Bio prospecting of Riboflavin producing bacteria from different riboflavin enriched food sources

Riboflavin is an essential, water-soluble vitamin (B2) and a component of basic cellular metabolism. The aim of the present study is to isolate and characterize riboflavin producing bacteria from different food sources. Ten different riboflavin enriched food sources were collected from Vellore district. Totally 72 bacterial strains were isolated and cultured on nutrient agar plates. Out of these, 43 strains were identified as riboflavin producers. Isolated bacterial strains HDS27, HDS07, HDS14, HDS18, HDS38 and HDS54 isolated from milk, mushroom, spinach, lamb kidney, beef liver and mackerel fish were found to be potent riboflavin producers. Based on morphological, biochemical and molecular characterization, the potent strains were identified as Lactobacillus plantarum (HDS27), Bacillus cereus (HDS07), Delftia tsuruhatensis (HDS14), Citrobacter freundii (HDS18), Enterobacter cloacae (HDS38) and Bacillus cereus (HDS54). The selected potent isolates HDS27 from milk and HDS07 from mushroom showed a maximum riboflavin production of 3.69 mg/L and 2.9mg/L respectively. The present study explores the riboflavin producing novel bacteria from different food sources. This is the first report that the Enterobacter cloacae isolated from beef liver, Delftia tsuruhatensis from spinach and Citrobacter freundii from lamb kidney has the ability to produce riboflavin. These potent strains could be a better starter for substituting the conventional bacteria for large scale production of riboflavin in industry.

Corneal crosslinking efficacy in patients with keratoconus under 18 years of age / Eficácia do crosslinking corneano em portadores de ceratocone com idade inferior a 18 anos

ABSTRACT Purpose: Keratoconus presents certain specificities in pediatric patients compared with adults. The greatest challenge is because the disease is typically more severe and progresses faster in children. This retrospective study aimed to report crosslinking procedure in patients under 18 years of age and their follow-up for at least 24 months after the procedure. Methods: Overall, 12 eyes from 10 patients were studied and data, such as visual acuity with and without correction, maximum keratometry, corneal thickness, foveal thickness, and endothelial microscopy, were assessed at both preoperative and postoperative visits. Corneal crosslinking was performed in all patients. Results: A tendency toward reduced Kmax and improved Corrected Distance Visual Acuity at all postoperative moments. Only one of the 12 eyes exhibited increased Kmax of more than 1 D during a time frame longer than 12 months. Regarding pachymetry, a tendency for corneal thinning was observed in the first four months after surgery. Conclusion: Encouraging results were obtained regarding the stabilization of the disease, progression, and procedural safety, corroborating to other authors' findings. The significance of early diagnosis and short-term follow-up were highlighted.

RESUMO Objetivo: O ceratocone na população pediátrica apresenta algumas particularidades em relação à população adulta. O maior desafio é devido à doença ser geralmente mais severa e rapidamente progressiva em crianças. Métodos: Este artigo utiliza uma análise retrospectiva para relatar o uso do crosslinking em jovens menores de 18 anos e sua evolução pelo menos 24 meses após o procedimento. Foram estudados 12 olhos de 10 pacientes, e dados como acuidade visual com e sem correção, ceratometria máxima, espessura corneana, espessura foveal e microscopia endotelial avaliados no pré e pós-operatórios. O crosslinking corneano foi realizado em todos os pacientes pelo mesmo cirurgião. Resultados: Observou-se uma tendência de redução do valor do Kmax e melhora da acuidade visual corrigida em todos os momentos de pós operatório. Com relação à paquimetria, observou-se afinamento corneano do ponto mais fino, nos primeiros quatro meses de pós-operatório. Conclusão: Resultados encorajadores foram obtidos com relação à estabilização da doença, progressão e segurança do procedimento, corroborando com as conclusões de outros autores. A importância do diagnóstico precoce e do acompanhamento a curto prazo do paciente deve ser destacada.

Use of gabapentin in management of postoperative pain after crosslinking / Uso da gabapentina no manejo da dor pós-operatória do crosslinking

ABSTRACT Objective: The objective was to evaluate the efficacy of gabapentin in the management of neuropathic pain in patients with keratoconus, who were treated with fast (10 minutes) epi-off corneal crosslinking (CXL). Methods: This was a prospective, double-blind, randomized study. The sample comprised patients with bilateral progressive keratoconus, aged 12 years or older, who underwent a bilateral epi-off corneal CXL (fast - 10 minutes) procedure. One group was given placebo orally, and the other group received gabapentin 600 mg orally, both preoperatively. The visual analogue scale (VAS) was applied to record postoperative pain up to 48 hours after procedure. The study was conducted at the Belotto Stock Centro Oftalmológico, in the city of Joaçaba, Santa Catarina, Brazil, from June 2018 to September 2019. Results: At no point in the study significant differences were observed between groups, in terms of pain intensity measured by means of the VAS questionnaire, or of opioid use (Paco®), though opioid consumption was 21% lower in the group receiving gabapentin. Conclusion: We concluded gabapentin has no efficacy in postoperative pain control after epi-off corneal CXL (fast - 10 minutes). Although there was no statistically significant difference, the group that received gabapentin suffered less pain, resulting in lower opioid consumption. UTN number: U1111-1256-0330.

RESUMO Objetivo: Avaliar a eficácia do uso da gabapentina no manejo da dor neuropática em pacientes portadores de ceratocone submetidos ao tratamento de crosslinking corneano epi-off fast de 10 minutos. Métodos: Tratou-se de pesquisa prospectiva, duplo-cega, randomizada. A amostra foi composta de pacientes com ceratocone progressivo bilateral, a partir dos 12 anos de idade, submetidos ao procedimento de crosslinking corneano acelerado epi-off fast de 10 minutos bilateral. Um grupo recebeu placebo via oral e o outro, gabapentina 600mg, via oral, ambos no pré-operatório. A Escala Visual Analógica foi aplicada para registrar a dor pós-operatória até 48 horas após o procedimento. A pesquisa foi realizada no período de junho de 2018 a setembro de 2019 em um centro oftalmológico. Resultados: Não foram observadas diferenças estatísticas significativas para ambos os grupos, tanto na intensidade da dor medida pela Escala Visual Analógica, como na redução do uso do opioide (Paco®), em qualquer horário analisado durante um período de 48 horas. No entanto, houve redução de 21% no consumo de opioides pelo grupo que fez uso da gabapentina. Conclusão: A gabapentina não demonstrou eficácia no controle da dor no pós-operatório do crosslinking corneano epi-off fast de 10 minutos. No entanto, observou-se que, mesmo não havendo diferença estatisticamente significativa, houve diminuição da dor no grupo em que foi usada a gabapentina, resultando na redução do consumo de opioides. Número UTN: U1111-1256-0330.

Accelerated corneal cross-linking with hypo-osmolar riboflavin in thin keratoconic corneas: 2-year follow-up / Cross-linking corneano acelerado com riboflavina hiposmolar em córneas ceratocônicas finas: 2 anos de acompanhamento

ABSTRACT Purpose: This study was performed to evaluate the outcomes of accelerated corneal cross-linking in keratoconic corneas with thinnest pachymetry values of <400 µm. Methods: The study included 28 eyes of 24 patients. The uncorrected and best-corrected visual acuities (logMAR), flattest and steepest keratometric readings, central corneal thickness at the thinnest point, corneal higher-order aberrations, and contrast sensitivity were assessed before and at 1, 3, 6, 12, and 24 months after corneal cross-linking. Result: The mean best-corrected visual acuity and contrast sensitivity increased (p=0.02, p=0.03, respectively), whereas the mean uncorrected visual acuity did not significantly differ (p>0.05) at 24 months after corneal cross-linking, compared with measurements before corneal cross-linking. Although the mean flattest keratometric reading showed no significant change (p=0.58), the mean steepest keratometric reading was reduced when compared with its value before corneal cross-linking (p=0.001). No change was observed in the mean central corneal thickness at the thinnest point at 24 months after corneal cross-linking, compared with its value before corneal cross-linking (p=0.12). Conclusion: Accelerated corneal cross-linking in keratoconic eyes with thin corneas could halt the progression of keratoconus in corneas thinner than 400 µm at 24 months after treatment.

RESUMO Objetivo: Este estudo foi realizado para avaliar os resultados do cross-linking corneano acelerado em córneas ceratocônicas com os valores mais baixos de paquimetria <400 µm. Métodos: O estudo incluiu 28 olhos de 24 pacientes. As acuidades visuais não corrigidas e melhor corrigidas (logMAR), leituras ceratométricas mais planas e íngremes, espessura corneana central no ponto mais fino, aberrações corneanas de mais alta ordem e a sensibilidade ao contraste foram avaliadas antes e em 1, 3, 6, 12 e 24 meses após a realização do do cross-linking. Resultados: A média da acuidade visual melhor corrigida e a sensibilidade ao contraste aumentaram (p=0,02, p=0,03, respectivamente), enquanto a média da acuidade visual não corrigida não diferiu significativamente (p>0,05) aos 24 meses após o cross-linking, comparada com medidas antes do procedimento. Embora a leitura da média da ceratometria mais plana não tenha apresentado alteração significativa (p=0,58), a leitura ceratométrica mais íngreme diminuiu quando comparada ao seu valor antes do cross-linking (p=0,001). Não foi observada alteração na média da espessura corneana central no ponto mais fino aos 24 meses após o cross-linking em comparação com seu valor antes do procedimento (p=0,12). Conclusão: O cross-linking corneano acelerado nos olhos ceratocônicos com córneas finas pode interromper a progressão do ceratocone nas córneas mais finas que 400 µm 24 meses após o tratamento.

Análise da eficácia do crosslinking transepitelial em pacientes portadores de ceratocone / Analysis of the effectiveness of transepithelial crosslinking in patients with keratoconus

Resumo Objetivo: Avaliar os resultados clínicos do Crosslinking Transepitelial (CXL) analisando sua eficácia em pacientes portadores de ceratocone progressivo. Métodos: Estudo transversal retrospectivo com 49 olhos e 37 pacientes com idades entre 10 e 50 anos, submetidos à técnica de CXL em 2017 no Instituto Panamericano da Visão, em Goiânia, Goiás, Brasil. Foi utilizado o sistema KXL Avedro programado no modo pulsado com intervalo (1/1 segundo), usando 45 mW/cm² com 7,2 J e solução de riboflavina a 0,25% da Avedro com córneas irradiadas por 8 minutos. Foram coletados os dados: sexo, idade, acuidade visual sem correção (AVSC), acuidade visual com correção (AVCC), astigmatismo, paquimetria no ponto mais fino e astigmatismo ceratométrico no pré-operatório e pós-operatório com 1, 6 e 12 meses. Foram utilizados os testes Kolmogorov-Smirnov, Qui-quadrado de Pearson, Friedman, Dunnett à posteriori e a correlação de Spearman. Resultados: Vinte e três pacientes (62,2%) eram do sexo feminino e 14 (37,8%) do sexo masculino. A média de idade foi de 27,89 (±10,89) anos. A AVSC e AVCC melhoraram significativamente no pré-operatório em relação a 1 mês (p=0,01) e (p<0,001), 6 meses (p<0,001 ambas) e 12 meses (p<0.001 ambas). O astigmatismo reduziu significativamente no pré-operatório em relação a 6 meses (p=0,02) e 12 meses (p=0,02). A paquimetria no ponto mais fino manteve-se constante no período (p=0,95). A diferença entre k2 e k1 (astigmatismo ceratométrico) mostrou redução significativa no pré-operatório em relação a 1 mês (p=0,01). Conclusão: A técnica de CXL foi segura e eficaz no tratamento e estagnação da doença em pacientes com ceratocone progressivo.

Abstract Objective: To evaluate the clinical results of Transepithelial Crosslinking (CXL) by analyzing its efficacy in patients with progressive keratoconus. Methods: Retrospective cross-sectional study with 49 eyes and 37 patients aged 10 to 50 years submitted to the CXL technique in 2017 at the Instituto Panamericano da Visão, in Goiânia, Goiás, Brazil. The Avedro KXL system was programmed in pulsed mode with interval (1/1 second), using 45 mW/cm² with 7.2 J and 0.25% riboflavin solution of Avedro with irradiated corneas for 8 minutes. Data were collected: sex, age, uncorrected distance visual acuity (UDVA), corrected distance visual acuity (CDVA), astigmatism, pachymetry at the thinnest point and keratometric astigmatism in the preoperative and postoperative periods at 1, 6 and 12 months. The Kolmogorov-Smirnov, Pearson's Chi-square, Friedman, Dunnett, and the Spearman correlation were used. Results: Twenty-three patients (62.2%) were female and 14 (37.8%) male. The mean age was 27.89 ± 10.89 years. The UDVA and CDVA significantly improved in the preoperative period in relation to 1 month (p = 0.01) and (p <0.001), 6 months (p <0.001 both) and 12 months (p <0.001 both). Astigmatism significantly reduced preoperatively in relation to 6 months (p = 0.02) and 12 months (p = 0.02). The pachymetry at the thinnest point remained constant in the period (p = 0.95). The difference between k2 and k1 (keratometric astigmatism) showed a significant reduction in the preoperative period in relation to 1 month (p = 0.01). Conclusion: The CXL technique was safe and effective in the treatment and stagnation of the disease in patients with progressive keratoconus.

Accelerated collagen cross-linking in the management of advanced Acanthamoeba keratitis / Cross-linking acelerado de colágeno no controle da ceratite por Acanthamoeba avançada

ABSTRACT Purpose: To report our initial experience in the treatment of Acanthamoeba keratitis with accelerated corneal collagen cross-linking. Methods: Retrospective chart review of patients diagnosed with Acanthamoeba keratitis with progressive corneal melting who were treated with accelerated collagen cross-linking. Results: A total of 6 eyes (5 patients) were reviewed. All the patients received adjuvant therapy with moxifloxacin and chlorhexidine. In 4 cases, the ulcer healed with a mean interval to epithelialization of 108.8 days (range 59-217). In 2 eyes, there was a persistent neurotrophic ulcer. The melting was not progressive in any case, nor did any eye required emergency penetrating keratoplasy. Conclusion: This study suggests a beneficial effect of accelerated collagen cross-linking in cases of Acanthamoeba keratitis with corneal melting. Thus, collagen cross-linking may be considered as adjuvant treatment for Acanthamoeba keratitis.

RESUMO Objetivo: Relatar nossa experiência inicial no tra tamento da ceratite por Acanthamoeba com reticulação acelerada de colágeno corneano. Métodos: Revisão retrospectiva de prontuários de pacientes diagnosticados com ceratite por Acanthamoeba, com deformação progressiva da córnea, tratados com reticulação acelerada de colágeno. Resultados: Seis olhos (5 pacientes) foram incluídos. Todos os pacientes receberam terapia adjuvante com moxifloxacina e clorexidina. Em 4 casos, a úlcera cicatrizou com uma média de epitelização de 108,8 dias (amplitude de 59-217 dias). Em dois pacientes, a úlcera apresentou um comportamento neurotrófico. A deformação não foi progressiva em nenhum dos pacientes e nenhum dos olhos exigiu ceratoplastia penetrante de emergência. Conclusão: Este estudo sugeriu um efeito benéfico da reticulação acelerada de colágeno em casos de ceratite por Acanthamoeba infecciosa com deformação corneal. A reticulação de colágeno parece ser uma alternativa coadjuvante possível para casos de ceratite por Acanthamoeba.

Effect of accelerated corneal crosslinking on ocular response analyzer waveform-derived parameters in progressive keratoconus / Efeito do crosslimking corneano acelerado nos parâmetros derivados da forma de onda do analisador de resposta ocular no ceratocone progressivo

ABSTRACT Purpose: To evaluate the effect of accelerated corneal crosslinking on corneal biomechanics with an ocular response analyzer in patients with progressive keratoconus. Methods: In this retrospective study, 50 eyes of 45 patients with progressive keratoconus who underwent accelerated corneal crosslinking were evaluated with ocular response analyzer waveform parameters before and one year after corneal crosslinking. Paired two-tailed Student's t-test was performed to compare the parameters before vs. after corneal crosslinking. Results: Mean patient age was 17.6 ± 3.6 (range 9-25) years. A significant increase was observed in p1 area, p2 area, h2, and dive2 values. No significant difference in corneal hysteresis, corneal resistance factor, or other waveform-derived parameters was observed at one year postoperatively. Conclusion: For estimating the effect of accelerated corneal crosslinking on corneal biomechanics, parameters such as p1 area, p2 area, h2, and dive2 are more sensitive than corneal hysteresis and corneal resistance factor. These results may help us to find out which corneal crosslinking method is most effective for stiffening the cornea.

RESUMO Objetivo: Avaliar o efeito do cross-linking corneano acelerado na biomecânica corneana com analisador de resposta ocular em pacientes com ceratocone progressivo. Métodos: Neste estudo retrospectivo, 50 olhos de 45 pacientes com ceratocone progressivo submetidos à cross-linking corneano acelerado foram avaliados com os parâmetros da forma de onda do analisador de resposta ocular antes e um ano após o tratamento com cross-linking corneano. O teste t de Student pareado bicaudal foi realizado para comparar os parâmetros antes e depois do cross-linking corneano. Resultados: A média de idade dos pacientes foi de 17,6 ± 3,6 (variação de 9 a 25) anos. Um aumento significativo foi observado nos valores de p1area, p2area, h2 e dive2. Nenhuma diferença significativa foi encontrada na histerese da córnea, fator de resistência da córnea ou outros parâmetros derivados da forma de onda foi observada em um ano de pós-operatório. Conclusão: Para estimar o efeito do cross-linking corneano acelerado na biomecânica corneana, parâmentros como p1area, p2area, h2 e dive2 são mais sensíveis que histerese da córnea e fator de resistência corneana. Esses resultados podem nos ajudar a descobrir qual método cross-linking corneano é mais eficaz no enrijecimento da córnea.

Consumo de bebidas energizantes en estudiantes universitarios / Consumption of energy drinks in university students

Las bebidas energizantes son productos que se consumen para reducir la sensación de cansancio y favorecer un estado activo, contienen principalmente cafeína, glucosa, glucoronolactona, taurina, guaraná vitaminas B1 (tiamina), vitamina B2 (riboflavina), vitamina B3 (niacina), vitamina B6 (piridoxina). El Objetivo de esta investigación fue determinar la frecuencia del consumo de las bebidas energizantes en los estudiantes de la Universidad Mayor Real y Pontificia de San Francisco Xavier de Chuquisaca y describir los posibles efectos adversos. Se trata de un estudio descriptivo, transversal, cuantitativo realizado en 367 estudiantes universitarios de las áreas de Salud, Económicas - Financieras, Sociales Humanidades, Tecnológicas y Agrarias. Para la recolección de datos se aplicó la encuesta. Entre los resultados se obtuvo que, del total de estudiantes encuestados, 69,21% si han consumido las bebidas energizantes, con una frecuencia de consumo de 2 a 3 veces por mes (39%), principalmente durante los parciales (18.80%) y después de realizar algún deporte (16.89%). Entre las marcas más consumidas de estas bebidas son red bull (30,25%) y power (14,99%).

Energy drinks are products that are consumed to reduce the feeling of tiredness and promote an active state, mainly contain caffeine, glucose, glucoronolactone, taurine, guarana B1 vitamins (thiamine), vitamin B2 (riboflavin), vitamin B3 (niacin), vitamin B6 (pyridoxine). The objective of this research was to determine the frequency of the consumption of energy drinks in the students of the Universidad Mayor Real and Pontificia de San Francisco Xavier de Chuquisaca and describe the possible adverse effects. This is a descriptive, cross-sectional, quantitative study conducted on 367 university students in the areas of health, economic - financial, social - humanities, technological and agricultural. The survey was applied to data collection. Among the results it was obtained that, of the total number of students surveyed, 69.21% if they have consumed the energy drinks, with a frequency of consumption of 2 to 3 times per month (39%), mainly during the partial ones (18.80%) and after performing some sport (16.89%). Among the most consumed brands of these drinks are red bull (30.25%) and power (14.99%).

Ácido fólico em excesso: efeitos sobre o metabolismo das vitaminas B2 e B6, o catabolismo do triptofano e a resposta imune / Folic acid excess: effects on vitamin B2 and B6 metabolism, tryptophan catabolism and immune response

Introdução: A suplementação com ácido fólico (AF) é recomendada em algumas condições para evitar a deficiência de folato, como para mulheres no período periconcepcional e durante a gestação. Atualmente, existe uma preocupação quanto ao consumo excessivo de AF pela população pelo uso de suplementos com altas doses dessa vitamina. As vitaminas B6 e B2 agem como cofatores no metabolismo de um carbono, e o uso de altas doses de AF pode influenciar o metabolismo de ambas vitaminas e, consequentemente, interferir em metabolismos importantes das quais elas participam, como a via das quinureninas, e no sistema imune. Objetivo: Avaliar os efeitos da intervenção diária com uma alta dose de AF (5 mg) por 90 dias sobre marcadores do estado das vitaminas do complexo B, e as consequências sobre os metabólitos da via das quinureninas e o sistema imune em adultos saudáveis. Material e Métodos: 64 indivíduos saudáveis foram submetidos à intervenção diária com 5 mg de AF por 90 dias. Coletas de sangue foram realizadas antes (baseline) e após 45 e 90 dias de intervenção. As concentrações séricas de folato e vitamina B12 foram avaliadas por métodos microbiológicos. As concentrações séricas das vitaminas B6 (piridoxal 5'-fosfato (PLP), piridoxal (PL) e ácido 4-piridóxico (PA)), B2 (riboflavina e flavina mononucleotídeo (FMN)), B1 (tiamina e tiamina monofosfato (TMP)) e B3 (ácido nicotínico, nicotinamida e N1-metilnicotinamida), bem como de triptofano, quinurenina e metabólitos, foram avaliadas por LC-MS/MS. A proteína C-reativa ultrassensível (PCRus) foi determinada por imunoturbidimetria, e as concentrações séricas de interleucina (IL)-6, IL-8, IL-10, interferon gama (IFN-γ) e fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) foram avaliadas por ensaio multiplex. A expressão de RNAm de DHFR (dihidrofolato redutase), MTHFR (metilenotetrahidrofolato redutase), IL8, TNFA e IFNG em leucócitos mononucleares (PBMC) foram avaliadas por PCR em tempo real. O número de células T regulatórias (Treg) (CD3+, CD4+, CD25high, FoxP3+, CD127-) foi avaliado após incubação dos PBMC com PMA e ionomicina ou veículo por 18h, por imunofenotipagem. Resultados: Houve um grande aumento das concentrações de folato sérico após 45 e 90 dias de intervenção com AF. Não houve diferença nas concentrações de vitamina B12 antes e após a intervenção. As concentrações séricas de PLP foram semelhantes antes e após a intervenção, entretanto, um aumento de PL sérico foi observado após 45 e 90 dias, e de PA após 45 dias, quando comparado ao baseline. Riboflavina e FMN foram maiores após 45 e 90 dias em relação ao baseline. A tiamina sérica foi menor após 45 dias, e as concentrações de TMP foram maiores após 90 dias quando comparados aos períodos anteriores. Não houve diferença nas concentrações de vitamina B3 antes e após a intervenção. Dentre os metabólitos da via das quinureninas, apenas o ácido antranílico apresentou aumento após 45 e 90 dias, enquanto o ácido picolínico diminuiu após 90 dias. PCRus, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ e TNF-α séricos foram semelhantes no baseline e após a intervenção. Um aumento da expressão de RNAm de DHFR e TNFA foi observado após, respectivamente, 90 dias e 45 e 90 dias de intervenção. Após 90 dias de intervenção com AF, foi observada diminuição do número de células Treg após estímulo com PMA e ionomicina. Conclusão: O uso diário de 5 mg de AF foi associado a alterações nas concentrações séricas de marcadores do estado de vitaminas do complexo B e da via das quinureninas, bem como a diminuição do número de células Treg

Introduction: Folic acid (FA) supplementation is recommended in some conditions to avoid folate deficiency, as women during periconceptional period and pregnancy. Currently, there is a concern about the excessive consumption of FA by population by using supplements with high doses of this vitamin. Vitamins B6 and B2 are cofactors of enzymes of one carbon metabolism and, consequently, may disturb key metabolism in which they participate, as kynurenine pathway, and the immune system. Aim: To assess the effects of a daily intervention with high dose of FA (5 mg) for 90 days on biomarkers of complex B vitamins status and its outcomes in kynurenine pathway metabolites and immune system in healthy adults. Material and Methods: 64 healthy individuals were submitted to a daily intervention with 5 mg of FA for 90 days. Blood samples were collected before (baseline) and after 45 and 90 days of intervention. Serum folate and vitamin B12 were assessed by microbiological assays. Serum vitamin B6 (pyridoxal 5'-phosphate (PLP), pyridoxal (PL) and 4-pyridoxic acid (PA)), vitamin B2 (riboflavin and flavin mononucleotide (FMN)), vitamin B1 (thiamin and thiamin monophosphate)) and vitamin B3 (nicotinic acid, nicotinamide and N1-methylnicotinamide), as well as tryptophan, kynurenine and metabolites, were assessed by LC-MS/MS. C-reactive protein (hs-CPR) was assessed by immunoturbidimetry, and serum interleukin (IL)-6, IL-8, IL-10, interferon gamma (IFN-γ) and tumor necrosis factor alpha (TNF-α) were assessed by multiplex assay. Mononuclear leukocytes mRNA expression of DHFR (dihydrofolate reductase), MTHFR (methylenetetrahydrofolate reductase), IL8, TNFA and IFNG were assessed by real time PCR. Regulatory T Cell (Treg) number (CD3+, CD4+, CD25high, FoxP3+, CD127-) was determined after mononuclear leukocytes incubation with PMA and ionomycin or vehicle for 18h, by immunophenotyping. Results: A great increase on serum folate was observed after 45 and 90 days of FA intervention. No differences in serum vitamin B12 were observed before and after intervention. Serum PLP was similar before and after intervention, however, an increase in serum PL was observed after 45 and 90 days, and in PA after 45 days, when compared to baseline. Riboflavin and FMN were increased after 45 and 90 days than in baseline. Serum thiamine was decreased after 45 days than in baseline. Serum TMP was increased after 90 days when compared with previous timepoints. No differences in vitamin B3 were observed after and before FA intervention. Among kynurenine pathway metabolites, anthranilic acid was increased after 45 and 90 days, while picolinic acid was decreased after 90 days. hs-CPR, serum IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ and TNF-α were similar at baseline and after intervention. An increase on mRNA expression of DHFR and TNFA was observed after, respectively, 90 days and 45 and 90 days of intervention. After 90 days of FA intervention, it was observed a decrease on Treg cell number after PMA and ionomycin stimulation. Conclusion: Daily use of 5 mg of FA was associated with changes in serum markers of B-complex vitamins status and kynurenine pathway, as well as decreased number of Treg cells

Cross-linking da cornea: protocolo padrão / Corneal Crosslinking: The Standard Protocol

RESUMO O objetivo desta revisão é de determinar as indicações e eficácia da cirurgia que promove novas ligações covalentes entre as fibras de colágeno da córnea, conhecida como Cross-Linking (CXL), assim como esclarecer seus objetivos. O ceratocone é uma doença ectasica da córnea, bilateral, assimétrica, que, principalmente, cursa com encurvamento e afinamentos progressivo, e se inicia em geral na segunda década de vida. O uso primário do CXL tem sido na interrupção da progressão do Ceratocone. Apesar do conhecido encurvamento no estroma da córnea ocorrer nesses pacientes, a fisiopatologia por trás do ceratocone ainda é desconhecida e parece ser multifatorial. Pela evidencia literária disponível até o momento, o CXL da córnea esta, portanto indicado nos pacientes com doença em progressão. Concluímos que existe evidencia suficiente para afirmar que o CXL da córnea é eficaz na estabilização da doença ectásica da cornea.

ABSTRACT The purpose of this review is to determine the indications and efficacy of the surgery that promotes new covalent bonds between the collagen fibers of the cornea, known as Cross-Linking (CXL), as well as to clarify its objectives. Keratoconus is a bilateral, asymmetric ectasic disease of the cornea that mainly courses with steepening and progressive thinning, and usually begins in the second decade of life. The primary use of CXL has been in discontinuing the progression of keratoconus. Although known corneal stromal remodeling occurs in these patients, the pathophysiology behind keratoconus is still unknown and appears to be multifactorial. By the literary evidence available to date, the CXL of the cornea is safely indicated in patients with progressing disease. We conclude that there is sufficient evidence to affirm that cornea CXL is effective in stabilizing corneal ectasic disease.

Eficacia y seguridad de coenzoma Q10, carnitina y riboflavina en pacientes con enfermedades mitocondriales / Efficacy and safety of coenzyme Q10, carnitine and riboflavin in patients with mitochondrial diseases

INTRODUCCIÓN: Antecedentes: El presente dictamen expone la evaluación de tecnología de la eficacia y seguridad de la coenzima Q10, carnitina y riboflavina respecto a su uso en pacientes con enfermedades mitocondriales. Aspectos Generales: Las mitocondrias son organelas complejas de doble membrana que cuentan con un ADN propio, heredado de la madre. Subojetivo es producir energia a partir de los nutrientes en fora de calor y ATP, mediante la respiración. El proceso por el cual se produce la energía es conocido como fosforilación oxidativa y se lleva a cabo en la cadena respiratoria de las mitocondrias, también llamada cadena transportadora de electrones. Tecnologia Sanitária de Interés: Coenzima Q10: La coenzima Q10, también conocida como ubiquinona, es una quinona soluble en grasas , sintetizada en la mitocondria y que se encuentra presente en la membranas celulares. La coenzima Q'0 endógena es producida por el organismo como parte de la vía de producción del colestereol, mientras que la exógena es ingerida por la dieta como ubiquinona (forma oxidada) y ubuquinol (forma reducida). Esta molécula se encuentra presente en todas las células del organismo, en mayor concentración en el tejido del cerebro, corazón, riñones, e hígado. Carnitina: La carnitina, presente en el organismo y en los alimentos como I-carnitina, es un aminoácido sintetizado en el tejido muscular, renal y hepático a partir de los aminoácidos l-lisina yl-metionina. Existen fuentes exógenas de l-carnitina como las carnes rojas, el pescado, el pollo e la leche. Esta molécula cumple una función importante en el metabolismo de ácidos grasos, ya que promueve la utilización de la grasa almacenada en el organismo como fuente de energia. Especificamente, la L-carnitina es un transportador de lípidos que permite el ingreso de las cadenas de ácidos grasos a la matriz mitocondrial para ser convertidos en energía a través del proceso de la beta-oxidación. Riboflavina: La riboflavina (vitamina B2) es una vitamina hidrosolubre que se encuentra la manera natural en los alimentos de origen animal y vegetal, y puede ser producida también por la microbiota intestinal. Esta vitamina se absorve en el intestino delgado proximal y, cuando es consumida en exceso, es excretada por la orina y/o almacenada en concetraciones reducidas en el hígado, riñones, y corazón. METODOLOGÍA: Estrategia de Búsqueda: Se realizó una búsqueda de literatura científica en relación a la eficacia y seguridad del uso de la coenzima Q10, carnitina y riboflavina en pacientes con enfermedades mitocondriales (EM). Sedio preferencia a guías de práctica clínica, revisiones sistemáticas con o sin meta-análisis y ensayos clínicos aleatrorizados. RESULTADOS: Sinopsis de la Evidencia: Se realizó la busqueda bibliográfica y de evidencia científica que sustente el uso de coenzima Q10, carnitina y riboflavina en pacientes con diganóstico de enfermedades mitocondriales (EM). CONCLUSIONES: En la presente evaluación de tecnología sanitária se presenta a la evidencia recabada sobre el beneficio de la coenzima Q10, carnitina y riboflavina en pacientes con enfermedades mitocondriales. La evidencia encontrada que evalúa el uso de estos compuestos en pacientes con enfermedades mitocondriales es escasa. Se ha identificado evidencia proveniente de tres ensayos clínicos y un estudio obervacional. Ninguno de los estudios evaluó los tres suplementos en conjunto como una sola intervención. El Instituto de evaluación en Salud e Investigación-IETSI, aprueba el uso de la coenzima Q10, carnitina y riboflavina en pacientes con enfermedades mitocondriales. El presente Dictamen Preliminar tiene una vigencia de dos años a partir de la fecha de publicación.

The effects of riboflavin and ultraviolet light on keratocytes cultured in vitro / Avaliação do efeito da riboflavina e luz ultravioleta sobre os ceratócitos in vitro

ABSTRACT Purpose: To culture quiescent human keratocytes and evaluate the effects of ultraviolet light and riboflavin on human corneal keratocytes in vitro. Methods: Keratocytes were obtained from remaining corneoscleral ring donor corneas previously used in corneal transplant surgeries and cultured in DMEM/F12 with 2% FBS until confluence. Characterization of cultured cells was performed by immunofluorescence analysis for anti-cytokeratin-3, anti-Thy-1, anti-α-smooth muscle actin, and anti-lumican. Immunofluorescence was performed before and after treatment of cultured cells with either ultraviolet light or riboflavin. Corneal stromal cells were covered with collagen (200 µL or 500 µL) and 0.1% riboflavin, and then exposed to ultraviolet light at 370 nm for 30 minutes. After 24 hours, cytotoxicity was determined using MTT colorimetric assays, whereas cell viability was assessed using Hoechst 33342 and propidium iodide. Results: Cell cultures achieved confluence in approximately 20 days. Expression of the lumican was high, whereas no expression of CK3, Thy-1, and α-SMA was observed. After crosslinking, MTT colorimetric assays demonstrated a low toxicity rate, whereas Hoechst 33342/propidium iodide staining demonstrated a low rate of apoptosis and necrosis, respectively, in all collagen-treatment groups. Conclusion: Keratocytes can be successfully cultured in vitro and characterized by immunofluorescence using lumican. MTT colorimetric assays, and Hoechst 33342, and propidium iodide staining demonstrated a higher rate of cell death in cells cultured without collagen, indicating collagen protects keratocytes from the cytotoxic effects of ultraviolet light.

RESUMO Objetivo: Avaliar o efeito da aplicação da luz ultravioleta e riboflavina sobre ceratócitos da córnea humana in vitro. Métodos: Os ceratócitos foram obtidos a partir das rimas corneoesclerais remanescentes da trepanação de córneas previamente utilizadas em cirurgias de transplante de córnea e cultivadas em meio DMEM/F12 com 2% de FBS até atingir confluência. As culturas de células foram caracterizadas por imunofluorescência com os anticorpos K3 (marcador de células epiteliais), Thy-1 (marcador de fibroblasto) SMA (marcador de miofibroblasto) e Lumican (marcador de ceratócitos). Imunofluorescência também foi feita após o tratamento. As células do estroma da córnea foram cobertas com colágeno (200 µL e 500 µL) e 0,1% de riboflavina e exposta a luz UVA a 370 nm por 30 minutos. Após 24 horas, citotoxicidade foi determinada por ensaio de MTT e a viabilidade celular foi feita por Hoechst 33342/Iodeto de propideo. Resultados: As culturas de células atingiram confluência em aproximadamente 20 dias. Imunofluorescência apontou alta expressão para o marcador de ceratócitos (Lumican) e expressão negativa par os marcadores de células epiteliais (K3), fibroblasto (Thy-1) e miofibroblasto (α-SMA). Após o cross linking a análise de MTT mostrou baixa taxa de toxicidade e com a coloração de Hoechst 33342/Iodeto de propideo baixa taxa de apoptose e necrose respectivamente em todos os grupos que continham colágeno. Conclusão: As culturas de ceratócitos foram obtidas e caracterizadas por imunofluorescência através do marcador Lumican com sucesso. O ensaio de MTT e a coloração por Hoechst 33342 e iodeto de propídio, apresentaram maior índice de morte celular nos grupos que não continham colágeno, provando que protege as células contra os efeitos da luz UVA.

Six-month outcomes of corneal crosslinking with dextran-free isotonic riboflavin solution / Resultados após seis meses de crosslinking de córnea com solução isotônica de riboflavina sem dextrano

ABSTRACT Purpose: To analyze the short-term clinical and topographic outcomes in patients with keratoconus after corneal collagen cross-linking treatment (CXL) with dextran-free isotonic riboflavin solution. Methods: In this retrospective case series, 26 eyes from 26 patients with keratoconus were studied. The best corrected visual acuity (BCVA) and refractive and topographic findings were analyzed at a 6-month follow-up. Results: The mean BCVA (Snellen lines) values before and 1, 3, and 6 months after CXL were 0.51 ± 0.2, 0.48 ± 0.2, 0.57 ± 0.2, and 0.64 ± 0.2, respectively, and the difference between the preoperative and 6-month values was statistically significant (p=0.006). The mean spherical equivalent refraction decreased from -5.6 ± 2.4 diopters (D) preoperatively to -5.0 ± 2.1 D, and mean simulated keratometry decreased from 48.5 ± 2.5 D to 47.8 ± 2.6 D at 6 months. (p=0.145 and p=0.001, respectively). In addition, the maximum keratometry decreased progressively and significantly from the preoperative value during follow-up (p=0.003). The central and minimal corneal thicknesses, including those of the epithelium, also decreased from 442.8 ± 25.6 µm and 430.5 ± 23.9 µm preoperatively to 420.7 ± 31.8 µm and 409.3 ± 28.7 µm at the most recent follow-up (p<0.001), respectively. No intraoperative or postoperative complications were observed. Conclusions: CXL with dextran-free isotonic riboflavin solution appears to be a safe treatment alternative for keratoconus and yields sustained short-term improvements in visual acuity, keratometric readings, and corneal thickness. However, long-term results are needed to confirm these outcomes.

RESUMO Objetivo: Analisar os resultados clínicos e topográficos curto prazo após crosslinking (CXL) de córnea com solução isotônica de riboflavina sem dextrano, em pacientes com ceratocone. Método: Estudamos 26 olhos de 26 pacientes com ceratocone, nesta série retrospectiva de casos. Melhor acuidade visual corrigida (BCVA), refração e achados topográficos foram analisados aos 6 meses de acompanhamento. Resultados: BCVA pré-operatória (linhas de Snellen) foi de 0,51 ± 0,2. BCVA após CXL foram de 0,48 ± 0,2, 0,57 ± 0,2 e 0,64 ± 0,2 no 1º, 3º e 6º meses, respectivamente. A diferença entre a BCVA pré-operatória e mais recente foi estatisticamente significativa (p=0,006). O equivalente esférico médio diminuiu de -5,6 ± 2,4 dioptrias (D) no pré-operatório para -5.0 ± 2.1 D e a média da ceratometria simulada diminuiu de 48,5 ± 2,5 D para 47, 8± 2,6 D aos 6 meses. (p=0,145 e p=0,001, respectivamente). A ceratometria máxima diminuiu progressivamente durante o acompanhamento com as mudanças sendo significativamente diferentes do valor pré-operatório (p=0,003). As espessuras corneanas central e mínima, diminuiram de 442,8 ± 25,6 µm e 430,5 ± 23,9 µm para 420,7 ± 31,8 µm e 409,3 ± 28,7 µm, respectivamente, na visita mais recente (p<0,001). Não foram observadas complicações intraoperatórias e pós-operatórias. Conclusões: CXL com solução de riboflavina isotônica sem dextrano parece ser uma opção segura de tratamento para o ceratocone com melhora mantida na acuidade visual, ceratometria e espessura corneana, no curto prazo. Resultados a longo prazo são necessários para confirmar estes resultados.

Factors affecting visual acuity after accelerated crosslinking in patients with progressive keratoconus / Fatores que afetam a acuidade visual após crosslinking acelerado entre pacientes com ceratocone progressivo

ABSTRACT Purpose: The present study aimed to report the outcomes of patients with progressive keratoconus who were treated via accelerated crosslinking (CXL) 6 months earlier and to determine the factors that promoted improved visual acuity after treatment. Methods: This retrospective study included 35 eyes of 34 patients with progressive keratoconus who underwent CXL. Topographical measurements were obtained preoperatively and in the first, third, and sixth months postoperatively using a rotating Scheimpflug camera. The uncorrected visual acuity (UCVA), best-corrected visual acuity (BCVA), flat keratometry (K) value (K1), steep K value (K2), average K value (avgK), topographic cylindrical value (Cyl), apical keratoscopy front (AKf), apical keratoscopy back (AKb), symmetry index front (SIf), symmetry index back (SIb), and thinnest point of the cornea (ThkMin) were recorded. Results: At the 6-month follow-up, the mean UCVA and BCVA values were improved, and the K values remained stable. Statistically significant decreases in AKf (p=0.04) and the thinnest point of the cornea (p=0.001) and a statistically significant increase in AKb (p=0.01) were observed. A correlation analysis revealed that the preoperative BCVA, UCVA, K1, K2, avgK, AKf, and AKb values significantly affected visual acuity at the 6-month follow-up. Conclusions: Accelerated CXL is an effective treatment for the prevention or even reversal of keratoconus progression. The preoperative K values and apexes of the anterior and posterior cornea were found to affect visual acuity at 6 months after accelerated CXL. Both AKb steepening and AKf flattening appear to be important factors in the stabilization of keratometric values and improvement of visual outcomes.

RESUMO Objetivo: O objetivo do estudo é relatar os resultados do sexto mês após o tratamento de crosslinking acelerado (CXL) em pacientes com ceratocone progressivo e determinar os fatores que afetam a melhora da acuidade após o tratamento. Métodos: Neste estudo retrospectivo, foram incluídos 35 olhos de 34 pacientes com ceratocone progressivo que se submeteram CXL. Acuidade visual não corrigida (UCVA) e melhor acuidade visual corrigida (BCVA) foram registradas. Medidas topográficas foram obtidas utilizando uma câmara Scheimpflug rotativa no pré-operatório e no 1º, 3º e 6º meses após a cirurgia. Os valores de ceratometria (K) mais plana (K1), K mais curva (K2), médio de K (avgK), astigmatismo topográfico (Cyl), ápice anterior da ceratoscopia (AKf), ápice posterior da ceratoscopia (AKb), índice anterior de simetria (SIf), índice posterior de simetria (SIb) e ponto mais fino da córnea (ThkMin) foram avaliados. Resultados: A média UCVA e BCVA melhoraram, enquanto valores de K ficaram estáveis 6º mês. Houve uma diminuição estatisticamente significativa na AKf e um aumento estatisticamente significativo na AKb (p=0,04, p=0,01, respectivamente). O ponto mais fino da córnea diminuiu significativamente (p=0,001). Na análise de correlações, além da UCVA e BCVA pré-operatórias; valores K1, K2, avgK, AKf e AKb pré-operatórios influenciaram significativamente a acuidade visual no 6º mês de acompanhamento. Conclusões: CXL acelerado é uma forma eficaz de tratamento na prevenção ou no mesmo inversão da progressão do ceratocone. A acuidade visual no 6º mês após CXL acelerado foi afetada a partir dos valores de K e dos ápice anterior e posterior da córnea. Encurvamento do AKb e aplanamento do AKf parecem ser fatores importantes na estabilização dos valores ceratométricos e na melhora da acuidade visual.

Corneal collagen cross-linking for progressive keratoconus in patients aged 9 to 14 / Cross-linking corneano para ceratocone progressivo em pacientes de 9 a 14 anos de idade

RESUMO Objetivo: Determinar a segurança e eficácia do cross-linking corneano (CXL) em pacientes de 9 a 14 anos de idade com ceratocone progressivo. Métodos: Dezesseis olhos de onze pacientes (8 homens e 3 mulheres) com ceratocone progressivo foram submetidos ao CXL, de acordo com o protocolo padrão de Dresden. A média do tempo de seguimento foi de 26 meses (variando de 12 a 60 meses). Os exames pré e pós-operatórios incluíram: acuidade visual sem correção (AVSC), melhor acuidade visual com correção (AVCC), topografia corneana, tonometria, refração, paquimetria corneana, e contagem de células endoteliais. Resultados: Na última visita de acompanhamento ambulatorial, a AVCC melhorou pelo menos uma linha na tabela de Snellen em 6 olhos (37,5%) e permaneceu estável em 9 olhos (56,25%). Dois olhos (12,5%) de pacientes que coçam os olhos com frequência, exigiram retratamento devido à progressão do ceratocone, 15 e 28 meses após o primeiro CXL. A refração e contagem de células endoteliais mantiveram-se estáveis. Os resultados topográficos mostraram melhora estatisticamente significativa nos valores do K máximo até dois anos após o CXL. No entanto, houve perda de significância ao longo do tempo. Nenhuma complicação peroperatória foi observada. Dois olhos (12,5%) apresentaram haze grau I, que regrediu após um mês de terapia com esteróide tópico. Conclusão: Neste estudo com pacientes selecionados, de 9 a 14 anos de idade, o CXL mostrou ser uma opção segura e eficaz para o tratamento do ceratocone progressivo. No entanto, o efeito pode não ser duradouro, podendo ser necessário um novo tratamento. Maior amostragem e maior seguimento são necessários para verificar esta tendência.

ABSTRACT Purpose: To determine the safety and efficacy of corneal collagen cross-linking (CXL) for progressive keratoconus in patients aged between 9 and 14 years old. Methods: Sixteen eyes of 11 patients (8 male and 3 female) with progressive keratoconus underwent epithelium-off CXL according to the standard Dresden protocol. Mean follow-up was 26 months (range, 12 to 60 months). Pre- and postoperative examinations included: uncorrected visual acuity (UCVA), best spectacle-corrected visual acuity (BSCVA), corneal topography, tonometry, refraction, corneal pachymetry, and endothelium cell count. Results: At the last follow-up visit, BSCVA improved by at least one Snellen line in six eyes (37.5%) and remained stable in nine eyes (56.25%). Two eyes (12.5%) in habitual eye rubbers required a re-treatment due to keratoconus progression, at 15 and 28 months after first CXL. Manifest refraction and endothelium cell count remained stable. Topographic results showed statistically significant improvement in maximum K readings up to two years after CXL. However, this lost significance over time. No intraoperative complications were observed. Two eyes (12.5%) presented grade one haze, which regressed after a month of topical steroid therapy. Conclusion: In this study of selected patients aged 9 to 14, CXL was a safe and effective option for the treatment of progressive keratoconus. However, the effect in stemming the disease may not be long lasting and may require retreatment. A larger sample size and longer follow-up time are needed to verify this trend.

Bactérias láticas produtoras de folato e riboflavina: Isolamento e avaliação do seu potencial de aplicação na produção de produtos lácteos caprinos com alto teor de vitaminas / Folate and riboflavin producing lactic acid bacteria: isolation and evaluation of their potential application for production of goat dairy products with higher vitamin content

O valor nutricional e as características físico-químicas fazem com que os produtos lácteos caprinos sejam muito apreciados e tenham um alto valor agregado. Muitas bactérias láticas (BAL) possuem a capacidade de produzir compostos com propriedades benéficas à saúde, inclusive vitaminas do grupo B, como a riboflavina (B2) e o folato (B9), que participam de importantes funções metabólicas. O presente estudo objetivou isolar e identificar BAL capazes de produzir folato e riboflavina, utilizando leite de cabra cru e de queijos de cabra como fonte, para em seguida, avaliar a produção destas vitaminas em leite de cabra UHT, para estimar uma possível aplicação na produção de derivados lácteos de cabra com teores mais altos destas vitaminas. Um total de 179 isolados de BAL, sendo 87 provenientes de leite e 92 de queijos, foram obtidas e analisados quanto à produção de folato e de riboflavina extracelular (EC) e intracelular (IC), empregando-se ensaios microbiológicos apropriados. A produção de folato em meio de cultura a 37ºC foi observada em 151 isolados (84,4%) e de riboflavina em 15 isolados (8,4%), sendo que 14 produziram as duas vitaminas concomitantemente. A média da produção folato total (EC + IC) foi 138,8 µg/L, sendo que em 77 isolados (51%) a produção estava acima da média. Houve diferença significativa entre as médias de produção de folato total pelos isolados de leite e de queijo. A média da produção de riboflavina total (EC + IC) foi 363,7 µg/L, sendo que em 9 isolados (60%) a produção foi acima da média. Com base no RAPD-PCR e sequenciamento da porção 16S do rDNA, foram obtidos 19 perfis genéticos diferentes e identificadas 7 espécies, com predominância de Streptococcus thermophilus (7 isolados), Weissella paramensenteroides (6 isolados) e Lactococcus lactis subsp. lactis (4 isolados). Oito isolados produtores de folato acima da média foram selecionados e submetidos à avaliação da produção de folato em leite de cabra UHT a 37°C, sendo 7 positivas, com média da concentração de folato total de 120,55 µg/L, variando de 12,97 a 261,91 µg/L. Os melhores produtores de folato em leite de cabra UHT foram Lc. lactis subsp. lactis FP368 e St. thermophilus FP34v, FP170v e FP268v. A concentração de folato produzido por estes isolados foi acima da média, evidenciando seu interessante potencial de aplicação na produção de novos derivados lácteos caprinos com teores aumentados desta vitamina. Por outro lado, não foi possível detectar a produção de riboflavina em leite de cabra por nenhum dos isolados testados

Due to the high nutritional value and physicochemical characteristics, goat milk and cheeses are highly appreciated. Many strains of lactic acid bacteria (LAB) are able to produce vitamins from the B complex, such as riboflavin (B2) and folate (B9). These vitamins have important metabolic roles. The present study aimed to isolate riboflavin- and folate-producing LAB strains from goat milk and cheeses, and evaluate the potential application of those strains in the production of goat dairy products with higher content of these vitamins. A total of 179 LAB isolates were obtained from milk (87) and cheese (92) samples. The isolates were evaluated for production of extra (EC) and intracellular (IC) riboflavin and folate, applying appropriate microbiological methods. Among these isolates, 151 (84.4%) were able to produce folate, while 15 (8.4%) displayed the ability to produce riboflavin, and 14 produced both vitamins. The average production of total folate (EC + IC) was 138.8 µg/L, and the amount of folates produced by 77 isolates (51%) were above this average. The differences observed for the average production of total folate from milk and cheese isolates were statistically significant. For total riboflavin (EC+ IC), the average rate was 363.7 µg/L. Nine isolates (60%) presented production rates above the average. No significant difference was observed between the average production of total riboflafin from milk or cheese isolates (319.3 µg/L and 379.8 µg/L, respectively). Based on RAPD-PCR and 16S rDNA sequencing, 19 different genetic profiles were obtained and 7 species were identified, with predominance of Streptococcus thermophilus (7 isolates), Weissella paramensenteroides (6 isolates), and Lactococcus lactis subsp. lactis (4 isolates). Eight isolates that produced folate above the average were selected and tested for vitamins production in UHT goat milk at 37°C. Seven isolates produced an average of 120.55 µg/L of folate in the milk and concentration varied from 12.97 to 261,91 µg/L. The best folate producers were Lactococcus lactis subsp. lactis FP368, Streptococcus thermophilus FP34v, Streptococcus thermophilus FP170v and Streptococcus thermophilus FP268v. The amount of folate produced by these isolates surpassed the average, and was above the amounts described in other studies, evidencing their potential application in the production of goat dairy products with higher content of folate. None of the tested isolates was able to produce riboflavin in UHT goat milk

Crosslinking: an updated and effective insight / Cross-linking: uma visão objetiva e atualizada

The corneal cross-linking has been used in order to reduce and stabilize the progression of ectatic diseases through its effects on the biomechanics of the cornea. Different protocols are being conducted worldwide to expand its indications as well as its use at different ages, different stages of the disease, combinations with other techniques, besides the utilization for non-ectatic diseases. There is still no consensus on the indications of the cross-linking procedure, but the results published in the literature show significant changes in the properties of the corneal tissue. The aim of this study is to review some of these protocols already published and discuss their results, indications and complications.

O cross-linking corneano é utilizado com o objetivo de reduzir e estabilizar a progressão das patologias ectásicas através de seus efeitos na biomecânica da córnea. Diferentes protocolos estão sendo realizados pelo mundo para expandir suas indicações, assim como seu uso em diversas faixas etárias, diferentes estágios da doença, combinações com outras técnicas, além de utilizações para doenças não ectásicas. Não há ainda um consenso nas indicações do procedimento de cross-linking, mas os resultados publicados na literatura evidenciam mudanças significativas nas propriedades do tecido corneano. O objetivo desse estudo é revisar alguns desses protocolos já publicados e discutir seus resultados, indicações e complicações.

Associação do folato e vitaminas envolvidas no ciclo docarbono-1 com polimorfismos no gene metilenotetrahidrofolatoredutase (MTHFR) e metilação global do DNA em pacientes com câncercolorretal / Association of folate and vitamins involved in the one-carbon cycle with polymorphisms in the methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene and global DNA methylation in patients with colorectal cancer

Introdução: Folato, vitamina B2, vitamina B6, vitamina B12, colina e betaína são nutrientes envolvidos no ciclo do carbono-1 que podem alterar os níveis de metilação do DNA e influenciar na gênese e/ou progressão tumoral. Objetivo: Avaliar a associação de folato e vitaminas envolvidas no ciclo do carbono-1 com polimorfismos no gene MTHFR e metilação global do DNA em pacientes com câncer colorretal. Material e Métodos: 189 pacientes casos novos com adenocarcinoma colorretal responderem a um questionário de avaliação clínica e um Questionário de Frequência Alimentar (QFA) validado para pacientes com câncer de cólon e reto. Foram coletadas amostras de sangue para a avaliação dos polimorfismos no gene MTHFR da metilação global do DNA no sangue e no tumor. Resultados: Os valores de folato sérico foram correlacionados positivamente com o equivalente dietético de folato total (DFE total) (rho= 0,51 e p= 0.03) e com a metilação global do DNA (rho= 0,20 e p= 0.03). Indivíduos com idade igual ou superior a 61 anos (p= 0.01), em estadiamento clínico-patológico III e IV (p= 0.01) e com genótipos homozigotos mutados + heterozigotos para o gene MTHFR A1298C apresentaram maiores níveis de metilação global do DNA (p= 0.04). A associação entre a ingestão dietética de folato, folato sérico e estadiamento do tumor foram preditoras da metilação global do DNA no sangue dos pacientes. Conclusão: Os níveis de folato sérico e dietético, além do estadiamento clínico-patológico podem influenciar no status de metilação do DNA.

Introduction: Folate, vitamin B2, vitamin B6, vitamin B12, choline and betaine are nutrients involved in the one-carbon cycle that can alter the levels of DNA methylation and influence the genesis and/or tumor progression. Objective: Evaluate the association of folate and vitamins involved in the one-carbon cycle and MTHFR polymorphisms in global DNA methylation in patients with colorectal cancer gene. Material and Methods: 189 new cases with colorectal adenocarcinoma answering a clinical evaluation questionnaire and the Food Frequency Questionnaire (FFQ) validated for patients with colon and rectal cancer. Blood samples were collected for evaluation of MTHFR gene polymorphisms in the global DNA methylation in blood and in tumor. Results: The values for serum folate were positively correlated with the equivalent total dietary folate (total DFE) (rho = 0.51, p = 0:03) and the global DNA methylation (rho = 0.20, p = 0:03). Individuals aged over 61 years (p = 0.01) in staging clinicopathological III and IV (P = 0.01) and with + heterozygous mutated homozygous genotypes for the MTHFR A1298C gene had higher levels of global DNA methylation (p = 0:04). The association between dietary intake of folate, serum folate, and tumor stage were predictive of global DNA methylation in patients' blood. Conclusion: The levels of serum and dietary folate, the clinical-pathological staging can influence the status of DNA methylation.

Induction of corneal collagen cross-linking in experimental corneal alkali burns in rabbits / Indução de ligações covalentes de colágeno em queimaduras corneanas experimentais por álcali em coelhos

Objective: To evaluate the effect of riboflavin-ultraviolet-A-induced cross-linking (CXL) following corneal alkali burns in rabbits. Methods: The right corneas and limbi of ten rabbits were burned using a 1N solution of NaOH and the animals were then divided into two groups: a control group submitted to clinical treatment alone and an experimental group that was treated 1 h after injury with CXL, followed by the same clinical treatment as administered to the controls. Clinical parameters were evaluated post-injury at 1, 7, 15, and 30 days by two independent observers. Following this evaluation, the corneas were excised and examined histologically. Results: There were no statistically significant differences in clinical parameters, such as hyperemia, corneal edema, ciliary injection, limbal ischemia, secretion, corneal neovascularization, symblepharon, or blepharospasm, at any of the time-points evaluated. However, the size of the epithelial defect was significantly smaller in the CXL group (p<0.05) (day 15: p=0.008 and day 30: p=0.008) and the extent of the corneal injury (opacity lesion) was also smaller (day 30: p=0.021). Histopathology showed the presence of collagen bridges linking the collagen fibers in only the CXL group. Conclusions: These results suggest that the use of CXL may improve the prognosis of acute corneal alkali burns. .

Objetivo: Avaliar o efeito de ligações covalentes de colágeno (cross-linking [CXL]) induzidas pelo tratamento com riboflavina e radiação ultravioleta A após queimaduras por álcali em córneas de coelhos. Métodos: Dez coelhos foram submetidos a queimadura ocular direita abrangendo estruturas da córnea e limbo usando uma solução de NaOH a 1N. A seguir, os animais foram divididos em dois grupos: um grupo controle submetido a tratamento clínico pós dano corneano e um grupo experimental que foi tratado com CXL uma hora após o dano, seguido pelo mesmo tratamento clínico administrado aos controles. Os parâmetros clínicos foram avaliados 1, 7, 15 e 30 dias após a lesão, por dois observadores independentes. Na etapa seguinte, foi realizada a excisão e o exame histológico das córneas. Resultados: Não houve diferenças estatisticamente significantes nos parâmetros clínicos de hiperemia, edema da córnea, injeção ciliar, isquemia límbica, secreção, neovascularização da córnea, simbléfaro ou blefaroespasmo, em qualquer dos momentos da avaliação. Entretanto, o grupo CXL apresentou um defeito epitelial menor (p<0,05) (dia 15: p=0,008 e dia 30: p=0,008) e menor extensão da lesão na córnea (lesão opaca) (dia 30: p=0,021). O exame histopatológico revelou a presença de pontes de colágeno conectando as fibras de colágeno somente no grupo CXL. Conclusões: Estes resultados sugerem que o uso de CXL pode melhorar o prognóstico de queimaduras agudas da córnea causadas por alcáli. .