Metformin Inhibits ROS/TNF-alpha Axis-Mediated Chronic Kidney Disease Induced by TAA Independent of Leukocyte Infiltration in Association with the Inhibition of Kidney Injury Biomarkers / La Metformina Inhibe la Enfermedad Renal Crónica Mediada por el Eje ROS/TNF-alfa Inducida por TAA Independientemente de la Infiltración de Leucocitos en Asociación con la Inhibición de Biomarcadores de Lesión Renal

SUMMARY: The toxic effects of thioacetamide (TAA) and carbon tetrachloride on the human body are well recognized. In this study, we examined whether TAA intoxication can induce kidney leukocyte infiltration (measured as leukocyte common antigen CD45) associated with the augmentation of the reactive oxygen species (ROS)/tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) axis, as well as biomarkers of kidney injury with and without metformin treatment. Rats were either injected with TAA (200 mg/kg; twice a week for 8 weeks) before being sacrificed after 10 weeks (experimental group) or were pre-treated with metformin (200 mg/kg) daily for two weeks prior to TAA injections and continued receiving both agents until the end of the experiment, at week 10 (protective group). Using basic histology staining, immunohistochemistry methods, and blood chemistry analysis, we observed profound kidney tissue injury such as glomerular and tubular damage in the experimental group, which were substantially ameliorated by metformin. Metformin also significantly (p0.05) increase in kidney expression of CD45 positive immunostaining cells. In conclusion, we found that TAA induces kidney injury in association with the augmentation of ROS/TNF-α axis, independent of leukocyte infiltration, which is protected by metformin.

Son bien conocidosos los efectos tóxicos de la tioacetamida (TAA) y el tetracloruro de carbono en el cuerpo humano. En este estudio, examinamos si la intoxicación por TAA puede inducir la infiltración de leucocitos renales (medida como antígeno leucocitario común CD45) asociada con el aumento de las especies reactivas de oxígeno (ROS)/factor de necrosis tumoral-alfa (TNF-α), así como biomarcadores de daño renal con y sin tratamiento con metformina. A las ratas se les inyectó TAA (200 mg/kg; dos veces por semana durante 8 semanas) antes de sacrificarlas a las 10 semanas (grupo experimental) o se les pretrató con metformina (200 mg/kg) diariamente durante dos semanas antes de las inyecciones de TAA y continuaron recibiendo ambos agentes hasta el final del experimento, en la semana 10 (grupo protector). Usando tinción histológica básica, métodos de inmunohistoquímica y análisis químico de la sangre, observamos una lesión profunda del tejido renal, como daño glomerular y tubular en el grupo experimental, que mejoraron sustancialmente con la metformina. La metformina también inhibió significativamente (p0,05) en la expresión renal de células de inmunotinción positivas para CD45. En conclusión, encontramos que el TAA induce la lesión renal en asociación con el aumento del eje ROS/TNF-α, independientemente de la infiltración de leucocitos, que está protegida por metformina.

Suppression of diabetes-induced renal inflammatory cell infiltration by metformin associated with the amelioration of renal injury biomarkers / Supresión de la infiltración de células inflamatorias renales de diabetes-inducida, por metformina asociada con la mejora de los biomarcadores de lesión renal

SUMMARY: Diabetes and hypertension account for the majority of chronic kidney injury cases that can lead to renal failure. The link between the leukocytes common antigen (CD45) and diabetic kidney disease (DKD) with and without metformin incorporation in an animal model has not been investigated before. Therefore, we sought to assess the extent of leukocytes infiltration into kidney tissues 10 weeks following the induction of diabetes in rats treated with metformin. In addition, we monitored blood and urine parameters associated with diabetes. The model group of rats received streptozotocin (STZ; 50 mg/kg) injection after being fed for 14 days on a high-fat diet (HFD) and continuously fed a HFD until they were culled, at week 12. The protective group was treated in the same way except that these animals were put from day 1 on metformin (200 mg/kg) until being culled, on week 12. Kidneys were immunostained with CD45 as a marker of leukocytes infiltration and examined by light microscopy. Urine samples were tested for urine albumin and collected blood was analyzed for sugar, urea, creatinine, and oxidative stress and antioxidants biomarkers. Kidney injury secondary to diabetes was developed as demonstrated by (i) increased blood glucose, urea, and malondialdehyde (MDA) as a marker of lipid peroxidation; and (ii) kidney tissue damage and marked increase in kidney tissues expressing CD45 positive cells. The above markers were inhibited (p0.0006) by metformin. Also, a significant correlation was observed between CD45 score and glycemia, urea, MDA, and the antioxidant superoxide dismutase (SOD). Thus, our data demonstrate an association between the infiltration of CD45+ inflammatory cells into kidney tissues and biomarkers of kidney damage in a rat model of DKD, which was effectively protected by metformin.

RESUMEN: La diabetes y la hipertensión representan la mayoría de los casos de lesión renal crónica que pueden provocar insuficiencia renal. El vínculo entre el antígeno común de los leucocitos (CD45) y la enfermedad renal diabética (DKD) con y sin incorporación de metformina en un modelo animal no se había anteriormente investigado. El objetivo fue evaluar el grado de infiltración de leucocitos en los tejidos renales 10 semanas después de la inducción de diabetes en ratas tratadas con metformina. Además, monitoreamos los parámetros de sangre y orina asociados con la diabetes. El grupo modelo de ratas recibió una inyección de estreptozotocina (STZ; 50 mg/kg) después de ser alimentadas durante 14 días con una dieta alta en grasas (HFD) y continuamente alimentadas con un HFD hasta que fueron sacrificadas, en la semana 12. El grupo protector fue tratado de la misma manera excepto que estos animales fueron recibieron desde el día 1 metformina (200 mg/kg) hasta ser sacrificados, en la semana 12. Los riñones fueron inmunoteñidos con CD45 como marcador de infiltración de leucocitos y examinados por microscopía óptica. Las muestras de orina se analizaron en busca de albúmina y la sangre recolectada se analizó en busca de glucosa, urea, creatinina y biomarcadores de estrés oxidativo y antioxidantes. La lesión renal secundaria a la diabetes se desarrolló como lo demuestra (i) el aumento de la glucosa en sangre, la urea y el malondialdehído (MDA) como marcador de la peroxidación lipídica; y (ii) daño del tejido renal y marcado aumento en los tejidos renales que expresan células positivas para CD45. Los marcadores anteriores fueron inhibidos (p≤0.0006) por metformina. Además, se observó una correlación significativa entre la puntuación de CD45 y la glucemia, la urea, la MDA y la superóxido dismutasa antioxidante (SOD). Por lo tanto, nuestros datos demuestran una asociación entre la infiltración de células inflamatorias CD45+ en los tejidos renales y biomarcadores de daño renal en un modelo de rata con DKD, que fue protegido de manera efectiva por metformina.

Paracetamol poisoning induces acute liver injury in rats: inhibition of miR-155/cd45 axis-mediated antioxidant depletion and hepatotoxicity using quercetin and resveratrol / La intoxicación por paracetamol induce daño hepático agudo en ratas: inhibición de la depleción de antioxidantes mediado por el eje miR-155/cd45 y hepatotoxicidad usando quercetina y resveratrol

SUMMARY: Ingestion of an overdose of paracetamol (also called acetaminophen, or APAP) induces hepatotoxicity that can lead to liver failure. The link between the pro-inflammatory microRNA-155 (miR-155) and leukocyte infiltration (CD45) in APAP- antioxidant depletion and liver toxicity with and without the natural polyphenolic compounds, quercetin (QUR) plus resveratrol (RES) has not been previously studied. Therefore, acute hepatic injury was induced in rats by 2 g/kg APAP (single dose, orally) and another group started QUR (50 mg/kg) plus RES (30 mg/kg) treatment one week prior to APAP ingestion. Animals were culled 24 hours post the paracetamol treatment. APAP overdose induced hepatic and blood levels of miR-155 expression, CD45 (leukocyte common antigen) immunostaining, degenerated hepatocytes, and hepatic injury enzymes; alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST), which were markedly decreased by QUR+RES. Whereas, APAP intoxication ameliorated liver tissue levels of the antioxidants, glutathione peroxidase and superoxide dismutase that were augmented by QUR+RES. Moreover, a significant (p<0.05) correlation between miR-155/CD45 axis and liver tissue injury was observed. These findings show that paracetamol intoxication augments miR- 155/CD45 axis-mediated modulation of antioxidants and liver injury in rats, and is protected by QUR+RES.

RESUMEN: La ingestión de una sobredosis de paracetamol (también llamado acetaminofeno o APAP) induce hepatotoxicidad que puede provocar insuficiencia hepática. El vínculo entre el microARN-155 proinflamatorio (miR-155) y la infiltración de leucocitos (CD45) en el agotamiento de APAP- antioxidante y la toxicidad hepática con y sin los compuestos polifenólicos naturales, quercetina (QUR) más resveratrol (RES) no ha sido previamente investigado. En este estudio, se indujo daño hepático agudo en ratas con 2 g/kg de APAP (dosis única, por vía oral) y otro grupo comenzó el tratamiento con QUR (50 mg/ kg) más RES (30 mg/kg) una semana antes de la ingestión de APAP. Los animales se sacrificaron 24 horas después del tratamiento con paracetamol. La sobredosis de APAP indujo niveles hepáticos y sanguíneos de expresión de miR-155, inmunotinción de CD45 (antígeno leucocitario común), degeneración de los hepatocitos y daño hepático enzimático; alanina aminotransferasa (ALT) y aspartato aminotransferasa (AST), disminuyeron notablemente con QUR+RES. Mientras que la intoxicación con APAP mejoró los niveles de antioxidantes, glutatión peroxidasa y superóxido dismutasa en el tejido hepático los que aumentaron con QUR+RES. Además, se observó una correlación significativa (p<0,05) entre el eje miR-155/CD45 y la lesión del tejido hepático. Estos hallazgos muestran que la intoxicación por paracetamol aumenta la modulación mediada por el eje miR-155/CD45 de los antioxidantes y la lesión hepática en ratas, y está protegida por QUR+RES.

CD45 y leucemia linfoide aguda pediátrica / CD45 and childhood acute lymphoblastic leukemia

Introducción: El CD45 se expresa en las células hematopoyéticas, su determinación es indispensable para la clasificación inmunofenotípica de la leucemia linfoide aguda (LLA). Objetivo: Evaluar la expresión del antígeno CD45 en los blastos de pacientes pediátricos con LLA y su relación con las características biológicas, morfológicas y clínicas al inicio de la enfermedad, la respuesta al tratamiento y la supervivencia global (SG) de los enfermos. Métodos: Se estudiaron 160 pacientes con LLA entre diciembre del 2012 y diciembre del 2017, tratados con el protocolo ALL-IC BFM-SG 2009. El inmunofenotipaje celular de la médula ósea se realizó por citometría de flujo. Resultados: El fenotipo B CD45+ predominó en los menores de seis años de edad y en los mayores de diez, el fenotipo T CD45+. Se encontró diferencia significativa entre la ausencia de adenopatías mediastínicas, el fenotipo leucémico y la ausencia de CD45 (p=0.004); entre la respuesta a la prednisona en sangre periférica al día ocho, el fenotipo leucémico y la ausencia de CD45 (p=0.001). Se encontraron diferencias significativas entre la respuesta a la prednisona en sangre periférica el día ocho y la respuesta en médula ósea el día 33, según fenotipo leucémico (p=0.009) y la presencia en los blastos del antígeno CD45 (p=0.02). Se encontró diferencia significativa entre la SG de los enfermos, según fenotipo leucémico y la ausencia del antígeno CD45 (p=0.017). Conclusión: La expresión o ausencia del antígeno de CD45 en los blastos tiene relación con la respuesta al tratamiento y la SG de pacientes pediátricos con LLA(AU)

Introduction: CD45 is expressed in hematopoietic cells, its determination is essential for the immunophenotypic classification of acute lymphoid leukemia (ALL). Objective: To evaluate the expression of the CD45 antigen in the blasts of pediatric patients with ALL and its relationship with the biological, morphological and clinical characteristics at the onset of the disease, the response to treatment and the overall survival (OS) of the patients. Methods: 160 patients with ALL were studied between December 2012 and December 2017, treated with the ALL-IC BFM-SG 2009 protocol. Bone marrow cellular immunophenotyping was performed by flow cytometry. Results: Patients with the CD45 + B phenotype predominated in those under six years of age, while those with a CD45 + T phenotype in those older than ten. A significant difference was found between the absence of mediastinal lymph nodes, the leukemic phenotype and the absence of CD45 (p = 0.004). A significant difference was found between the response to prednisone in peripheral blood at day eight, the leukemic phenotype and the absence of CD45, p = 0.001. Significant differences were found between the response to prednisone in peripheral blood on day eight and the response in bone marrow on day 33, according to leukemic phenotype and the presence in blasts of the CD45 antigen (p = 0.009 and p = 0.02, respectively). A significant difference was found between the OS of patients, according to leukemic phenotype and the absence of the CD45 antigen, p = 0.017. Conclusion: The expression or absence of the CD45 antigen in blasts is related to the response to treatment and OS of pediatric patients with ALL(AU)

Subsets of T lymphocytes in the lesional skin of pityriasis rosea

Abstract: Background: Pityriasis rosea is a common papulosquamous disorder. However, its etiology and pathogenesis remain unclear. Objective: We investigate the types of inflammatory cells infiltrating the lesional skin of pityriasis rosea and demonstrate whether T-cell-mediated immunity is involved in the pathogenesis of this condition or not. Methods: The biopsies were taken from the lesional skin of 35 cases of patients diagnosed with pityriasis rosea. The specimens were prepared in paraffin sections, then submitted to routine immunohistochemistry procedures using monoclonal antibodies directed against CD3, CD4, CD8, CD20 and CD45RO and horseradish peroxidase-labeled goat anti-human antibodies. The positive sections were determined by the ratio and staining intensity of positive inflammatory cells. Results: The mean score of positive CD3, CD4, CD8, and CD45RO staining was respectively 3.74±3.88, 5.67±4.40, 2.94±3.42 and 7.68±4.33 in these pityriasis rosea patients (P<0.001). The percentage of positive staining was 54.29% (19/35), 69.7% (23/33), 40% (14/35) and 79.41% (27/34) (P<0.05). However, the staining of CD20 was negative in all samples. The mean score of CD3 staining in patients with time for remission ≤60 days (4.90±4.21) was higher than that in patients with time for remission >60 days (2.00±2.5) (P<0.05), whereas no statistical difference in the mean score of CD4, CD8 and CD45RO staining was observed. study liMitations: The sample size and the selected monoclonal antibody are limited, so the results reflect only part of the cellular immunity in the pathogenesis of pityriasis rosea. Conclusion: Our findings support a predominantly T-cell mediated immunity in the development of pityriasis rosea.

Antígenos MICA y trasplante / MICA antigens and transplantation

Los antígenos leucocitarios humanos (HLA, del inglés human leukocyte antigens), codificados por los genes del complejo principal de histocompatibilidad (MHC, del inglés m ajor histocompatibility complex), actúan como inductores de las respuestas inmunitarias en el trasplante; sin embargo, los productos de los genes relacionados a cadenas MHC clase I (MIC, del inglés MHC class I chain-related genes), constituyen también uno de los blancos del rechazo. La familia de los genes MIC consta de siete miembros, de los cuales solo MICA y MICB son funcionales. Los transcriptos son glicoproteínas de superficie celular de 62 kDA que presentan homología en su secuencia con las moléculas HLA clase I y cuya función está relacionada con la inmunidad innata. En los órganos trasplantados ocurre un incremento en la expresión de los antígenos MICA como una señal temprana de "peligro" debido al trauma quirúrgico y la isquemia. Esta sobrexpresión antigénica puede llevar al rechazo mediado por anticuerpos anti-MICA que activan el complemento y por un incremento de la citotoxicidad debido a la estimulación en los linfocitos citolíticos naturales (NK, del inglés natural killer) y los linfocitos CD8+ &+ αß y γδ, del receptor conocido como NKG2D (NK grupo 2 miembro D(AU)

Human leukocyte antigens (HLA), encoded by major histocompatibility complex (MHC) genes, act as inducers of immune responses in transplantation. However, the products of the genes related to MHC class I chains (MIC) are also one of the targets of rejection. The family of MIC genes consists of seven members, of which only MICA and MICB are functional. Transcripts are cell surface glycoproteins of 62 kDa that exhibit homology in sequence with HLA class I molecules and whose function is related to innate immunity. In transplanted organs an increase in the expression of MICA antigens occurs as an early sign of "danger" due to surgical trauma and ischemia. This antigenic overexpression can lead to rejection mediated by complement-activating anti-MICA antibodies and by increased cytotoxicity due to stimulation in natural killer (NK) lymphocytes and CD8 + + αß and γδ lymphocytes. Receptor known as NKG2D (NK group 2 member D)(AU)

Expresión del antígeno CD45 en la Leucemia Linfoide Aguda Pediátrica / Evaluation of CD45 antigen expression in acute lymphoblastic leukemia

Introducción: la leucemia linfoide aguda (LLA) es la neoplasia más frecuente en la infancia. La determinación del antígeno CD45 discrimina entre los blastos y las células reactivas en la médula ósea (MO). Objetivo: evaluar la expresión del antígeno CD45 sobre los blastos de pacientes con LLA, según los distintos subtipos inmunológicos, su posible relación con las características biológicas y clínicas de presentación de la enfermedad y la respuesta al tratamiento antileucémico. Métodos: se estudiaron 150 pacientes con LLA procedentes de varios servicios oncohematológicos del país, entre enero del 2008 y mayo del 2015. El inmunofenotipaje celular de la MO se realizó por citometría de flujo. Resultados: el antígeno CD45 mostró una gran heterogeneidad de expresión sobre los linfoblastos. Del total de enfermos estudiados, 19,3 por ciento no expresaron sobre los blastos el antígeno CD45, 36,7 por ciento presentaron una expresión moderada y 44 por ciento mostraron una alta densidad de expresión. Se encontró diferencia significativa al comparar el fenotipo leucémico con la expresión del antígeno CD45 sobre los blastos (p = 0,000). Ningún enfermo presentó adenopatías mediastinales, con diferencias significativas (p = 0,000), según el fenotipo y la expresión de CD45. Los pacientes con LLA-T cuyos blastos no expresaron CD45 tuvieron una mala respuesta al tratamiento anti-leucémico los días 8 y 15 en sangre periférica y MO, respectivamente. Conclusión: la expresión de CD45 sobre los blastos, pudiera ser considerada como un factor pronóstico adicional para la estratificación en diferentes grupos de riesgos, de la LLA en el niño(AU)

Introduction: Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is the most frequent neoplasia in infancy. Determination of CD45 antigen discriminates between blasts and reactive cells in the bone marrow (MO). Objective: To evaluate the expression of the CD45 antigen on the blasts of patients with ALL, according to the different immunological subtypes, their possible relation with the biological and clinical characteristics of the disease and the response to antileukemic treatment. Methods : 150 patients with ALL were studied from various onco-hematological services of the country, between January 2008 and May 2015. The cellular immunophenotyping of the MO was performed by flow cytometry. Results : The CD45 antigen showed a great heterogeneity of expression on the lymphoblasts. Of the total number of patients studied, 19.3 percent did not express the CD45 antigen on the blasts, 36.7 percent presented moderate expression and 44 percent showed a high expression density of it.A significant difference was found when comparing the leukemic phenotype with the expression of the CD45 antigen on the blasts (p = 0.000). No patient had mediastinal lymphadenopathy, with significant differences (p = 0.000), according to the phenotype and CD45 expression. Patients with T-ALL whose blasts did not express CD45 had a poor response to anti-leukemic treatment on days 8 and 15 in peripheral blood and MO, respectively. Conclusion: CD45 expression on blasts could be considered as an additional prognostic factor for stratification in different risk groups of ALL in children(AU)

Cardiopatía chagasica: identificación y cuantificación de células infiltrantes, en corazones de pacientes que sufrieron muerte cardiaca a distintas edades / Human chagasic cardiopathy: identification and quantification of intracardiac infiltrating cells, in patients died by cardiac failure at different ages

Esta investigación fue realizada para obtener datos nuevos sobre factores que intervendrían en la producción y progresión de la cardiopatía chagasica humana (CChH) con muerte por fallo cardíaco. Estudiamos muestras cardíacas de pacientes que murieron a edad temprana y más tardía. METODOS: Caracterizamos y cuantificamos los tipos de células infiltrantes mediante anticuerpos monoclonales; y con métodos histológicos clássicos. RESULTADOS: Hallamos intensa infiltración intracardíaca por linfocitos que reaccionaron con el anticuerpo para CD45RO que muestra linfocitos T activados (más de 70). Similar número mostró reactividad para subtipo CD4. Dichos linfocitos mostraron substancia PAS+ en citoplasma. Macrófagos fueron detectados en número superior a 25. Pocos linfocitos reaccionaron para CD8. Hubo un número muy bajo de linfocitos B. Otras células infiltradas fueron mastocitos intramiocárdicos, en número elevado. Cualitativamente, esos hallazgos fueron similares en los dos grupos de pacientes. Cuantitativamente, el número de linfocitos T y el de mastocitos fue significativamente mayor en los casos que sufrieron muerte temprana (p<0.001). No se observó T.cruzi. Se observaron daños en cardiomiocitos, con linfocitos T y macrófagos adheridos. CONCLUSIONES: Los hallazgos sugieren una activa e intensa existencia de mecanismos inmunocelulares en la producción y evolución de la CChH grave, en los que intervienen linfocitos T CD4+, con substancias PAS+, macrófagos, y mastocitos. Dichas células, mostraron citoadherencia a cardiomiocitos con lesiones; y por su ubcación y número asociáronse también a arritmias cardíacas malignas. En base a dichos hechos sugerimos que serían causas de pobre perfomance cardíaca en la CChH, y merecerían considerarse con respecto a estrategias terapéuticas