MASP-2 saturation curve in cerebrospinal fluid indicates local synthesis and its equilibrium with soluble and associated forms / La curva de saturación de MASP-2 en líquido cefalorraquídeo indica síntesis local y su equilibrio con formas solubles y asociadas

Introduction: MASP-2 is a mannose blinding lectin associate to serine protease in cerebrospinal fluid and its dynamics through the blood brain barrier is unknown. Objective: To describe MASP-2 diffusion pattern from blood to cerebrospinal fluid. Methods: A transversal observational prospective study was performed 56 control samples of cerebrospinal fluid and serum were employed. ELISA measured MASP-2. Two groups were made: control patients without organic brain disease with normal cerebrospinal fluid and normal barrier function and patients without inflammatory diseases with a blood cerebrospinal fluid barrier dysfunction. Results: MASP-2 concentration in cerebrospinal fluid increase with augment the Q Albumin. QMASP-2 vs. Q Albumin saturation curve indicates that MASP-2 is interacting with other molecules in the subarachnoid environment. The higher inter-individual variation of cerebrospinal fluid MASP-2 of the control compared to the serum MASP-2 indicates that MASP-2 is a protein derived from blood. Conclusions: MASP-2 in CSF is predominantly blood-derived. The saturation curve demonstrates that MASP-2 interacts with the starters of the lectin pathway like mannose binding lectin, ficolins and collectin LK(AU)

Introducción: MASP2 es una proteína de unión a manosa asociada a una proteasa de serina encontrada en la periferia, pero puede pasar a líquido cefalorraquídeo. Sin embargo, su dinámica a través de la barrera sangre-líquido cefalorraquídeo es aún desconocida. Objetivo: Describir la difusión del MASP-2 desde la sangre al líquido cefalorraquídeo. Métodos: Se realiza estudio observacional prospectivo de corte transversal donde se emplearon 56 muestras de suero y líquido cefalorraquídeo. Fue seleccionado un grupo control con pacientes sin enfermedad orgánica del cerebro, con líquido cefalorraquídeo y función de barrera normal y otro grupo de pacientes sin enfermedades inflamatorias del cerebro con disfunción de barrera sangre-líquido cefalorraquídeo. Resultados: La concentración de MASP-2 en líquido cefalorraquídeo aumentó con el incremento de la Q Albúmina. La curva de saturación de Q MASP-2 contra la Q Albúmina indicó que el MASP-2 se encuentra interactuando con otras moléculas en el espacio subaracnoideo. El aumento del coeficiente de variación individual de MASP-2 en líquido cefalorraquídeo de los controles comparado con el MASP-2 en suero indicó que el MASP-2 es una proteína derivada de la sangre. Conclusiones: La producción de MASP-2 en líquido cefalorraquídeo es predominantemente derivada de la sangre. La curva de saturación demostró que el MASP-2 interactúa con los iniciadores de la vía de las lectinas como lectina unida a manosa, las ficolinas y la colectina LK(AU)

Effects of different extracts of the mushroom Agaricus blazei Murill on the hematologic profile of mice with Ehrlich tumor / Efeitos de diferentes extratos do cogumelo Agaricus blazei Murill sobre o perfil hematológico de camundongos com tumor de Ehrlich

The aim of this study was to investigate the effect of the mushroom Agaricus blazeii Murril (ABM) extracts on the hematological profile of Swiss mice bearing an Ehrlich solid tumor. Three fractions (total extract, polysaccharides, and supernatant) of ABM extracts obtained by four methods (ultrasonic or water bath, at pH 4 or pH 7) were administered to mice over 21 days. Polysaccharide solutions were analyzed by gas and liquid chromatography that showed both mannose and glucose concentrations. The method of extraction influenced the degree of glucose polymerization and the mannose/glucose relationship. The treatment with ABM supernatant at pH 7 and water bath was associated with reduced concentrations of leukocytes and lymphocytes and altered the percentage of CD4+ and CD8+ lymphocytes in Ehrlich tumor-bearing mice. The treatment with the ABM extract in water bath and ultrasound at pH 4 resulted in lower lymphocyte counts, regardless of tumor presence, and greater granulocyte values in mice with Ehrlich tumor than in controls. We concluded that different fractions and methods of extraction of A. blazei produced differing blood profiles in mice inoculated with the Ehrlich tumor.

O objetivo deste estudo foi investigar o efeito de diferentes extratos do cogumelo Agaricus blazeii Murril (ABM) sobre o perfil hematológico de camundongos Swiss portadores de tumor de Ehrlich sólido. Três frações (extrato total, polissacarídeos e sobrenadante) dos extratos de ABM foram obtidas por quatro métodos (sonificador, banho-maria, em pH 4 ou pH 7) e administradas para camundongos durante 21 dias. Soluções de polissacarídeos foram analisadas por cromatografia gasosa e líquida, que mostraram concentrações de glucose e manose. O método de extração influenciou o grau de polimerização da glicose e a relação manose/glucose. O tratamento com o sobrenadante de ABM (em pH 7 e banho-maria) estava associado com reduzidas concentrações de leucócitos e linfócitos, além de alterar a porcentagem de linfócitos CD4+ e CD8+ em camundongos portadores de tumor sólido de Ehrlich. O tratamento com extratos de ABM, obtidos tanto em banho-maria como no sonificador em pH 4, resultou nas mais baixas contagens de linfócitos, independentemente da presença do tumor, e nos maiores valores de granulócitos em camundongos com tumor de Ehrlich. Conclui-se que os diferentes métodos de extração com as respectivas frações de A. blazei são capazes de intereferir no perfil hematológico de camundongos com tumor sólido de Ehrlich.

Guarda responsável de animais de estimação na área urbana do município de Pelotas, RS, Brasil / Responsible pet animal guardianship in the urban area of the municipality of Pelotas in the state of Rio Grande do Sul, Brazil

O presente estudo teve por objetivo estimar a presença de cães e gatos em domicílios da zona urbana do município e avaliar a guarda responsável e seus fatores associados. Foi realizado um estudo transversal, de base populacional com processo de amostragem em múltiplos estágios e com os setores censitários do censo demográfico do ano de 2010, realizado pelo IBGE, utilizados como conglomerados. A unidade em estudo foi o domicílio. O desfecho foi a guarda responsável, definida por um escore que levou em consideração as seguintes variáveis: esterilização, vacinação antirrábica, consulta médica veterinária, controle de endoparasitas, acesso dos animais às áreas públicas e o recolhimento das fezes nestes locais e controle de ectoparasitas. Entre os 1.558 domicílios investigados, 58,9% possuíam animais de estimação (cão e/ou gato). O estudo revela que o escore de posse responsável aumenta com a escolaridade do chefe da família e é maior entre os moradores de apartamento. A maioria dos domicílios investigados atendeu apenas a metade dos critérios. Os resultados deste estudo apontam para a necessidade de políticas públicas que orientem a população sobre a guarda responsável e que ofertem serviços de imunizações e esterilização para os animais.

The study sought to estimate the presence of cats and dogs in households in the urban area of the city and assess responsible guardianship and associated factors. A population-based, cross-sectional study was conducted using the multi-stage sampling process and the census sectors of the demographic census of the year 2010 carried out by IBGE were used as conglomerates. The unit under study was the household. The outcome was responsible guardianship, defined by a score that took into account the following variables: sterilization, anti-rabies vaccination, veterinary medical consultation, control of endoparasites, access of animals to public areas, control of ectoparasites and the collection of feces of animals in public areas. Of the 1,558 households investigated, 58.9% had pets (cat or dog). The study reveals that the score of responsible guardianship increases with the education level of the head of the household and is highest among apartment dwellers. The majority of the households investigated met only half of the criteria. The results of this study point to the need for public policies that instruct the population on responsible guardianship, and that offer immunizations and sterilization services for animals.

Nutritional repercussions in patients submitted to bariatric surgery / Repercussões nutricionais em pacientes submetidos à cirurgia bariátrica

BACKGROUND: Few studies evaluated the association between nutritional disorders, quality of life and weight loss in patients undergoing bariatric surgery. AIM: To identify nutritional changes in patients undergoing bariatric surgery and correlate them with weight loss, control of comorbidities and quality of life. METHOD: A prospective cohort, analytical and descriptive study involving 59 patients undergoing bariatric surgery was done. Data were collected preoperatively at three and six months postoperatively, evaluating nutritional aspects and outcomes using BAROS questionnaire. The data had a confidence interval of 95%. RESULTS: The majority of patients was composed of women, 47 (79.7%), with 55.9% of the series with BMI between 40 to 49.9 kg/m². In the sixth month after surgery scores of quality of life were significantly higher than preoperatively (p<0.05) and 27 (67.5 %) patients had comorbidities resolved, 48 (81.3 %) presented BAROS scores of very good or excellent. After three and six months of surgery 16 and 23 presented some nutritional disorder, respectively. There was no relationship between the loss of excess weight and quality of life among patients with or without nutritional disorders. CONCLUSION: Nutritional disorders are uncommon in the early postoperative period and, when present, have little or no influence on quality of life and loss of excess weight. .

RACIONAL: Poucos estudos avaliam a associação entre distúrbios nutricionais, qualidade de vida e perda de peso em pacientes submetidos à cirurgia bariátrica. OBJETIVO: Identificar alterações nutricionais em pacientes submetidos à cirurgia bariátrica e correlacioná-las com perda de peso, controle de comorbidades e qualidade de vida. MÉTODO: Estudo de coorte, prospectivo, analítico e descritivo envolvendo 59 pacientes submetidos à cirurgia bariátrica. Os dados foram coletados no pré-operatório e aos três e seis meses pós- operatórios, quantificando aspectos nutricionais e utilizando o Bariatric Analysis and Reporting Outcomes System (BAROS) como ferramenta de sucesso. Os dados usaram intervalo de confiança de 95%. RESULTADOS: O total de mulheres foi 47 (79,7%), sendo 55,9% com IMC entre 40-49,9 kg/m². No sexto mês depois da operação os escores de qualidade de vida foram significativamente maiores do que no pré-operatório (p<0,05) e 27 (67,5%) pacientes tinham todas comorbidades resolvidas, 48 (81,3%) apresentaram conceito BAROS muito bom ou excelente. Após três e seis meses 16 e 23 pacientes apresentaram algum distúrbio nutricional, respectivamente. Não houve relação entre a perda do excesso de peso e qualidade de vida entre pacientes com ou sem distúrbio nutricional. CONCLUSÃO: os distúrbios nutricionais são pouco frequentes no pós-operatório precoce e, quando presentes, têm pouca ou nenhuma influência na qualidade de vida e na perda do excesso de peso. .

Glycodendritic structures: tools to interact with DC-SIGN

The key role of carbohydrates in many biological events has attracted the interest of the scientific community. This fact has demanded the access to new tools necessary to understand this role and the interaction of carbohydrates with their corresponding receptors, lectins. Glycodendrimers and glycodendritic structures in general, have demonstrated to be very efficient and interesting tools to intervene in those processes where carbohydrates participate. In this review, we discuss the different glycodendritic structures that have been used to interfere with DC-SIGN, a very attractive lectin involved in infection processes and in the regulation of the immune response.

O papel chave dos carboidratos em muitos eventos biológicos tem atraído interesse da comunidade científica. Este fato demonstrou o acesso de novas ferramentas para a compreensão da interação dos carboidratos com seus receptores correspondentes, lectinas. Glicodendrímeros e estruturas glicodendríticas, em geral, mostram-se como ferramentas muito eficientes e interessantes para intervir nos processos em que os carboidratos participam. Nesta revisão, discutimos diferentes estruturas glicodendríticas que têm sido úteis para interferir com DC-SIGN, uma lectina muito atraente envolvida em processos infecciosos e na regulação da resposta imune.

Nitrogen-deficient microalgae are rich in cell-surface mannose: potential implications for prey biorecognition by phagotrophic protozoa / Microalgas com deficiência de nitrogênio são enriquecidas com manose na superfície celular: potenciais implicações para reconhecimento de presas por protozoários fagotróficos

Flow cytometry was used to quantify the abundance of mannose-linked glycoconjugates on microalgae precultured using low- or high-nitrate media. Nitrogen-deficient microalgae were richer in cell-surface mannose than nitrogen-sufficient. Findings are discussed in view of recent research which reveals mannose-specific 'feeding receptors' assist prey biorecognition by phagotrophic protozoa that ingest microalgae.

Citometria de fluxo foi usada para quantificar a abundância de glicoconjugados com manose em precultivos de microalgas usando meios com baixo e alto teor de nitrato. Microalgas com deficiências de nitrogênio tinham mais manose na superfície celular do que as com nitrogênio suficiente. Resultados são discutidos com base nas pesquisas recentes que revelam receptores específicos para manose que auxiliam no reconhecimento da presa por protozoários fagotróficos que ingerem microalgas.

Performance and morphology of intestinal mucosa of broilers fed mannan-oligosaccharides and enzymes / Desempenho e morfologia da mucosa intestinal de frangos de corte alimentados com mananoligossacarídeos e enzimas

The performance and the morphology of intestinal mucosa of broilers fed mannan-oligosaccharides (MOS) and enzymes (E) from one to 21-day-old were evaluated using 750 one-day-old chicks, assigned to a 2 x 2 + 1 factorial design - two levels of MOS (0 and 0.1 percent), two levels of E (0 and 0.05 percent) plus an antibiotic positive control diet - performing five treatments of five replications each one. MOS x E interaction was significant for both duodenal (P<0.002 and P<0.002) and ileal (P<0.04 and P<0.05) perimeters and heights of villi, being the values lower in the mucosa of birds fed non-supplemented diets. MOS based-diet determined an increase on perimeter of jejunal villi (P<0.05). Compared with antibiotic treatment group, villi perimeter (P<0.02) and height (P<0.005), and crypt depth (P<0.02) of duodenum of broiler fed MOS were higher. Broilers fed MOS and/or E did not perform better, but higher villi perimeter and height were observed in the intestinal mucosa of those birds.

Avaliaram-se o desempenho e a morfologia da mucosa intestinal de frangos de corte alimentados com mananoligossacarídeos (MOS) e enzimas (E) até os 21 dias de idade. Utilizaram-se 750 pintainhos de um dia em delineamento experimental inteiramente ao acaso, em esquema fatorial 2 x 2 + 1 (dois níveis de MOS - 0 e 0,1 por cento, dois níveis de E - 0 e 0,05 por cento e uma dieta controle positivo com antibióticos) totalizando cinco tratamentos com cinco repetições cada. A interação MOS x E foi significativa para o perímetro de altura de vilos no duodeno (P<0,02 e P<0,02) e no íleo (P<0,04 e P<0,05), sendo os valores menores observados na mucosa das aves alimentadas com dietas não-suplementadas. A dieta contendo MOS determinou aumento no perímetro dos vilos no jejuno (P<0,05). Comparado com o grupo controle positivo, o perímetro (P<0,02) e a altura (P<0,005) dos vilos e a profundidade de cripta (P<0,02) no duodeno das aves do tratamento com MOS foram maiores. As aves que consumiram dietas com MOS e/ou E não tiveram melhor desempenho, mas maiores perímetros e alturas de vilos foram observados na mucosa intestinal dessas aves.

Expressão do receptor para manose em células de Schwann e Schwannoma ST88-14 / Expression of the receiver for mannose in cells of Schwann and Schwannoma ST88-14

O receptor para manose receptor (RM) é uma glicoproteína transmembrana que é expressa em vários tipos celulares, mas, pouca ou nenhuma informação sobre RM existe em células de Schwann (CS). Mostramos que CS de rato em culturas primárias de células dissociadas ou em explantes de nervo bem como, numa linhagem de Schwannoma humano (ST88-14) liga uma neoglicoproteína manosil/albumina de soro bovino - isotiocianato de fluoresceína (man/BSA-FITC) de uma maneira altamente específica. Após incubação com man/BSA-FITC, a análise por citometria de fluxo demonstra 62por cento de células ST88-14 e 90por cento de CS positivas, uma ligação dose-dependente de ligantes marcads e inibição quase total pela competição com 250 mM D-manose ou com a proteína (altamente manosilada) peroxidase de raiz forte (HRP) - 1.1(miu)M. O tratamento de CS cultivadas com dexametasona (0.1 (miu)g/ml) ou interferon gama (IFN-gama - 100 U/ml) seguido pela marcação com man/BSA-FITC e análise por citometria de fluxo mostra um acréscimo e um decréscimo, respectivamente, da captação do ligante. Explantes de nervo ciático cultivados na presence de IFN-gama mostram colocalização de man/BSA-FITC e imunoreatividade para MHC classe II. A análise ultra-estrutural de células ST88-14 após incubação a 4grausC por 40min com HRP-Au coloidal com ou sem subseqüente elevação da temperatura para 37grausC mostra uma localização inicial na superfície, seguida da internalização do traçador temperatura e tempo-dependente. Células ST88-14 e CS dissociadas bem como nervos recentemente esgarçados mostram reatividade a um anticorpo policlonal contra o domínio C-terminal do RM de macrófagos murinos (anti-cMR). No caso de nervos esgarçados, a imunorreatividade é particularmente abundante em regiões topograficamente homólogas às alças para-nodais. Além disso, a imuno-histoquímica ultra-estrutural de nervo ciático incluído em Lowicryl mostra reatividade ao anti-cMR, com máxima deposição do anticorpo secundário-Au...periférico.

Avaliação da concentração sérica de MBL e sua atividade funcional na transmissão materno-fetal do HIV / MBL serum level evaluation and its functional activity in maternal-to-child HIV transmission

Objetivo: A gp120 da superfície do HIV é extensivamente glicosilada e representa excelente alvo de ligação para a MBL. Este estudo teve por objetivo avaliar os níveis séricos de MBL e sua atividade funcional na transmissão materno-fetal do HIV correlacionando-os com as características clínico-laboratoriais da infecção. Métodos: Amostras de soro e plasma de 79 crianças HIV soropositivas e negativas, e suas mães soropositivas, foram coletadas. Os pacientes foram divididos em dois grupos: crianças HIV soropositivas (C+) e suas mães (MT) (n=18) e crianças HIV soronegativas (C-) e suas mães (MNT) (n=61). Os níveis séricos e atividade funcional da MBL foram verificados por ELISA, detectados por anticorpos monoclonais anti-MBL e pelo consumo de C4, respectivamente. Resultados: A avaliação laboratorial não verificou diferença estatisticamente significante dos níveis séricos e atividade funcional da MBL entre os grupos. Verificou-se correlação entre os níveis séricos e funcionais de MBL. A distribuição de carga viral não diferiu significativamente entre os grupos MNT, MT e C+. Os níveis séricos de MBL também não diferiram entre os pacientes que receberam terapia anti-retroviral, quando comparados aos que não foram tratados. Conclusão: Os dados obtidos mostraram ausência de correlação entre os níveis séricos de MBL, e sua atividade funcional, na transmissão materno-fetal do HIV.

Efecto modulador de las secreciones del tracto reproductivo femenino sobre la función del espermatozoide humano / Modulating effect of the secretions of the feminine reproductive tract on the function of the human spermatozoa

El objetivo de éste trabajo fue determinar mediante un modelo in vitro, el efecto que ejerce el fluido peritoneal sobre la función del espermatozoide humano, tomando como control al fluido folicular. Para ello se obtuvieron fluidos peritoneales provenientes de pacientes que realizaron laparascopia diagnóstica en fecha periovulatoria y que no presentaron enfermedad tubo-peritoneal (n=9). El fluido folicular se obtuvo de pacientes que realizaron recuperación ovocitaria en un programa de fertilización in vitro (n=4). Ambos fluidos fueron centrifugados, filtrados y congelados a -20§C. Los sémenes de pacientes normozoospérmicos (n=21) fueron procesados mediante un gradiente discontínuo de Percoll y capacitados en medio sintético Human Tubal Fluid suplementado con albúmina, a una concentración de 2-10 por 10 esp./ml durante 3 a 4 horas. En experimentos apareados, los espermatozoides capacitados fueron expuestos en relación 1:1 v/v al medio control, al fluido folicular o al peritoneal durante 1 hora, luego de lo cual se procedió a estudiar la función espermática mediante los siguientes tests: a) viabilidad b) motilidad progresiva c) la reacción acrosomal inducida por ionóforo de calcio y d) la expresión del receptor espermático para D-manosa. Nuestros resultados muestran que ni la viabilidad ni la motilidad resultaron afectadas por el pre-tratamiento. Si bien la ocurrencia de la reacción acrosomal espontánea no fue diferente entre los distintos grupos (6.3 a 7.5 por ciento, NS), la inducida por ionóforo disminuyó significativamente luego de la exposición al fluido peritoneal y al folicular (18.9ñ5.1 por ciento y 29.0ñ6.1 por ciento vs control 45.6ñ5.0 por ciento, p <0.001 y 0.01 respectivamente). Si bien la detección del receptor para D-manosa aumentó durante la capacitación, resultó significativamente menor a los controles luego del tratamiento previo (FP: 15.4ñ2.9 por ciento y FF: 15.5ñ3.1 por ciento vs control 23.7ñ3.1 por ciento, p<0.05. Nuestros resultados sugieren que al menos in vitro, tanto el fluido peritoneal como el folicular modularían la función del espermatozoide humano manteniéndolo vivo y móvil, pero en un estado no reaccionado

Trypanosoma cruzi-cardiomyocytes: new contributions regarding a better understanding of this interaction

The present paper summarizes new approaches regarding the progress done to the understanding of the interaction of Trypanosoma cruzi-cardiomyocytes. Mannose receptors localized at the surface of heart muscle cell are involved in binding and uptake of the parasite. One of the most striking events in the parasite-heart muscle cells interaction is the disruption of the actin cytoskeleton. We have investigated the regulation of the actin mRNA during the cytopathology induced in myocardial cells by the parasite. T. cruzi invasion increases calcium resting levels in cardiomyocytes. We have previously shown that Ca2+ ATPase of the sarcoplasmic reticulum (SERCA) is involved in the invasion of T. cruzi in cardiomyocytes. Treating the cells with thapsigargin, a drug that binds to all SERCA ATPases and causes depletion of intracellular calcium stores, we found a 75 per cent inhibition in the T. cruzi-cardiomyocytes invasion.

The FML (Fucose Mannose Ligand) of Leishmania donovani: a new tool in diagnosis, prognosis, transfusional control and vaccination against human kala-azar

The Fucose-Mannose Ligand (FML) of Leishmania donovani is a complex glycoproteic fraction. Its potential use as a tool for diagnosis of human visceral leishmaniasis was tested with human sera from Natal, Rio Grande do Norte, Brazil. The FML-ELISA test, showed 100 per cent sensitivity and 96 per cent specificity, identifying patients with overt kala-azar (p < 0.001, when compared to normal sera), and subjects with subclinical infection. More than 20 per cent apparently healthy subjects with positive reaction to FML developed overt kala-azar during the following 10 months. In the screening of human blood donnors, a prevalence of 5 per cent of sororeactive subjects was detected, attaining 17 per cent in a single day. The GP36 glycoprotein of FHL is specifically reconized by human kala-azar sera. The immunoprotective effect of FML on experimental L. donovani infection was tested in swiss albino mice. The protection scheemes included three weekly doses of FML, supplemented or not with saponin by the subcutaneous or intraperitoneal routes and challenge with 2 x 10(7) amastigotes of Leishmania donovani. An enhancement of 80.0 per cent in antibody response (p < 0.001) and reduction of 85.5 per cent parasite liver burden (p < 0.001) was detected in animals immunized with FML saponin, unrespectively of the immunization route.

Caracterización de fracciones mayoritarias del plasma seminal humano: estudio comparativo entre individuos normospérmicos, azoospérmicos, necrozoospérmicos, oligozoospérmicos y vasectomizados / Caracterization of major human seminal plasma fractions: comparative study with normospermic, azoospermic, necrozoospermic, oligozoospermic and vasectomised donors

El plasma seminal humano (PSH) de individuos normospérmicos y con diferentes patologías fue analizado por cromatografía de afinidad en Concanavalina-A Sepharose. Se obtuvieron dos fracciones mayoritarias, F1 y F2, en proporciones variables y con diferencias en la composición de monosacáridos y aminoácidos de acuerdo con el tipo de patología. Galactosa es el principal miembro, juntamenete con fucosa y proporciones variables de manosa, N-acetilglucosamina y N-acetilgalactosamina. Se encontraron diferencias en la estructura primaria de los glicanos (enlaces N- y O-glicosídicos) presentes en las fracciones de los individuos con diferentes patologías. En F1 todas las cadenas de oligosacáridos son del tipo O-glicosídica correspondiendo a glicoproteínas tipo mucina; en F2 se encontró una relación molar O-/N- es 5,3/1. La fracción de F1 de individuos azoospérmicos y oligozoospérmicos son del tipo O-glicosídico mientras que en vasectomizados la relación molar O-/N- es 1,7/1. En todos los casos, F2 presenta cadenas de oligosacáridos O- y N-glicosídicas en diferentes proporciones, con la excepción del plasma seminal de vasectomizado que pertenece al tipo O-glicosídico. Los resultados obtenidos sugieren que la composición de las fracciones F1 y F2 de donantes con diferentes patologías está caracterizada por diferencias importantes en el contenido de carbohidratos y pépticos

Kinetics of translation and glycosylation of pituitary glycoproteins

The present study determines the basal kinectics of synthesis of translation (by[(14)C] leucine incorporation. [(14)C] leu-PROT] and of proximal (by [(3)H] mannose incorparation. [(3)H] man-PROT) and distal (by [3H] galactose incorporation, [(3)H] gal-PROT) glycosylation of total adenohypophyseal glycoproteins, by rat pituitary cells in primary culture. In order to obtain more information regarding the role of both septs of glycosylation on the secretory process, the effects of cycloheximide (CH; translation inhibitor) and tunicamycin (TM; glycosylation inhibitor) on the kinetics of synthesis and release of pituitary glycoproteins were also studied. Cells were incubated in medium containing [(14)C] leu plus [(3)H] man or [(14)C] leu plus [(3)H] gal, for various time-intervals (from 0.5 to 5h) in the abscence (control) or presence of different doses od CH (1.0;4.0 or 16.0 mug/ml) or TM (0.5;1.0 or 2.0 mug/ml). The kinetics of synthesis (slope=3488) and release (slope=622) of [(14)C] le-PROT were higler than those of the sugar percursos (slopes: [(3)H] man-PROT=1751 and 526; [(3)H] gal-PROT=1231 and 506). Leucine or mannose-labeled protein was barely detectable in the medium after 2h incubation, whereas galactose-labeled protein had already been released into the incubation medium by 30min. Cycloheximide induced translation blockage and, concomitantly, produced a marked inhibition of [(3)H] man incorporation. On the other hand, TM inhibited the kinetics of synthesis and release of [(3)H] man-PROT without affecting those of [(14)C] leu-PROT. The kinetics of synthesis and release of [(3)H] gal-PROT, although diminished, maintained linearity and increased in function of time, even in the presence of the antibiotics. Thus, the present results on glycoproteins from the pituitary gland are consistent with the previous conclusion for other mammalian glycoproteins that carbohydrate attachment occurs in several steps to molecules destined to be secreted. Addition of mannose (proximal glycosylation) is a co-translational event and that of galactose (distal glycosylation) is post-translational and can be designated as final stages in carbohydrate assembly, occurring close to the time of release. Furthermore, it has been demonstrated that the absence of the carbohydrate side chains of the pituitary glycoprotein does not prevent the intracellular transport of the protein and its export from the cell.

Inhibición del sitio específico de adhesión de leishmania braziliensis después de la ingestión de manosa por lutzomyia youngi / Inhibition of the specific site of adhesion of leishmania braziliensis after of the ingestion of mannose by Leitzomyia youngi

Hembras de Lutzomyia youngi silvestres mantenidos con sacarosa, se han infectado con Leishmania braziliensis alimentándolos sobre lesiones tarsales de hámsteres. Hembras silvestres de Lu. youngi atrapadas con trampa de shannon en una localidad no endémica para leishmaniasis cutánea y deplecionadas de azúcares reductores ingeridos naturalmente a las 48 horas, solamente ingieren manosa o galactosa cuando estos azúcares se mezclan con sacarosa. Infectados por lotes, alimentando las Lu. youngi sobre hámsteres diferentes inoculados con L.braziliensis, han sido, alimentados adicionalmente con sacarosa mezclada con colorante artificial Mc Cormick durante 120 horas, detéctandose promastigotos en el píloro de 31 por ciento de los insectos ingurgitados y presencia de parásitos como tapones en la válvula estomodeal en 42 por ciento de los infectados. La ingestión de sacarosa-manosa por insectos similarmente infectados aunque produjo el mismo porcentaje de infecciones, redujo el número de flebótomos con infecciones pilóricas e inhibió la fijación de haptosomas a la válvula estomodeal, en tanto que aumentó la frecuencia de infecciones rectales por haptomonadas. La ingestión de sacarosa-galactosa, sin alterar el porcentaje de infectados, produjo una menor colonización de la valvula estomodeal. Se especula la presencia en la cutícula estomodeal en Lu. youngi de actividad lectínica similar a Con A y de actividad similar a la ricina en la cúticula del píloro para explicar estos resultados, que comparten el punto de vista de la producción de un lipofosfoglicano la menbrana de promastigotos de la fase estacionaria de desarrollo, cuyos terminales activos de manosa y o galactosa serían inhibidos competitivamente por la ingestión de los mismos azúcares durante las 120 horas del desarrollo

Relación entre cepas de enterobacterias manosa resistentes y presencia de células centelleantes en el sedimento urinario / Relation among enterobacteriaceae mannosa resistant isolates and glitter cells in the urinary sediments

La presencia de células con características especiales denominadas células centelleantes, en el sedimento urinario provenientes de infecciones urinarias producidas por cepas de enterobacterias que expresan fimbrias Pap, fue evaluada en este estudio. En 143 cepas de enterobacterias, la capacidad de adhesión fue analizada aglutinación de glóbulos rojos humanos grupo A suspendidos en buffer fosfato (PBS), para ver hemoaglutinación (HA), y con el agregado de D-manosa al 1 por ciento para detectar hemoaglutinación manosa-sensible (HAMS) o manosa resistente (HAMR). Escherichia coli presentó una diferencia significativa en el número de cepas que expresan fimbrias manosa resistente (MR):56 y las que expresan fimbrias manosa sensibles (MS):25. Las especies MR, fueron enfrentadas con glóbulos rojos humanos grupo P y eritrocitos de cerdo, utilizando como inhibidor de la hemoaglutinación el digalactósido (1-4) -ß-D galactopiranósido. No se estableció una diferencia notable en el número de cepas con fimbrias MR, que presentaron capacidad hemoaglutinante, frente a las dos especies de eritrocitos. Pero fue comparativamente mayor, el número de cepas con fimbrias Pap que aglutinaron glóbulos rojos humanos grupo P. La relación presencia de células centelleantes en el sedimento urinario y cepas de enterobacterias que expresan fimbrias MR, como agente etiológico del proceso infeccioso, fue significativamente mayor que la establecida por cepas con fimbrias MS

The FML vaccine (fucose-mannose ligand) protects hamsters from experimental kala-azar

Visceral leishmaniais or kala-azar, is a chronic and frequently lethal disease, caused by Leishmania donovani. Clinical signs include malaise, hepatosplenomegaly, hypergammaglobulinemia, fever, cachexia and progressive suppresion of the cellular immune response. Only few studies on prophylactic immunization against this disease have been understaken, mostly with crude antigens, and no vaccine against kala-azar is yet available. In previous studies, we have isolated the Fucose-Mannose Ligand (FML) of L. donovani that strongly and specifically inhibits the in vitro infection of macrophages by promastigotes and amastigotes. The FML behaves as a pontent immunogen for rabbits and mice, and is specifically recognized by kala-azar patient sera. The protective pontential of FML on kala-azar was now analyzed in the CB-hamster model. We studied the efect of three intraperitoneal weekly doses of FML (100 mg) in saponin (100 mg), folowed by an intracardiac injection of 107 amastigotes. Saponin- and saline-treated controls were also included. Protection was highly significant regarding the enhancement of anti-FML antibodies titers, the splenocyte proliferative response, and the intradermal delayed hypersensitivity reaction to antigen, as well as the decrease of the parasite burden in spleen and of splenomegaly. Protection to kala-azar was due to specific FML antigenic properties, since the results obtained by saponin alone were significantly different. We conclude that the use of FML and saponin as a vaccine reduced the disease impact and retarded its onset.

Isolation of temperature-sensitive yeast GPI-anchoring mutants

We are using a genetic approach to explore the synthesis and function of glycosylphosphatidylinositol (GPI). We have developed a novel strategy to isolate Saccharomyces cerevisiae mutants blocked in GPI anchoring by screening colonies of mutagenized yeast cells for those that fail to incorporate [3H]inositol into protein. Among our isolates are strains blocked in mannosylation of the GPI-anchor precursor, and strains defective in the synthesis of N-acetylglucosaminylphosphatidylinositol (GlcNAc-PI). We have characterized one mutant, gpil, further. This strain is defective in GlcNAC-PI synthesis and is temperature-sensitive for growth. Completion of the first step in GPI assembly is therefore required for the growth of the unicellular eukaryote S. cerevisiae. We have isolated plasmids that complement the gpil mutation from S. cerevisiae genomic DNA- and fission yeast cDNA libraries

Metabolism of GPIs in mammalian cells

In Trypanosoma brucei, glycosylphosphatidylinositol (GPI) anchors of proteins and free GPIs with identical structures have been characterized. This identity provides strong presumptive evidence that the free GPIs are in fact precursors of the GPI anchors on proteins. In mammalian tissues, however, rather consistent differences in the structures of free GPIs and GPI anchors are observed. The terminal GPIs produced by the mammalian biosynthetic pathway differ from GPI anchors in being almost exclusively fatty acid acylated on the inositol residue, having a greater number of phosphoethanolamine residues, and perhaps in containing a greater percentage of diacylglycerol components. While in principle these differences could be reconciled by remodeling reactions before or after attachment of GPI anchors, it is possible that some of the mammalian free GPIs play cellular roles other than as anchor precursors. We have approached this question by studying the lifetimes of the last three GPIs on the biosynthetic pathway, denoted H6, H7 and H8, in K562 cells and in K562 mutant designated class K that is devoid of GPI-anchored proteins. Pulse-chase metabolic labeling with [3H]-mannose indicated that H6 was a precursor of H7 and H8 and that the H8 lifetime was more than one hour in the parental cells and even longer in the mutant. Preliminary data indicated that the majority of each of the three GPIs was localized in the plasma membrane fraction rather than the endoplasmic reticulum. These observations argue that mammalian GPIs are not utilized exclusively as GPI anchor precursors

Características clínicas e virulência de Escherichia coli em infecçöes do trato urinário / Clinical characteristics and virulence in Escherichia coli urinary tract infection

Neste estudo nós isolamos amostras de Escherichia coli de 73 pacientes com infecçöes urinárias hospitalares oucomunitárias (16 de pielonefrite, 47 de cistite e 11 bacteriúria) e de 24 amostras de fezes de pessoas saudáveis. Estas amostras foram analisadas para avaliar: 1) a produçäo de aerobactina, hemolisina, colicina; 2) a presença de pili tipo 1, hemaglutinaçäo manose resistente (HAMR) e resistência a antibióticos; 3) a possível correlaçäo entre os fatores de virulência com sinais e sintomas de infecçäo localizada no trato urinário. A HAMR ocorreu em 75 por cento das amostras pielonefrite, 51,1 por cento em cistite, 63,6 por cento em bacteriúria assintomática e apenas em 25 por cento das amostras fecais. A aerobactina foi produzida em 68,7 e 57,0 e 54,5 e 25,0 por cento das pielonefrites, cistites, bacteriúria assintomática e flora normal, respectivamente, enquanto a atividade hemolítica foi observada em 43,7 e 28,8 e 36,0 e 4,3 por cento. Uma maior produçäo de amostra de E. coli urinária produziu aerobactina, alfa hemolisina, HAMR e resistência a drogas quando comparadas com as amostras fecais normais mas a presença destes fatores näo foi correlacionada com a localizaçäo da infecçäo no trato urinário. A produçäo de fimbria tipo 1 e colicinas foram igualmente detectadas nos grupos de amostras urinárias e fecais. Estes resultados sugerem que a produçäo de pili P, alfa-hemolisina e aerobactina säo importantes fatores de virulência de E. coli em UTI e que a severidade das UTI depende da relaçäo entre resistência do hospedeiro e fatores de virulência bacteriana