Detection of white spot syndrome virus in Brazil using negative staining, immunoelectron microscopy and immunocytochemistry techniques / Detección del virus del síndrome de mancha blanca en el Brasil utilizando inmunomicroscopía e inmunomarcación con partículas de oro coloidal

In this study thirty shrimp samples from commercial marine shrimp (L. vannamei) farms of southern region of Brazil were obtained. Hepatopancreas and shell scrapings fragments collected in these animals were processed by transmission electron microscopy using negative staining (rapid preparation), immunoelectron microscopy and immunocytochemistry (immunolabelling with colloidal gold particles) techniques. On the transmission electron microscopy a great number of white spot virus particles, ovoid or bacilliform-to-ellipsoid, measured 230-290 nm in length and 80-160 nm in diameter with intra-nuclear projections were visualized by the negative staining technique in 27 (90 percent) out of 30 samples examined. Using immunoelectron microscopy technique, the anti-VP 664 serum agllutinated a large number of particles formed by antigen-antibody interaction. In the immunocytochemistry technique, the antigen-antibody reaction was styrongly marked by the particles of colloidal gold over the virus. Notably, this is the first report, to our knowledge, describing use of these microscopy techniques to study Brazilian L. vannamei marine shrimp samples; moreover, this methodology also appears to be a viable complementary tool for diagnosing the presence of the white spot virus within shrimp tissues. Importantly, these are the first photoelectron micrographs of the WSSV in Brazil.

Se obtuvieron para el estudio 30 muestras de camarones marinos comerciales (L. vannamei) de las granjas de la región sur de Brasil. Fueron procesados fragmentos de hepatopáncreas y raspados internos del cefalotórax recogidos en estos animales por microscopía electrónica de transmisión con tinción negativa (preparación rápida), inmunomicroscopía y técnicas de inmunocitoquímica (inmunomarcación con partículas de oro coloidal). En la microscopía electrónica de transmisión de un gran número de partículas de virus de la mancha blanca, ovoide o elipsoidal a baciliformes, medían 230-290 nm de longitud y 80-160 nm de diámetro. En 27 (90 por ciento) de las 30 muestras examinadas intra-nuclear proyecciones se visualizaron mediante la técnica de tinción negativa. Utilizando una técnica de inmunomicroscopía electrónica, el anti-suero VP 664 reunió a un gran número de partículas formadas por la interacción antígeno-anticuerpo. En la técnica de inmunocitoquímica, la reacción antígeno-anticuerpo fue fuertemente reforzada por las partículas de oro coloidal en los virus. En particular, en Brasil este es el primer informe, a nuestro entender, que describe el uso de estas técnicas de microscopía en muestras de camarón marino L. vanamei. Además, esta metodología también parece ser una herramienta complementaria viable para diagnosticar la presencia del virus de la mancha blanca en tejidos de camarón. Es importante destacar que estas son las primeras fotos en microscopia electrónica del WSSV obtenidas en Brasil.

Evaluación preliminar de un inmunoanálisis de un solo paso, cualitativo y rápido de troponina I cardiaca en el diagnóstico del infarto agudo del miocardio / Preliminary evaluation of a rapid, qualitative one step immunoassay of cardiac troponin I in the acute myocardial infartion diagnosis

La Troponina I cardiaca es considerada el marcador bioquímico de elección para el infarto agudo del miocardio; que es una urgencia médica y es necesario su diagnóstico rápido. En este artículo se estudió la posibilidad de diagnosticar esta entidad nosológica de una manera cualitativa a través de un ensayo inmunocromatográfico de un solo paso de detección de Troponina I cardiaca elaborado en el laboratorio y otro ensayo inmunocromatográfico cualitativo de detección de Troponina I cardiaca Cardiac STATus. Se evaluaron retrospectivamente 76 plasmas de pacientes con infarto agudo del miocardio y 50 plasmas de donantes sanos. El inmunoensayo del laboratorio no presentó reactividad cruzada con la isoforma esquelética de la Troponina I.Esta prueba detectó 1 ng/mL o mayor de Troponina I cardiaca en forma de complejo terciario en plasma y también reconoció la molécula libre. La sensibilidad clínica del inmunoensayo del laboratorio en pacientes con infarto agudo del miocardio de tipo Q fue 100 por ciento para el inmunoensayo comercial, 85,7 por ciento en el período de 6 h a 24 h de inicio del dolor en el pecho. Para ese tipo de infarto se detectó señal hasta las 148 h y la sensibilidad clínica entre 84,2 por ciento y 90,9 por ciento para ambos sistemas. En el caso de pacientes con infarto agudo del miocardio de tipo no-O la sensibilidad clínica fue 70 por ciento en los dos inmunoensayos. La especificidad clínica del inmunocromatográfico de Troponina I cardiaca preparado en el laboratorio con muestras de donantes sanos fue 90,4 por ciento y para el inmunocromatográfico comercial, 100 por ciento. Los dos sistemas inmunocromatográficos de un solo paso para la detección de Troponina I cardiaca evaluados en este trabajo diagnóstican de una manera rápida y fácil la muerte celular miocárdica importante y en menor grado, aquella necrosis más pequeña, sin signos electrocardiograficos concluyentes y con posibilidades de la ocurrencia de complicaciones a corto y mediano plazo en el paciente con síndrome coronario agudo

Inmunolocalización del complejo polisacárido-proteína en ultraestructuras de la fase micelial y levaduriforme de Histoplasma capsulatum / Immunolocalization of the polysaccharide-protein complex (PPCD-Histo) in the Histoplasma capsulatum mycelium and yeast phase ultrastructures

Introducción: El empleo de un antígeno parcialmente purificado denominado complejo polisacárido-proteína desproinizado de Histoplasma capsulatum (CPPD-Histo), utilizado para discriminar la histoplasmosis de diversas micosis pulmonares y otras enfermedades respiratorias en métodos inmunodiagnósticos de alta sensibilidad, ha sido motivo de estudio desde hace años por nuestro grupo de investigación: Objetivo: En este trabajo se planteó conocer la ubicación celular preferencial del antígeno CPPD-Histo, en las diferentes formas y estructuras de las fases micelial y levaduriforme del hongo. Material y métodos: El estudio se desarrolló mediante inmunolocalización con marcaje de oro coloidal para microscopia electrónica, usando anticuerpos primarios CPPD-Histo específicos. Resultados y discusión: La localización en microscopia electrónica mostró mayor concentración del CPPD-Histo en las zonas de mayor grosor de la capa externa de la pared celular de las proyecciones digitiformes de macroconidios, poco marcaje en pared celular de hifas, y una distribución dispersa de la marca en las levaduras. Conclusión: La pared celular de los macroconidios de la fase micelial del hongo es la estructura fúngica con mayor concentración del antígeno CPPD-Histo

Electroinmunofijación de orinas sin concentrar por coloración con metales pesados / Immunofixation electrophoresis of unconcentrated urines with heavy metal staining

Se describe una técnica sencilla y altamente sensible para la identificación inmunológica de proteínas en orina sin concentración previa, basada en la alta sensibilidad de las tinciones con metales pesados, como plata y oro, al estado coloidal (100 veces más sensible que el azul brillante de Coomassie (CBB) R y G 250). Posteriormente a la corrida electroforética convencional se efectuó una inmunofijación utilizando una cantidad de antisuero monoespecífico en el orden de 3,5 µl/cm² de gel. El contacto antígeno-antisuero se mantuvo durante 30 minutos y posteriormente se efectuaron lavados con sucesivos recambios de solución fisiológica y se aplicaron las coloraciones argénticas, áurica y con CBB R 250. Bajo las condiciones de trabajo utilizadas se lograron identificar satisfactoriamente las cadenas livianas k y ? monoclonales en proteinurias de Bence Jones (BJ) positivo, y la ß2 microglobulina en proteinurias de tipo tubular, con un límite de sensibilidad del orden de los 5 x 10-4ug de proteína/mm2 de gel. Esta técnica resultó de gran utilidad en el estudio del cuadro uroproteico y se presenta como un método simple, rápido, de alta sensibilidad y baja relación costo/beneficio, para el estudio de los distintos cuadros de proteinuria en muestras sin concentrar

Use of lectins to evaluate the effects of GaAS softlaser on dog tendon

1. Lectins labeled with colloidal gold particles were used for the ultrastructural evaluation of the biological effects of GaAs softlaserirradiation on the healing of dog tendon wounds. 2. Six dogs were submitted to tenotomy and tenorrhaphy on the right and left hind legs. All animals received laser irradiation (4J/cm²) daily for ten days only on the left leg, and the right leg of the same animal was used as control. Biopsies were taken 11, 22 and 40 days after surgery. 3. Laser-irradiated and control tendon tissues were embedded in L.R. White resin and thin section were incubated in the presence of gold-labeled Arachis hypogaea (PNA), Canavalia ensiformes (Con A) and Triticum vulgare (WGA). 4. In general, the control and laser-irradiated tissues presented homogeneous and similar labelling of heterochromatin, rough endoplasmic reticulum and extracellular matrix. 5. We conclude that GaAs softlaser irradiation does not produce significant changes in the glycosylation of healing tendons

Estudo da interação de Leishmania amazonensis com fibroblastos de cultura primária de músculo esquelético e cardíaco de camundongos / Study of the interaction of Leishmania amazonensis in fibroblasts primary culture of skeletal and cardiac muscle of mice

Culturas primárias de fibroblastos foram obtidas a partir da dissociação de tecidos de músculo esquelético e cardíaco de embriões de camundongos suiços. Após 48h de cultivo a 37C e 5% CO2 formavam-se monocamadas que foram utilizadas para diferentes experimentos...Culturas de fibroblastos obtido de músculo cardíaco de embriões de camundongos irradiadas com raios gama foram infectadas com formas promastigotas de L. Amazonensis e tratadas com L-leu-Ome no quarto dia de infecção. este dia foi selecionado por apresentar os índices mais altos de infecção. Na concentração de 1nM nos tempos de 1, 2 e 24 horas os fibroblastos apresentaram parasitas destruídos, com percentuais de inibição da infecção de 16,63%, 10,68% e 84,36%, respectivamente. Na concentração de 2mM e nos mesmos tempos estes índices foram 13,78%, 25,71% e 95,9%. Nas culturas controle, os índices médios de infecção de 27,35% +- 7,56 (1 hora), 17,50 +- 4,09 (2 horas) e de 26,85 + - 8,27 (24 horas), confirmando os dados referentes à infecção de fibroblastos de músculo esquelético pelo mesmo parasita