Role of extracellular DNA in Enterococcus faecalis biofilm formation and its susceptibility to sodium hypochlorite

Abstract Objective This study investigated the role of extracellular deoxyribonucleic acid (eDNA) on Enterococcus faecalis ( E. faecalis ) biofilm and the susceptibility of E. faecalis to sodium hypochlorite (NaOCl). Methodology E. faecalis biofilm was formed in bovine tooth specimens and the biofilm was cultured with or without deoxyribonuclease (DNase), an inhibitor of eDNA. Then, the role of eDNA in E. faecalis growth and biofilm formation was investigated using colony forming unit (CFUs) counting, eDNA level assay, crystal violet staining, confocal laser scanning microscopy, and scanning electron microscopy. The susceptibility of E. faecalis biofilm to low (0.5%) or high (5%) NaOCl concentrations was also analyzed by CFU counting. Results CFUs and biofilm formation decreased significantly with DNase treatment (p<0.05). The microstructure of DNase-treated biofilms exhibited less structured features when compared to the control. The volume of exopolysaccharides in the DNase-treated biofilm was significantly lower than that of control (p<0.05). Moreover, the CFUs, eDNA level, biofilm formation, and exopolysaccharides volume were lower when the biofilm was treated with DNase de novo when compared to when DNase was applied to matured biofilm (p<0.05). E. faecalis in the biofilm was more susceptible to NaOCl when it was cultured with DNase (p<0.05). Furthermore, 0.5% NaOCl combined with DNase treatment was as efficient as 5% NaOCl alone regarding susceptibility (p>0.05). Conclusions Inhibition of eDNA leads to decrease of E. faecalis biofilm formation and increase of susceptibility of E. faecalis to NaOCl even at low concentrations. Therefore, our results suggest that inhibition of eDNA would be beneficial in facilitating the efficacy of NaOCl and reducing its concentration.

O papel das nucleases no laboratório de biologia molecular: vilãs ou aliadas? / The role of nucleases in the molecular biology laboratory: villains or allies?

Em laboratório de biologia molecular existem normas para prevenir que nucleases destruam os ácidos nucleicos em análise. Rígida adesão a estas normas é primordial, principalmente em laboratórios de análises clínicas e ao se lidar com amostras com número restrito de cópias do genoma-alvo. Em contraposição, diversas nucleases têm tido importância fundamental, por exemplo, na identificação do ácido nucleico de vírus, investigação de RNA mensageiro, purificação de vírus em abordagem metagenômica, edição de genomas com o sistema CRISPR/Cas e descoberta de enzimas. O conhecimento de como nucleases podem ser tanto vilãs quanto aliadas é essencial na formação de todos que trabalham no campo de biologia molecular.

In a molecular biology laboratory there are standards to prevent nucleases from destroying the nucleic acids under analysis. Strict adherence to these standards is paramount, mainly in clinical analysis laboratories and when dealing with samples with a limited number of copies of the target genome. In contrast, several nucleases have been of fundamental importance, for example, in the identification of the type of viral nucleic acid, investigation of messenger RNA, virus purification in metagenomic approach, genome editing with the CRISPR/Cas system, and enzyme discovery. Knowledge of how nucleases can be both villains and allies is essential in the training of all working in the field of molecular biology.

Enzyme activity and thermostability of a non-specific nuclease from Yersinia enterocolitica subsp. palearctica by site-directed mutagenesis

Background: To identify the critical amino acid residues that contribute to the high enzyme activity and good thermostability of Yersinia enterocolitica subsp. palearctica (Y. NSN), 15 mutants of Y. NSN were obtained by site-directed mutagenesis in this study. And their enzyme activity and thermostability were assayed. Effect of several factors on the enzyme activity and thermostability of Y. NSN, was also investigated. Results: The results showed that the I203F and D264E mutants retained approximately 75% and 70% enzyme activity, respectively, compared to the wild-type enzyme. In addition to the I203F and D264E mutants, the mutant E202A had an obvious influence on the thermostability of Y. NSN. According to the analysis of enzyme activity and thermostability of Y. NSN, we found that Glu202, Ile203 and Asp264 might be the key residues for its high enzyme activity and good thermostability. Conclusions: Among all factors affecting enzyme activity and thermostability of Y. NSN, they failed to explain the experimental results well. One reason might be that the enzyme activity and thermostability of Y. NSN were affected not only by a single factor but also by the entire environment.

Assessment of adherence to the guidelines for the management of nausea and vomiting induced by chemotherapy / Avaliação da aderência à diretriz de cuidados para náuseas e vômitos induzidos por quimioterapia

ABSTRACT Objective: To assess adherence of the prescribing physicians in a private cancer care center to the American Society of Clinical Oncology guideline for antiemetic prophylaxis, in the first cycle of antineoplastic chemotherapy. Methods: A total of 139 chemotherapy regimens, of 105 patients, were evaluated retrospectively from 2011 to 2013. Results: We observed 78% of non-adherence to the guideline rate. The main disagreements with the directive were the prescription of higher doses of dexamethasone and excessive use of 5-HT3 antagonist for low risk emetogenic chemotherapy regimens. On univariate analysis, hematological malignancies (p=0.005), the use of two or more chemotherapy (p=0.05) and high emetogenic risk regimes (p=0.012) were factors statistically associated with greater adherence to guidelines. Treatment based on paclitaxel was the only significant risk factor for non-adherence (p=0.02). By multivariate analysis, the chemotherapy of high emetogenic risk most correlated with adherence to guideline (p=0.05). Conclusion: We concluded that the adherence to guidelines is greater if the chemotherapy regime has high emetogenic risk. Educational efforts should focus more intensely on the management of chemotherapy regimens with low and moderate emetogenic potential. Perhaps the development of a computer generated reminder may improve the adherence to guidelines. .

RESUMO Objetivo: Avaliar a adesão dos médicos prescritores, de um centro privado especializado em oncologia, à diretriz de antiêmese profilática da American Society of Clinical Oncology, no primeiro ciclo de quimioterapia antineoplásica. Métodos: Foram avaliados retrospectivamente 139 esquemas de quimioterapia, de 105 pacientes, tratados no período de 2011 a 2013. Resultados: Foram observados 78% de taxa de não adesão à diretriz. As principais discordâncias com a diretriz foram prescrição de doses mais elevadas de dexametasona e uso excessivo de antagonista 5-HT3 para regimes de quimioterapia de risco emetogênico baixo. Pela análise univariada, malignidades hematológicas (p=0,005), uso de dois ou mais quimioterápicos (p=0,05) e regimes de alto risco emetogênico (p=0,012) foram fatores estatisticamente associados a maior adesão à diretriz. O tratamento baseado em paclitaxel foi o único fator estatisticamente significativo para a não adesão (p=0,02). Pela análise multivariada, a quimioterapia de alto risco emetogênico apresentou maior correlação com a adesão à diretriz (p=0,05). Conclusão: Houve maior aderência para a quimioterapia de alto risco emetogênico. Esforços educacionais devem se concentrar mais intensamente na gestão de regimes de quimioterapia com potencial emetogênico baixo e moderado. Talvez o desenvolvimento de lembretes gerados por sistemas informatizados possa melhorar a aderência à diretriz. .

Functional disruption of human leukocyte antigen II in human embryonic stem cell

BACKGROUND: Theoretically human embryonic stem cells (hESCs) have the capacity to self-renew and differentiate into all human cell types. Therefore, the greatest promise of hESCs-based therapy is to replace the damaged tissues of patients suffering from traumatic or degenerative diseases by the exact same type of cells derived from hESCs. Allo-graft immune rejection is one of the obstacles for hESCs-based clinical applications. Human leukocyte antigen (HLA) II leads to CD4+ T cells-mediated allograft rejection. Hence, we focus on optimizing hESCs for clinic application through gene modification. RESULTS: Transcription activator-like effector nucleases (TALENs) were used to target MHC class II transactivator (CIITA) in hESCs efficiently. CIITA(-/-)hESCs did not show any difference in the differentiation potential and self-renewal capacity. Dendritic cells (DCs) derived from CIITA(-/-)hESCs expressed CD83 and CD86 but without the constitutive HLA II. Fibroblasts derived from CIITA(-/-)hESCs were powerless in IFN-γ inducible expression of HLA II. CONCLUSION: We generated HLA II defected hESCs via deleting CIITA, a master regulator of constitutive and IFN-γ inducible expression of HLA II genes. CIITA(-/-)hESCs can differentiate into tissue cells with non-HLA II expression. It's promising that CIITA(-/-)hESCs-derived cells could be used in cell therapy (e.g., T cells and DCs) and escape the attack of receptors' CD4+ T cells, which are the main effector cells of cellular immunity in allograft.

Light-emitting diode effects on combined decellularization of tracheae. A novel approach to obtain biological scaffolds

PURPOSE: To obtain a decellularized tracheal scaffold associating traditional approaches with the novel light-emitting diode (LED) proposal. METHODS: This study was performed with New Zealand adult rabbits weighing 3.0 - 4.0 kg. Different protocols (22) were used combining physical (agitation and LED irradiation), chemical (SDS and Triton X-100 detergents), and enzymatic methods (DNase and RNase). RESULTS: Generally, the cells surrounding soft tissues were successfully removed, but none protocol removed cells from the tracheal cartilage. However, longer protocols were more effective. The cost-benefits relation of the enzymatic processes was not favorable. It was possible to find out that the cartilaginous tissue submitted to the irradiation with LED 630nm and 475 nm showed an increased number of gaps without cells, but several cells were observed to be still present. CONCLUSION: The light-emitting diode is a promising tool for decellularization of soft tissues. .

Comparación de métodos de extracción de ADN en tejidos parafinados y utilidad para amplificación por PCR / Comparison of DNA extraction methods from formalin-fixed paraffin sections for RCP amplification

Los tejidos fijados en formol e incluidos en parafina son una fuente de material para hallazgos moleculares en el ámbito clínico y científico, demostrándose que el ADN extraído de éstos, es adecuado para amplificación a través de la reacción en cadena de la polimerasa (RCP). En este estudio, se ensayaron tres métodos de extracción de ADN en tejidos incluidos en parafina, con el objetivo de comparar la eficiencia de estos para obtener ADN adecuado, además se analizó su utilidad en amplificación por RCP. Se emplearon tres muestras, correspondientes a una biopsia de pulmón, legrado endometrial y ganglio linfático, todas fijadas en formaldehido al 10% e incluidas en parafina. Utilizándose tres métodos diferentes de extracción de ADN (extracción por salting out, método modificado de Sambrook y kit comercial) El ADN obtenido se cuantificó por espectrofotometría, además se realizó electroforesis en gel de agarosa al 1%, para comprobar si el ADN era de buena calidad y se realizó RCP para el exón 3 del gen caveolina 1. Todos los métodos dieron como resultado una buen producto de ADN genómico, observándose mayor cantidad y pureza en los métodos de salting out y kit comercial, asimismo se obtuvo amplificación del producto esperado por estos dos métodos, no hubo buenos resultados con el ADN extraído por el método modificado "Preparation of Genomic DNA from Mouse Tails y Other Small samples, según Sambrook". El ADN obtenido a partir de tejidos FFIP puede ser amplificado por varios métodos, entre estos, la extracción por salting out es útil y con poca toxicidad, permite obtener ADN de buena calidad para amplificación por RCP.

Formalin-fixed and paraffin-embedded tissues are a source of important molecular findings in clinical and scientific, demonstrating that the DNA extracted from these is suitable for amplification by polymerase chain reaction (PCR). In this study, we tested three methods of DNA extraction, in order to compare the efficiency of these DNA for RCP amplification. Three samples were used, corresponding to a lung biopsy, endometrial curettage and lymph node, all fixed in 10% formaldehyde and embedded in paraffin. Three different methods were used for DNA extraction (extraction by salting out, modified Sambrook method and commercial kit) The DNA obtained was analyzed by spectrophotometry, and gel electrophoresis was performed in 1% agarose to check if the DNA was amplifiable. PCR was performed for exon 3 of caveolin-1 gene. All methods resulted in a good product of genomic DNA, obtaining more quality and purity in the salting out and commercial kit methods. Also, we obtained amplification of the product by these two methods, without favorable results with the DNA extracted by the modified "Preparation of Genomic DNA from Mouse Tails and Other Small samples, according to Sambrook et al." The DNA obtained from FFPE can be amplified by several methods, among them, salting out extraction is an easy, effective and low toxicity for obtaining good quality DNA for PCR amplification.

Estudo estimativo do sexo em crânios da região de Guarulhos-SP utilizando antropologia física e DNA / Estimative study of the sex in skulls from the region of Guarulhos-SP using physical antropology and DNA

A investigação do sexo é uma das análises mais importantes na identificação humana. Este trabalho teve como objetivo a determinação do sexo em crânios humanos utilizando três métodos de Antropologica Física, duas quantitativas (Forensic Data Anthropolgy Bank, FDB, 1986 e Oliveira, 1995) e uma qualitativa, (Walker, 2008), e a análise genética pela amelogenina. A amostra foi composta de 66 crânios (34 homens e 32 mulheres) do Centro de Estudo e Pesquisa em Ciências Forenses, Guarulhos, SP. As metodologias foram aplicadas por duas pesquisadoras, que desconheciam o sexo dos crânios. Para o estudo estatístico realizaram-se análise descritiva, média, desvio padrão, análise discriminante linear e logística e regressão logística. A metodologia quantivativa apresentou um acerto de 89,52%. O Método FBD teve uma acurácia de 92,31%, com a elaboração de uma fórmula utilizando as medidas Largura Bizigomática, Altura Nasal, as quais apresentaram o maior dimorfismo entre os sexos, e Altura Básio-bregma e Máximo Comprimento do Crânio. A metodologia de Oliveira et al. (1995) necessitou de ajuste para a população estudada (nova fórmula com acurácia de 76,47% em homens e 78,13% em mulheres). Para o DNA, foi possível determinar o sexo em 86,15% da amostra. Pode-se afirmar que as diferentes metodologias comportaram-se de modo semelhante e com alta acurácia para determinação do sexo. A antropologia física apresenta as vantagens de facilidade de aplicação, reprodutibilidade e baixo custo, porém, necessita de ajustes populacionais. O DNA é mais complexo, necessita de infraestrutura e insumos específicos e pode ter interferência da condição ambiental, fatores que dificultam as análises, entretanto, não precisa ser ajustado á população.

The investigation of the sex is one of the most important analyzes in the human identification. This study aimed to determine the sex in human skulls using three methodologies of Physical Anthropology, two quantitative (Forensic Data Anthropology Bank, FDB, 1986 e Oliveira, 1995) and one qualitative (Walker, 2008) and genetic analysis by amelogenin. The sample was composed by 66 skulls (34 men and 32 women) from the Center for Study and Research in Forensic Science, Guarulhos, SP. The methodologies were applied by two researchers who were unaware of the craniums sexes. For the statistical analysis, there were performed descriptive analysis, average, standard deviation, linear discriminant analysis and logistic and logistic regression. The quantitative methodology presented an accuracy of 89.52%. The FBD method had an accuracy of 92.31%, with the development of a mathematical model using the measures Bizygomatic breadth, Nasal heigh, which showed the biggest dimorphism between the sexes, and Basion-bregma height and Maximum Cranial Length. The Oliveiras et al. (1995) methodology required adjustment for the studied population (new formula with an accuracy of 76.47% in men and 78.13% in women). For the DNA, it was possible to determine the sex in 86.15% of the sample. The different methodologies behaved similarly and with high accuracy in sex determination. Physical anthropology has the advantages of being easy to use, reliability and low cost, but needs population adjustments. The DNA is more complex, requires specific reagents and structure and may have interference from environmental condition, however, does not need to be adjusted to the population.

Panorama nacional do uso da técnica de identificação genética nos serviços oficiais de identificação e a participação do cirurgião-dentista / National survey about the use of the technique of genetic identification in the official services of identification and the dentist's participation

A análise do DNA pode ser considerada um dos principais progressos técnicos para investigação criminal desde a descoberta das impressões digitais. incorporada à rotina forense pelas polícias de países de primeiro mundo, esta análise começa a ser introduzida no contexto pericial em alguns estados do Brasil. O trabalho objetivou conhecer a realidade brasileira diante desta tecnologia. Foram aplicados questionários nos Institutos de Criminalística e Laboratórios de DNA Forense de 20 estados brasileiros. Por meio dos resultados obtidos no presente estudo, foi possível verificar a grande influência exercida pela técnica de DNA nos processos de identificação. Também foi possível verificar que a diversidade profissional das equipes e a descrição dos procedimentos empregados incorporaram conhecimentos específicos do odontologista, nos exemplos de equipes com a presença do cirurgião-dentista.

Desenvolvimento e implementação de métodos laboratoriais aplicados ao diagnóstico fenotípico e genotípico do Corynebacterium diptheriae / Development and implementation of laboratory methods applied to phenotypic and genotypic diagnosis of Corynebacterium diphtheriae

A emergência de cepas de Corynebacterium diphtheriae atoxinogênicas como agentes de endocardite e outras infecções sistêmicas aliada ao aumento do número de adultos susceptíveis à difteria enfatizam a necessidade de métodos alternativos para o diagnóstico laboratorial desta doença, especialmente para laboratórios de rotina clínica. Neste estudo avaliou-se a atividade de DNase de 91 amostras de C. diphtheriae (37 toxinogênicas e 54 atoxinogênicas) e de 564 cepas clínicas de bacilo Gram positivo não diftérico. A atividade de DNase foi detectada em todas as amostras de C. diphtheriae examinadas, previamente identificadas por métodos bioquímicos e pelo sistema API Coryne System. Diferentemente, os resultados do teste de DNase foram negativos em 93.9 porcento das cepas clínicas de bacilo Gram positivo não diftérico. Também foi documentado o valor de uma PCR espécie-específica que tem como alvo o gene dtxR como um método para diferenciação entre C. diphtheriae e colônias similares ao gênero Corynebacterium. Os resultados da PCR-dtxR foram positivos para todas as amostras de C. diphtheriae estudadas e foram concordantes com os obtidos através de metodologia bioquímica padrão. Diferentemente, os resultados da PCR-dtxR foram negativos para 100 porcento das 111 amostras de bacilos Gram positivos não diftéricos estudadas. A partir destes resultados, uma PCR multiplex utilizando três pares de oligonucleotídeos iniciadores foi desenvolvida para a detecção do C. diphtheriae e diferenciação em amostras toxinogênicas ou atoxinogênicas. Dois pares de oligonucleotídeos iniciadores têm como alvo as regiões do gene tox relativas aos domínios A e B da toxina diftérica e um terceiro par direcionado para o gene dtxR. Todas as amostras de C. diphtheriae foram identificadas pela reação de PCR multiplex em concordância com os testes bioquímicos padrão e os ensaios de citotoxicidade celular...

The emergence of non-toxigenic Corynebaterium diphtheriae strains as the causative agent of endocarditis and other systemic infections and the significant rise in the percentage of adults susceptible to diphtheria emphasize the need for new laboratory diagnostic procedures. In this study, we examine techniques as alternative procedures for differentiating C. diphtheriae from Corynebacterium-like colonies for the presumptive identification of this pathogen, especially in the diagnosis laboratory. This study evaluated the DNase activity of 91 C. diphtheriae (37 toxigenic and 54 non-toxigenic) and 564 non-diphtherial Gram-positive rod clinical strains. The DNase activity was detected in all C. diphtheriae strains examined, previously identified by both conventional biochemical methods and API Coryne System. Conversely, DNase test results were negative in 93.9 percent of the 564 non-diphtherial Gram-positive rod clinical strains. We also documented the value of a species-specific PCR assay that targets the dtxR gene as a procedure for differentiating C. diphtheriae from Corynebacterium-like colonies. The results of the PCR-dtxR were all positive for 91 C. diphtheriae strains and completely correlated with the standard biochemical methods and commercial identification system for all strains tested. In other hand, the PCR-dtxR results were negative in 100 percent of the 111 non-diphtherial Gram-positive rod strains. Considering these results, a multiplex PCR using three primers pairs was developed for detection of C. diphtheriae infection and differentiation between toxigenic and non-toxigenic strains. Two primer pairs targeted to domains A and B of tox gene and a third primer pair targeted to a region of dtxR gene. All C. diphtheriae strains were diagnosed by the multiplex PCR in agreement with standard biochemical tests and citotoxicity assay in Vero cells. Thus, these tecniques emerged as viable, cost-effective screening methods for C. diphtheriae laboratory...

Teste de DNA para verificaçäo de parentesco em cäes: avaliaçäo do método näo automatizado com o auxílio do primer CMR S / DNA test for parentage verification in dogs: evaluation of the non-automatized method with assistance of the primer CMR S

To evaluate the precision of the DNA tests using the non-automatized technique for individual identification and parentage tests, 105 Rottweiler dogs were studied using the primer CMR S. The sample was composed of 39 animals belonging to 11 complete families and their progenies, and 66 non related individuals until the second generation, derived from kennels located in the states of Minas Gerais and Säo Paulo. The CMR S primer was used for the Polimerase Chain Reaction (PCR). The results showed the inefficiency of the technique, even when analyzed through the automated gel analysis system. Also showed the impossibility of its commercial use due to the fact of does not permit the storage of data for subsequent use

Evidência de transferência horizontal de minicírculos de KDNA de trypanosoma cruzi para o genoma de coelhos chagásicos / Evidence of the horizontal tranference of the trypanosoma cruzi 's KDNA of the minicircles to the genome of the chagasics rabbit

Acredita-se que inúmeros processos de rearranjos e transferências gênicas teriam permitido o aumento da complexidade dos genomas, possibilitando o desenvolvimento de algumas características nas diferentes formas de seres vivos...

Intra and extracellular nuclease production by Aspergillus niger and Aspergillus nidulans

Intra and extracellular nuclease production by strains of "Aspergillus niger"and "Aspergillus nidulans" was estimated using a modified DNAse test agar and cell-0free extract assays. Differences in the production of nucleases by A. niger and A. nidulans were observed. These observations suggest that the DNAse test agar can be helpful for a quick screening for some types of nucleases in filamentous fungi. The assays using cell-free extracts can also be useful for initial characterization of other types of nucleases.

Actividad microbicida de la ribonucleasa y desoxirribonucleasa en cepas de bacterias patógenas in vitro / Microbicidal activity of ribonuclease and deoxyribonuclease in pathogenic bacterias strains in vitro

Las nucleasas son enzimas que por muchos años se han relacionado exclusivamente con la actividad digestiva. Sin embargo, diversos estudios han demostrado que en condiciones naturales, tienen una función microbicida importante. El presente trabajo se desarrolló con el objetivo de demostrar in vitro la acción germicida de la ribonuclease (RNasa) y la desoxirribonucleasa (DNasa) cuando se aplican exógenamente en algunas cepas patógenas. Surge como una necesidad de analizar la acción directa de las nucleasas sobre ciertos microorganismos, debido a que al aplicarse terapéuticamente en pacientes afectados de procesos infecciosos producidos por estos microorganismos, se ha obtenido el control del padecimiento. En cultivos de cepas puras de Staphylococcus, Proteus vulgaris, proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniase, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhi y Escherichia coli, se aplicaron directamente al medio de cultivo soluciones al 0.1, 1, 10, 25, 50, y 75 por ciento de RNasa (0.00070 mg/mL) y/o DNasa (0.00035 mg/mL). Se valoró la viabilidad y el crecimiento de las colonias bacterianas conservadas en condiciones óptimas de nutrición, temprana, pH y osmolaridad, a las 24, 48, 72 y 192 horas de exposición a estas nucleasas. Se observó que el efecto lítico se manifiesta en la mayor concentración y que las distintas cepas muestran una sensibilidad diferente a las enzimas, ya sea que se apliquen individualmente o en forma simultánea. Se concluye, que las nucleasas tienen actividad antimicrobiana selectiva in vitro, que corrobora el efecto que se ha observado in vivo, en donde además, de demostrar el efecto microbicida selectivo y lisar directamente a los microorganismos, controlan la infección porque destruyen a las células infectadas e inhiben la replicación de los microorganismos que se mantienen en el interior de algunas células.

Deteccion de la Desoxirribonucleasa Termoestable (Terminucleasa) directamente en el alimento / Detection of deoxyribonuclease thermostable (thermonuclease) directly in food thermostble

Se inocularon in vitro diversos alimentos de origen animal, con la cepa de Staphylococcus aureus FRI-S6, productora de la enterotoxina estafilococica del serotipo B y de la nucleasa tersmoestable. Se comprobo la concentracion microbiana de los inoculos, mediante siembra en superficie en medio Baird Parker. Se hallo termonucleasa en alimentos que contenian concentraciones microbianas de 10(6) - 10(7) UFC/g

Receptores estrogénicos: estandarización de un método para su demostración en muestras incluídas en parafina / Estrogen receptors: standardization of a method for it demonstration in paraffin included samples

Detecting estrogenic receptors on histological samples of breast tumors has a strong significance on the prognosis and treatment of this disease. The clasical detection method involves the incubation of the tissue with a monoclonal antibody from mouse directed against the estrogenic receptor (primary antibody) and a second incubation with another antibody that is directed against with an anti mouse I g G antibody. Afterwards this reaction is identified by an enzyme (generally horseradish peroxidase) that acquires a characteristic color that allows the identification of the cells that have the receptor. We demonstrate here that is possible to simplify the method modifyng qualitatively the treatment of the tissue samples before its exposure to the primary antibody and also shortening the incubation times with this antibody

Toxins of Moraxella bovis: effect on substrates and cells

Culturas totais em meio líquido e filtrados, de 12 cepas de Moraxella bovis, foram testados para determinar a presença de gelatinase, DNAse, lecitinase e dermonecrotoxinas. Foi também estudado seu efeito citotóxico sobre 5 culturas celulares de linhagem. Nas culturas totais demonstrou-se a presença de gelatinase e DNAse. Os filtrados produziram dermonecrose em cobaias brancas e efeito citotáxico em células BHK 21 (Cl.13), mas näo nas outras linhagens. A atividade tanto das culturas totais quanto dos filtrados foi eliminada por aquecimento a 100oC. Discute-se a participaçäo destas toxinas na patogênese e no controle da ceratoconjuntivite infecciosa bovina

Utilizaçäo da Técnica do AgNOR em patologia óssea / Utilization of AgNOR Technique in osseous pathology

A técnica da prata coloidal para a identificaçäo das regiöes organizadoras nucleolares (AgNOR) foi aplicada em 20 espécimes parafinizados de lesöes ósseas dos maxilares, sendo 05 osteossarcomas, 05 osteoblastomas, 05 osteomas e 05 fibromas ossificantes centrais. Foram realizadas análises quantitativas, através do método visual e computadorizado das regiöes organizadoras nucleolares (NORs). Os valores obtidos para a contagem do número de NORs por núcleo, através desses métodos foram os seguintes recpectivamente: osteossarcoma 3,11 e 3,25; osteoblastoma 1,64 e 1,79; osteoma 1,33 e 1, 58 e fibroma ossificante central 2,18 e 2,11. Para esses resultados, a análise estatística revelou significância na diferença entre o número médio de NORs por núcleo dos osteossarcomas em relaçäo às demais entidades estudadas. A análise dos valores obtidos para área, perímetro e forma das NORs, através do método computadorizado, demonstrou os seguintes valores médios respectivamente: osteossarcoma 2,37µm², 6,02µm e 0,70; osteoblasma 1,39µm², 4,60µm e 0,71; osteoma 0,56µm², 2,78µm e 0,74 e fibroma ossificante central 1,76µm², 5,69µm e 0,79. Foi estatisticamente significante a diferença entre os tumores estudados foi significante entre osteossarcoma e osteoma, para área; entre osteossarcoma e osteoma e entre osteoma e fibroma ossificante central, para perímetro; entre osteossarcoma e fibroma ossificante central e entre osteoblastoma e fibroma ossificante central, para forma. Nossos resultados mostraram a eficiência da Técnica do AgNOR em patologia óssea, salientando as vantagens do método computadorizado, no que diz respeito a possibilitar uma precisa análise morfodimensional. Com base nesses achados sugerimos a utilizaçäo de tal técnica como coadjuvante no diagnóstico histopatológico de neoplasias ósseas

Streptococcus pyogenes: un nuevo desafío / Streptococcus pyogenes: a new challenger

Streptococcus pyogenes es una bacteria conocida desde hace más de un siglo por los médicos. En la última década se ha presentado con un nuevo rostro asociado a cuadros clínicos invasores con una alta mortalidad. En el presente artículo se describe al agente, se clasifican estos cuadros clínicos, se discuten su etiopatogenia, tratamiento y prevención

Uma nova associaçäo antimicrobiana no desbridamento enzimático com colagenase / A new antimicrobial association in the enzymatic debridment with collagenase

A substituiçao do Cloranfenicol pela Gentamicina, associada à colagenase Clostridium peptidase A mostrou-se vantajosa na eliminaçao da escara em 66 doentes portadores de lesoes causadas por patologias diversas. Esta eliminaçao foi mais eficaz por sua precocidade, homogeneidade, facilidade e sobretudo por provocar a diminuiçao da flora patogênica local.