Understanding the complexity of Tityus serrulatus venom: A focus on high molecular weight components

Tityus serrulatus scorpion is responsible for a significant number of envenomings in Brazil, ranging from mild to severe, and in some cases, leading to fatalities. While supportive care is the primary treatment modality, moderate and severe cases require antivenom administration despite potential limitations and adverse effects. The remarkable proliferation of T. serrulatus scorpions, attributed to their biology and asexual reproduction, contributes to a high incidence of envenomation. T. serrulatus scorpion venom predominantly consists of short proteins acting as neurotoxins (α and ß), that primarily target ion channels. Nevertheless, high molecular weight compounds, including metalloproteases, serine proteases, phospholipases, and hyaluronidases, are also present in the venom. These compounds play a crucial role in envenomation, influencing the severity of symptoms and the spread of venom. This review endeavors to comprehensively understand the T. serrulatus scorpion venom by elucidating the primary high molecular weight compounds and exploring their potential contributions to envenomation. Understanding these compounds' mechanisms of action can aid in developing more effective treatments and prevention strategies, ultimately mitigating the impact of scorpion envenomation on public health in Brazil.

Diretrizes brasileiras do angioedema hereditário 2022 ­ Parte 1: definição, classificação e diagnóstico / 2022 Brazilian guidelines for hereditary angioedema ­ Part 1: definition, classification, and diagnosis

O angioedema hereditário é uma doença autossômica dominante caracterizada por crises recorrentes de edema que acometem o tecido subcutâneo e o submucoso, com envolvimento de diversos órgãos. Os principais locais afetados são face, membros superiores e inferiores, as alças intestinais e as vias respiratórias superiores. Em decorrência da falta de conhecimento dessa condição por profissionais de saúde, ocorre atraso importante no seu diagnóstico, comprometendo a qualidade de vida dos indivíduos afetados. Além disso, o retardo no diagnóstico pode resultar em aumento da mortalidade por asfixia devido ao edema de laringe. A natureza errática das crises com variação do quadro clínico e gravidade dos sintomas entre diferentes pacientes, e no mesmo paciente ao longo da vida, se constitui em desafio no cuidado dos doentes que têm angioedema hereditário. O principal tipo de angioedema hereditário é resultante de mais de 700 variantes patogênicas do gene SERPING1 com deficiência funcional ou quantitativa da proteína inibidor de C1, porém nos últimos anos outras mutações foram descritas em seis outros genes. Ocorreram avanços importantes na fisiopatologia da doença e novas drogas para o tratamento do angioedema hereditário foram desenvolvidas. Nesse contexto, o Grupo de Estudos Brasileiro em Angioedema Hereditário (GEBRAEH) em conjunto com a Associação Brasileira de Alergia e Imunologia (ASBAI) atualizou as diretrizes brasileiras do angioedema hereditário. O maior conhecimento dos diversos aspectos resultou na divisão das diretrizes em duas partes, sendo nessa primeira parte abordados a definição, a classificação e o diagnóstico.

Hereditary angioedema is an autosomal dominant disease characterized by recurrent attacks of edema that affect the subcutaneous tissue and the submucosa, involving several organs. The main affected sites are the face, upper and lower limbs, gastrointestinal tract, and upper airways. Because health professionals lack knowledge about this condition, there is a significant delay in diagnosis, compromising the quality of life of affected individuals. Furthermore, delayed diagnosis may result in increased mortality from asphyxia due to laryngeal edema. The erratic nature of the attacks with variations in clinical course and severity of symptoms among different patients and in one patient throughout life constitutes a challenge in the care of patients with hereditary angioedema. The main type of hereditary angioedema results from more than 700 pathogenic variants of the SERPING1 gene with functional or quantitative deficiency of the C1 inhibitor protein, but in recent years other mutations have been described in six other genes. Important advances have been made in the pathophysiology of the disease, and new drugs for the treatment of hereditary angioedema have been developed. In this context, the Brazilian Study Group on Hereditary Angioedema (GEBRAEH) in conjunction with the Brazilian Association of Allergy and Immunology (ASBAI) updated the Brazilian guidelines on hereditary angioedema. Greater knowledge of different aspects resulted in the division of the guidelines into two parts, with definition, classification, and diagnosis being addressed in this first part.

Are stem cell marker expression and cd133 analysis relevant to differentiate colorectal cancer? / A expressão de marcadores de células-tronco e a análise do cd133 são relevantes na diferenciação do câncer colorretal?

ABSTRACT Background: CD133 and AXL have been described as cancer stem cell markers, and c-MYC as a key regulatory cellular mechanism in colorectal cancer (CRC). Aim: Evaluate the prognostic role of the biomarkers CD133, AXL and c-MYC and their association with clinicopathologic characteristics in colorectal adenocarcinomas and adenomas. Methods: A total of 156 patients with UICC stage I-IV adenocarcinomas (n=122) and adenomas (n=34) were analyzed. Tissue microarrays (TMA) from primary tumors and polyps for CD133, c-MYC and AXL expression were performed and analyzed for their significance with clinicopathologic characteristics. Results: Poorly differentiated adenocarcinomas and disease progression were independent risk factors for poor overall survival. The median overall survival time was 30 months. Positive CD133 expression (35.9% of all cases), particularly of right-sided CRCs (44.8% of the CD133+ cases), was negatively correlated with death in the univariate analysis, which did not reach significance in the multivariate analysis. c-MYC (15.4% of all cases) was predominantly expressed in advanced-stage patients with distant (non-pulmonary/non-hepatic) metastasis. AXL expression was found only occasionally, and predominantly dominated in adenomas, with less penetrance in high-grade dysplasia. Conclusions: CD133 expression was not associated with inferior overall survival in CRC. While AXL showed inconclusive results, c-MYC expression in primary CRCs was associated with distant metastasis.

RESUMO Racional: CD133 e AXL são descritos na literatura como marcadores de células-tronco tumorais, e c-MYC cumpre papel chave como mecanismo de regulação celular no câncer colorretal (CCR). Objetivo: Avaliar o papel prognóstico dos biomarcadores CD133, AXL e c-MYC e sua associação com características clinicopatológicas de adenocarcinomas e adenomas colorretais. Métodos: Um total de 156 pacientes com adenocarcinomas de estádio UICC I-IV (n=122) e adenomas (n=34) colorretais foram avaliados. Microarranjos teciduais (TMA) dos tumores primários e adenomas foram realizados em busca de expressão de CD133, c-MYC e AXL, com posterior análise de relação significativa com características clinicopatológicas. Resultados: Adenocarcinomas pobremente diferenciados e progressão de doença foram fatores de risco independentes para má sobrevida global. A taxa mediana de sobrevida global foi de 30 meses. Expressão positiva de CD133 (35,9% dos casos), particularmente em cânceres de cólon direito (44,8% dos casos CD133+), correlacionou-se negativamente com óbito na análise univariada, sem significância estatística na análise multivariada. c-MYC (15,4% dos casos) teve predomínio de expressão em pacientes com estádio avançado com metástases distantes (não-pulmonares/não-hepáticas). Expressão de AXL foi pouco encontrada, com predomínio em adenomas, com menor penetrância em displasia de alto grau. Conclusão: Expressão de CD133 não se associou com sobrevida global inferior em CCR. Enquanto AXL demonstrou resultados inconclusivos, expressão de c-MYC em tumores primários se associou-se à metástases à distância.

Acute-phase protein concentration in bronchoalveolar lavage fluid from healthy horses / Proteínas de fase aguda do lavado broncoalveolar de equinos hígidos

Bronchoalveolar lavage fluid (BALF) was analyzed to obtain information on leakage of acute-phase proteins from the blood into the respiratory lumen and about local synthesis. Ceruloplasmin, transferrin, albumin, α1-antitripsin, immunoglobulin G heavy, immunoglobulin G light, immunoglobulin A, haptoglobin, acidic glycoprotein, and P23 were measured in BALF from 30 horses without inflammatory disease by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). In serum, the same proteins were identified except for α1-antitrypsin. In conclusion, this study demonstrated that polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) can be used for the determination of acute-phase proteins in BALF samples from horses. In healthy horses, the values are very low, but they can be compared with reference values to assist in the diagnosis of animals with respiratory diseases.(AU)

O líquido obtido através da lavagem broncoalveolar (LBA) foi analisado para obter informações sobre as proteínas da fase aguda. Ceruloplasmina, transferrina, albumina, α1-antitripsina, imunoglobulina G pesada, imunoglobulina G leve, imunoglobulina A, haptoglobina, glicoproteína ácida e P23 foram medidas nos LBA de 30 cavalos sem doença inflamatória por eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecilsulfato de sódio (SDS-PAGE). No soro, as mesmas proteínas foram identificadas, exceto a α1-antitripsina. Em conclusão, este estudo demonstra que a eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) pode ser usada para a determinação de proteínas de fase aguda em amostras de LBA em cavalos. Em cavalos saudáveis, os valores são muito baixos, no entanto, podem ser comparados e auxiliar no diagnóstico de animais com doenças respiratórias.(AU)

Expressão e caracterização da glicoproteína D do herpesvírus equídeo 1 em Pichia pastoris / Expression and characterization of equid herpesvirus 1 glycoprotein D in Pichia pastoris

O herpesvírus equídeo 1 (EHV-1) apresenta distribuição mundial e causa graves prejuízos à equideocultura. É agente de surtos de doença respiratória, reprodutiva e neurológica, em equídeos jovens e adultos. A glicoproteína D (gD) do envelope viral é essencial para ligação e penetração em células permissivas e direcionamento do sistema imunológico do hospedeiro, induz respostas imunes humorais e celulares, sendo um antígeno apropriado para ser utilizado em vacinas e imunodiagnóstico. O objetivo deste trabalho foi expressar e caracterizar a gD do EHV-1 em Pichia pastoris para posterior utilização como antígeno em técnicas de imunodiagnóstico e formulação de vacinas recombinantes. Uma sequência de DNA que codifica uma forma truncada da gDEHV-1 foi clonada no vetor pPICZαA de expressão em P. pastoris. Obteve-se uma proteína de ~41 kDa, como esperado. A proteína apresentou glicosilação entre 4 kDa e 16 kDa, demonstrada por deglicosilação enzimática. A proteína recombinante foi caracterizada antigenicamente e imunogenicamente por Western blot, utilizando-se anticorpos policlonais equinos anti-EHV-1, e por ELISA indireto em modelo murino, demonstrando que a gD recombinante manteve epítopos similares aos da proteína nativa. Esses resultados sugerem que a gDEHV-1 é um antígeno promissor para uso como imunobiológico no controle do EHV-1.(AU)

Equine herpesvirus 1 (EHV-1) has a worldwide distribution and causes serious damage to horse breeding. It is an agent of respiratory, reproductive and neurological disease outbreaks in young and adult equids. Viral envelope glycoprotein D (gD) is essential for binding and penetration into permissive cells and targeting the host immune system, inducing humoral and cellular immune responses, and is an appropriate antigen for use in vaccines and immunodiagnostics. The objective of this work was to express in Pichia pastoris and to characterize EHV-1 gD for later use as an antigen in immunodiagnostic techniques and formulation of recombinant vaccines. A DNA sequence encoding a truncated form of gDEHV-1 has been cloned into the P. pastoris expression vector pPICZαA. A protein of ~41 kDa was obtained as expected. The protein presented glycosylation between 4 kDa and 16 kDa, demonstrated by enzymatic deglycosylation. The recombinant protein was antigenically and immunogenically characterized by Western blot using equine polyclonal anti-EHV-1 antibodies, and by indirect ELISA in a murine model, demonstrating that the recombinant gD maintained epitopes similar to those of the native protein. These results suggest that gDEHV-1 is a promising antigen for use as an immunobiological in the control of EHV-1.(AU)

Use of a commercial ELISA kit specific for glycoprotein E peptides to indirectly detect Caprine Herpesvirus 1 (CpHV-1) in the state of São Paulo, Brazil / Uso de kit ELISA comercial específico para peptídeos da glicoproteína E para detecção indireta de Herpesvírus Caprino tipo 1 (CpHv-1) no estado de São Paulo, Brasil

Caprine herpesvirus 1 (CpHV-1) infection is associated with clinical manifestations related to animal age, with high mortality in kids and infertility in adults. Given the scarcity of research about the epidemiological situation of this infection in Brazilian flocks, we aimed to conduct a cross-sectional descriptive study to detect antibodies against CpHV-1 in goats in the state of São Paulo, Brazil. Fifty-five male and female goats ­ kids and adult ­ were assessed in this study. Blood serum was analyzed by a commercial ELISA kit to detect antibodies against CpHV-1, which had not been used in Brazil before. No animals were reactive. Brazil lacks information about CpHV-1 infection in goat flocks. Continuing the study is crucial to understand the epidemiological situation of the disease and establish protocols for infection control.(AU)

A infecção pelo Herpesvírus Caprino tipo 1 (CpHv-1) está associada a manifestações clínicas relacionadas à idade dos animais, com alta mortalidade em filhotes e infertilidade em adultos. Diante da escassez de estudos sobre situação epidemiológica dessa infecção nos rebanhos brasileiros, a presente pesquisa teve como objetivo realizar um estudo transversal e descritivo para a detecção de anticorpos anti-Herpesvírus Caprino tipo 1 em caprinos do estado de São Paulo, Brasil. Foram avaliados 55 caprinos machos e fêmeas, filhotes e adultos. O soro sanguíneo foi analisado por um kit ELISA comercial para detecção de anticorpos contra CpHv-1, de utilização inédita no Brasil. Nenhum animal estudado foi sororreagente. O Brasil carece de informações acerca da infecção pelo Herpesvírus Caprino tipo 1 nos rebanhos caprinos do país. A continuidade do estudo é imprescindível para compreender a situação epidemiológica da enfermidade e estabelecer protocolos para controle da infecção.(AU)

Efficacy and limitations of different approaches to anticipate the diagnosis of pregnancy in cattle / Eficácia e limitações de diferentes abordagens para antecipar o diagnóstico de gestação em bovinos

The study evaluated sonographic and serologic exams performed for early (20 to 30d) diagnosis of pregnancy. One hundred-twenty (n= 120) bovine recipients were synchronized (estrous=D0) and timed embryo transferred (TET, D7) with fresh in vitro produced embryos. In the first trial (n= 46), diagnosis of pregnancy was performed on day 20 (D20) by detecting CL blood flow (BF) and by Pregnancy-Associated Glycoproteins (PAGs) serology. In the second trial (n= 30), pregnancy diagnosis was performed on D25 by ultrasound visualization of uterine contents and by PAGs serology. In the last trial, PAG's serology was performed on D30. Ultrasonographic detection of the uterine contents and embryo viability performed on D30 (DG30) was considered the gold standard. The PROC FREQ procedure was used to test the agreement between diagnostic methods. On D20, the Doppler ultrasonography of the CL had showed high sensitivity (100%), but only moderate specificity (53.3%). On the same day, serologic diagnostic had no agreement (k= -0.08, P< 0.46) with the gold standard, with very low sensitivity (6.3%). However, the sensitivity of the serologic exam increased dramatically (from 6.3 to 100%) from D20 to D25, and it contributed to detect false negatives from the ultrasound diagnosis, improving the overall accuracy from 90% to 96.7%.(AU)

O estudo foi planejado para correlacionar exames ultrassonográficos e sorológicos realizados para o diagnóstico precoce (20 a 30d) de gestação. Cento e vinte (n= 120) receptoras bovinas foram sincronizadas (estro=D0), e embriões frescos produzidos in vitro foram transferidos em tempo fixo (TETF, D7). No experimento 1 (n= 46), o diagnóstico de gestação foi realizado no D20, pela detecção do fluxo sanguíneo do CL e pela sorologia de glicoproteínas associadas à gestação (PAGs). No experimento 2 (n= 30), a detecção da gestação foi realizada por meio da visualização do conteúdo do útero e também pela sorologia para PAGs. No experimento 3, a sorologia para PAGs foi realizada no D30. Em todos os experimentos, a visualização ultrassonográfica da vesícula e da viabilidade embrionária, realizada no D30, foi considerada padrão-ouro. O procedimento PROC FREQ testou o nível de concordância dos métodos diagnósticos. No D20, o diagnóstico baseado na vascularização do CL mostrou alta sensibilidade (100%) e apenas moderada especificidade (53,3%). Nesse mesmo dia, o diagnóstico sorológico não apresentou concordância (k=-0,08, P<0,46) com o padrão-ouro, além de baixa sensibilidade (6,3%). No entanto, a sensibilidade do exame sorológico aumentou drasticamente (6,3 para 100%) do D20 para o D25, contribuindo para detectar falsos negativos diagnosticados pela ultrassonografia, melhorando a acurácia (90 para 96,7%).(AU)

Respuesta inmunoprotectora inducida por la glicoproteina D recombinante en el modelo de infección respiratoria de ratones BALB/c por alfaherpesvirus equino 1 / Immunoprotective response induced by recombinant glycoprotein D in the BALB/c respiratory mouse model " of Equid alphaherpesvirus 1 infection

Equid alphaherpesvirus 1 (EHV-1) infection causes abortion, respiratory disease, perinatal deaths and neurological disorders in horses. The natural infection and available vaccines provide only partial and short-lived protection against reinfections. In the present study, we analyzed the ability of purified baculovirus-expressed glycoprotein D (gD) administered by different routes to induce protective immunity in BALB/c mice after challenge with the EHV-1 AR8 strain. Clinical signs varied among the different groups of mice immunized by parenteral routes, and, although gD induced a specific serum IgG response, it did not prevent the virus from reaching the lungs. Intranasally immunized mice showed no clinical signs, and virus isolation from lungs, histological lesions and antigen detection by immunohistochemistry were negative. In addition, by this route, gD did not stimulate the production of serum IgG and IgA. However, a specific IgA response in the respiratory tract was confirmed in intranasally immunized mice. Thus, we conclude that the mucosal immune response could reduce the initial viral attachment and prevent the virus from reaching the lungs. Our findings provide additional data to further study new immunization strategies in the natural host.

La infección con alfaherpesvirus equino 1 (EHV-1) causa abortos, enfermedad respiratoria, muertes perinatales y desórdenes neurológicos en equinos. La infección natural y las vacunas disponibles solo proporcionan protección parcial y de corta duración contra las reinfecciones. En el presente estudio se analizó la inducción de inmunidad protectiva de la glicoproteina D (gD) expresada en baculovirus y purificada al ser administrada por diferentes rutas en ratones BALB/c desafiados con la cepa AR8 de EHV-1. Los signos clínicos fueron variables entre los grupos de ratones inmunizados por rutas parenterales y, aunque la gD indujo respuesta especifica de IgG en suero, no logró prevenir la llegada del virus al pulmón. En los ratones inmunizados intranasalmente no se observaron signos clinicos ni lesiones histopatológi-cas, y el aislamiento viral y la detección de antigenos por inmunohistoquímica en pulmón fueron negativos. Además, por esta ruta la gD no estimuló la producción de IgG y de IgA en suero. Sin embargo se confirmó la respuesta de IgA especifica en el tracto respiratorio de ratones inmunizados intranasalmente. Esta respuesta inmune mucosal podría haber reducido la unión inicial del virus a la célula huésped y, de este modo, prevenir la llegada del virus al pulmón. Nuestros hallazgos proporcionan un aporte para continuar estudiando nuevas estrategias de inmunización en el huésped natural.

Identification of glycoproteins in mucous cells of the gill epithelium of Colossoma macropomum after exposure to organophosphate / Identificação das glicoproteínas nas células mucosas do epitélio branquial de Colossoma macropomum após exposição ao organofosforado

The use of organophosphates has been recommended for fish, especially the trichlorfon to control parasites. Colossoma macropomum were exposed to trichlorfon during 96 hours and of total number of mucous cells decreased in the number of cells when compared to the control group. Glycoproteins acid, acid sulphated and neutral was identified in the gill epithelium. Neutra glycoprotein had a significant decrease between control and the sublethal concentration. Acid glycoprotein didn't have any significant difference between the groups exposed to the trichlorfon, compared to the control group. Sulfated acidic glycoprotein in the group exposed to the trichlorfon was noticed a reduction in number of mucosal cells acidic sulphated. The differences between density cell and production glycoprotein was a response of these cells after exposure to xenobiotic. The reduction of neutral, acid and sulphated acid glycoprotein in the MC of the gill epithelium Colossoma macropomum may affect gills epithelial surface protection by reducing the formation of an unstirred layer and enhance the ion loss.(AU)

A utilização de organofosforados tem sido recomendada em pisciculturas, principalmente o trichlorfon, para o controle de parasitoses. Colossoma macropomum foram expostos ao trichlorfon durante 96 horas, e o número total de células mucosas diminuiu no número de células quando comparado com o grupo controle. Glicoproteínas ácida, ácida sulfatada e neutra foram identificadas no epitélio branquial. Glicoproteína neutra teve uma diminuição significativa entre o controle e a concentração subletal. Glicoproteína ácida não apresentou diferença significativa entre os grupos expostos ao triclorfon, em comparação com o grupo controle. Glicoproteína ácida sulfatada no grupo exposto ao triclorfon teve uma redução no número de células da mucosa ácida sulfatada. As diferenças entre a densidade celular e a produção de glicoproteína foi uma resposta dessas células após exposição aos xenobióticos. A redução das glicoproteínas neutra, ácida e ácida sulfatada no epitélio branquial de Colossoma macropomum pode afetar a proteção da superfície, reduzindo a formação de uma camada de muco, e aumentar a perda de íons.(AU)

Laronidase como terapia de reposição enzimática na mucopolissacaridose tipo I / Laronidase as enzyme replacement therapy in mucopolysaccharidosis type I

CONTEXTO: A mucopolissacaridose tipo I (MPS I) é uma doença lisossômica (DL) crônica, progressiva, causada pela atividade deficiente da alfa-L-iduronidase (IDUA). A IDUA é responsável pela clivagem dos resíduos de ácido idurônico dos glicosaminoglicanos (GAGs) heparan e dermatan sulfato. Na MPS I, ocorre o acúmulo desses GAGs parcialmente degradados no interior dos lisossomos e o aumento da sua excreção na urina. Em consequência, os pacientes apresentam comprometimento dos sistemas respiratório, nervoso, musculoesquelético, gastrointestinal (fígado e baço), cardiovascular, dentre outros. A MPS I é herdada de forma autossômica recessiva, sendo uma doença rara. A sua incidência mundial é bastante variável, sendo estimada entre 0,69 e 1,66 por 100.000 pessoas. Está associada a três formas clássicas, que diferem entre si com base na presença de comprometimento neurológico, na velocidade de progressão da doença e na gravidade do acometimento dos órgãos-alvo. Não existe tratamento curativo para a MPS I. O manejo clínico dos pacientes envolve equipe multidisciplinar e inclui intervenções realizadas no nível do fenótipo clínico (como cirurgias para correção de hérnias) e no nível da proteína mutante (transplante de células hematopoiéticas (TCTH) e terapia de reposição enzimática (TRE), conduzida com laronidase, enzima produzida por tecnologia de DNA recombinante). TECNOLOGIA: Laronidase. INDICAÇÃO: Reposição enzimática na mucopolissacaridose tipo I. PERGUNTA: O uso da laronidase como TRE em pacientes com MPS tipo I é eficaz e seguro na melhora clínica e da qualidade de vida dos pacientes? EVIDÊNCIAS CIENTÍFICAS: Foram realizadas buscas nas seguintes bases de dados: PubMed, Embase, Lilacs, Cochrane e ClinicalTrials.gov. Treze estudos foram incluídos nesse relatório, sendo nove ensaios clínicos controlados e randomizados, 4 revisões sistemáticas, os quais foram avaliados pelos desfechos, classificados, por sua vez, como de maior ou menor relevância clínica no tratamento da doença. Dentre os quatro desfechos considerados de maior relevância avaliados, o tratamento com laronidase trouxe benefício clinicamente significativo na capacidade de flexão do ombro que reflete um efeito positivo nas doenças osteoarticulares. Para os outros desfechos avaliados, qualidade de vida, manifestações cardiológicas e doença ocular não foi possível determinar com precisão a existência de benefício. Entre os desfechos de menor relevância, o uso de laronidase demonstrou ter impacto benéfico na diminuição da excreção de GAGs urinários e diminuição do crescimento hepático, mas com efeito incerto na capacidade respiratória, e no crescimento e estado nutricional. O uso de laronidase foi considerado seguro, não se relatando efeitos adversos importantes que pudessem comprometer o tratamento. Em estudos não controlados ou randomizados observaram-se maior probabilidade de sobrevida e menor impacto em órgãosalvo em participantes que fizeram o tratamento de reposição enzimática, principalmente quando se iniciava o tratamento de forma mais precoce. Recomendam-se que sejam implementadas políticas de saúde e educacionais no Brasil, que permitam o diagnóstico precoce dos pacientes, a fim de possibilitar a realização de TCTH, quando indicado, o início precoce da TRE e o aconselhamento genético. Da mesma forma, Protocolo Clínico e Diretrizes Terapêuticas deve estabelecer os critérios para início e interrupção do tratamento. ANÁLISE DE IMPACTO ORÇAMENTÁRIO: A estimativa de impacto orçamentário decorrente da incorporação de laronidase estaria entre R$ 29 milhões a R$ 44 milhões no primeiro ano de incorporação. RECOMENDAÇÃO INICIAL: A CONITEC recomendou preliminarmente a incorporação no SUS da laronidase para reposição enzimática em pacientes com mucopolissacaridose tipo I. CONSULTA PÚBLICA: Foram recebidas 348 contribuições, sendo 340 pelo formulário de experiência ou opinião e 8 pelo formulário técnico-científico. No que diz respeito às características das 340 contribuições pelo formulário de experiência ou opinião analisadas, 337 contribuições foram de pessoa física e 3 de pessoa jurídica. O percentual de concordância com a recomendação da CONITEC foi de 100%. Dos 08 formulários técnico-cientifico enviados e analisados, 7 foram de pessoa física (4 de profissionais de saúde, 2 interessados e 1 familiar) e 1 de pessoa jurídica. Todas as 8 contribuiçoes recebidas pelo formulário técnico-científico se declaravam favoráveis à recomendação da CONITEC e apenas 1 apresentou argumentos ciêntíficos. DELIBERAÇÃO FINAL: Os membros presentes na 57ª reunião do Plenário da CONITEC, nos dias 5 e 6 de julho, deliberaram por unanimidade recomendar a incorporação da laronidase para reposição enzimática em pacientes com mucopolissacaridose tipo I. Foi assinado o Registro de Deliberação nº 275/2017.(AU)

Involvement of mast cells, CD68+ and VEGF+ expressions in response to Himatanthus drasticus commercial latex in mice wound healing model / Envolvimento de mastócitos, expressão de CD68+ e VEGF+ em resposta ao látex comercial de Himatanthus drasticus em modelo de cicatrização em camundongos

This study aimed to evaluate Himatanthus drasticus latex in a mice wound healing experimental model. Animals were divided into four groups (n=7) according to the treatments: GI - saline 0.9% (control), GII - mineral oil (vehicle), GIII - H. drasticus commercial latex (HdCL) and GIV - H. drasticus mixed isolated fraction (MIF, 1 mg/mL). The treatments were applied topically once daily, 50 µL for 14 consecutive days. Macroscopic lesions were evaluated, considering parameters such as swelling, redness, granulation tissue and reepithelialization. VEGF+, CD68+ expressions and mast cells (Toluidin blue stain) were evaluated. HdCL induced higher contraction and exuberant granulation tissue (P > 0.05). HdCL showed a mild inflammatory process while MIF induced intense infiltrate inflammatory predominantly by lymphocytes, vascular congestion, bleeding and did not presented full reepithelialization. Reorganization of collagen fibers (red picrosirius stain) was observed. CD68+ expression and mast cells were presented as moderate, intense and mild in GI, GIII and GIV, respectively. Neovascularization occurred in all groups, while VEGF+ expression was intense in MIF in relation to HdCL. We concluded that HdCL presents wound healing potential, through modulation of mast cells, CD68+ and VEGF+ expressions that can be associated to triterpenes presence according MIF isolated from HdCL.(AU)

Objetivou-se avaliar o látex de Himatanthus drasticus em feridas induzidas experimentalmente em camundongos. Os animais foram divididos em quatro grupos (n=7): GI - salina 0,9% (controle), GII - óleo mineral (veículo), GIII - látex comercial de H. drasticus (HdCL) e GIV - fração isolada mista de H. drasticus (MIF, 1mg/mL). Os tratamentos foram aplicados topicamente uma vez ao dia (50µL), durante 14 dias consecutivos. Lesões macroscópicas, as expressões de VEGF+, CD68+ e a participação dos mastócitos (coloração azul de toluidina) foram avaliadas. HdCL induziu maior contração e tecido de granulação exuberante (P >0,05). HdCL induziu leve processo inflamatório enquanto MIF promoveu intenso infiltrado inflamatório predominantemente linfocítico, congestão vascular, hemorragia e reepitelização parcial. Observou-se reorganização das fibras colágenas (coloração picrosírius). A expressão de CD68+ e os mastócitos apresentaram-se moderados, intensos e leves em GI, GIII e GIV, respectivamente. A neovascularização foi observada em todos os grupos, enquanto a expressão de VEGF+ foi mais intensa em MIF em relação a HdCL. Conclui-se que HdCL apresenta potencial de cicatrização por meio da modulação dos mastócitos e das expressões de CD68+ e VEGF+, o que pode estar associado à presença de triterpenos de acordo com MIF isolada de HdCL.(AU)

Calcium homeostasis modulator 1 ( CALHM1 ) polymorphisms in cattle

The calcium homeostasis modulator 1 gene (CALHM1), which is located on chromosome 10 in humans and on chromosome 26 in cattle, is a transmembrane glycoprotein that controls the cytosolic calcium concentrations. Altered calcium homeostasis has been associated with several neurodegenerative disorders, including Alzheimer's disease (AD). In a recent study, single nucleotide polymorphisms (SNPs) of CALHM1 have been associated with sporadic Creutzfeldt-Jakob disease (CJD). The protein sequence of human CALHM1 shows 93% homology with bovine CALHM1. Although SNPs of human CALHM1 have been correlated with human prion disease, polymorphisms of the bovine CALHM1 gene have not been reported in cattle thus far. To investigate polymorphisms of the bovine CALHM1 gene in Korean native cattle, we analyzed the open reading frame (ORF) of this gene in 175 Hanwoo and 141 Holstein cattle. We observed five SNPs: c.219C>T (rs380966453), c.357C>T (rs385969338), and c.869A>G (rs516301908) within the ORF region of two exons; and c.552+92A>G (rs481706737) and c.553-3A>C (rs448524869) in the intron of bovine CALHM1. Among the three SNPs that are in the ORF region of bovine CALHM1, the genotype and allele frequencies of the c.869A>G (p.His290Arg) and c.219C>T (p.Asn73Asn) SNPs were significantly different between Hanwoo and Holstein cattle (P<0.0001). Haplotype analysis showed that haplotypes ht2, ht3 and ht5 were also significantly different in these two cattle breeds. This study provides the first genetic analysis of the bovine CALHM1 gene in cattle.(AU)

Retrospective study of Bovine herpesvirus 5 meningoencephalitis in cattle from São Paulo State, Brazil / Estudo retrospectivo de meningoencefalite por herpesvírus bovino-5 em bovinos do estado de São Paulo, Brasil

Meningoencephalitis caused by Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is an important neurological disease that affects Brazilian cattle herds. The present study investigated the presence of BoHV-5 DNA in cattle diagnosed with meningoencephalitis at Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, UNESP - Univ Estadual Paulista from 1980 to 2009. The records obtained from the Large Animal Internal Medicine Service and the Animal Pathology Service were reviewed to identify clinical and epidemiological data from cattle with neurological signs. Excluding rabies cases, we found 115 cases of cattle with neurological signs that had been necropsied. Non-suppurative meningoencephalitis was diagnosed in 28 animals of the 115 initially selected based on histopathological examination of brain tissues. Of these 28 animals, 15 (54%) were positive for BoHV-5 DNA by polymerase chain reaction (PCR) of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) brain samples. PCR target was 159-bp fragment from the BoHV-5 glycoprotein C gene. The oldest case identified in the present study was from 1988. PCR was a good tool for the diagnosis of BoHV-5 DNA extracted from FFPE tissues, allowing retrospective studies of samples stored for more than 20 years.(AU)

A meningoencefalite por herpesvírus bovino-5 (BoHV-5) é uma doença neurológica importante no rebanho bovino brasileiro. Este estudo tem por objetivo verificar a presença do DNA de BoHV-5 em bovinos diagnosticados com meningoencefalite na Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade Estadual Paulista, entre os anos de 1980 e 2009. Foram revisados os arquivos do Serviço de Clínica de Grandes Animais e da Patologia Animal em busca dos dados clínicos e epidemiológicos de bovinos com sinais neurológicos. Excluídos os casos de raiva, foram encontrados 115 casos de bovinos com sinais neurológicos, que foram necropsiados. O exame histopatológico realizado nos tecidos encefálicos desses animais constatou lesões de meningoencefalite não supurativa em 28 animais. Destes, em 15 (54%) casos foi identificada a presença do DNA de BoHV-5 por meio de PCR realizada em amostras de tecido encefálico fixadas em formalina e incluídas em parafina (FFPE). O alvo da PCR foi um fragmento de 159 pb do gene da glicoproteína C do BoHV-5. O caso mais antigo identificado neste estudo foi de 1988. A PCR apresentou-se como boa ferramenta para o diagnóstico do DNA de BoHV-5 extraído de tecidos FFPE, possibilitando estudos retrospectivos e diagnóstico de amostras com mais de 20 anos de armazenamento.(AU)

Comparisons of IgA response in saliva and colostrum against oral streptococci species

Abstract The present study compared IgA specificity against oral streptococci in colostrum and saliva samples. Sixty-two mother-and-child pairs were included; samples of colostrum (C) and saliva (MS) were collected from the mothers and saliva samples were collected from babies (BS). The specificity of IgA against Streptococcus mutans and S. mitis were analyzed by western blot. Only 30% of babies’ samples presented IgA reactivity to S. mutans, while 74 and 80% of MS and C, respectively, presented this response. IgA reactivity to S. mutans virulence antigens (Ag I/II, Gtf and GbpB) in positive samples showed differences between samples for Gtf and especially for GbpB (p < 0.05), but responses to Ag I/II were similar (p > 0.05). The positive response of Gtf-reactive IgA was different between C (90%) and MS (58%) samples (p < 0.05), but did not differ from BS (p > 0.05). GbpB was the least detected, with 48 and 26% of C and MS, and only 5% of BS samples presenting reactivity (p > 0.05). Eight percent of MS and C samples presented identical bands to SM in the same time-point. In conclusion, the differences of IgA response found between C and MS can be due to the different ways of stimulation, proliferation and transportation of IgA in those secretions. The colostrum has high levels of IgA against S. mutans virulence antigens, which could affect the installation and accumulation process of S. mutans, mainly by supplying anti-GbpB IgA to the neonate.

BPI-fold (BPIF) containing/plunc protein expression in human fetal major and minor salivary glands

Abstract The aim of this study was to determine expression, not previously described, of PLUNC (palate, lung, and nasal epithelium clone) (BPI-fold containing) proteins in major and minor salivary glands from very early fetal tissue to the end of the second trimester and thus gain further insight into the function of these proteins. Early fetal heads, and major and minor salivary glands were collected retrospectively and glands were classified according to morphodifferentiation stage. Expression of BPI-fold containing proteins was localized through immunohistochemistry. BPIFA2, the major BPI-fold containing protein in adult salivary glands, was detected only in the laryngeal pharynx; the lack of staining in salivary glands suggested salivary expression is either very late in development or is only in adult tissues. Early expression of BPIFA1 was seen in the trachea and nasal cavity with salivary gland expression only seen in late morphodifferentiation stages. BPIFB1 was seen in early neural tissue and at later stages in submandibular and sublingual glands. BPIFA1 is significantly expressed in early fetal oral tissue but BPIFB1 has extremely limited expression and the major salivary BPIF protein (BPIFA2) is not produced in fetal development. Further studies, with more sensitive techniques, will confirm the expression pattern and enable a better understanding of embryonic BPIF protein function.

Increased expression of ID2, PRELP and SMOC2 genes in patients with endometriosis

Endometriosis is a benign, estrogen-dependent disease with symptoms such as pelvic pain and infertility, and it is characterized by the ectopic distribution of endometrial tissue. The expression of the ID2, PRELP and SMOC2 genes was compared between the endometrium of women without endometriosis in the proliferative phase of their menstrual cycle and the eutopic and ectopic endometrium of women with endometriosis in the proliferative phase. Paired tissue samples from 20 women were analyzed: 10 from endometrial and peritoneal endometriotic lesions and 10 from endometrial and ovarian endometriotic lesions. As controls, 16 endometrium samples were collected from women without endometriosis in the proliferative phase of menstrual cycle. Analysis was performed by real-time polymerase chain reaction (PCR). There was no significant difference between gene expression in the endometrium of women with and without endometriosis. The ID2 gene expression was increased in the most advanced stage of endometriosis and in ovarian endometriomas, the PRELP was more expressed in peritoneal lesions, and the SMOC2 was highly expressed in both peritoneal and endometrioma lesions. Considering that the genes studied participate either directly or indirectly in cellular processes that can lead to cell migration, angiogenesis, and inappropriate invasion, it is possible that the deregulation of these genes caused the development and maintenance of ectopic tissue.

Safety and immunogenicity of a glycoprotein E gene-deleted bovine herpesvirus 1 strain as a candidate vaccine strain / Atenuação e imunogenicidade de uma cepa recombinante do herpesvírus bovino tipo 1 defectiva na glicoproteína E

A glycoprotein E-deleted Brazilian bovine herpesvirus 1 (BoHV-1gEΔ) was tested regarding to safety and immunogenicity. Intramuscular inoculation of young calves with a high virus dose did not result in clinical signs or virus shedding during acute infection or after dexamethasone administration. Calves vaccinated once IM (group I) or subcutaneously (group II) with live BoHV-1gEΔ or twice with inactivated virus plus aluminum hydroxide (group IV) or Montanide™ (group V) developed VN titers of 2 to 8 (GMT:2); 2 to 4 (GMT:1.65); 2 to 16 (GMT:2.45) and 2 to 128 (GMT:3.9), respectively. All BoHV-1gEΔ vaccinated calves remained negative in an anti-gE ELISA. Lastly, six young calves vaccinated with live BoHV-1gEΔ and subsequently challenged with a virulent BoHV-1 strain shed less virus and developed only mild and transient nasal signs comparing to unvaccinated calves. Thus, the recombinant BoHV-1gEΔ is safe and immunogenic for calves and allows for serological differentiation by a gE-ELISA test.(AU)

Um isolado brasileiro de herpesvírus bovino tipo 1, contendo uma deleção na glicoproteína E (gE - BoHV-1gEΔ) foi submetido a testes para avaliar a sua segurança e imunogenicidade em bovinos. Bezerros foram submetidos à inoculação intramuscular com uma alta dose viral e não demonstraram sinais clínicos ou excreção viral durante a fase aguda ou após tentativa de reativação viral pela administração de dexametasona. Bezerros que receberam uma dose do vírus vivo, contendo a deleção na gE, pela via intramuscular (grupo I) ou pela via subcutânea (grupo II) ou duas doses do vírus inativado utilizando o adjuvante hidróxido de alumínio (grupo IV) ou Montanide™ (grupo V), desenvolveram títulos de anticorpos neutralizantes de 2 a 8 (GMT: 2); 2 a 4 (GMT: 1,65); 2 a 16 (GMT: 2,25) e de 2 a 128 (GMT: 3,9), respectivamente. Todos os bezerros vacinados se mantiveram soronegativos quando utilizado um kit ELISA específico para a gE. Para o teste de segurança, seis bezerros foram vacinados com o vírus vivo BoHV-1gEΔ, sendo estes posteriormente desafiados com uma cepa virulenta de BoHV-1. Estes bezerros excretaram menos vírus e desenvolveram apenas sinais clínicos moderados e transitórios quando comparados com dados coletados de quatro animais não-vacinados. Com base nestes resultados, podemos confirmar que o vírus do BoHV-1 que contém a deleção na gE (BoHV-1gEΔ) é seguro e suficientemente imunogênico para bezerros e permite a diferenciação sorológica entre os animais vacinados e infectados perante a a um teste ELISA commercial específico para a gE.(AU)

Análise histoquímica das glândulas anexas do aparelho reprodutor do macho de paca (Cuniculus paca) / Histochemical analysis of the accessory glands of male paca (Cuniculus paca)

A paca (Cuniculus paca) é um roedor típico de regiões tropicais. Com a finalidade de estudar esta espécie selvagem para manejo adequado e sua preservação, objetivou-se neste trabalho caracterizar a histoquímica das glândulas anexas do trato reprodutor do macho da paca. Para este fim, cortes histológicos dessas glândulas foram submetidas às reações histoquímicas com Ácido Periódico de Schiff (PAS), Alcian blue (AB), PAS. + AB. e PAS + Amilase. Na glândula bulbouretral foi constatado que o epitélio produz secreção rica em glicoproteínas neutras e ácidas, glicosaminoglicanas, e em algumas regiões produz mais de um tipo de secreção. Não foi observada a presença de glicogênio no epitélio. Na glândula vesicular, seu epitélio em borda em escova corou-se por glicoproteínas neutras e também por substância de composição desconhecida, não contendo glicoproteínas ácidas, glicogênio ou glicosaminoglicanas. Verificou-se presença de pequena quantidade de glicoproteínas ácidas e neutras na próstata, em especial na mucosa, além de glicoproteínas ácidas carboxiladas e sulfatadas em pequena quantidade no tecido conjuntivo da lâmina própria dessa glândula. Por fim, a glândula coaguladora apresentou pequena quantidade de glicoproteínas neutras na borda em escova de seu epitélio e substância de composição desconhecida, sendo ausente o glicogênio. Conclui-se que as glândulas anexas do trato reprodutor da paca apresentam características histoquímicas que compartilham certa similaridade com outras espécies da ordem Rodentia, com a presença de glicoproteínas neutras e ácidas em algumas glândulas, principalmente no epitélio da glândula bulbouretal e na borda em escova do epitélio das demais glândulas.(AU)

Paca is a wild rodent typical of the tropical region. In order to study this species with focus on the proper management and preservation, this study aims to characterize the histochemistry of the accessory glands of the reproductive tract of the male paca. For this purpose, histological sections were stained with Periodic Acid-Schiff (PAS), Alcian Blue (AB), PAS + AB e PAS + Amilase. In the histochemical reaction of the bulbouretral gland was found that the epithelium produces secretion rich in neutral and acid glycoproteins, glycosaminoglycans, and in some regions produces more than one type of secretion. The epithelium did not contain any glycogen. In the vesicular gland the epithelium had bush border stained by neutral glycoproteins, but no acid glycoproteins, glycogen or glycosaminoglycan. The coagulating gland showed small amount of neutral glycoproteins in the brush border of the epithelium, without glycogen. It is concludes that the accessory glands of paca have histochemical characteristics that share some similarity with other species of the Order Rodentia, with some glands with neutral and acid glycoproteins, mainly in the epithelium of the bulbouretral gland and in the brush border of the other glands.(AU)

Análise histoquímica das glândulas anexas do aparelho reprodutor do macho de paca (Cuniculus paca) / Histochemical analysis of the accessory glands of male paca (Cuniculus paca)

Paca is a wild rodent typical of the tropical region. In order to study this species with focus on the proper management and preservation, this study aims to characterize the histochemistry of the accessory glands of the reproductive tract of the male paca. For this purpose, histological sections were stained with Periodic Acid-Schiff (PAS), Alcian Blue (AB), PAS + AB e PAS + Amilase. In the histochemical reaction of the bulbouretral gland was found that the epithelium produces secretion rich in neutral and acid glycoproteins, glycosaminoglycans, and in some regions produces more than one type of secretion. The epithelium did not contain any glycogen. In the vesicular gland the epithelium had bush border stained by neutral glycoproteins, but no acid glycoproteins, glycogen or glycosaminoglycan. The coagulating gland showed small amount of neutral glycoproteins in the brush border of the epithelium, without glycogen. It is concludes that the accessory glands of paca have histochemical characteristics that share some similarity with other species of the Order Rodentia, with some glands with neutral and acid glycoproteins, mainly in the epithelium of the bulbouretral gland and in the brush border of the other glands.

A paca (Cuniculus paca) é um roedor típico de regiões tropicais. Com a finalidade de estudar esta espécie selvagem para manejo adequado e sua preservação, objetivou-se neste trabalho caracterizar a histoquímica das glândulas anexas do trato reprodutor do macho da paca. Para este fim, cortes histológicos dessas glândulas foram submetidas às reações histoquímicas com Ácido Periódico de Schiff (PAS), Alcian blue (AB), PAS. + AB. e PAS + Amilase. Na glândula bulbouretral foi constatado que o epitélio produz secreção rica em glicoproteínas neutras e ácidas, glicosaminoglicanas, e em algumas regiões produz mais de um tipo de secreção. Não foi observada a presença de glicogênio no epitélio. Na glândula vesicular, seu epitélio em borda em escova corou-se por glicoproteínas neutras e também por substância de composição desconhecida, não contendo glicoproteínas ácidas, glicogênio ou glicosaminoglicanas. Verificou-se presença de pequena quantidade de glicoproteínas ácidas e neutras na próstata, em especial na mucosa, além de glicoproteínas ácidas carboxiladas e sulfatadas em pequena quantidade no tecido conjuntivo da lâmina própria dessa glândula. Por fim, a glândula coaguladora apresentou pequena quantidade de glicoproteínas neutras na borda em escova de seu epitélio e substância de composição desconhecida, sendo ausente o glicogênio. Conclui-se que as glândulas anexas do trato reprodutor da paca apresentam características histoquímicas que compartilham certa similaridade com outras espécies da ordem Rodentia, com a presença de glicoproteínas neutras e ácidas em algumas glândulas, principalmente no epitélio da glândula bulbouretal e na borda em escova do epitélio das demais glândulas.

Reprimo as a modulator of cell migration and invasion in the MDA-MB-231 breast cancer cell line

BACKGROUND: Reprimo (RPRM), a highly glycosylated protein, is a new downstream effector of p53-induced cell cycle arrest at the G2/M checkpoint, and a putative tumor suppressor gene frequently silenced via methylation of its promoter region in several malignances. The aim of this study was to characterize the epigenetic inactivation and its biological function in BC cell lines. METHODS: The correlation between RPRM methylation and loss of mRNA expression was assessed in six breast cancer cell lines by methylation specific PCR (MSP), 5'-Aza-2'-deoxycytidine treatment and RT-PCR assays. MDA-MB-231 cells were chosen to investigate the phenotypic effect of RPRM in cell proliferation, cell cycle, cell death, cell migration and invasion. RESULTS: In the cancer methylome system (CMS) (web-based system for visualizing and analyzing genome-wide methylation data of human cancers), the CpG island region of RPRM (1.1 kb) was hypermethylated in breast cancer compared to normal breast tissue; more interesting still was that ERa(+) tumors showed higher methylation intensity than ERa(-). Downregulation of RPRM mRNA by methylation was confirmed in MDA-MB-231 and BT-20 cell lines. In addition, overexpression of RPRM in MDA-MB-231 cells resulted in decreased rates of cell migration, wound healing and invasion in vitro. However, RPRM overexpression did not alter cell viability, phosphatidylserine (PS) translocation or G2/M cell cycle transition. CONCLUSION: Taken together, these data suggest that RPRM is involved in decreased cell migration and invasion in vitro, acting as a potential tumor suppressor gene in the MDA-MB-231 cell line.