Simplified methodology for large scale isolation of homozygous transgenic lines of lettuce

Background: Lettuce is a globally important leafy vegetable and a model plant for biotechnology due to its adaptability to tissue culture and stable genetic transformation. Lettuce is also crucial for functional genomics research in the Asteraceae which includes species of great agronomical importance. The development of transgenic events implies the production of a large number of shoots that must be differentiated between transgenic and non-transgenic through the activity of the selective agent, being kanamycin the most popular. Results: In this work we adjusted the selection conditions of transgenic seedlings to avoid any escapes, finding that threshold concentration of kanamycin was 75 mg/L. To monitor the selection system, we studied the morphological response of transgenic and non-transgenic seedlings in presence of kanamycin to look for a visual morphological marker. Several traits like shoot length, primary root length, number of leaves, fresh weight, and appearance of the aerial part and development of lateral roots were affected in non-transgenic seedlings after 30 d of culture in selective media. However, only lateral root development showed an early, qualitative and reliable association with nptII presence, as corroborated by PCR detection. Applied in successive transgenic progenies, this method of selection combined with morphological follow-up allowed selecting the homozygous presence of nptII gene in 100% of the analyzed plants from T2 to T5. Conclusions: This protocol allows a simplified scaling-up of the production of multiple homozygous transgenic progeny lines in the early generations avoiding expensive and time-consuming molecular assays.

Improvement of clavulanic acid production in Streptomyces clavuligerus F613-1 by using a claR-neo reporter strategy

Background: Streptomyces clavuligerus was the producer of clavulanic acid, claR, a pathway-specific transcriptional regulator in S. clavuligerus, positively regulates clavulanic acid biosynthesis. In this study, the promoter-less kanamycin resistance gene neo was fused with claR to obtain strain NEO from S. clavuligerus F613-1. The claR-neo fusion strain NEO was mutated using physical and chemical mutagens and then screened under high concentrations of kanamycin for high-yield producers of clavulanic acid. Results: The reporter gene neo was fused downstream of claR and used as an indicator for expression levels of claR in strain NEO. After three rounds of continuous treatment and screening, the high-yield clavulanic acid-producing strain M3-19 was obtained. In the shaking flask model, the clavulanic acid titer of M3-19 reached 4.33 g/L, which is an increase of 33% over the titer of 3.26 g/L for the starting strains S. clavuligerus F613-1 and NEO. Conclusions: Our results indicate that neo can be effectively used as a reporter for the expression of late-stage biosynthetic genes when screening for high-yield strains and that this approach has strong potential for improving Streptomyces strains of industrial value.

Efficient Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of Malus zumi (Matsumura) Rehd using leaf explant regeneration system

Malus zumi is known as an excellent dwarfing apple rootstock occurring in natural or arid/semiarid soil or salina. Gene manipulation of M. zumi through transgenic technology can modify plant feature for further improvement fruit tree production by grafting the scion on a transgenic rootstock. Here, we report the establishment of an efficient, in vitro, shoot regeneration system and Agrobacterium tumefaciens- mediated transformation from the leaf explants for Malus zumi (Matsumura) Rehd. Leaf explants were infected with Agrobacterium strains containing nptII and gus gene. The highest frequency of shoot regeneration was obtained on MS medium containing 500 mg l-1 Lactalbumin hydrolysate, 30 g l-1 fructose, supplemented with 3.0 mg l-1 BA, 0.2 mg l-1 NAA.Using fructose instead of sucrose significantly increases the shoot regeneration and decreases vitrification. This regeneration procedure was incorporated into an Agrobacterium-mediated transformation procedure in M. zumi. Kanamycin was an efficient selective agent for selection. Pre-selection (5 days after co-cultivation) improved the transformation efficiency. The emergence of expected bands by PCR analysis and Southern blot in transgenic plantlets confirmed the transformation of foreign DNA into plant genome.

Efecto protector del factor de crecimiento epidérmico ante la nefritis tóxica causada por kanamicina / Protective effect of epidermal growth factor in Kanamycin-induced toxic nephritis

Se estableció como objetivo conocer si el factor de crecimiento epidérmico, por su función regeneradora y protectora, protegía al riñón del efecto tóxico de la kanamicina. Para esto se diseñó una investigación experimental, prospectiva con animales. Se dividieron en 3 grupos, a uno se le administró el antibiótico semejante al esquema en humanos, al segundo, el antibiótico más una monodosis profiláctica de factor, y un tercer grupo se tomó como control negativo; se les midió a los 3, al principio y al final del estudio, la función renal más un estudio histológico. Todas las variables cuantitativas fueron sometidas a análisis estadístico para buscar significación entre los grupos. Se comportaron de forma similar el control negativo y el que recibió el factor, no así el que tomó solo el antibiótico. El factor resultó un protector de la nefrona proximal.

The objective was to determine if epidermal growth factor with its regenerating and protective function, was capable of protecting kidneys from toxic effect of kanamycin. To this end, a prospective experimental research study on animals was designed. They were divided into three groups, one was administered antibiotic in a way similar to humans; the second group was given the antibiotic plus a prophylactic one-dose of the factor, and the third group was the negative control. At the beginning and at the end of the study, renal function was assessed and a histological study was performed on the three groups. All the quantitative variables were statistically analyzed to find significance among the groups. It was observed that the negative control and the group receiving the factor had a similar behaviour, but the group under antibiotic treatment behaved differently. The factor was a protector of proximal nephrone.

Ototoxicidade, otoproteção e autodefesa das células ciliadas da cóclea / Ototoxycity, otoprotection and self defense of the coclear outer hair cells

Ototoxicoses são afecções provocadas por drogas medicamentosas de forma iatrogênica, comprometendo a função auditiva e/ou do sistema vestibular periférico. São caracterizadas por uma perda auditiva neurossensorial de mais de 25 dB em uma ou mais freqüências na faixa de 250 a 8000 Hz, com ou sem manifestações de vertigem ou desequilíbrio. Dentre as drogas ototóxicas as mais estudadas são os antibióticos aminoglicosídeos e antineoplásicos como a cisplatina que é largamente utilizada para o tratamento do câncer, tanto em adultos quanto em crianças. Estudos têm tentado identificar drogas que, associadas aos ototóxicos possam atuar como otoprotetores. Sabe-se que o mecanismo da ototoxicidade de aminoglicosídeos e da cisplatina está relacionado a alterações nos mecanismos antioxidantes das células ciliadas, principalmente as células ciliadas externas da cóclea. Além disso, existem relatos do fenômeno de autodefesa das células ciliadas externas a aminoglicosídeos e a cisplatina.

Costo-beneficio de la profilaxis antibiótica perioperatoria en los pacientes operados de hiperplasia prostática / Cost-benefit ratio of perioperatory antibiotic prophylaxis in patients operated on for prostatic hyperplasia

Se revisaron 98 historias clínicas de pacientes operados de hiperplasia prostática benigna en el Servicio de Urología del Hospital Clinicoquirúrgico Docente "Joaquín Albarrán; por las distintas técnicas quirúrgicas. La terapéutica antimicrobiana con kanamicina se utilizó en 41 de estos casos de forma convencional, en dosis de 10 a 15 mg/kg de peso/24 h durante 7 d y los 57 casos restantes recibieron antibioticoterapia perioperatoria con ceftriaxona, en dosis de 1 g intramuscular en el momento de la inducción anestésica y 1 g intramuscular 1 h antes de la remoción del catéter uretral. Se hizo un estudio comparativo de los resultados del uso de ambos métodos profilácticos, donde se demostró el enorme beneficio, desde el punto de vista de los costos, de la ceftriaxona perioperatoria, pues implica una mayor eficacia del medicamento con menores costos hospitalarios(AU)

98 clinical histories of operated patients of hiperplasia benign prostática were revised in the Service of Urología of the Hospital Educational Clinicoquirúrgico Joaquín Albarrán; for the different ones technical surgical. The therapeutic antimicrobiana with kanamicina was used in 41 of these cases in a conventional way, in dose of 10 to 15 peso/24 mg/kg h during 7 d and the 57 remaining cases received antibioticoterapia perioperatoria with ceftriaxona, in dose of 1 g intramuscular in the moment of the anesthetic induction and 1 g intramuscular 1 h before the removal of the catheter uretral. A comparative study of the results of the use of both methods preservatives was made, where the enormous benefit was demonstrated, from the point of view of the costs, of the ceftriaxona perioperatoria, because it implies a bigger effectiveness of the medication with smaller hospital costs(AU)

Factores de riesgo en el uso de los aminoglucósidos en pacientes oncológicos / Risk factors in the use of aminoglycosides for oncological patients

Los objetivos de este trabajo fueron observar el comportamiento de los factores de riesgo que pudieron influir de manera desfavorable sobre la respuesta de los pacientes al tratamiento con los aminoglucósidos; determinar la frecuencia en la indicación de creatinina sérica; valorar el grado de dosificación, y detectar las interacciones medicamentosas potenciales (IMP), en los perfiles farmacoterapéuticos. Se realizó un estudio retrospectivo y para ello se seleccionaron 157 casos correspondientes a pacientes oncológicos ingresados en el Instituto Nacional de Oncología y Radiobiología, a los cuales se les prescribió indistintamente amikacina, gentamicina y kanamicina inyectables. Se colectaron los datos necesarios para la investigación, a partir de las historias clínicas, seguido de la confección de planillas recolectoras de datos. De los factores de riesgo de mayor incidencia, se destacaron la edad > 59 años (45,9 porciento), cirugía mayor 72 h antes del tratamiento (45,2 porciento), IMP (42 por ciento), fumadores (40,7 por ciento), insuficiencia renal (32,5 por ciento) y nefrotóxicos recientes (35 por ciento). Cada uno de estos porcentajes están referidos al total de la muestra. También se observó el predominio de los pacientes con 2 o más factores de riesgo (83 por ciento). La creatinina sérica fue indicada a 98 pacientes (62,4 por ciento). Es necesario destacar que este indicador biológico, muy importante para evaluar el funcionamiento renal, sólo fue medido a 38 pacientes durante los 7 días previos al tratamiento con los aminoglucósidos, lo cual representa el 24 por ciento del total de la muestra. El grado de dosificación se pudo evaluar a sólo el 21 por ciento de la muestra total, debido a la ausencia de datos tan elementales como: la creatinina sérica, el peso y la talla. Se detectaron las IMP de los aminoglucósidos, con el 41 porciento de la muestra; donde la mayor frecuencia estuvo presente con los betalactámicos (37 porciento)

Possibilidades secundárias no tratamento da hanseníase / Secondary possibilities in leprosy's therapy

O autor faz uma revisäo da terapêutica em hanseníase, enfatizando as medicaçöes secundárias, as de apoio ao tratamento e as pouco documentadas. Conclui sugerindo esquemas terapêuticos alternativos, ainda näo experimentados na prática.

Plesiomonas shigelloides una Vibrionaceae en quien pensar / Plesiomonas shigelloides, a Vibrionaceae to be taken into account

The antigenic structure and antimicrobial susceptibility were studied in 99 strains isolated from patients with acute diarrhea (6 strains from an outbreak of digestive transmission disease in Santiago de Cuba) and a strain isolated from a patient who died from infections neurological syndrome (INS, meningitis). Four new serotypes (093, 994, 095, 096), which had not been described in the world classification, were identified from the Cuban isolated strains and were included in the International Serotyping Scheme by the International Reference Center located in Prague, Czech Republic. For the first time in Cuba, the circulation of serotypes 017:H11, 011: H2, 023. H1alc, 057: H3 which show cross reaction to Shiguella species was proved. Those strains from the outbreak of digestive disease belonged to serotype 050: H11 and had a thermostable toxin. The first case of infectious neurologic syndrome with Plesionomas shigelloides etiology reported in Cuba was described; the strain corresponded to serotype 050: H11. The worldwide reported pattern of antimicrobial resistance was demonstrated.

Paciente Quirúrgico Séptico en Terapia Intensiva / Surgical septic patient in Intensive Care Unit

Se realizó un estudio anual de 121 pacientes quirúrgicos sépticos ingresados en Terapia Intensiva en el Hospital Provincial Clinicoquirúrgico Docente "Dr. Gustavo Aldereguía Lima" y se aplicaron métodos computadorizados para el procesamiento de datos y aplicación de pruebas de significación estadística. La edad media de la serie fue de 40,4 para vivos y 47,35 para fallecidos; la mayor letalidad correspondió a pancreatitis hemorrágica (80) y cirugía gastroduodenal (45,5). En el 41.32 por ciento el diagnóstico se basó en el examen físico y ultrasonido abdominal. Existió un incremento franco de evolución desfavorable al aumentar el número de intervenciones quirúrgicas. Los gérmenes más frecuentes fueron Klebsiella psneumoniae, E. coli, Pseudomona aeruginosa y Proteus mirabilis. Los anti-bióticos más usados fueron metronidazol, penicilinas y aminoglucósidos. Se destaca el 8,2 de incidencia para fallo multiórgano (FMO) con 100 por ciento de letalidad y un predominio de la evolución favorable en 84 enfermeos y 37 que fallecieron

Agentes antituberculosos. Nuevas alternativas farmacológicas / Antituberculous drugs. New alternatives

La principal indicación de los fármacos antituberculosos de segunda línea es la presencia de tuberculosis resistente a drogas primarias. Comparados con los antituberculosos de primera línea, estos fármacos tienen una menor actividad antimicrobiana, más efectos colaterales, algunos son más caros y varios regímenes en los que se incluyen estas drogas son administradas por un mayor tiempo. Los principales fármacos son: ácido paraaminosalicílico (PAS), tiacetazona, clofazimina, etionamida, cicloserina, capreomicina, amikacina y kanamicina. Sus mecanismos de acción y de resistencia, así como su absorción, eliminación y efectos colaterales son diferentes para cada droga. Para el PAS y la tiacetazona los efectos colaterales más importantes son a nivel gastrointestinal; la clofazimina puede producir hiperpigmentación de la piel; la ciloserina puede originar síntomas neurológicos; los aminoglucósidos y la capreomicina generalmente causan trastornos vestibulococleares. Las contraindicaciones y las dosis de cada fármaco, de acuerdo a las posibles enfermedades concomitantes, son quizás de los aspectos a considerar más importantes cuando estas drogas son administradas

Efectos de la gentamicina y kanamicina a dosis terapéuticas en el desarrollo del oído interno de la ratas / Gentamicin and Kanamicin effects on the development of the internal ear in rat

Los aminoglucósidos son antibióticos de acción bactericida a nivel ribosomal en la subunidad 30s, en donde se inhiben la síntesis proteica y disminuye la fidelidad de la traslación del RNAm. La ototoxicidad es el resultado de la destrucción progresiva de células sensoriales a nivel coclear y vestibular. El objetivo del estudio fue determinar los cambios histopatológicos en el desarrollo del oído interno en embriones de rata al administrarse gentamicina a dosis de 3.5 mg/Kg/día y 7 mg/Kg/día por 21 días y kanamicina a dosis de 7 mg/Kg/día y 15 mg/Kg/día por 21 días. Los productos fueron sacrificados a los 7 y 14 días de gestación e inmediatamente después de termianr el período de gestación. Se observó un detenimiento del desarrollo y crecimiento de las estructuras del oído interno. La gentamicina causó mayores daños a nivel vestibular y la kanamicina a nivel coclear. Los principales cambios cocleares encontrados fueron degeneración de las células externas e internas hacía la porción basal, así como colapso de las rampas vestibular y timpánica. Los principales cambios vestibulares fueron: falta de desarrollo de la cresta ampular, ausencia de células ciliadas e hipodesarrollo de canales semicirculares

Serovariedades de Salmonella em águas superficiais em San Luís, Argentina / Salmonella serotypes from surface waters in San Luis, Argentina

Resumo: Foi investigada a presença de Smonella em amostras de água colhidas pela técnica de Moore, em rios e açudes, durante um ano. Realizau-se um pré-enriquecimento em água peptomada tamponada e um enriquecimento em caldo tetrationato-verde brilhante com caldo Rappaport. Isolou-se em 0gar verde brilhantre com desoxicolato de sódio a 0,25 (por cento) e em ágar sulfito de bismuto. As colônias suspeitas foram estrudadas mediante provas bioqu1micas clássicas e sorológicas. Recuperou-se Salmonella em 6,66 (por cento) das amostras. Isolou-se S. panama, S. newport, S. sandiego e Salmonella sub-espécie IV, 40: Z4, Z23: esta última serovariedade constitui o primeiro isolamento na Argentina. Determinou-se o antibiograma pelo método de Kirby-Bauer. As 15 cepas isoladas foram sensíveis a trimetroprima-sulfametoxazol, gentamicina, tetraciclina, cloranfenicol, kamamicina e ácido nalidíxico, quanto à carbenicilina, 6 cepas foram resistentes, 7 mostraram sensibilidade intermediária e só 2 foram sensíveis. -Foram determinados perfis plasmídicos pela técnica de Birnboin e dOLY. Os pesos moleculares (PM) dos plasmídeos em megadaltons (MDa) foram determinados por comparaçäo com plasmídeos de PM conhecidos. Foram detectados plasmídeos de PM 40 MDa em S. newpot e de PM 17 MDa em S. sandiego. Seria de interesse a determinaçäo sistemática de marcadores epidemiológicos em surtos e casos esporádicos de salmonelose com o fim de estabelecer sua distribuiçäo geográfica na zona estudada da província de San Luis, assim como também a necessidade de uma vigilância microbiológica das águas superficiais e a implementaçäo de tratamentos de depuraçäo de águas cloacais adequadois antes de serem despejadas nos cursos de água (au)

Farmacología clínica de los aminoglicósidos y los aminociclitoles en medicina veterinaria / Clinical pharmacology of aminoglycoside and aminocyclitol antibacterials in veterinary medicine

Dada la importancia de los aminoglicósidos y aminocilitoles en la clínica veterinaria, y en virtud de la enorme cantidad de información que se genera en torno a estos antimicrobianos, se consideró de importancia llevar a cabo un análisisi farmacológico y clínico de la literatura especializada. La intención primordial de realizar estudios documentales de esta naturaleza es estrechar las actividades del clínico con las del investigador para procurar un mejor manejo de estos medicamentos en el campo, aunque también se hace énfacis en las áreas que aún requieren atención de los investigadores. Este ensayo no pretende ser enciclopédico y solamente se incluye un porcentaje del enorme caudal de información que se genera con estos dos grupos de antimicrobianos. Se hace énfasis en los aspectos farmacológicos que pueden ser de importancia para el clínico, incluyendo rasgos generales de los grupos, datos farmacocinéticos, de espectro, residuos, toxicidad y usos. Cuando resulta neceario, se presenta la opinión de los autores

Nefrotoxicidad por aminoglucosidos / Aminoglycoside nephrotoxicity

Se realizo un estudio prospectivo durante 18 meses (1990-1991) en el Hospital Pediatrico Docente "Jose Luis Miranda" de Santa Clara, con el objetivo de determinar el comportamiento de la nefrotoxicidad por aminoglucosidos y se realizaron complementarios al inicio y final del tratamiento. Se encontro cilindruria como hallazgo mas frecuente en el sedimento urinario. La creatinina serica se altero en el 10 porciento de los casos tratados con aminoglucosidos no combinados, y las mayores alteraciones se relacionaron con las altas dosis e intervalos frecuentes de administracion. La velocidad de filtracion glomerular se altero en el 16,7 porciento, y esto se relaciono con los mismos factores que alteraron la creatinina serica. La urea serica no se altero, y ningun paciente tuvo manifestaciones clinicas. Los intervalos de administracion poco frecuentes disminuyeron los costos hospitalarios por paciente hasta en un 50 porciento, y por concepto de examenes complementarios se ahorro un 70 porciento

Termorresistência e sensibilidade a antibióticos e quimioterápicos de cepas de S. aureus isolados de materiais envolvidos em intoxicaçäo por enterotoxina estafilocócica, no estado de Säo Paulo / Antibiotics and drug therapy thermo-resistance and sensitivity of S. aureus strain isolated from materials involved in intoxication by staphylococcal enterotoxins, in the state of Säo Paulo

Foram realizados testes de termorresistência e teste de sensibilidade aos antibióticos e quimioterápicos em 22 cepas de S. aureus isoladas de enventos de doenças veiculadas por alimentos. Das 5 cepas isoladas de carne, uma apresentou resistência a penicilina/kanamicina/tetraciclina, outra cepa para penicilina/tetraciclina e as demais apenas para penicilina. Das doze cepas isoladas de bolo, três apresentaram resistência para penicilina/ácido nalidíxico, penicilina/kanamicina e penicilina/polimixina B, outras seis somente para penicilina e as demais sensíveis para todos os agentes testados. Uma cepa isolada de farofa apresentou resistência a penicilina/kanamicina. Das duas cepas isoladas de produtos de confeitaria, uma apresentou resistência dupla penicilina/sulfametoxazol-trimetoprim e a outra sensível a todos os agentes testados. Das duas cepas isoladas de nasofaringe de manipuladores de alimentos, uma foi resistente a ampicilina/penicilina e a outra a fosfomicina. O teste de termorresistência de 25 cepas mostrou que 5 (20%) estavam viáveis imediatamente após a exposiçäo a 68 graus por 10 minutos. Dos tubos negativos, após a incubaçäo foram ainda recuperadas 5 cepas (20%)

Effect of transposon Tn5 on exopolysaccharide production by Xanthomonas campestris

A partir da conjugaçäo entre um mutante Smr de Xanthomonas campestris pv. campestris e uma linhagem de Escherichia coli contendo o transposon Tn5, foram isolados 581 mutantes apresentando resistência aos antibióticos kanamicina e estreptomicina. Foram selecionados 90 mutantes pela viscosidade aparente e tamanho das colônias. estes mutantes foram analisados quanto à viscosidade em seis experimentos independentes de fermentaçäo. A análise dos resultados obtidos através do teste estatístico de Tukey permitiu diferenciar 29 mutantes que apresentam valores de viscosidade significativamente maiores que a linhagem original Smr. Dentre estes foram selecio9nados os 5 melhores mutantes. Uma soluçäo (1%) da goma produzida por estes foi analisada à diferentes rotaçöes, temperaturas e pHs tendo sido utilizado a goma comercial Keltrol como referência. Os resultyados foram analisados através do teste de Friedman e verificou-se que nos testes à várias rotaçöes näo houve diferença significativa entre as linhagens testadas e a goma Kletrol, com exceçäo da lionhagem Smr que apresentou os menores valores de viscosidade. Nos testes à altas temperaturas,. todas as linhagens apresentaram um decréscimo na viscosidade; em pH ácido a reduçäo foi de aproximadamente 50% e em pH alcalino, as linhagens apresentaram valores de viscosidade maiores que em pH normal