coelhos , Ratos , Doenças dos Roedores/epidemiologia , Hymenolepis diminuta , Helmintíase Animal , Helmintos , MuridaeRESUMO
The study reveals the prevalence of a potential rodent-borne zoonotic helminth species, Hymenolepis diminuta in commensal rodents caught from irrigated and rain-fed areas of Swat, Pakistan. Three hundred and fifty rodents (269 rats and 81 mice) trapped during vegetative, flowering/fruiting and mature/harvesting stages of crops were studied from 2011-2013. Hymenolepisdiminuta eggs were identified on the basis of their shape, size, colour and markings on the surface of the egg shell and three pairs of embryonic hook-lets. Overall prevalence of H. diminuta was 3.14% (n=11/350). The highest prevalence 3.49% (n=5/143) of H. diminuta was noted at harvesting stages of the crops whereas the lowest 2.59% (n=2/77) during vegetative stage. Infection was higher in males 3.25% (n=7/215) than females 2.96% (n=4/135). Adult rodents were highly infected while no sub-adult was found infected. Infection was higher in mice 3.70% (3/81) than rats 2.69% (8/269) while no significance (p=1.0000:0.1250 to 32.00 CI). Rats and mice appears to show the most suitable reservoirs by hosting H. diminuta a zoonotic helminth. The presence of these rodents in all possible habitats can act as a main channel of transferring parasites through various habitats and can pose a hazard to humans in the area.
O estudo revela a prevalência de uma espécie potencial de helmintos zoonóticos transmitidos por roedores, Hymenolepis diminuta, em roedores comensais capturados em áreas irrigadas e alimentadas pela chuva de Swat, Paquistão. Trezentos e cinquenta roedores (269 ratos e 81 camundongos) presos durante os estágios vegetativo, floração/frutificação e maturidade/colheita das safras foram estudados de 2011-2013. Ovos de Hymenolepisdiminuta foram identificados com base em sua forma, tamanho, cor e marcações na superfície da casca do ovo e três pares de anzóis embrionários. A prevalência geral de H. diminuta foi de 3,14% (n = 11/350). A maior prevalência 3,49% (n = 5/143) de H. diminuta foi observada na fase de colheita das lavouras, enquanto a menor 2,59% (n = 2/77) durante a fase vegetativa. A infecção foi maior nos homens 3,25% (n = 7/215) do que nas mulheres 2,96% (n = 4/135). Roedores adultos foram altamente infectados, enquanto nenhum subadulto foi encontrado infectado. A infecção foi maior em camundongos 3,70% (3/81) do que em ratos 2,69% (8/269), embora sem significância (p = 1,0000: 0,1250 a 32,00 CI). Ratos e camundongos parecem mostrar os reservatórios mais adequados hospedando H. diminuta um helmintos zoonótico. A presença desses roedores em todos os habitats possíveis pode atuar como um canal principal de transferência de parasitas através de vários habitats e pode representar um perigo para os humanos na área.
Assuntos
Masculino , Feminino , Animais , Himenolepíase/diagnóstico , Himenolepíase/veterinária , Muridae/parasitologiaRESUMO
Diversos estudos epidemiológicos já correlacionaram a infecção pelo DENV-3 a quadros graves, tanto em infecções primárias quanto secundárias e, no Brasil, este sorotipo apresenta maior associação a sinais e sintomas mais graves, incluindo choque, dor abdominal e exantema, em comparação aos demais sorotipos. O estabelecimento de modelos animais para estudos das infecções pelos DENV é de grande relevância para a pesquisa sobre patogênese, imunidade, desenvolvimento e teste de fármacos e candidatas a vacinas. Porém, para tal, são inúmeros os desafios, uma vez que os vírus epidêmicos circulantes não infectam naturalmente espécies não-humanas. Diante deste cenário, este estudo teve como objetivo principal verificar através de análises de hemograma, bioquímicas, morfológicas e moleculares possíveis alterações histopatológicas e fisiopatológicas, assim como a presença do genoma do DENV em diferentes órgãos, soro, saliva e urina de camundongos BALB/c infectados experimentalmente com o DENV-3 epidêmico e não neuroadaptado
Camundongos BALB/c machos, de 2 meses de idade foram infectados com DENV-3 pela via intravenosa e eutanasiados em 72 h.p.i, 7 e 14 d.p.i, de acordo com as análises a serem realizadas. Análises histopatológicas, ultraestruturais e histomorfométricas a partir de amostras de todos os órgãos estudados revelaram alterações semelhantes às observadas em casos humanos de DEN. Partículas semelhantes aos DENV foram detectadas em célula intersticial renal. Discretas alterações bioquímicas, como a elevação do nível de creatinina e ureia e diminuição do nível de colesterol total foram observadas nos camundongos infectados, ao longo da cinética experimental. Em relação às alterações no hemograma, foi observado aumento do hematócrito e diminuição da contagem de plaquetas nos camundongos infectados. Apesar de ter sido observada baixa viremia em camundongos 72 h.p.i, o genoma viral foi detectado em todos os órgãos testados, além da saliva. Estes resultados demonstram a suscetibilidade do camundongo BALB/c à infecção pelo DENV-3. (AU)
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Animais , Tropismo , Modelos Animais , Vírus da Dengue , MuridaeRESUMO
En el laboratorio de la Dra Pasqualini, por serendipitismo surgió un modelo de cáncer de mama murino que se caracteriza por el hecho de que es uno de los pocos modelos de ratón en los cuales los carcinomas mamarios inducidos modelan al tipo de tumor más frecuente de la mujer: el carcinoma mamario luminal que expresa receptores hormonales y es modulable por terapia endócrina. Luego ya en el IBYME demostramos que en este modelo los receptores de estrógeno interaccionan con los de progesterona en los promotores de genes blanco y que la proporción de isoformas de receptor de progesterona es fundamental para predecir la respuesta a antiprogestágenos. Hemos validado estas observaciones en modelos de xenotransplantes de líneas celulares de cáncer de mama humano creciendo en ratones inmunosuprimidos y posteriormente, utilizando muestras de pacientes de cáncer de mama humano, hemos demostrado que sólo aquellas con mayor expresión de isofoma A que de isofoma B, responden ex vivo al tratamiento con antiprogestágenos. Proponemos que estas pacientes serían candidatas a tratamientos combinados de antiestrógenos y antiprogestágenos. Estudios de tumores de pacientes creciendo en ratones inmunosuprimidos ayudarán a discernir cuáles tumores responden mejor a una u otra terapia endocrina
By serendipity, at Dr. Christiane Dosne Pasqualini´s Laboratory,, we have developed one of the few mouse experimental models of breast cancer in which induced-tumors share many features of human luminal breast cancer: ductal histology, hormone receptor expression and hormone responsiveness. After moving to IBYME, we were able to demonstrate that estrogen receptors interact with progesterone receptors at the promoter of key target genes and that the ratio of progesterone receptor isoforms A and B is essential to predict antiprogestin responsiveness. After validating this data in human breast cancer cell xenografts, modified to express different PR isoform ratios, we designed a study aimed to evaluate the response of human breast cancers to antiprogestins ex-vivo and correlate this data with the PR isoform ratio. Only those samples with higher levels of isoform A than isoform B were inhibited by antiprogestins. We propose that selected breast cancer patients, those with higher levels of isoform A than isoform B, might be candidates for adjuvant treatment with antiprogestins in combination with standard endocrine therapy. Future experiments generating patient derived xenografts will help to understand and better select patients for personalized endocrine treatments.
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Humanos , Terapêutica , Transplante Heterólogo , Neoplasias da Mama/imunologia , Receptores de Progesterona , Receptores de Estrogênio , Imunossupressores , Muridae , Camundongos/imunologiaRESUMO
Anisaquidose é uma doença provocada por parasitos da família Anisakidae e se caracteriza por manifestações gastrointestinais e alérgicas. O Anisakis simplex é o parasito mais patogênico ao homem e altamente alergênico. Porém, outros anisaquídeos também são danosos aos humanos, mas é desconhecida a imunogenicidade dessas larvas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial imunogênico do parasito Hysterothylacium deardorffoverestreetorum (HD) em modelo murino. Camundongos da linhagem BALB/c foram divididos em três grupos experimentais e receberam as preparações antigênicas obtidas de larvas de HD: extrato bruto de larvas (EBH), extrato secretado/ excretado de larvas (ESH) e extrato bruto de larvas após excreção/secreção (EEH). Amostras séricas foram obtidas em diferentes dias após imunização para determinação dos níveis de anticorpos específicos pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados demonstram aumento na produção de imunoglobulina (Ig) G após a segunda imunização, com aumento progressivo após a terceira imunização. Já em relação à IgE, a reatividade foi mais tardia, demonstrando aumento progressivo após a terceira imunização. Foi avaliada a imunidade celular por meio da intradermorreação, como resultado estatisticamente significativo em relação ao controle utilizado. Este experimento é a primeira descrição da potencialidade patogênica desse parasito em mamíferos e representa um avanço no diagnóstico da anisaquidose humana.(AU)
Anisaquidosis is a disease caused by parasites of Anisakidae family and is characterized by gastrointestinal and allergic reactions. The Anisakis simplex is a more pathogenic Anisakidae to humans and is highly allergenic. However, other species of this family also have characteristics that are harmful to humans, but little is known about the immunogenicity this parasites. The objective of this study was to experimentally assess the immunogenic potential of the parasite Hysterothylacium deardorffoverestreetorum (H.D) in mice. Mice of inbred BALB/c strain were divided into three groups and received three immunizations of the following antigenic preparations obtained from L3 larvae H.D: Crude larval extract of H.D (CEH) Extract secreted / excreted larvae H.D. (ESH) and crude extract of larvae after excretion / secretion (EEH). Serum samples were obtained on different days after immunization to determine the levels of circulating specific antibodies by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results show increased production of immunoglobulin (Ig) G after the second immunization with a gradual increase after the third immunization. Regarding IgE reactivity, this occurred later, demonstrating a progressive increase only after the third immunization. Cellular immunity was evaluated by intradermal, and showed statistically significant result compared to the control used. This experiment is the first description of the pathogenic potential of this parasite in mammals and represents a breakthrough in the diagnosis of human Anisakidosis.(AU)
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Animais , Anisaquíase/imunologia , Ascaridoidea/imunologia , Fenômenos Imunogenéticos , Muridae , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/veterináriaRESUMO
El principal síntoma de la esquizofrenia es la psicosis, caracterizada principalmente por la aparición de alucinaciones y delusiones. En esta investigación, se llevó a cabo el fraccionamiento biodirigido de extractos etanólicos (EE) de 4 plantas (6078, 6518, 7158 y 6521) usadas en la medicina tradicional Peruana para el tratamiento de psicosis. Los extractos y fracciones fueron probados en el modelo animal murino de hiperactividad inducida por Dizocilpina o MK-801(antagonista del receptor de glutamato tipo N-metil D-aspartato). Se utilizó la prueba de campo abierto (OFT) para medir la hiperactividad y la prueba de inhibición del sobresalto por prepulso (PPI) para medir la respuesta de sobresalto. En la prueba de campo abierto, la fracción apolar A del EE 7158 (p<0.05), la fracción D del EE 6078 (p <0.001) y la fracción A (p<0.05) y D (p<0.001) del EE 6518 (p<0.001) suprimieron los efectos del MK-801. En la prueba de PPI fueron activas las fracciones A, C y D (7158); A, B y C (6078); y todas las fracciones del extracto 6518. Adicionalmente, los ensayos de unión a radioligando y ensayos funcionales indican que los cuatro EEs tienen un efecto sobre receptores involucrados en esquizofrenia.
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Animais , Camundongos , Plantas Medicinais , Transtornos Psicóticos , Medicina Tradicional , Peru , Esquizofrenia , MuridaeRESUMO
BACKGROUND: Salmonella pathogenicity island (SPI)-13 is conserved in many serovars of S. enterica, including S. Enteritidis, S. Typhimurium and S. Gallinarum. However, it is absent in typhoid serovars such as S. Typhi and Paratyphi A, which carry SPI-8 at the same genomic location. Because the interaction with macrophages is a critical step in Salmonella pathogenicity, in this study we investigated the role played by SPI-13 and SPI-8 in the interaction of S. Enteritidis and S. Typhi with cultured murine (RAW264.7) and human (THP-1) macrophages. RESULTS: Our results showed that SPI-13 was required for internalization of S. Enteritidis in murine but not human macrophages. On the other hand, SPI-8 was not required for the interaction of S. Typhi with human or murine macrophages. Of note, the presence of an intact copy of SPI-13 in a S. Typhi mutant carrying a deletion of SPI-8 did not improve its ability to be internalized by, or survive in human or murine macrophages. CONCLUSIONS: Altogether, our results point out to different roles for SPI-13 and SPI-8 during Salmonella infection. While SPI-13 contributes to the interaction of S. Enteritidis with murine macrophages, SPI-8 is not required in the interaction of S. Typhi with murine or human macrophages. We hypothesized that typhoid serovars have lost SPI-13 and maintained SPI-8 to improve their fitness during another phase of human infection.
Assuntos
Humanos , Animais , Camundongos , Salmonella enteritidis/genética , Infecções por Salmonella/microbiologia , Salmonella typhi/genética , Ilhas Genômicas/fisiologia , Macrófagos/microbiologia , Especificidade da Espécie , Sobrevivência Celular , Células Cultivadas , Reação em Cadeia da Polimerase , Análise de Variância , Genoma Bacteriano , Fenômenos Fisiológicos Bacterianos , Ilhas Genômicas/genética , Interações Microbianas/genética , Sorogrupo , Células RAW 264.7 , MuridaeRESUMO
The Mongolian gerbil, belonging to the Muridae family, is characterized as an economic asset in the pet market due to its easy management. Current research analyzes and describes the origin of the nerves that make up the lumbosacral plexus in the species, foregrounding comparative anatomy, especially among wild rodents. The experiment, approved by the Committee of Institutional Bioethics, involved 15 animals which had been used in other studies and were donated to the Laboratory of Applied Animal Morphophysiology of the Federal Rural University of the Semi-Arid, Mossoró, Rio Grande do Norte, Brazil. The animals were fixed in a water solution of formaldehyde 10%. After 72 hours, they were dissected, the abdominal cavity was opened and eviscerated, and the psoas minor, psoas major and the quadratus lumborum muscles were removed to inspect the nerves that form the lumbosacral plexus. Results were given in percentages and grouped in tables. The lumbosacral plexus of the Mongolian gerbil frequently derived from the ventral roots of the last thorax nerves, from the seven lumbar nerves and from the four sacral nerves (Type II T12-S4). The nerves of the gerbil´s lumbosacral plexus are the iliohypogastricus, ilioinguinalis, cutaneus femoris lateralis, genitofemoralis, femoralis, obturatorius, ischiadicus, gluteus cranialis, pudendus, gluteus caudalis and rectales caudales nerves. Information on the origin of the nerves of the gerbil´s lumbosacral plexus and their description is relevant for clinical and surgical studies, and for the application of techniques or anesthetic drugs.
O esquilo da Mongólia é um roedor pertencente à família Muridae, caracterizado por seu interesse econômico no mercado pet e por ser de fácil manejo. Esta pesquisa analisa e descreve a origem dos nervos que formam o plexo lombossacral da espécie. No experimento foram utilizados 15 animais, provenientes de outros estudos aprovados pelo Comitê de Bioética Institucional, que foram doados ao Laboratório de Morfofisiologia Animal Aplicada da Universidade Federal Rural do Semi-Árido, Mossoró, Rio Grande do Norte. Os animais foram fixados em solução aquosa de formaldeído a 10%. Após 72 horas, os animais foram dissecados, realizando-se a abertura da cavidade abdominal, depois, eviscerados e em seguida, os músculos psoas maior, psoas menor e quadrado lombar foram removidos para visualização dos nervos que formam o plexo lombossacral. Os resultados foram expressos em percentagens e agrupados em tabelas. O plexo lombossacral do gerbil originou-se mais frequentemente das raízes ventrais do último nervo torácico, dos sete nervos lombares e dos quatro nervos sacrais (Tipo II T12-S4). Os nervos que formaram o plexo lombossacral do gerbil foram: ílio-hipogástrico, ílioinguinal, cutâneo femoral lateral, genitofemoral, femoral, obturatório, isquiático, glúteo cranial, pudendo, glúteo caudal, e nervo retal caudal. O conhecimento sobre a origem e os nervos do plexo lombossacral no gerbil mostra-se útil para estudos clínico-cirúrgicos e aplicação de técnicas ou fármacos anestésicos.
Assuntos
Gerbillinae , Plexo Lombossacral , Muridae , Sistema NervosoRESUMO
Rickettsia typhi is the causal agent of murine typhus; a worldwide zoonotic and vector-borne infectious disease, commonly associated with the presence of domestic and wild rodents. Human cases of murine typhus in the state of Yucatán are frequent. However, there is no evidence of the presence of Rickettsia typhi in mammals or vectors in Yucatán. The presence of Rickettsia in rodents and their ectoparasites was evaluated in a small municipality of Yucatán using the conventional polymerase chain reaction technique and sequencing. The study only identified the presence of Rickettsia typhi in blood samples obtained from Rattus rattus and it reported, for the first time, the presence of R. felis in the flea Polygenis odiosus collected from Ototylomys phyllotis rodent. Additionally, Rickettsia felis was detected in the ectoparasite Ctenocephalides felis fleas parasitizing the wild rodent Peromyscus yucatanicus. This study’s results contributed to a better knowledge of Rickettsia epidemiology in Yucatán.
Rickettsia typhi es el agente causal del tifo murino; una enfermedad zoonótica transmitida por vector mundialmente distribuida, comúnmente asociada con la presencia de roedores domésticos y silvestres. Los casos humanos de tifo murino en el Estado de Yucatán son frecuentes. Sin embargo, no existe evidencia de la presencia de Rickettsia typhi en mamíferos o vectores en Yucatán. En la búsqueda de vectores y reservorios de Rickettsia typhi, evaluamos la presencia de bacterias del género Rickettsia en roedores y sus ectoparásitos de un pequeño municipio del estado de Yucatán por medio de técnicas de PCR convencional y secuenciación de ADN. Se identificó la presencia de Rickettsia typhi en muestras de sangre obtenidas de Rattus rattus y reportamos por primera vez la presencia de Rickettsia felis en la pulga Polygenis odiosus colectado de Ototylomys phyllotis. Complementariamente, Rickettsia felis fue detectado en la pulga Ctenocephalides felis parasitando al roedor Peromyscus yucatanicus. No se identificó especie de Rickettsia en las muestras de sangre de O. phyllotis y P. yucatanicus analizados. Nuestros resultados contribuyen también en el conocimiento de ciclo de vida biológico del género Rickettsia.
Assuntos
Animais , Humanos , Rickettsia felis/isolamento & purificação , Rickettsia typhi/isolamento & purificação , Roedores/microbiologia , Sifonápteros/microbiologia , Vetores de Doenças , México , Muridae , Reação em Cadeia da Polimerase , Parasitos/microbiologia , Tifo Endêmico Transmitido por Pulgas/transmissãoRESUMO
O objetivo do trabalho foi avaliar a diminuição da replicação viral (BoHV-1 Colorado) em embriões murinos após tratamento do extrato etanólico da casca de Punica granatum (EEPg). Camundongos fêmeas Swiss com idade entre 6 e 8 semanas foram superovuladas com 0,2 mL a 5 UI de hormônios (eCG e hCG), e acasaladas com machos da mesma idade. Após 18 horas, as fêmeas sofreram eutanásia em câmara de CO2 e, através de abertura no peritônio, os zigotos foram coletados e lavados com solução de pronase 0,5%.Os zigotos foram divididos em quatro grupos: G1 (controle), G2 (expostos aos vírus BoHV-1 Colorado a 108 TCID50/mL), G3 (expostos ao EEPg) e G4 (expostos aos vírus e ao EEPg). Os grupos foram mantidos a 37,5ºC em meio TCM199 (100µL) com 10% de soro fetal bovino em estufa a 5% de CO2 e 95% de umidade. Após 24 h, analisamos a taxa de clivagem (teste exato de Fisher; p<0,05), a morfologia (por microscopia óptica), a nested-PCR e a titulação dos embriões em cocultura com células MDBK após mais 72 h do tratamento (teste de Mann-Whitney; p<0,05) e microscopia eletrônica de transmissão (ME). Os embriões murinos tratados com EEPg apresentaram resultados satisfatórios: sem alterações morfológicas, taxa de clivagem semelhante ao controle e, apesar da detecção da presença do vírus pela nested-PCR e ME, houve diminuição do título viral após tratamentos com esse extrato, o que sugere interferência desse tratamento no ciclo viral do BoHV-1 Colorado sem alterar o desenvolvimento dos embriões.(AU)
The aim of this study was to evaluate the reduction of viral replication (Colorado BoHV-1) in murine embryos after the treatment of ethanol extract of Punica granatum peel (PgEE). Swiss female mice aged 6 to 8 weeks were superovulated with 0.2 mL of the 5 UI hormones (eCG and hCG) and mated with males of the same age. After 18 hours, the females were euthanized in a CO2 chamber, and through the opening in the peritoneum, zygotes were collected and washed with 0.5% pronase solution. The zygotes were divided into four groups: G1 (control), G2 (exposed to the virus Colorado BoHV -1 to 108 TCID50/mL), G3 (exposed to PgEE) and G4 (exposed to the virus and to PgEE). The groups were maintained at 37.5ºC in TCM199 (100 mL) with 10% fetal bovine serum in an incubator at 5% CO2 and 95% humidity. After 24 h, we analyzed the cleavage rate (Fisher's exact test; p<0.05), the morphology (by light microscopy), the nested-PCR and the titration of embryos in co-culture with MDBK cells after over 72 h of treatment (Mann-Whitney test; p<0.05) and transmission electron microscopy (TEM). The murine embryos treated with PgEE showed satisfactory results: no morphological changes, cleavage rate similar to controls, despite the detection of the presence of virus by nested PCR and TEM, there was a decrease of the viral titer after the treatment with this extract, which suggests interference of this treatment in the viral cycle BoHV-1 Colorado without altering the embryo development.(AU)
Assuntos
Replicação Viral , Muridae , Noxas , Embrião de MamíferosRESUMO
Em resposta à uma variedade de estímulos, os eosinófilos são recrutados da circulação para focos inflamatórios, onde modulam a resposta imune, através da liberação de proteínas derivadas dos grânulos secretores. Eosinófilos secretam suas proteínas através de diferentes maneiras de secreção: i) clássica exocitose dos grânulos; ii) desgranulação por piecemal (PMD), um processo de secreção mediada por vesículas de transporte; e iii) a citólise. Estes mecanismos estão bem caracterizadas em humanos, mas ainda são poucos conhecidas em camundongos. Aqui, foram investigados os mecanismos subjacentesa desgranulação de eosinófilos murinos durante as respostas inflamatórias in vivo (modelo de asma) e invitro (após estímulos pró-inflamatória). Camundongos Balb/c foram imunizados com uma suspensão deovalbumina (OVA) (50 mg) e Al (OH) 3 (5 mg) em 200 ml de NaCl a 0,9% nos dias 0 (subcutâneamente) e14 (por via intraperitoneal). Catorze dias depois, os desafios de OVA (50 mg) foram instilados intranasalmente3 vezes por semana durante 4 semanas. O grupo controle recebeu solução de NaCl 0,9%. Após o tratamento, os fragmentos de pulmão foram fixados e processados para a microscopia de transmissão de eletrônica (MET). Além disso, a interleucina-13 (IL-13), IL-4, a eotaxina-1 (CCL11) e fator de crescimento transformante beta (TGF-β) foram medidos em tecido pulmonar. Nos experimentos in vitro, os eosinófilos foram isolados a partir do baço de camundongos transgênicos para interleucina-5, estimulados com fator estimulante de colônia granulócito-macrófago[GM-CSF (10 ng / mL)], Lipopolissacarídeo [LPS(100 ng / ml)] ou apenas meio, durante 1 h, imediatamente fixada e processada para MET e avaliação da atividade enzimática de ribonucleases. MET revelou uma intensa infiltrado de eosinófilos no pulmão de animais tratados com OVA, mas estas células foram raramente visualizadas em pulmões dos controles...
Mechanisms governing secretion of proteins underlie the functions of human eosinophils, leukocytesinvolved in allergic, inflammatory and immunoregulatory responses. In response to varied stimuli,eosinophils are recruited from the circulation into inflammatory foci, where they modulate immuneresponses through the release of granule-derived protein. Eosinophils secrete proteins from their specificcytoplasmic granules through different secretion pathways: i) classical granule exocytosis; ii) piecemealdegranulation (PMD), a secretory process mediated by transport vesicles; and iii) cytolysis. These mechanismsare well characterized in humans, but are still poorly understood in mice. Here we investigatedthe mechanisms underlying eosinophil degranulation of murine models during inflammatory responsesin vivo (asthma model) and in vitro (after stimulation with pro-inflammatory stimuli). Balb/c mice wereimmunized with a mixed suspension of ovalbumin (OVA) (50 μg) and Al(OH)3 (5 mg) in 200 μL of 0.9%NaCl on days 0 (subcutaneously) and 14 (intraperitonealy). Fourteen days later, repetitive OVA challenges(50 μg) were intranasaly instilled 3 times a week during 4 weeks. The control group received 0.9% NaClsolution. After treatment, lung fragments were fixed and processed for light and transmission electronmicroscopy (TEM). Moreover, interleukin-13 (IL-13), IL-4, eotaxin-1 (CCL11) and transforming growth factorbeta (TGF- β) were measured in the lung tissue. For the in vitro experiments, eosinophils were isolatedfrom the spleen of interleukin-5 transgenic mice, stimulated with GM-CSF (10 ng/mL), LPS (100 ng/mL) ormedium alone for 1h, immediately fixed and processed to TEM. Both light and TEM revealed an intenseeosinophil infiltration in perivascular and peribronchial spaces of OVA-treated animals, but these cellswere rarely observed in control lungs...
Assuntos
Humanos , Eosinófilos , Muridae , Asma , InflamaçãoRESUMO
Toxoplasma gondii é um dos protozoários mais ubíquos encontrado parasitando tanto animais quanto humanos sendo encontrado em diversos órgãos de seus hospedeiros, inclusive o fígado. Este estudo avaliou as lesões hepáticas causadas pela toxoplasmose experimental em duas cepas de T. gondii (RH e ME-49). Análises bioquímicas e histopatológicas foram realizadas. Foi possível detectas um aumento significativo nos níveis séricos de AST, ALT e LDH em ambas as infecções. A análise histopatológica demonstrou infiltrado inflamatório na infecção experimental com a cepa ME-49 e hiperemia e vasodilatação na infecção com a cepa RH. A infecção aguda (cepa RH) induziu falência hepática e morte do hospedeiro. A infecção crônica (cepa ME-49) levou a lesão hepática, mas não à morte do hospedeiro. Portanto este estudo valida a importância das análises bioquímicas para avaliação da infecção ressaltando o rigoroso exame clinico em indivíduos infectados com T. gondii.
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Enzimas , Muridae , ToxoplasmaRESUMO
O tecido linfóide das mucosas apresenta estruturas especializadas contendo células imunorreguladoras e mecanismos capazes de determinar indução de tolerância ou resposta inflamatória após a administração oral de um antígeno. Diversos agentes causadores de doenças utilizam a via oral como rota de infecção, dentre eles o Toxoplasma gondii. A infecção por T. gondii pode gerar diversas manifestações patológicas, como por exemplo, a doença inflamatória intestinal, que envolve diferentes tipos celulares, diversas citocinas, bem como a participação da microbiota intestinal. Para melhor compreender o envolvimento dos diversos tipos celulares e elementos humorais na toxoplasmose, elegemos como modelos experimentais as linhagens de camundongos geneticamente selecionados para tolerância oral: TR (resistentes à tolerância) e TS (susceptíveis à tolerância). Os camundongos TS se caracterizam por baixa resposta inflamatória e maior quantidade de células T regulatórias produtoras de IL-10. Em contraste, os camundongos TR produzem fortes reações inflamatórias. A caracterização da toxoplasmose experimental nos camundongos TR e TS infectados por gavagem com T. gondii foi feita por análise histológica e imunohistoquímica de cortes do intestino, fígado e baço, dosagem de citocinas e quimiocinas, além da caracterização da microbiota intestinalNossos resultados confirmam o estabelecimento de uma resposta inflamatória intestinal aguda nos camundongos TR, que ocorre durante os 14 dias iniciais da infecção. As lesões apresentam macrófagos e, em menor número, células dendríticas. Além disso, o perfil de citocinas corrobora essas observações, com alta produção de citocinas pró-inflamatórias, tanto sistêmica quanto localizada. Os camundongos TS, por outro lado, apresentaram um perfil característico voltado para a regulação, inibindo a infecção intestinal e produção de citocinas inflamatórias, ao mesmo tempo em que favorece um aumento da quantidade de parasitos nos órgãos...
The mucosal lymphoid tissue has specialized structures containingimmunoregulatory cells and mechanisms to determine the induction of tolerance or inflammatory response following oral administration of an antigen. Several agentscausative of diseases uses the oral route as a form of infection, includingToxoplasma gondii. T. gondii infection can lead to various pathologicalmanifestations, such as inflammatory bowel disease, involving various cell types, several cytokines, as well as the involvement of the intestinal microbiota. To better understand the involvement of different cell types and humoral elements in the toxoplasmosis, we choose as experimental models two lineages of mice genetically selected for oral tolerance: TR (tolerance resistant) and TS (tolerance susceptible). TS mice are characterized by low inflammatory response and increased amount of regulatory T cells producing IL-10. In contrast, the TR mice produce strong inflammatory reactions. Characterization of experimentaltoxoplasmosis in TR and TS mice infected by gavage with T. gondii was made by histological and immunohistochemical analysis of sections of the intestine, liver andspleen, dosage of cytokines and chemokines, in addition to characterization of intestinal microbiota. Our results confirm the setting of an acute inflammatory response in the intestines of TR mice, which occurs during the initial 14 days from infection. Lesions presented macrophages and to a lesser number, dendritic cells. Moreover, thecytokine profile supports these observations, with a high production of proinflammatory cytokines, either systemic or localized...
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Camundongos , Muridae , Toxoplasma/classificação , Toxoplasmose/induzido quimicamenteRESUMO
La tesis se enmarca dentro de la problemática de la elevada incidencia de los efectos adversos provocados por el uso crónico de antiinflamatorios y la posibilidad de contar con una terapia alternativa o coadyuvante para el tratamiento de cuadros inflamatorios basada en la utilización de plantas medicinales empleadas tradicionalmente en Bolivia. En este sentido, la investigación se realizó con las especies vegetales Xanthium spinosum L. y Urtica urens L. procedentes de la Provincia Ingavi del Departamento de La Paz. El objetivo principal de esta investigación fue el de profundizar en el conocimiento del efecto antiinflamatorio de los extractos de Xanthium spinosum L. y Urtica urens L. a través de la evaluación de procesos inflamatorios inducidos, en modelo murino. Para alcanzar este objetivo, se desarrolló un plan de trabajo que se dividió en cuatro partes fundamentales: la autentificación de ambas especies vegetales estudiadas, el estudio de sus parámetros de calidad, el estudio fitoquímico cualitativo y el estudio farmacológico in vivo, de los diferentes extractos obtenidos. La autentificación fue realizada sobre muestras representativas de las plantas recolectadas, en el Herbario Nacional de Bolivia, identificándose posteriormente como X. spinosum L. y U. urens L. El grado de su calidad fue determinado empleando las directrices propuestas por la Real Farmacopea Española y por comparación con muestras auténticas, lo que reveló la presencia de tricomas en X. spinosum L. y pelos urticantes unicelulares y pluricelulares en U. urens L. y valores de humedad, cenizas totales, cenizas ácidas, cenizas solubles, elementos extraños, índice de hinchamiento, dentro de los límites aceptables de calidad. Por otro lado, el protocolo desarrollado para la obtención de extractos por el método de polaridad creciente permitió la obtención de extractos etéreo, diclorometánico, etanólico y acuoso, los que mediante un screening fitoquímico cualitativo reveló la presencia mayoritaria de esteroles y flavonoides en X. spinosum L. y taninos, alcaloides, compuestos reductores, esteroles, flavonoides y cumarinas en U. urens L. Adicionalmente, el perfil cromatográfico de los distintos extractos reveló la presencia de diferentes manchas en fases móviles asociadas principalmente con flavonoides. El estudio del efecto antiinflamatorio de los extractos se realizó en ratones albinos Swiss, siguiendo el protocolo de edema plantar inducido por carragenina y el estudio del efecto analgésico siguiendo el protocolo de inducción de contorciones abdominales por ácido acético. Los mayores valores de inhibición de la inflamación fue registrado para los extractos acuoso y etanólico de X. spinosum L. y de U. urens L., en tanto que la inhibición de la algesia fue más importante cuando se empleó extractos diclorometánico y etanólico de ambas especies vegetales. Finalmente, la combinación de extractos acuosos de ambas especies estudiadas mostró un efecto sinérgico antiinflamatorio y analgésico, en tanto que la combinación de los extractos etanólicos de estas especies vegetales mostró sólo un efecto antiinflamatorio, no así analgésico. (AU)
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Humanos , Urtica urens , Xanthium , Anti-Inflamatórios , Muridae , Plantas Medicinais , Bolívia , Cromatografia , Compostos FitoquímicosRESUMO
A VDAC é uma porina presente na MME cuja função é crucial no metabolismo energético, sobrevivência e morte celular. A caracterização da VDAC torna-se importante para a compreensão das inter-relações da mitocôndria com os diferentes componentes citosólicos, tais como a HK. A ligação HK-VDAC favorece a utilização do ATP intramitocondrial em células neuronais, a HK cerebral pode interagir de formas diferentes com a VDAC, o que resulta em diferentes sítios de ligação (sítios A e B). Os variados papéis metabólicos das isoformas da VDAC podem ser explicados pela presença de alterações pós-traducionais. No presente trabalho purificamos a VDAC1 mitocondrial neuronal proveniente de cérebro aviar. Paralelamente, comprovamos que a presença de múltiplas formas das VDACs 1 e 2 em cérebros murino e aviar, seja devida à presença de modificações pós-traducionais, nomeadamente a fosforilação. A proteína isolada apresentou peso molecular de 30KDa. Quando submetida à eletroforese e posteriormente à coloração para a identificação de fosfoproteínas, a mesma mostrou-se desfosforilada. O conhecimento da presença, ou ausência de fosforilação das VDACs, reside na importância de estabelecer-se as bases moleculares ligadas à existência de sítios A e B nas mitocôndrias neuronais.
VDAC (voltage-dependent anion channel) is a pore forming protein from outer mitochondrial membrane. It has key functions on energetic metabolism, and cell death and survival. VDAC characterization is important for understanding mitochondrial interactions with cytosolic proteins, such as hexokinase (HK). HK-VDAC interaction supports preferential access to intramitochondrial ATP in neural cells. Brain HK interacts in different ways with VDAC. It results in two HK binding sites (A and B). VDAC isoforms differential metabolic roles may be explained by the presence of post-translational modifications. In this study we purified avian neuronal mitochondrial VDAC1. At same time we showed that VDACs 1 and 2 pI heterogeneity in rat and avian brains is due to phosphorylation. Purified VDAC had a molecular weight of 30 KDa. The purified VDAC submitted to phosphorylated protein staining on gel, was dephosphorylated. The knowledge of presence or absence of VDAC phosphorylation is important for understanding the molecular nature basis of A and B HK binding sites in brain mitochondria.
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Animais , Canal de Ânion 1 Dependente de Voltagem/metabolismo , /metabolismo , Membranas Mitocondriais , Porinas/isolamento & purificação , Proteína Inibidora de Apoptose Neuronal/isolamento & purificação , Proteínas de Transporte da Membrana Mitocondrial/metabolismo , Aves/metabolismo , Bovinos/metabolismo , Muridae/metabolismoRESUMO
Estudos sobre os aspectos morfológicos, genéticos e de virulência, inerentes ao Paracoccidioides brasiliensis antes e depois da interação com hospedeiro experimental são de grande importância para. Oito isolados avaliados não apresentaram diferenças macro e micromorfológicas póspassagem em animal quando comparadas a morfologia pré-passagem. Entretanto eles diferiram entre si em relação à micromorfologia, in vitro, com diferenças na gemulação e presença de filamentos à temperatura de 36oC. Em relação à virulência, segundo os critérios adotados, índice esplênico, reisolamento de células fúngicas, lesões em diferentes órgãos e taxa de sobrevivência, o isolado Pb235CRS foi considerado o mais virulento; os isolados Pb261, Pb31MAS, Pb285, Pb246, Pb281 apresentaram virulência intermediária e os isolados Pb29EE e Pb639 foram os menos virulentos. A genotipagem por RAPD dos isolados demonstrou modificações no perfil de bandas do DNA após interação com o hospedeiro animal, aos 100 dias da inoculação, porém não foi possível correlacionar esses dados com os demais obtidos. Os resultados obtidos em nosso estudo apontam que diferenças entre isolados existem e podem interferir na evolução da doença...
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Animais , Muridae , Paracoccidioides , Técnica de Amplificação ao Acaso de DNA Polimórfico , Virulência , GenótipoRESUMO
Paecilomyces lilacinus é um fungo filamentoso, hialino, assexuado e agente causal da hialohifomicose. Esse fungo é considerado um patógeno emergente e oportunista capaz de infectar crianças, adultos imunossuprimidos, como também imunocompetentes. O presente trabalho objetivou estudar a resposta à infecção, in vivo, de camundongos C57BL/6, imunocompetentes e imunossuprimidos, frente a P. lilacinus. Dois isolados de origem humana do fungo foram avaliados quanto à virulência, tendo como critérios, sinais clínicos, sobrevivência, índice esplênico, lesões histológicas nos animais e reisolamento de células fúngicas viáveis do baço. Além disso, o perfil imunológico dos animais foi feito através da quantificação de células T CD4+ e CD8+ esplênicas, seus perfis de marcadores de ativação e memória em linfócitos T (CD25, CD69 e CD62L), e da avaliação de anticorpos no plasma contra epítopos de P. lilacinus...
Os resultados demonstraram que ambos os isolados fúngicos apresentaram características morfológicas compatíveis com a espécie e foram capazes de infectar os animais do grupo dos imunocompetentes e provocar a doença, com manifestações clínicas, no modelo imunossuprimido. Um dos isolados, proveniente de lesão cutânea, foi considerado mais virulento, pelos critérios avaliados, que o isolado proveniente de lesão subcutânea na região da tíbia. A avaliação imunológica mostrou diferenças na cinética de expressão de moléculas de ativação pelos linfócitos CD4+ e CD8+ dos animais inoculados com os dois isolados, sendo mais recente para o isolado da região tibial, e tardia para o isolado de pele. Foi possível também verificar que esse padrão se mantinha nos animais imunossuprimidos, mas com um grau de ativação aparentemente mais elevado do que nas células obtidas dos animais imunocompetentes. Com relação a avaliação da produção de anticorpos específicos contra o fungo, nossos dados sugerem que a imunossupressão não exerceu influência na resposta humoral, visto que ambos os grupos de animais, imunocompetentes e imunossuprimidos, inoculados com o fungo foram capazes de produzir anticorpos IgG específicos anti-P. lilacinus...
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Humanos , Muridae , Paecilomyces , Paecilomyces/virologia , VirulênciaRESUMO
A Doença Esteatótica Não Alcoólica do Fígado (do inglês Nonalcoholic Fatty Liver Disease NAFLD) é uma doença crônica hepática de caráter espectral, que vai desde a esteatose simples até a esteato-hepatite não alcoólica. A progressão para cirrose e carcinoma hepatocelular têm sido descrita. A NAFLD apresenta aspectos histológicos semelhantes à doença hepática relacionada ao álcool (esteatose, inflamação lobular, corpúsculos de Mallory e fibrose), mas acomete indivíduos com história negativa de consumo excessivo de álcool. A NAFLD é uma das principais doenças crônicas hepáticas mundiais, e os indivíduos obesos representam a maioria dos casos da doença. Os mecanismos envolvidos na progressão da esteatose para esteato-hepatite não são bem compreendidos. Neste aspecto, modelos murinos da NAFLD têm sido frequentemente utilizados para elucidação destes mecanismos. A maioria dos modelos disponíveis é resultante de modificações genéticas e/ou nutricionais e, em geral, não simulam as alterações metabólicas e histológicas comumente vistas em pacientes com NAFLD. Em nosso grupo, foi proposto um novo modelo de NAFLD. Camundongos C57BL/6 alimentados com dieta rica em gordura (High Fat - HF) demonstraram alterações metabólicas e histológicas sugestivas de NAFLD. O objetivo do presente trabalho foi comparar alterações histológicas hepáticas presentes nestes camundongos com as alterações observadas em pacientes obesos. Amostras de fígados de pacientes obesos e de camundongos alimentados com a dieta HF foram utilizadas. Os tecidos hepáticos foram corados em Hematoxilina & Eosina e Picrossírius Red para avaliação das alterações hepáticas (esteatose, balonização, inflamação, corpúsculos de Mallory-Denk e fibrose). Além disso, foi realizada imunoistoquímica para avaliação da presença de células estrelares ativadas e de células progenitoras hepáticas, células envolvidas na fibrose e no desenvolvimento de carcinoma hepatocelular, respectivamente. Os resultados demonstraram que os fígados de todos os pacientes obesos exibiram esteatose macrovacuolar, balonização hepatocelular, inflamação lobular e fibrose perissinusoidal, o que caracterizou estes pacientes como portadores da NAFLD. As mesmas alterações foram observadas em fígados de camundongos alimentados com a dieta HF. As células estrelares ativadas foram observadas em todos os pacientes obesos, assim como em camundongos de dieta HF. As células progenitoras hepáticas foram observadas na maioria dos pacientes obesos. O fígado de todos os camundongos alimentados com dieta HF exibiram células progenitoras hepáticas. A partir dos dados obtidos, pode-se concluir que fígados de camundongos alimentados com dieta HF exibem alterações histológicas hepáticas similares às observadas em pacientes obesos. Isto abre perspectivas para a utilização do modelo proposto em estudos que busquem elucidar os mecanismos envolvidos na patogênese da NAFLD.
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Humanos , Camundongos , Fígado Gorduroso/patologia , Hepatopatias/patologia , Muridae/microbiologia , Obesidade/dietoterapiaRESUMO
Populações que residem em áreas endêmicas da doença de Chagas são submetidas a múltiplas infecções pelo Trypanosoma cruzi e podem estar infectadas com cepas ou clones com diferentes graus de virulência e susceptibilidade à quimioterapia. Este é um fator importante para o desenvolvimento e morbidade da doença. As cepas de Trypanosoma cruzi representam complexas populações multiclonais, homogêneas ou heterogêneas, com predominância de um clone principal. São biologicamente classificados em Biodemas (Tipos I, II e III) que apresentam diferentes graus de resistência à quimioterapia. Cepas do Tipo I são muito suscetíveis ao tratamento; cepas do Tipo II possuem uma média susceptibilidade (cepa 21SF); cepas de Tipo III são muito resistentes (cepa Colombiana). No presente estudo, é avaliado o resultado do tratamento de camundongos triplamente infectados com clones da cepa 21SF, em comparação com os infectados com a cepa parental. 50 camundongos foram infectados com a cepa 21SF (infecção única). O inóculo foi de 5 x 104 formas tripomastigotas sanguícolas. 80 camundongos foram infectados, sucessivamente, com 3 clones da cepa 21SF (C6, C7 e C8), inóculo: 1x104 formas tripomastigotas (infecção tripla). A infecção simples com cada clone também foi feita. Os camundongos de ambos os grupos foram divididos em dois subgrupos: tratados com Benzonidazol BZ (100 mg/kg/dia - 60 doses) e controles não tratados. Após 60 dias do final do tratamento, os camundongos sobreviventes foram eutanasiados, por exsanguinação, pós-anestesia; o sangue foi coletado para o exame sorológico de imunofluorescência indireta; testes de cura foram realizados (parasitemia, xenodiagnósticos, hemocultura) e seções do coração e músculo esquelético foram coletadas, fixadas e processadas para o estudo histopatológico em cortes corados com Hematoxilina & Eosina. A PCR foi também usada como uma técnica diagnóstica complementar. Os testes parasitológicos mostraram uma positividade variando de 54,4% nos camundongos infectados com a cepa parental e tratados; 33,4 a 66,7% nos animais com infecção única pelos diversos clones e tratados e 26,7% nos camundongos com infecção tríplice, tratados. Os títulos sorológicos (TIFI) variaram de 1:20 a 1:280 nos infectados com cepa parental tratados com BZ e de 1:640 a 1:1280 para controles não tratados. Os títulos sorológicos na infecção única com cada clone variaram de 1:10 a 1:1280 em camundongos tratados e de 1:160 a 1:1280 nos controles não tratados. A PCR revelou positividade em todos os animais infectados, tratados. O resultado final foi obtido pela combinação dos testes parasitológicos com os títulos sorológicos revelando positividade de 6,6% nos camundongos infectados com a cepa parental e tratados; 0 a 18,2% nos animais com infecção única pelos diversos clones e tratados e 12% nos camundongos com infecção tríplice, tratados. Estudo histopatológico: Os camundongos infectados com a cepa parental apresentaram lesões que variavam de leves a moderadas, na maioria dos casos, predominante no miocárdio (animais tratados e controles não tratados) camundongos submetidos à infecção única por cada clone apresentaram lesões semelhantes aos demonstrados pela infecção com cepa parental. Os camundongos com infecção tripla apresentaram uma exacerbação de lesões, evoluindo para a miocardite crônica. Nestes casos, havia intensas lesões no músculo esquelético; animais tratados apresentaram uma nítida redução das lesões no miocárdio e no músculo esquelético. Os resultados da quimioterapia com Benzonidazol em animais triplamente infectados, considerando os testes parasitológicos e sorológicos, revelaram baixos índices de cura e agravamento das lesões tissulares nos camundongos submetidos a múltiplas infecções com clones obtidos da cepa 21SF.
