Tinción con azul de toluidina en biopsia dirigida de lesiones displásicas de la mucosa bucal: informe de casos clínicos / Toluidine blue guided biopsy of dysplastic lesions of the oral mucosa: clinical cases report

Objetivo: Los desórdenes de mucosa bucal potencialmente malignos pueden presentar áreas displásicas. En estos casos, la biopsia es un procedimiento imprescindible para un correcto diagnóstico. La inspección visual y la palpación, como método de selección del área de biopsia, ofrecen sensibilidad y especificidad adecuadas pero mejorables. El objetivo de este artículo es presentar una serie de casos clínicos en los que se describen el empleo y la interpretación de la tinción vital con azul de toluidina como método complementario para contribuir a una mejor elección del área de biopsia. Casos clínicos: Se trata de siete casos de lesiones con sospecha de displasia epitelial en mucosa bucal. En cada uno se detalla la correlación de las áreas teñidas con las manifestaciones clínicas y con el diagnóstico de displasia. Además, se muestran patrones de tinción considerados falsos positivos. En la interpretación de la tinción positiva, se tuvieron en cuenta el aspecto superficial y el color de la lesión teñida. El empleo combinado de inspección, palpación y tinción vital podría constituir un procedimiento integral de utilidad para obtener mayor precisión en la determinación del sitio de biopsia en comparación con los mismos procedimientos aplicados de manera individual. En la interpretación de la tinción positiva con azul de toluidina deberían considerarse el aspecto superficial y el color de la lesión teñida (AU)

Aim: Potentially Malignant Disorders in the oral cavity can present dysplastic areas. In these cases, the biopsy is an essential procedure for a correct diagnosis. Visual inspection and palpation, are adequate methods to select the area for the biopsy, however there is margin for improvement. The objective of this article is to present a series of clinical cases in which the use and interpretation of vital staining with Toluidine Blue is described as a complementary method to contribute to a better choice of the biopsy area. Clinical cases: Seven clinical cases that presented lesions with suspected epithelial dysplasia in the oral mucosa were presented. The correlation of the stained areas with the clinical manifestations and with the diagnosis of dysplasia is detailed in each case. Staining patterns considered false positives are also shown. In the interpretation of the positive staining, the superficial appearance and color of the stained lesion were considered. The combined use of inspection, palpation and vital staining could constitute a useful comprehensive procedure to obtain greater precision in determining the biopsy site in relation to the same procedures applied individually. In the interpretation of the positive staining with Toluidine Blue, the superficial appearance and color of the stained lesion should be considered (AU)

Value of the toluidine blue test as an aid to determine the biopsy site in actinic prurigo cheilitis

Actinic prurigo (AP) is a type of photodermatosis that primarily affects the Latin American mestizo population. Histologically, AP cheilitis exhibits acanthosis with spongiosis and vacuolation of the basal cell layer overlying a dense lymphocytic inflammatory infiltrate that forms well-defined lymphoid follicles. Toluidine blue is a thiazide, acidophilic, and metachromatic dye used in vivo to selectively stain the acidic components of tissues such as sulfates, carboxylates, and phosphate radicals that are incorporated into DNA and RNA. It is necessary to develop a method that allows detecting, on clinical grounds the area of the lesion in which it is more feasible to find such structures. Thus to increase the sensitivity of the biopsy, in AP cheilitis to accurately identify where the lymphoid follicles reside, based on the higher concentration of DNA in such structures and thus confirm the diagnosis. In this study, staining was positive in 85% of patients with AP cheilitis, in 14 of whom 82% lymphoid follicles were observed by histopathology. One of the pathologist's problems in establishing the diagnosis of AP is that the main histopathological characteristics are not always identified in the submitted samples because it is not easy to clinically identify the most representative site of the lesion selected for performing a biopsy. Based on our results, we propose using toluidine blue as an auxiliary method to choose a tissue sample to facilitate the diagnosis and allow clinicians to make clinical correlations between the histopathological and therapeutic findings.

Use of scanning electron microscopy in the cochlea of guinea pigs / Microscopia eletrônica de varredura em cócleas de cobaias

Abstract Introduction: The use of electron microscopy in the study of the inner ear has allowed us to observe minute details of the hair cells, especially in ototoxicity studies; however, the preparation of this material is a difficult and delicate task. In an attempt to simplify the handling of these materials, two agents, toluidine blue and ethylenediamine tetra-acetic acid were tested, in addition to the elimination of osmium tetroxide during the preparation of albino guinea pig cochleae. We also tested the applicability of these methodologies in an ototoxicity protocol. Objective: To verify the quality of the images obtained with and without the use of ethylenediamine tetra-acetic acid, toluidine blue and osmium tetroxide in the preparation of cochleae of albino guinea pigs for the scanning electron microscopy. Methods: Three groups of cochleae were used. In Group 1, 10 cochleae were prepared with the usual methodology, dissecting the optical capsule without decalcification and using osmium tetroxide as a post-fixative agent. In Group 2, we prepared 10 cochleae decalcified with ethylenediamine tetra-acetic acid, injecting toluidine blue in the endolymphatic space to facilitate the identification of the organ of Corti. In Group 3, we used 4 cochleae of guinea pigs that received 3 doses of cisplatin (7.5 mg/kg, D1-D5-D6), two prepared according to the methodology used in Group 1 and two with that used in Group 2. Scanning electron microscopy images were obtained from the organ of Corti region of the basal turn of each cochlea. Results: The organ of Corti was more easily identified with the use of toluidine blue. The dissection of the cochlea was more accurate in the decalcified cochleae. The quality of the images and the preservation of the organ of Corti obtained with the two methodologies were similar. Conclusion: The proposed modifications resulted in images of similar quality as those observed using the traditional methodology.

Resumo Introdução: O emprego da microscopia eletrônica no estudo da orelha interna permitiu observar detalhes minuciosos das células ciliadas especialmente em estudos de ototoxicidade. Entretanto, o preparo desse material é trabalhoso e delicado. Para simplificar a manipulação desses materiais, testou-se o uso de dois agentes, azul de toluidina e ácido etilenodiamino tetra-acético, além da retirada do tetróxido de ósmio na preparação de cócleas de cobaias albinas. Testamos também a aplicabilidade dessas metodologias em um protocolo de ototoxicidade. Objetivo: Verificar a qualidade das imagens obtidas com e sem o uso de ácido etilenodiamino tetra-acético, azul de toluidina e tetróxido de ósmio na preparação de cócleas de cobaias albinas para a microscopia eletrônica de varredura. Método: Foram utilizados três grupos de cócleas. No Grupo 1 preparou-se 10 cócleas com a metodologia usual, dissecando a cápsula ótica sem descalcificac¸ão e utilizando tetróxido de ósmio como pós-fixador. No Grupo 2 preparamos 10 cócleas descalcificadas com ácido etilenodiamino tetra-acético, injetando azul de toluidina no espac¸o endolinfático para facilitar a identificação do órgão de Corti. No Grupo 3 utilizamos 4 cócleas de cobaias que receberam 3 doses de cisplatina (7,5 mg/kg, D1-D5-D6), duas preparadas com a metodologia do Grupo 1 e duas com a do Grupo 2. Foram obtidas imagens da microscopia eletrônica de varredura da região do órgão de Corti do giro basal de cada cóclea. Resultados: O órgão de Corti foi mais facilmente identificado com o azul de touidina. A dissecção da cóclea foi mais precisa nas cócleas descalcificadas A qualidade das imagens e a preservac¸ão do órgão de Corti obtidas com as duas metodologias foi similar. Conclusão: As modificações propostas resultaram em imagens de qualidade similar as observadas com o uso da metodologia tradicional.

Utilização da cromoendoscopia com azul de toluidina mais solução de Lugol para diagnóstico precoce de lesões pré-malignas esofágicas e neoplasias superficiais em pacientes de alto risco / Chromoendoscopy using toluidine blue plus lugol's solution for early diagnosis of esophageal premalignant lesions and superficial neoplasms in high-risk patients

ABSTRACT BACKGROUND: Esophageal cancer is the eighth most common cancer. The prognosis is bleak in patients with advanced stages. Patients with early disease have a better prognosis than those with advanced stage. There are several techniques for the screening of premalignant and superficial lesions including chromoendoscopy. OBJECTIVE: This article aimed to determine the effectiveness of chromoendoscopy with toluidine blue combined with Lugol's solution for diagnosis of esophageal premalignant and superficial neoplastic lesions in high risk patients. METHODS: Routine white light upper endoscopy was performed. Toluidine blue was sprayed from the gastroesophageal junction to 20 cm of the dental arch. Then the uptake dye areas were characterized. Later Lugol's solution was sprayed. Areas with less-intense staining were characterized. Biopsy of the toluidine blue capturing areas and areas with less-intense staining of Lugol's solution were taken. In the cases where lesions were not evidenced after application of dyes, biopsies four quadrants of the esophageal mucosa were taken. The samples were evaluated by a digestive pathologist. RESULTS: Barrett's esophagus was the most common premalignant lesion and the early neoplastic lesion was adenocarcinoma with a sensitivity of 100%, specificity 85.7%, positive predictive value 30%, negative predictive value 100%, positive likelihood ratio 7 negative likelihood ratio 0. CONCLUSION: Chromoendoscopy with toluidine blue combined with Lugol's solution is a useful tool in the screening of esophageal premalignant lesions and superficial neoplasms.

RESUMO CONTEXTO: O câncer de esôfago é o oitavo câncer mais comum. O prognóstico é sombrio em pacientes com estágios avançados. Pacientes com doença precoce têm um melhor prognóstico do que aqueles com estágio avançado. Existem várias técnicas para a triagem de lesões pré-malignas e superficiais, incluindo cromoendoscopia. OBJETIVO: Este artigo objetivou determinar a efetividade da cromoendoscopia com azul de toluidina combinada com a solução de Lugol para o diagnóstico de lesões neoplásicas pré-malignas e superficiais esofágicas em pacientes de alto risco. MÉTODOS - A endoscopia de luz branca de rotina foi realizada de forma rotineira. O azul do toluidina foi pulverizado desde a junção gastroesofágica até 20 cm da arcada dentária. As áreas impregnadas pela tintura da tomada foram então caracterizadas. Mais adiante a solução de Lugol foi pulverizada. Áreas com coloração menos intensa foram caracterizadas. Foram realizadas biópsias das áreas de captura de azul de toluidina e áreas com coloração menos intensa da solução de Lugol. Nos casos onde as lesões não foram evidenciadas após a aplicação das tinturas, foram feitas biópsias em quatro quadrantes da mucosa esofágica. As amostras foram avaliadas por um patologista especializado. RESULTADOS: O esôfago de Barrett foi a lesão pré-maligna mais frequente e a lesão neoplásica precoce foi adenocarcinoma com sensibilidade de 100%, especificidade de 85,7%, valor preditivo positivo de 30%, valor preditivo negativo 100%, razão de verossimilhança positiva 7 e razão de verossimilhança negativa 0. CONCLUSÃO: A cromoendoscopia com azul de toluidina combinada com a solução de Lugol é uma ferramenta útil na triagem de lesões pré-malignas esofágicas e neoplasias superficiais.

Análise comparativa entre a coloração do azul de toluidina e a imunoexpressão da ciclina D1 em leucoplasias da mucosa bucal com diferentes graus de atipia / Comparative analysis between the coloring of toluidine blue and the immunoexpression of cyclin D1 in leucoplakias of the bucal mucosa with different degrees of atipia

O câncer de boca ocupa uma posição de destaque em relação ao número total de casos registrados no Brasil. A displasia epitelial (DE) oral é um achado histopatológico associado a um risco aumentado de transformação maligna do epitélio oral. A falha nos mecanismos de sinalização celular, no controle do ciclo celular ou nos mecanismos para reparar danos celulares pode favorecer a processos que culminam com a progressão para o câncer. Objetivo: avaliar comparativamente a resposta clínica da marcação do azul de toluidina (AT) e a imunoexpressão da proteína ciclina D1, uma proteína nuclear de grande importância como regulador da transição da fase G1 para fase S do ciclo celular, em leucoplasias oral (LO). Metodologia: avaliamos 12 pacientes que apresentavam, na cavidade bucal, lesões com diagnóstico clínico de LO. O estudo se desenvolveu em duas etapas: clínica e laboratorial. Foi feita marcação com AT e avaliação Imuno-histoquímica, respectivamente. Após análise quantitativa das lâminas, os dados obtidos foram analisados pelo programa BIOESTAT 2.0, por meio dos testes de Spearman e pelo teste de correlações múltiplas de Pearson. Resultados: não foi observada relação entre a marcação clínica do AT, o grau de displasia da lesão e a imunoexpressão da Ciclina D1 em LO. Conclusão: 82% das lesões apresentaram DE em graus variados, confirmando a necessidade de se realizar o diagnóstico histopatológico das LO e o acompanhamento clínico posterior dos pacientes.

Mouth cancer occupies a prominent position in relation to the total number of cases registered in Brazil. Oral epithelial dysplasia (ED) is a histopathological finding associated with an increased risk of malignant transformation of oral epithelium. The failure in the mechanisms of cell signaling, cell cycle control mechanisms or to repair cell damage can favor processes that culminate with the progression to cancer. Objective: evaluate comparatively the clinical response of the toluidine blue marking (TB) and immuno-expression of cyclin D1 protein, a nuclear protein of great importance as a factor regulating the transition from G1 phase to S phase of the cell cycle, in oral leukoplakia (OL). Methodology: we evaluated 12 patients who presented lesions in the oral cavity with clinical diagnosis of OL. The study was developed in two stages: Clinical and Laboratorial. Marking was made with TB and immunohistochemical evaluation, respectively. After quantitative analysis of blades, the data obtained were analyzed by BIOESTAT program 2.0 through Spearman tests and by Pearson multiple correlation test. Results: no relation was observed between clinical marking of TB, the degree of dysplasia of the lesion and the immuno-expression of Cyclin D1 in OL. Conclusion: 82% of the lesions presented DE in varying degrees, confirming the need to perform histopathological diagnosis of the OL and the subsequent clinical monitoring of the patients.

Comparative study of metachromatic staining methods in assessing the exfoliative cell types during oestrous cycle in Sprague-Dawley laboratory rats / Estudio comparativo de los métodos de tinción metacromática en la evaluación de los tipos de células exfoliativas durante el ciclo estral en ratas Sprague-Dawley de laboratorio

This study was aimed at comparing the commonly used metachromatic stains viz., Papanicolaou stain, WrightGiemsa, Toluidine blue and Methylene blue in the assessment of cell types of the oestrous cycle in rats. Eight female Sprague-Dawley rats aged 8-9 weeks were used for this assessment. Cotton Swabs were gently inserted in the animals vagina to obtain cells from which they were then transferred to glass slides for staining and evaluation under microscopy. The different cell types were compared for their morphological features and clarity of cellular detail under all four stains. The application, advantages and limitations of all stains were then discussed. It was concluded that the selection of the most effective stain in the assessment of vaginal cytology depends on their application to clinical or research which was based on the cellular detail of interest, time, cost and availability of each staining procedure.

El presente estudio tuvo como objetivo comparar las tinciones metacromáticas comúnmente utilizadas, Wright's-Giemsa, azul de toluidina, azul de metileno y tinción de Papanicolaou, en la evaluación de los tipos de células del ciclo estral en ratas. El estudio se realizó en ocho ratas hembras SpragueDawley, con edades entre 8 y 9 semanas, y se usaron hisopos vaginales de algodón para preparar portaobjetos. Los diferentes tipos de células se compararon por sus características morfológicas y claridad en las cuatro tinciones. La aplicación, ventajas y limitaciones de todas las tinciones fueron discutidas. Se concluye que la selección de la tinción más efectiva en la evaluación de la citología vaginal depende de su uso, es decir, clínico o de investigación, el detalle celular de interés, tiempo, costo y disponibilidad.

Adherence to standard precautions from the standpoint of the Health Belief Model: the practice of recapping needles / Adesão às precauções padrão sob o prisma do Modelo de Crenças em Saúde: a prática de reencapar agulhas

The aim of this study was to applythe Health Belief Model to explain the adherence to the recommendation not to recap needles by dentists and dental assistants of the public health system in a municipality in the State of São Paulo. A questionnaire validated and adapted for the oral health area was used, which included variables related to the frequency of recapping and health beliefs using Likert-type scales. The relationship between beliefs and adherence to the recommendation not to recap needles was obtained by regression analysis. Of all the professionals in this study (n=79), the majority (83.5%) reported recapping needles at least once in the last month. Through regression analysis, it was observed that the relationship between the beliefs described by the model and the attitude whether or not to follow the recommendation not to recap needles was explained by a lower perception of psychological barriers and a greater perception of stimuli not to recap needles. The conclusion reached is that the acceptance of recommendations to prevent working accidents with biological material was explained by some dimensions of the Health Belief Model, enabling discussion about reformulation of training offered to professionals of the public health system.

Objetivou-se neste estudo aplicar o Modelo de Crenças em Saúde a fim de explicar a adesão à recomendação de não reencapar agulhas por cirurgiões-dentistas e auxiliares de saúde bucal da rede pública de um município paulista. Utilizou-se um questionário validado e adaptado para a área de saúde bucal, que contemplava variáveis relativas à frequência do reencape e crenças em saúde, por meio de escalas tipo Likert. A relação entre as crenças e a adesão à recomendação de não reencapar agulhas foi obtida por meio da análise de regressão. Da amostra de profissionais obtida por adesão ao estudo (n = 79), a maioria (83,5%) relatou ter reencapado agulhas pelo menos alguma vez no último mês. Por meio da análise de regressão, foi observado que a relação entre as crenças descritas pelo modelo e a atitude de aderir ou não à recomendação de não reencapar agulhas foi explicada por uma menor percepção de barreiras psicológicas e por uma maior percepção de estímulos para não reencapar agulhas. Conclui-se que a aceitação das recomendações para prevenir acidentes do trabalho com material biológico foi explicado por algumas dimensões do Modelo de Crenças em Saúde, possibilitando a discussão sobre a reformulação de capacitações oferecidas para profissionais do sistema público de saúde.

The susceptibility of Streptococcus mutans to antibacterial photodynamic therapy: a comparison of two different photosensitizers and light sources

Streptococcus mutans is the main etiological agent for dental caries. Recently, photodynamic therapy (PDT) has been introduced as a new modality in bacterial decontamination. Objective: This in vitro study was carried out to evaluate the susceptibility of Streptococcus mutans to antibacterial PDT using two different photosensitizers and light sources. Material and Methods: Standard suspensions of S. mutans were exposed to laser light at 662 nm and Radachlorin® or LED 630 nm in combination with Toluidine blue O (TBO). Radiation-only groups, photosensitizer alone, and groups with no treatment were used as controls. Bacterial suspension from each treatment was subcultured onto the surface of Mueller-Hinton agar plates and bacterial growth was assessed. The results were analyzed by analysis of variance and Tukey test (p<0.05). Results: PDT with TBO and Radachlorin® significantly reduced S. mutans viability, whereas no difference was observed between two groups of PDT. In the groups treated just with the photosensitizer or irradiated alone, no significant reduction of S. mutans colonies was observed. Conclusion: S. mutans colonies were susceptible to either 662 nm laser or LED light in the presence of Radachlorin® and TBO respectively with no priority. .

Expressão de imunomarcadores em carcinomas epidermoides de boca / Expression of biological markers in oral squamous cell carcinomas

Squamous cell carcinomas are the most commonly diagnosed oral malignancy, accounting for about 90% of all malignant oral lesions. Detection of the condition at early stages is rare; as a result, the clinical and histological characteristics and prognosis of this tumor have not been extensively investigated. The objective of this study was to evaluate clinical and microscopic features of squamous cell carcinomas using immunohistochemical analysis and assessing biological markers of angiogenesis and tumor vascular activity (anti-CD31, anti-CD34, Factor VIII), cell proliferation (Ki-67), and loss of cell suppression (p53). Tolonium chloride 1% was used to determine the optimal biopsy site. Six patients seen at the Stomatology Service of a university hospital in Canoas, southern Brazil, with a suspected diagnosis of squamous cell carcinoma were analyzed. All patients were male, with a mean age of 56.6 years, and four had a white skin color. Lesions were detected in the tongue4 and tonsillar pillar2. All diagnoses were confirmed by microscopy (hematoxylin-eosin staining). Immunohistochemical analysis revealed p53 expression in 5 of the cases, Ki-67 in 6, and anti-CD34 in 1; anti-CD31 and Factor VIII were not detected in any patient. Our findings suggest an important contribution of tumor markers in the diagnosis and prognosis of these malignancies, as well as in treatment planning.

O carcinoma epidermoide é a neoplasia maligna bucal mais frequentemente diagnosticada, correspondendo a aproximadamente 90% de todas lesões malignas bucais. Sua detecção nos estágios iniciais da doença é rara; como resultado, tem sido difícil avaliar o comportamento clínico e histológico e o prognóstico deste tumor. O objetivo deste estudo foi avaliar clínica e microscopicamente o carcinoma epidermoide através de análise imuno-histoquímica, avaliando imunomarcadores tumorais angiogênicos e de atividade vascular tumoral (anticorpos anti-CD31, anti-CD34, Fator VIII), de proliferação celular (Ki-67) e de perda de supressão celular (p53). Azul de toluidina a 1% foi utilizado para determinar o local ideal da biópsia incisional. Foram analisados seis pacientes oriundos do Serviço de Estomatologia do hospital universitário localizado em Canoas, sul do Brasil, com hipótese diagnóstica de carcinoma epidermoide. Todos os pacientes eram do sexo masculino, com idade média de 56,6 anos, e quatro tinham pele branca. As lesões foram detectadas na língua4 e no pilar amigdaliano2. Todos os diagnósticos foram confirmados por microscopia (hematoxilina-eosina). A análise imuno-histoquímica revelou expressão de p53 em 5 dos casos, Ki-67 em 6 e anti-CD34 em 1; anti-CD31 e Fator VIII não apresentaram expressividade. Nossos resultados sugerem uma contribuição importante dos marcadores tumorais no diagnóstico e prognóstico dessas neoplasias, bem como no planejamento terapêutico.

Phototoxic action of light emitting diode in the in vitro viability of Trichophyton rubrum / Ação fototóxica do diodo emissor de luz na viabilidade de Trichophyton rubrum in vitro

BACKGROUND: Trichophyton rubrum is the most common agent of superficial mycosis of the skin and nails causing long lasting infections and high recurrence rates. Current treatment drawbacks involve topical medications not being able to reach the nail bed at therapeutic concentrations, systemic antifungal drugs failing to eradicate the fungus before the nails are renewed, severe side effects and selection of resistant fungal isolates. Photodynamic therapy (PDT) has been a promising alternative to conventional treatments. OBJECTIVES: This study evaluated the in vitro effectiveness of toluidine blue O (TBO) irradiated by Light emitting diode (LED) in the reduction of T. rubrum viability. METHODS: The fungal inoculums' was prepared and exposed to different TBO concentrations and energy densities of Light emitting diode for evaluate the T. rubrum sensibility to PDT and production effect fungicidal after photodynamic treatment. In addition, the profiles of the area and volume of the irradiated fungal suspensions were also investigated. RESULTS: A small reduction, in vitro, of fungal cells was observed after exposition to 100 µM toluidine blue O irradiated by 18 J/cm² Light emitting diode. Fungicidal effect occurred after 25 µM toluidine blue O irradiation by Light emitting diode with energy density of 72 J/cm². The analysis showed that the area and volume irradiated by the Light emitting diode were 52.2 mm² and 413.70 mm³, respectively. CONCLUSION: The results allowed to conclude that Photodynamic therapy using Light emitting diode under these experimental conditions is a possible alternative approach to inhibit in vitro T. rubrum and may be a promising new treatment for dermatophytosis caused by this fungus.

FUNDAMENTOS: Trichophyton rubrum é o agente mais comum das micoses superficiais de pele e unhas causando infecções de longa duração e altas taxas de recidiva. As desvantagens do tratamento atual envolvem medicações tópicas as quais não são capazes de alcançar o leito ungueal em concentrações terapêuticas, antifúngicos sistêmicos que não erradicam o fungo antes das unhas serem renovadas, efeitos colaterais graves e seleção de isolados fúngicos resistentes. A terapia fotodinâmica tem sido uma alternativa promissora aos tratamentos convencionais. OBJETIVOS: Este estudo avaliou a eficácia, in vitro, de azul de orto-toluidina irradiado por diodo emissor de luz na redução da viabilidade de T. rubrum. MÉTODOS: O inóculo fúngico foi preparado e exposto a diferentes concentrações de azul de orto-toluidina e densidades de energia do diodo emissor de luz, para avaliar a sensibilidade de T. rubrum e o efeito fungicida, após terapia fotodinâmica. Além disso, os perfis da área e volume das suspensões fúngicas irradiados também foram investigados. RESULTADOS: Uma pequena redução, in vitro, de células fúngicas foi observada após a exposição a 100 mM azul de orto-toluidina irradiados por diodo emissor de luz a 18 J/cm². Efeito fungicida ocorreu após irradiação 25 µM orto-toluidina por diodo emissor de luz com densidade de energia de 72 J/cm². A análise mostrou que a área e o volume irradiados pelo diodo emissor de luz foram 52,2 mm² e 413,70 mm³, respectivamente. CONCLUSÕES: Os resultados permitiram concluir que a terapia fotodinâmica com diodo emissor de luz, nas condições experimentais é uma abordagem alternativa para inibir, in vitro, T. rubrum e pode ser um tratamento promissor para as dermatofitoses causadas por este fungo.

Utilização do teste com o azul de toluidina como método auxiliar no diagnóstico de lesões orais / Toluidine blue test as an auxiliar method for the diagnosis of oral lesions

A avaliação clínica nem sempre é suficiente para garaA avaliação clínica nem sempre é suficiente para garantir o diagnóstico das lesões orais. O objetivo deste artigo é avaliar a validade do teste com o azul de toluidina como método auxiliar no diagnóstico de lesões orais. A amostra constituiu-se de 110 pacientes com lesões orais. Seguindo o protocolo estabelecido para este trabalho, todas as lesões foram submetidas ao teste do azul de toluidina. Um total de 105 lesões foram biopsiadas e a histopatologia considerada padrão-ouro diagnóstico. O teste do azul de toluidina foi positivo em 31 das 110 lesões, com 20 marcações focais e 11 difusas. Concluiu-se que, o teste do azul de toluidina é um recurso útil como método auxiliar no diagnóstico de lesões orais.

Diagnóstico microscópico de neumonía por Pneumocystis jirovecii en muestras de lavado broncoalveolar y lavado orofaríngeo de pacientes inmunocomprometidos con neumoníA / Microscopic diagnosis of Pneumocystis jirovecii pneumonia in bronchoalveolar lavage and oropharyngeal wash samples of immunocompromised patients with pneumonia

Introducción. El diagnóstico de neumonía por Pneumocystis jirovecii se fundamenta en la visualización microscópica del hongo en secreciones respiratorias. Técnicas moleculares recientes también lo han detectado en muestras de orofaringe, pero su utilidad diagnóstica es discutible. En Colombia, hay poca información al respecto. Objetivo. Comparar el rendimiento de dos coloraciones, azul de toluidina O e inmunofluorescencia directa, en muestras de lavado broncoalveolar y lavado orofaríngeo en pacientes inmunocomprometidos con neumonía. Materiales y métodos. Se llevó a cabo un estudio transversal de evaluación de pruebas diagnósticas en 166 pacientes inmunocomprometidos con sospecha de neumonía por P. jirovecii. Por protocolo, las muestras de lavado broncoalveolar y orofaríngeo se citocentrifugaron y se colorearon con azul de toluidina e inmunofluorescencia. Se determinó la proporción de resultados positivos con ambas tinciones en cada una de las muestras, y la concordancia entre ellas. Resultados. Se detectaron 24 casos de neumonía por P. jirovecii en las muestras de lavado broncoalveolar (14,5 %), 21 de los cuales fueron positivos por ambas pruebas, mientras que tres casos se detectaron sólo por inmunofluorescencia. Ninguna de las 166 muestras de lavado orofaríngeo fue positiva por cualquiera de estas técnicas. Al comparar las proporciones de resultados positivos, no se encontraron desacuerdos significativos (p=0,63). La concordancia (coeficiente kappa) entre ellas fue de 0,92 (IC95%: 0,84-1). Conclusiones. Ambas coloraciones son útiles para diagnosticar neumonía por P. jirovecii en muestras de lavado broncoalveolar. Sin embargo, el azul de toluidina no detecta, aproximadamente, el 12 % de los casos positivos por inmunofluorescencia. Las muestras de lavado orofaríngeo no son apropiadas para detectar microscópicamente P. jirovecii.

Introduction. The diagnosis of Pneumocystis jirovecii pneumonia is based on observation of the microorganism using several staining techniques in respiratory samples, especially bronchoalveolar lavage and induced sputum. Recently, the fungus also has been detected in oropharyngeal wash samples, but only using molecular tests. Objective. The diagnostic yield of two microscopic stains, toluidine blue O and direct fluorescent antibody, was compared in bronchoalveolar lavage and oropharyngeal wash samples for the detection of P. jirovecii in immunocompromised patients with pneumonia. Materials and methods. Cross-sectional evaluation diagnostic tests were used in 166 immunossupressed patients with suspected P. jirovecii. By protocol, bronchoscopic bronchoalveolar lavage and oropharyngeal wash samples were prepared by cytocentrifugation, and slides were stained with toluidine blue and fluorescent antibody. The proportion of positive results from each stain and concordance between them were determined. Results. Twenty-four cases (14.5%) of P. jirovecii were detected in bronchoalveolar lavage samples. Of them, 21 were positive by both toluidine blue and fluorescent antibody stains, whereas 3 cases were detected by fluorescent antibody alone. None of the 166 oropharyngeal wash samples were positive by either of these techniques. No significant differences were found between proportions from positive results (p=0.63). Concordance (kappa coefficient) between both stains was 0.92 (95% CI: 0.84-1.00). Conclusions. Both techniques were useful to diagnose P. jirovecii in bronchoalveolar lavage samples. However, toluidine blue stain did not detect 12% of fluorescent antibody positive cases. Oropharyngeal wash samples do not provide sufficient material for the microscopic identification of this fungus.

In Vitro Effect of photodynamic therapy on Aggregatibacter actinomycetemcomitans and Streptococcus sanguinis

New periodontal disease treatments are needed to prevent infection progression. Photodynamic therapy (PDT) is one of the greatest pledges for this purpose. It involves the use of light of specific wavelength to activate a nontoxic photosensitizing agent in the presence of oxygen for eradication of target cells, and can be used for photokilling of microorganisms. This study evaluated in vitro the photodynamic effect of 0.01 percent toluidine blue-O (TBO) in combination with an AlGaInP diode laser light source on Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a.) and Streptococcus sanguinis (S.s.). Suspensions (2 mL) containing A.a. and S.s. at 1.5 x 108 CFU/mL concentration were prepared and divided into 3 groups: Control group (no treatment), Dye group (inoculum and TBO for 5 min) and Dye/Laser group (inoculum, TBO for 5 min and laser for 3 min). Next, a dilution for subsequent subculture in 20 mL of Trypic Soy Agar (A.a) and Brucella Agar (S.s.) in Petri dishes (Pourplate Method) was done. Incubation of A.a. in microaerophilia and S.s. in aerobiosis at 35oC for 48 h was performed for subsequent visual counting of CFU/mL. Data were analyzed by one-way ANOVA and Tukey’s HSD test at 5 percent significance level. For both strains, the control group showed a significantly higher (p<0.05) bacterial growth (1.5 x 108 CFU/mL), while the Dye group presented no significant reduction (p>0.05) in the CFU counts. The Dye/Laser group presented a significant decrease in the CFU counts (p<0.05) compared with the Control group (61.53 percent for A.a. and 84.32 percent for S.s.). It may be concluded that PDT was effective in reducing the numbers of A.a. and S.s. in vitro.

Novos tratamentos são propostos para evitar a progressão da periodontite, sendo a terapia fotodinâmica (PDT) uma notória promessa. Sua aplicação associa o Azul de orto-toluidina a 0,01 por cento (TBO) e uma fonte luminosa a laser de diodo (TwinFlex, Mmoptics), liberando assim, toxinas às bactérias. O objetivo do estudo é avaliar in vitro a eficiência da PDT sobre Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a.) e Streptococcus sanguinis (S.s.). Preparou-se suspensões distintas de 2 mL contendo A.a. e S.s. na concentração de 1,5x108 UFC/mL, e divisão de cada suspensão em 3 grupos: Controle (sem tratamento); Corante (suspensão e TBO por 5min) e Corante/Laser (suspensão, TBO por 5 min e laser por 3 min). Promoveu-se a diluição, a semeadura em 20 mL de TSA (A.a.) e de Ágar Brucella (S.s.), em placas de Petri (Método Pourplate), e a incubação da A.a. em microaerofilia e da S.s. em aerobiose, por 48 h a 35oC, para posterior contagem visual das UFC. Os grupos Controle mostraram ótimo crescimento bacteriano (1,5 x 108 UFC/mL). Os grupos Corante não apresentaram redução significativa para ambas bactérias. Os grupos Laser apresentaram redução em relação ao controle, 61,53 por cento para A.a. e 84,32 por cento para S.s. A análise estatística (ANOVA, p<0,05) corrobou que a PDT é eficaz na redução destas bactérias in vitro.

Mast cells and angiogenesis in canine mammary tumor / Mastócitos e angiogênese nos tumores mamários caninos

The correlation between microvessel density and mast cells density in canine mammary tumors was studied. Sixty-five samples of canine mammary tumors, being 24 benign and 41 malignant, were analyzed. The routine Toluidine Blue staining method was used to assess the mast cells. To evaluate angiogenesis, the immunohistochemical expression of CD31 was assessed. There was no significant difference in either mast cells (P=0.44) or microvessel density (P=0.77) between malignant and benign tumors. A positive correlation was observed between microvessel density and mast cells (r=0.39; P=0.011) in malignant tumors. These results suggest that mast cells may play a role in canine mammary malignant tumors development, promoting angiogenesis, similar to some tumors described in the human species.

Estimou-se a correlação entre a densidade de microvasos e a densidade de mastócitos em tumores mamários caninos. Sessenta e cinco amostras de tumores mamários caninos - 24 benignos e 41 malignos - foram analisadas, pela técnica rotineira de coloração com Azul de Toluidina para avaliação da densidade de mastócitos. Para a avaliação da angiogênese, foi utilizada a técnica de imunoistoquímica para expressão de CD31. Não foram observadas diferenças significativas de mastócitos (P=0.44) ou densidade microvascular (P=0.77) entre tumores malignos e benignos. A correlação entre densidade microvascular e densidade de mastócitos foi positiva (r=0,39; P=0,011) em tumores malignos. Estes resultados sugerem que os mastócitos podem exercer um importante papel no desenvolvimento de tumores mamários malignos caninos mediante promoção da angiogênese, similarmente a alguns tumores descritos na espécie humana.

Radiographic assessment of photodynamic therapy as an adjunctive treatment on induced periodontitis in immunosuppressed rats

OBJECTIVE: The aim of this study was to assess radiographically the effect of photodynamic therapy (PDT) as an adjunctive treatment to scaling and root planing (SRP) on induced periodontitis in dexamethasone-induced immunosuppressed rats. MATERIAL AND METHODS: The animals were divided into 2 groups: ND group (n=60): saline treatment; D group (n=60): dexamethasone treatment. In both ND and D groups, periodontal disease was induced by the placement of a ligature in the left first mandibular molar. After 7 days, ligature was removed and all animals received SRP, being divided according to the following treatments: SRP: saline and PDT: phenothiazinium dye (TBO) plus laser irradiation. Ten animals per treatment were killed at 7, 15 and 30 days. The distance between the cementoenamel junction and the height of the alveolar bone crest in the mesial surface of the mandibular left first molars was determined in millimeters in each radiograph. he radiographic values were analyzed statistically by ANOVA and Tukey's test at a p value <0.05. RESULTS: Intragroup radiographic assessment (ND and D groups) showed that there was statistically signifcant less bone loss in the animals treated with PDT in all experimental periods compared to those submitted to SRP. Intergroup radiographic analysis (ND and D groups) demonstrated that there was greater bone loss in the ND group treated with SRP compared to the D group treated with PDT at 7 and 30 days. CONCLUSION: PDT was an effective adjunctive treatment to SRP on induced periodontitis in dexamethasone-induced immunosuppressed rats.

Contact endoscopy (Stomatoscopy) versus histological diagnosis of lesions of the lower lip vermilion area

In Brazil, the incidence of oral cavity cancer is estimated at 14,160 new cases in 2008. Contact endoscopy (stomatoscopy) applied to the oral cavity may favor early diagnosis. The aim of this study is to compare the contact endoscopy diagnosis to histological diagnosis of lesions of the lower lip vermilion area. Fifty-three prospective, ex vivo, non-consecutive lesions of the lip vermilion area were stained with toluidine blue solution, examined with stomatoscopy and directly biopsied. False-negatives did not occur and false-positives represented 9.4 percent. Sensitivity to diagnosis of malignancy was 100 percent, specificity was 88 percent, positive predicted value was 70.5 percent, negative predictive value was 100 percent and accuracy was 90.3 percent. Sensitivity and specificity of the contact endoscopy were high and the positive predictive value in relation to diagnosis of malignant lesions was good. Thus, stomatoscopy may be useful to diagnose lesions of the lower lip vermilion area.

Análise computacional da compactação da cromatina de espermatozoides de galo / Computational analysis of chromatin condensation of rooster spermatozoa

Testaram-se variantes metodológicas utilizando azul de toluidina (AT), até se estabelecer um protocolo confiável para a avaliação computacional da compactação da cromatina em espermatozoides de galo. Para tal, foram utilizados sêmen de 10 galos com 35 semanas de idade e sêmen de 10 galos com 60 semanas de idade. O melhor método foi o de hidrólise com ácido clorídrico 1N por 10 minutos, coloração em cubeta com AT 0,025 por cento, pH 4,0, por 20 minutos, desidratação em álcool, diafanização em xilol e montagem com bálsamo do Canadá. Todas as amostras de sêmen foram submetidas a este protocolo e posteriormente avaliadas por análise de imagem computacional, em que foram feitas mensurações da área, comprimento, largura, perímetro, homogeneidade da compactação da cromatina dentro de cada cabeça e intensidade de compactação da cromatina. Os espermatozoides de galos velhos apresentaram mais alterações na cromatina que os de galos jovens. Os galos jovens apresentaram cabeça dos espermatozoides maior que os galos mais velhos. A análise computacional da compactação da cromatina mostrou-se um método menos subjetivo e mais preciso que a avaliação visual das cabeças dos espermatozoides.

The methodological variants using toluidina blue (AT) to establish a trustworthy protocol for the computational analysis of chromatin condensation of rooster spermatozoa were studied. Twenty semen samples were used: ten from 35-week-old roosters and ten from 60-week-old roosters. Different methods of denaturation and staining were tested. The best method was hydrolysis with 1N HCl for 10 minutes, staining in bucket with 0.025 percent AT, pH 4.0, for 20 minutes, dehydration in alcohol, clearing in xylol, and mounted with Canada balsam. All the semen samples were submitted to this protocol and later evaluated by computational image analysis. Area, length, width, perimeter, and chromatin compaction homogeneity of head spermatozoa were measured. The sperm of older roosters presented more chromatin changes than the ones of younger ones. The spermatozoa of younger roosters presented bigger heads than the ones of older roosters. The computational analysis of chromatin compaction showed to be less subjective and more precise than the visual evaluation for identification of chromatin alterations of rooster spermatozoa.

Utilização da terapia fotodinâmica associada ou não ao hipoclorito de sódio na instrumentação de canais radiculares contaminados com Enterococcus faecalis / The use of photodynamic therapy associated or not to sodium hypochlorite in the instrumentation of radicular canals contaminated by Enterococcus faecalis

O presente trabalho teve por objetivo avaliar a ação do laser de baixa intensidade associado ao corante azul de toluidina, como agente bactericida durante a fase de instrumentação dos canais radiculares, comparando sua utilização associada ou não ao hipoclorito de sódio 0,5%. Para tal, 90 caninos humanos foram instrumentados, autoclavados e 88 imersos em caldo TSB (Tryptcase Soy Broth). Em seguida foram inoculados com suspensão de E. faecalis e incubados em estufa a 37°C, por 72 horas, para permitir a formação do biofilme. As amostras foram randomicamente divididas em 4 grupos de 22 dentes cada e 1 grupo controle negativo com 2 dentes. Grupo I: reinstrumentados e irrigados com soro fisiológico com posterior aplicação de terapia fotodinâmica (PDT); Grupo II: reinstrumentados e irrigados com hipoclorito de sódio a 0,5% com posterior aplicação de PDT; Grupo III: reinstrumentados e irrigados com hipoclorito de sódio a 0,5%; Grupo IV controle positivo: não foi realizado nenhum tipo de tratamento antes da coleta do material e Grupo V controle negativo: não foram contaminados. Para a coleta da dentina intracanal utilizou-se uma broca Gates Glidden número 6. A atividade antimicrobiana foi avaliada por meio da contagem de UFCs (unidades formadoras de colônias). Os dentes foram então imersos em meio seletivo para enterococos, incubados em estufa a 37º C por 72 horas e avaliados quanto à alteração de coloração do meio. Todas as amostras, exceto o controle negativo, apresentaram-se positivas. Com a finalidade de certificar-se da formação do biofilme e da confirmação dos resultados das contagens das UFCs, 9 amostras foram avaliadas ao MEV (microscopia eletrônica de varredura)...

This current paper aims to assess the action of low-intensity laser together with toluidine blue as a bactericidal agent during the instrumentation phase of radicular canals, comparing its associated or non-associated use with sodium hypochlorite 0.5%. To do so, 90 human canines were instrumented, autoclaved, and 88 were immersed into TSB, and were then inoculated with an E. faecalis suspension and brought into an incubator at 37 degrees Celsius for 72 hours in order to allow the formation of biofilm. The samples were randomly divided into 5 groups, 4 of which composed of 22 samples each plus 1 negative control. Group I: reinstrumented and irrigated with saline solution and subsequent application of photodynamic therapy (PDT); Group II: reinstrumented and irrigated with sodium hypochlorite 0.5% and subsequent PDT application; Group III: reinstrumented and irrigated with sodium hypochlorite 0.5%; Group IV: positive control (no previous treatment before material collection); Group V: negative control (2 samples) with no contamination. The collection of intracanal dentin was obtained by using a Gates Glidden drill nr. 6. The antimicrobial activity was assessed by CFUs counting. The teeth were then immersed in a selected medium for Enterococcus, incubated at 37 degrees Celsius for 72 hours. They were then assessed for medium turbidity. All samples, with the exception of the negative control, showed positive. In order to make sure of the formation of biofilm and the confirmation of the CFUs counting, 9 samples were scavenged under the electron microscope...

Comparative analysis of the mast cell density in normal oral mucosa, actinic cheilitis and lip squamous cell carcinoma

Previous studies have shown that the number of mast cells is increased in ultraviolet (UV) irradiated skin and in neoplasias. Actinic cheilitis (AC) is a lesion caused by excessive exposure to sunlight that can transform into lip squamous cell carcinoma. The aim of this study was to compare the number of mast cells in 4 groups: NOM = normal oral mucosa (n=6); MDAC = mild dysplasia in actinic cheilitis (n=13); SDAC = severe dysplasia in actinic cheilitis (n=13); and LSCC = lip squamous cell carcinoma (n=15). The sections were stained by histochemical technique of blue toluidine and visual counting was performed with the aid of a reticulum coupled to the microscope ocular. A calibrated observer performed the count in 5 fields by case at ×400 magnification. The largest mean number of mast cells per group was observed in LSCC (40.1), followed by MDAC (30.5), SDAC (28.6) and NOM (12.2). There were significant differences between NOM and MDAC (p<0.05) and between NOM and LSCC (p<0.05). The increased density of mast cells observed in AC and in LSCC compared to NOM suggests a role for the mast cells in the development of these lesions.

Estudos prévios mostram que os mastócitos estão significantemente aumentados na pele irradiada por ultra-violeta e neoplasias. A queilite actínica (QA) é uma lesão causada por excessiva exposição solar, que pode transformar-se em carcinoma espinocelular de lábio. O objetivo deste estudo foi comparar o número de mastócitos em 4 grupos: MON = mucosa oral normal (n=6); QADL = queilite actínica com displasia leve (n=13); QADS = queilite actínica com displasia severa (n=13); e CECL = carcinoma espinocelular de lábio (n=15). Os cortes foram corados pela técnica histoquímica do azul de toluidina e a contagem visual foi realizada utilizando um retículo acoplado à ocular do microscópio. Um observador calibrado realizou a contagem em 5 campos por caso em magnificação de ×400. A média de mastócitos por grupo foi maior no CECL (40,1), seguida da QADL (30,5), QADS (28,6) e MON (12,2). Houve diferença estatisticamente significante entre MON e QADL (p<0,05) e entre MON e CECL (p<0,05). A maior densidade de mastócitos na QA e no CECL em relação à MON sugere um papel para os mastócitos no desenvolvimento dessas lesões.