Papel dos receptores purinérgicos em modelo animal de doença de Parkinson / Role of purinergic receptors in an animal model of Parkinsons Disease

A Doença de Parkinson é uma doença altamente incapacitante e de grande prevalência. Pouco se sabe sobre sua etiologia e os tratamentos atuais consistem na diminuição dos sintomas, uma vez que ainda não foi encontrada uma maneira de reverter o déficit de neurônios dopaminérgicos observados nos pacientes acometidos. Sabe-se que os receptores purinérgicos são encontrados por todo o sistema nervoso central, não só no indivíduo adulto como também em diferentes estágios do desenvolvimento embrionário e estão envolvidos com proliferação e diferenciação celular. Este trabalho estudou a participação dos receptores purinérgicos em modelo animal de doença de Parkinson por lesão dos neurônios dopaminérgicos da via nigroestriatal com 6-OH dopamina (6-OHDA). Realizamos a análise do perfil de expressão gênica dos diferentes receptores após a lesão e subsequente modulação. Observamos expressão gênica alterada dos receptores P2X7 e P2Y6 até 5 semanas após a lesão. O uso do antagonista do receptor P2X7 Brilliant Blue G (BBG) induziu a regeneração da via nigroestriatal e o uso do antagonista do receptor P2Y6 MRS2578 preveniu a morte dos neurônios. Como esses efeitos foram acompanhados pela inativação de células microgliais, supõe-se que o controle do microambiente neuroinflamatório causado pela injeção de 6-OHDA seja a principal causa do efeito antiparkinsoniano observado pelo tratamento com BBG e MRS2578. Além disso, o transplante celular com células precursoras neuraisnão foi capaz de reverter o comportamento hemiparkinsoniano dos animais lesionados. Apesar do uso concomitante com BBG reduzir o comportamento, parece que esse efeito deve-se ao BBG per se, uma vez que o tratamento somente com o antagonista de P2X7 foi mais eficaz. De maneira geral, a modulação da atividade dos receptores purinérgicos se mostrou uma ferramenta promissora na pesquisa de cura e compreensão das bases moleculares da Doença de Parkinson

Parkinson's disease is a highly disabling and prevalent disease. Little is known about its etiology and the current treatments consist in the reduction of the symptoms, since there is no known method to reverse the dopaminergic neurons deficit observed in patients. Purinergic receptors are found throughout the central nervous system, not only in the adult individual but also at different stages of embryonic development, and are involved in proliferation and differentiation. This work investigated the role of purinergic receptors in the animal model of Parkinson's disease induced by 6-OH dopamine (6-OHDA) injection and consequent death of dopaminergic neurons of the nigrostriatal pathway. Patterns of purinergic receptors gene expression after the lesion and subsequent modulation were analyzed. We observed altered gene expression of P2X7 and P2Y6 receptors within 5 weeks of injury. The use of the P2X7 receptor antagonist Brilliant Blue G (BBG) induced the regeneration of the nigrostriatal pathway and treatment with P2Y6 receptor antagonist MRS2578 prevented the death of the neurons. Since these effects were accompanied by the inactivation of microglial cells, it is assumed that the control of neuroinflammatory milieu caused by the 6-OHDA injection is the main cause of the antiparkinsonian effect observed by the treatment with BBG and MRS2578. In addition, transplantation with neural precursor cells was not able to reverse the hemiparkinsonian behavior of injured animals. Although concomitant use with BBG improved cell engraftment, it appears that this effect is due to BBG per se, since treatment with only this P2X7receptor antagonist was more effective. In general, modulation of purinergic receptor activity showed to be a promising tool in the research of cure and understanding of the molecular bases of Parkinson's Disease

Nitric oxide modulates ATP-evoked currents in mouse Leydig cells

Testosterone synthesis within Leydig cells is a calcium-dependent process. Intracellular calcium levels are regulated by different processes including ATP-activated P2X purinergic receptors, T-type Ca2+ channels modulated by the luteinizing hormone, and intracellular calcium storages recruited by a calcium-induced calcium release mechanism. On the other hand, nitric oxide (NO) is reported to have an inhibitory role in testosterone production. Based on these observations, we investigated the interaction between the purinergic and nitrergic systems in Leydig cells of adult mice. For this purpose, we recorded ATP-evoked currents in isolated Leydig cells using the whole cell patch clamp technique after treatment with L-NAME (300 μM and 1 mM), L-arginine (10, 100, 300, and 500 μM), ODQ (300 μM), and 8-Br-cGMP (100 μM). Our results show that NO produced by Leydig cells in basal conditions is insufficient to change the ATP-evoked currents and that extra NO provided by adding 300 μM L-arginine positively modulates the current through a mechanism involving the NO/cGMP signaling pathway. Thus, we report an interaction between the nitrergic and purinergic systems in Leydig cells and suggest that Ca2+ entry via the purinergic receptors can be regulated by NO.

Satellite glial cells in sensory ganglia: its role in pain / Células gliais satélite de gânglios sensitivos: o seu papel na dor / Células gliales satélite de ganglios sensoriales: su papel en el dolor

BACKGROUND AND OBJECTIVES: Satellite glial cells in sensory ganglia are a recent subject of research in the field of pain and a possible therapeutic target in the future. Therefore, the aim of this study was to summarize some of the important physiological and morphological characteristics of these cells and gather the most relevant scientific evidence about its possible role in the development of chronic pain. CONTENT: In the sensory ganglia, each neuronal body is surrounded by satellite glial cells forming distinct functional units. This close relationship enables bidirectional communication via a paracrine signaling between those two cell types. There is a growing body of evidence that glial satellite cells undergo structural and biochemical changes after nerve injury, which influence neuronal excitability and consequently the development and/or maintenance of pain in different animal models of chronic pain. CONCLUSIONS: Satellite glial cells are important in the establishment of physiological pain, in addition to being a potential target for the development of new pain treatments. .

JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS: As células gliais satélite de gânglios sensitivos são um objeto recente de pesquisa na área da dor e um possível alvo terapêutico no futuro. Assim, este trabalho tem como objetivo resumir algumas das características morfológicas e fisiológicas mais importantes destas células e reunir as evidências científicas mais relevantes acerca do seu possível papel no desenvolvimento da dor crônica. CONTEÚDO: Nos gânglios sensitivos cada corpo neuronial é envolvido por células gliais satélite, formando unidades funcionais distintas. Esta íntima relação possibilita a comunicação bidirecional, através de uma sinalização parácrina, entre estes dois tipos de células. Existe um número crescente de evidências de que as células gliais satélite sofrem alterações estruturais e bioquímicas, após lesão nervosa, que influenciam a excitabilidade neuronial e consequentemente o desenvolvimento e/ou manutenção da dor, em diferentes modelos animais de dor crônica. CONCLUSÕES: As células gliais satélite são importantes no estabelecimento da dor não fisiológica e constituem um alvo potencial para o desenvolvimento de novos tratamentos da dor. .

JUSTIFICACIÓN Y OBJETIVOS: Las células gliales satélite de ganglios sensoriales son un objeto reciente de investigación en el área del dolor y un posible objeto terapéutico en el futuro. Por tanto, este trabajo intenta resumir algunas de las características morfológicas y fisiológicas más importantes de estas células y reunir las evidencias científicas más relevantes acerca de su posible papel en el desarrollo del dolor crónico. CONTENIDO: En los ganglios sensoriales cada cuerpo neuronal está envuelto por células gliales satélite, formando unidades funcionales distintas. Esta íntima relación posibilita la comunicación bidireccional a través de una señalización paracrina entre esos 2 tipos de células. Existe un número creciente de evidencias de que las células gliales satélite sufren alteraciones estructurales y bioquímicas después de la lesión nerviosa que influyen en la excitabilidad neuronal y por ende en el desarrollo y/o en el mantenimiento del dolor en diferentes modelos animales de dolor crónico. CONCLUSIONES: Las células gliales satélite son importantes en el establecimiento del dolor no fisiológico y son un potencial objetivo para el desarrollo de nuevos tratamientos del dolor. .

Modulação da diferenciação neural de células troco embrionárias por transientes de cálcio intracelulares: papéis dos receptores purinérgicos e de canais de cálcio voltagem-dependentes / Modulation of neural embryonic stem cell differentiation by intracellular Ca2+ oscillations. Roles of purinergic receptors and voltage gated Ca2+ channels

Receptores purinérgicos e canais de cálcio voltagem-dependentes estão envolvidos em diversos processos biológicos como na gastrulação, durante o desenvolvimento embrionário, e na diferenciação neural. Quando ativados, canais de cálcio voltagem-dependentes e receptores purinérgicos do tipo P2, ativados por nucleotídeos, desencadeiam transientes de cálcio intracelulares controlando diversos processos biológicos. Neste trabalho, nós estudamos a participação de canais de cálcio voltagem-dependentes e receptores do tipo P2 na geração de transientes de cálcio espontâneos e sua regulação na expressão de fatores de transcrição relacionados com a neurogênese utilizando como modelo células tronco (CTE) induzidas à diferenciação em células tronco neurais (NSC) com ácido retinóico. Descrevemos que CTE indiferenciadas podem ter a proliferação acelerada pela ativação de receptores P2X7, enquanto que a expressão e a atividade desse receptor precisam ser inibidas para o progresso da diferenciação em neuroblasto. Além disso, ao longo da diferenciação neural, por análise em tempo real dos níveis de cálcio intracelular livre identificamos 3 padrões de oscilações espontâneas de cálcio (onda, pico e unique), e mostramos que ondas e picos tiveram a frequência e amplitude aumentadas conforme o andamento da diferenciação. Células tratadas com o inibidor do receptor de inositol 1,4,5-trifosfato (IP3R), Xestospongin C, apresentaram picos mas não ondas, indicando que ondas dependem exclusivamente de cálcio oriundo do retículo endoplasmático pela ativação de IP3R. NSC de telencéfalo de embrião de camundongos transgênicos ou pré-diferenciadas de CTE tratadas com Bz-ATP, o agonista do receptor P2X7, e com 2SUTP, agonista de P2Y2 e P2Y4, aumentaram a frequência e a amplitude das oscilações espontâneas de cálcio do tipo pico. Dados, obtidos por microscopia de luminescência, da expressão em tempo real de gene repórter luciferase fusionado à Mash1 e Ngn2 revelou que a ativação dos receptores P2Y2/P2Y4 aumentou a expressão estável de Mash1 enquanto que ativação do receptor P2X7 levou ao aumento de Ngn2. Além disso, células na presença do quelante de cálcio extracelular (EGTA) ou do depletor dos estoques intracelulares de cálcio do retículo endoplasmático (thapsigargin) apresentaram redução na expressão de Mash1 e Ngn2, indicando que ambos são regulados pela sinalização de cálcio. A investigação dos canais de cálcio voltagem-dependentes demonstrou que o influxo de cálcio gerado por despolarização da membrana de NSC diferenciadas de CTE é decorrente da ativação de canais de cálcio voltagem-dependentes do tipo L. Além disso, esse influxo pode controlar o destino celular por estabilizar expressão de Mash1 e induzir a diferenciação neuronal por fosforilação e translocação do fator de transcrição CREB. Esses dados sugerem que os receptores P2X7, P2Y2, P2Y4 e canais de cálcio voltagem-dependentes do tipo L podem modular as oscilações espontâneas de cálcio durante a diferenciação neural e consequentemente alteram o padrão de expressão de Mash1 e Ngn2 favorecendo a decisão do destino celular neuronal

Purinergic receptors and voltage gated Ca2+ channels have been attributed with developmental functions including gastrulation and neural differentiation. Upon activation, nucleotide-activated P2 purinergic receptor and voltage-gated Ca2+ channel subtypes trigger intracellular calcium transients controlling cellular processes. Here, we studied the participation of voltage-gated calcium channels and P2 receptor activity in spontaneous calcium transients and consequent regulation expression of transcription factors related to retinoic acid-induced neurogenesis of mouse neural stem and embryonic stem cells (ESC). In embryonic pluripotent stem cells, proliferation is accelerated by P2X7 receptor activation, while receptor expression / activity needs to be down-regulated for the progress of neuroblast differentiation. Moreover, along neural differentiation time lapse imaging with means of a cytosolic calcium-sensitive fluorescent probe provided different patterns of spontaneous calcium transients (waves and spikes) showing that both, frequency and amplitude increased along differentiation. Cells treated with the inositol 1,4,5-trisphosphate receptor (IP3R) inhibitor Xestospongin C showed spikes but not waves, indicating that waves exclusively depended on calcium release from endoplasmic reticulum by IP3R activation. Cells treated with the P2X7 receptor subtype agonist Bz-ATP and the P2Y2 and P2Y4 receptor 2-S-UTP increased frequency and amplitudes of calcium transients, mainly spikes, in embryonic telencephalon neural stem cells (NSC) and NSC pre-differentiated from ESC. Data obtained by luminescence time lapse imaging of stable transfected cells with Mash1 or Ngn2 promoter-protein fusion to luciferase reporter construct revealed increased Mash1 expression due to activation of P2Y2/P2Y4 receptor subtypes, while increased expression of Ngn2 was observed following P2X7 receptor activation. In addition, cells imaged in presence of the extracellular calcium chelator EGTA or following endoplasmic reticulum calcium store depletion by thapsigargin showed a decrease in Mash1 and Ngn2 expression, indicating that both are regulated by calcium signaling. Investigation of the roles of voltage gated Ca2+ channels in neural differentiation showed that Ca2+ influx in NSC pre-differentiated from ESC is due to membrane depolarization and L-type voltage gated Ca2+ channel activation, thereby controlling cell fate decision, by stabilizing the expression of MASH1 and inducing differentiation, by phosphorylation of the transcription factor CREB. Altogether these data suggest that P2X7, P2Y2, P2Y4 receptors and L-type voltage gated Ca2+ channels can modulate spontaneous calcium oscillations during neural differentiation and consequently change the Mash1 and Ngn2 expression patterns, thus favoring the cell fate decision to the neuronal phenotype

Caracterização do ambiente inflamatório cardíaco e estudo de interações células T/endotélio em camundongos mdx/mdx / Characterization of cardiac inflammatory environment interactions and study T cell / endothelium in mice mdx / mdx

A Distrofia muscular de Duchenne (DMD) é uma doença recessiva ligada ao cromossomo X que afeta 1 a cada 3500 meninos nascidos vivos e é causada por mutações no gene da distrofina. A ausência da distrofina leva à degeneração progressiva dos músculos esqueléticos e cardíaco assim como à inflamação crônica. O camundongo mdx/mdx é um dos modelos mais utilizados para estudo da DMD e apresenta muitas características da doença, embora a progressão da patologia seja mais branda e não letal. Este trabalho visa avaliar a migração de células T para o coração de camundongos mdx/mdx e possíveis alterações na expressão de moléculas de adesão que possam modular esse processo. Leucócitos sanguíneos, incluindo células T de camundongos mdx/mdx de 6 semanas de idade, são CD62L (mais) , mas sofrem uma modulação negativa nos animais de 12 semanas, com apenas 40(por cento) dos linfócitos T mantendo a expressão dessa molécula. Nossos resultados apontam para uma clivagem de CD62L dependente de P2X7 (com altos níveis de CD62L no soro) que reduz a competência dos linfócitos T sanguíneos de camundongos mdx/mdx de 12 semanas aderirem aos vasos sanguíneos cardíacos in vitro. In vivo, nós observamos que mesmo após a infecção com Trypanosoma cruzi, um conhecido indutor de miocardite linfóide, essas células raramente são encontradas no co ração. Quando camundongos mdx/mdx são tratados com BBG, um bloqueador de P2X7, esses linfócitos sanguíneos mantém a expressão de CD62L e são capazes de migrar para o coração. Esses resultados fornecem novas informações sobre os mecanismos de infiltração in flamatória e regulação imune na DMD.

Estudio del sistema purinérgico a través de la caracterización de la enzima E-NPP3 y de la secreción de ATP en células uroepiteliales de la vejiga urinaria del ratón / Study of the purinergic system through the characterization of the E-NPP3 enzyme and the secretion of ATP in uroepithelial cells of the urinary bladder of the mouse

El presente trabajo involucra el estudio del sistema purinérgico mediante la purinérgico mediante la purificación y la caracterización bioquimica de la ecto-enzima E-NPP3 soluble, la cual modula la activación de los receptores purinérgicos mediante la hidrólisis de los nucleótidos extracelulares. La purificación de esta enzima, expresada en la línea celular CHO-K1, requirió el empleo de diferentes columnas cromatográficas; comprobándose la pureza, mediante la determinación de la actividad enzimática, la cuantificación de las proteínas y la detección de dicha enzima. Los resultados de la caracterización de la E-NPP3 indican que presentan un ph óptimo alcalino y que su actividad depende de la la concentración de los iones calcio y magnesio: mientras que el imidazol y el DDT ejercen acciones inhibidoras sobre su actividad. La purificación de la enzima E-NPP3 soluble representa un primer paso para futuros estudios que permitan su cristalización lo cual, constituirá una herramienta en la elaboración de agonistas y antagonistas selectivos o de anticuerpos monoclonales contra dicha enzima, útiles en el diagnóstico o el tratamiento de condiciones patológicas como el cáncer de colon y la colangiocarcinoma. Adicionalmente, teniendo en cuenta que se ha demostrado la disminución de la expresión de las ecto-nucleotidasas en el uroepitelio de pacientes que padecen cistitis intersticial; el presente trabajo comprende también, el desarrollo de un modelo de órgano aislado, la vejiga urinaria del ratón, para el estudio de la secreción de ATP desde las células uroepiteliales. Dicho modelo permitió demostrar, mediante estudios electrofisiológicos y el uso de diferentes fármacos, la contriución de los receptores purinérgicos sobre la actividad eléctrica del nervio pélvico cuando la vejiga es sometida a distensión mecánica gradual; sugiriendo la importancia de estos receptores en la transducción mecanosensorial de dicho órgano y permitiendo inferir la posible interrelación con los receptores de vaniloides en la detección de los estímulos sensoriales por parte del uroepitelio

Señales purinérgicas / Purinergic signals

En la última década se ha aportado clara evidencia de que tanto nucleósidos como nucleótidos de adenina y uridina pueden funcionar como factores de señalización extracelular. Su acción es mediada por dos tipos principales de receptores de superficie denominados purinérgicos. Los receptores P1 se activan por adenosina, y son todos metabotrópicos, mientras que los receptores de nucleótidos (ATP, ADP, UTP y UDP) y nucleótidos-azúcares (UDP-glucosa y UDP-galactosa) pueden ser metabotrópicos (P2Y) o ionotrópicos (P2X). La importancia y complejidad de este sistema de señalización se evidencia por la diversidad de mecanismos de liberación de nucleótidos al medio extracelular y por la distribución ubicua de varios grupos de ectonucleotidasas capaces de catalizar la degradación y conversión de nucleótidos. Hasta el momento se han descrito y clonado una veintena de estos receptores que modulan una variedad de respuestas, como el impulso nervioso, la respuesta inflamatoria, la secreción de insulina, la regulación del tono vascular y la percepción del dolor. En la presente revisión se describen las características estructurales y farmacológicas de los receptores purinérgicos y se analiza la interacción dinámica entre estos receptores, los nucleósidos y nucleótidos, y las ectonucleotidasas, con especial atención a la dinámica de la agregación plaquetaria, la respuesta inmune y la hidratación de las mucosas respiratorias.

In the last decade evidence accumulated that nucleosides and nucleotides of both uridine and adenine can act as extracellular signaling factors. Their action is mediated by two main types of surface receptors commonly known as purinergic. P1 receptors are metabotropic and activated by adenosine, whereas receptors for nucleotides (ATP, ADP, UTP and UDP) and nucleotide-sugars (UDP-glucose and UDP-galactose) can be either metabotropic (P2Y) or ionotropic (P2X). The importance and complexity of this signaling system is evidenced by various mechanisms of nucleotide release, as well as by the ibiquitous distribution of various types of ectonucleotidases which catalyze and convert extracellular nucleotides. Up to now about twenty receptors have been cloned and found to modulate the nerve impulse, inflammatory response, insuline secretion, the regulation of the vascular tone and nociception, among other processes. In the present review we describe the main structural and pharmacological features of purinergic receptors, and analyze how the dynamic interaction between these receptors, nucleotides and nucleosides, and ectonucleotidases modulate several biological responses. Particular focus is given to platelet aggregation and thrombus formation, the immune response and the hydration of the mucosal linings of the respiratory tract.

Purinergic signalling: past, present and future

The discovery of non-adrenergic, non-cholinergic neurotransmission in the gut and bladder in the early 1960's is described as well as the identification of adenosine 5'-triphosphate (ATP) as a transmitter in these nerves in the early 1970's. The concept of purinergic cotransmission was formulated in 1976 and it is now recognized that ATP is a cotransmitter in all nerves in the peripheral and central nervous systems. Two families of receptors to purines were recognized in 1978, P1 (adenosine) receptors and P2 receptors sensitive to ATP and adenosine diphosphate (ADP). Cloning of these receptors in the early 1990's was a turning point in the acceptance of the purinergic signalling hypothesis and there are currently 4 subtypes of P1 receptors, 7 subtypes of P2X ion channel receptors and 8 subtypes of G protein-coupled receptors. Both short-term purinergic signalling in neurotransmission, neuromodulation and neurosecretion and long-term (trophic) purinergic signalling of cell proliferation, differentiation, motility, death in development and regeneration are recognized. There is now much known about the mechanisms underlying ATP release and extracellular breakdown by ecto-nucleotidases. The recent emphasis on purinergic neuropathology is discussed, including changes in purinergic cotransmission in development and ageing and in bladder diseases and hypertension. The involvement of neuron-glial cell interactions in various diseases of the central nervous system, including neuropathic pain, trauma and ischemia, neurodegenerative diseases, neuropsychiatric disorders and epilepsy are also considered.

Mecanismos de acción de los fármacos inmunosupresores / Mechanisms of action of immunosuppressive drugs

Durante los últimos 50 años, muchos fármacos inmunosupresores han sido descritos, y sus mecanismos de acción se pueden dividir en: Reguladores de la expresión génica; Agentes alquilantes; Inhibidores de novo de la síntesis de purinas y pirimidinas, e Inhibidores de quinasas y fosfatasas. Los glucocorticoides ejercen su acción inmunosupresora y antiinflamatoria principalmente mediante la inhibición de la expresión de los genes de interleuquina-2 (IL-2) y otros mediadores. Los metabolitos derivados de Ciclofosfamida alquilanizan las bases de ADN y suprimen preferentemente la respuesta inmune (RI) mediada por linfocitos B (LB). Por su parte, el Metotrexato reprime las respuestas inflamatorias liberando adenosina; ésta induce la apoptosis de LT activos e inhibe la síntesis de purinas y pirimidinas. La Azatioprina inhibe varias enzimas implicadas en la síntesis de purinas, mientras que el Ácido micofenólico inhibe la inosina-monofosfato deshidrogenasa, con lo que agota los nucleótidos derivados de guanosina, induciendo la apoptosis de LT activados. Un metabolito de la Leflunomida suprime la dihidro-orotatedeshidrogenada y, consecuentemente, la síntesis de nucleótidos pirimidínicos. La Ciclosporina y el Tacrolimus inhiben la actividad de la Calcineurina, con lo que se suprime la producción de IL-2 y de otras citoquinas. Además, estos compuestos han demostrado bloquear las vías de señalización JNK y p38, activadas por el reconocimiento de antígenos en LT. Por el contrario, la Rapamicina inhibe quinasas celulares necesarias para el ciclo celular y las respuestas a IL-2; también induce la apoptosis de LT activos. Un futuro promisorio es derivado de la aplicación de fármacos inmunosupresores biológicos. El papel y mecanismos de acción de ellos serán discutidos aquí.

During the past 50 years, many immunosuppressive drugs have been described and their mechanisms of action can be organized in: Regulators of gene expression; Alkylating agents; Inhibitors of the novo purine and pyrimidine synthesis, and Inhibitors of kinases and phosphatases. Glucocorticoids exert immunosuppressive and anti-inflammatory activity mainly by inhibiting the expression of interleukin-2 (IL-2) genes and other mediators. Cyclophosphamide metabolites alkylate DNA bases and preferentially suppress immune responses mediated by B-lymphocytes. Methotrexate suppresses inflammatory responses through the release of adenosine; they suppress immune responses by inducing the apoptosis of activated T-lymphocytes and inhibit the synthesis of both purines and pyrimidines. Azathioprine metabolites inhibit several enzymes of purine synthesis. Mycophenolic acid inhibits inosine monophosphate dehydrogenase, thereby depleting guanosine nucleotides, inducing the apoptosis of activated T-lymphocytes. A Leflunomide metabolite inhibits dihydroorotate dehydrogenase, thereby suppressing pyrimidine nucleotide synthesis. Cyclosporine and Tacrolimus inhibit the phosphatase activity of Calcineurin, thereby suppressing the production of IL-2 and other cytokines. In addition, these compounds have recently been found to block the JNK and p38 signaling pathways triggered by antigen recognition in T-cells. In contrast, Rapamycin inhibits both kinases required for cell cycling and responses to IL-2; it also induces apoptosis of activated T-lymphocytes.A promising future is the application of biologic immunosuppressive drugs. We review their role and action mechanisms.

Avaliação das variantes genéticas funcionais trombogênicas relacionadas ao receptor plaquetário P2Y12 e à metaloprotease ADAMTS13 em pacientes apresentando doença arterial coronariana / Functionally genetic thrombogenic variants related to P2Y12 platelet receptor and metaloprotease ADAMTS13 in coronary disease patients

Variantes genéticas trombogênicas podem aumentar o risco de eventos adversos em pacientes com coronariopatia crônica. Estudos prévios demonstraram que o Haplótipo H2 do gene do receptor P2Y12 apresenta uma maior agregação plaquetária e está associado com a presença de isquemia arterial periférica. A metaloprotease ADAMTS13 é responsável pela clivagem do fator de von Willebrand e recentemente foi associada com doença isquêmica coronariana. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito das variantes genéticas funcionais trombogênicas dos Haplótipos H1 e H2 do receptor plaquetário P2Y12 e dos polimorfismos C1342G (Q448E), C1852G (P618A) e C2699T (A900V) da metaloprotease ADAMTS13 em 611 pacientes com doença arterial coronariana multiarterial com função ventricular preservada, acompanhados por um período de 05 anos no ensaio clínico do projeto MASS II (Medical, Angioplasty, or Surgery Study II) em relação aos eventos morte, infarto agudo do miocárdio, angina refratária necessitando um novo procedimento e acidente vascular cerebral. Neste estudo, a avaliação dos Haplótipos H1 e H2 nos pacientes do MASS II não encontrou diferença entre estes haplótipos e os eventos estudados. A análise dos polimorfismos da ADAMTS13 não encontrou associação entre os polimorfismos e os eventos estudados, exceto para a variante genética T2699 (Val900) que está associada com o evento morte (OR: 1,67 95%IC: 1-2,78, p= 0,049) e morte por causa cardiovascular (OR: 2,23 95%IC: 1,2-3,94, p=0,004) e apresenta uma diminuição na sobrevida livre de morte por causa cardíaca para os portadores do genótipo TT relacionado à este polimorfismo. A análise dos haplótipos e das combinações alélicas destes polimorfismos não apresentou associação com eventos ou com a sobrevida livre dos eventos nestes pacientes.

Thrombotic genetic variants could improve the risk of adverse events related to coronary arterial disease (CAD). P2Y12 platelet receptor H2 haplotype showed higher aggregation index and a positive association was described between such genetic variant and peripheral artery disease. DAMTS13 is a metaloprotease responsible to von Willebrand factor cleavage recently found correlated to CAD. We tested the genetic variants P2Y12 receptor H1 and H2 haplotypes and ADAMTS13 polymorphisms C1342G (Q448E), C1852G (P618A) and C2699T (A900V) in a group of 611 patients enrolled in the Medical, Angioplasty, or Surgery Study II (MASS II), a randomized trial comparing treatments for patients with coronary artery disease (CAD) and preserved left ventricular function in a follow up period of 05 years. The incidence of the end points of death and death from cardiac causes, myocardial infarction, refractory angina requiring revascularization and cerebrovascular accident was determined for P2Y12 H1 and H2 haplotypes and ADAMTS polymorphisms. In our study, we did not disclose any association between H1 or H2 haplotype groups regarding the incidence of any of the studied cardiovascular end-points. The association of ADAMTS13 genotypes and cardiovascular events did not showed any association between C1342G (Q448E), C1852G (P618A) variants and cardiovascular end points. Our date provide a strong association between T2699 variant and increased risk to death (OR: 1,67 CI: 1-2,78, p= 0,049) and cardiac death (OR: 2,23 CI: 1,2-3,94, p=0,004) in a population with CAD. The allelic combinations and haplotypes obtained from ADAMTS13 polymorphisms were not associated to cardiac end points and survival differences between MASS II patients.

The involvement of purinergic receptors in the kidney physiological and pathophysiological implications / O envolvimento de receptores purinérgicos no rim implicações fisiológicas e fisiopatológicas

The studies on the purinergic system in the kidney clearly showed its role on the renal hemodynamics, glomerular filtration and tubular function. The effectsof purinergic agonists on the mechanisms of tubuloglomerular feedback, and tubular transport of water and solutes, are well defined. In addition, severalstudies have documented the role of adenosine and specific ATP receptors on the processes of renal diseases, with special interest on the ischemiareperfusioninjury, renal cystic disease, glomerular and tubulointerstitial diseases. Therefore, the purinergic system has become a growing field for researchin renal physiology and pathophysiology, leading to therapeutic possibilities of using specific agonists and antagonists.

Os estudos sobre o sistema purinérgico no rim evidenciaram ao longo dos anos a sua participação na hemodinâmica renal, filtração glomerular e funçãotubular. É bem conhecida a participação de efetores purinérgicos no mecanismo de feedback túbulo-glomerular e transporte tubular de água e solutos.Além disso, vários trabalhos têm mostrado a participação da adenosina e de receptores específicos de ATP em processos de doença renal, com umespecial interesse na lesão da isquemia-reperfusão, doença cística renal, doenças glomerulares e túbulo-intersticiais. Portanto, o sistema purinérgico temse tornado alvo crescente de pesquisa em fisiologia e fisiopatologia renal, voltando-se para as possibilidades terapêuticas no uso de agentes agonistas eantagonistas específicos.

Estudo das bases mecanísticas da diferenciação neuronal mediada pela atividade de `Ca POT. 2+' através dos receptores purinérgicos e colinérgicos / Study of mechanistic bases of neuronal differentiation mediated by 'Ca POT. 2+' activity through purinergic and cholinergic receptors

Muitos subtipos de receptores são ativados pelo mesmo ligante, mas estão acoplados a diferentes mensageiros secundários podendo produzir sinalização divergente em uma célula, enquanto receptores ativados por diferentes ligantes, mas que compartilham o mesmo mensageiro secundário, podem produzir sinalização convergente. Para examinar as bases mecanísticas que influenciam a proliferação e a diferenciação celular determinamos as funções de liberação intracelular de 'Ca POT. 2+' e a excitabilidade celular mediada pelos receptores purinérgicos e colinérgicos utilizando imageamento de cálcio por microscopia confocal. Para tanto, caracterizamos a participação dos subtipos P2'X IND. 1-7' e P2'Y IND. 1,2,4,6' de receptores purinérgicos aos níveis dos transcritos de mRNA e de expressão protéica, assim como pela atividade de induzir os transientes de '['Ca POT. 2+'] IND. i', aumento na concentração livre de cálcio intracelular, durante a diferenciação neuronal de células P19 de carcinoma embrionário, que foram utilizadas como modelo in vitro para o desenvolvimento neuronal precoce. Em células embriônicas os receptores P2'Y IND. 1,2', P2'X IND. 4' ou os heteromultímeros de P2X com farmacologia semelhante ao do receptor P2'X IND. 4' foram os responsáveis pelos transientes de '['Ca POT. 2+'] IND. i' induzidos pelo ATP e seus análogos. Ao término da diferenciação neuronal, os receptores P2'Y IND. 2,6' e P2'X IND. 2' foram os principais mediadores das respostas de '['Ca POT. 2+'] IND. i'. Obtivemos evidências do envolvimento destes receptores na indução da proliferação tanto de células embriônicas como de progenitores neuronais, por ensaios de incorporação de BrdU, e da indução da diferenciação neuronal das células progenitoras, na presença de vários agonistas e antagonistas de receptores purinérgicos...

Caracterização farmacológica de diferentes subtipos de receptores purinérgicos mediante sinalização de cálcio em músculo liso de ceco de cobaia / Pharmalogical caracterization of differents subtypes purinergics receptors medianting calcium signalization caecum smooth muscle in the guínea pig

O ATP media uma vastidão de efeitos por ação dos receptores purinérgicos P2 expressados em muitos tecidos(Mackenzie e cols.,1999; Harden e cols., 1995). Existem dois diferentes mecanismos de sinalização e as estruturas moleculares determinada por sequenciamento dos receptores P2 forma a base para classificação destes receptores purinérgicos em duas maiores famílias: P2X e a família P2Y. (Burnstock e Kennedy, 1985). Estas duas famílias de receptores purinérgicos P2 tem sido divididas em um grande número de subtipos (P2X1 - P2X7 e P2Y1 - P2Y11) baseado no perfil farmacológico de respostas para agonista e na estrutura destes receptores (Bumstock,1996). Estimulação de receptores P2 rápidamente eleva concentração de cálcio citosólico (intracelular é de 100nM enquanto a concentração extracelular é de 1300nM), por influxo via canal cátion iônico (P2X, receptor ionotrópico)ou por liberação de cálcio dos estoques intracelulares, subsequente à ativação de fosfolipase C por proteína G (P2Y, receptor metabotrópico) com produção de IP3 (inositol trisfosfato ) e abertura dos canais de cálcio dos IP3 localizados no reticulo endoplasmático (Mackenzie, col.,1999)…(au)

Modelo de hipofuncao adenossinergica para esquizofrenia: interacao entre os sistemas purinergico, glutamatergico e dopaminergico / Model of adenosinergic hypofunction for schizophrenia: interactions between purinergic, glutamatergic and dopaminergic systems

Os modelos fisiopatologicos da esquizofrenia classicamente tem abordado diversos neurotransmissores, como a dopamina, a serotonina e o glutamato. Neste trabalho, propomos que alteracoes envolvendo o sistema purinergico...

Correntes iônicas, induzidas por ATP, em células de Leydig / Ionic currents induced by ATP in Leydig cells

As células de Leydig produzem e secretam testosterona, num processo controlado pelo Hormônio Luteinizante (LH) e modulado através de diversos fatores. O trifosfato de adenosina (ATP), no meio extracelular, tem se constituído num novo modulador do processo, atuando via ativação de receptores purinérgicos. Neste trabalho, a técnica de "patch-clamp" foi utilizada para detectar e caracterizar as correntes iônicas, induzidas pela ativação desses receptores, em células de Leydig, isoladas a fresco, de testículos de camundongos. A adição de ATP ao banho levou ao surgimento de uma corrente orientada para dentro, em potenciais hiperpolarizantes. A amplitude da corrente é dependente da dose de ATP, para cada nível de potencial aplicado à célula, e apresenta dessensibilização para doses acima de 60 μM. A relação corrente-voltagem é fortemente retificada na direção de potenciais hiperpolarizantes e apresenta um potencial de reversão próximo de zero mV, indicando uma via de baixa seletividade a cátions. Esses resultados vêm confirmar a presença de receptores purinérgicos em células de Leydig, muito provavelmente pertencentes à família P2X

On the purinergic regulation of hormonal secretion from the anterior pituitary gland

Purinergic regulation of hormonal secretion from the anterior pituitary may be characterized by effects with biphasic secretory response. This response may be started by activation of different subtypes of membrane prurinergic receptor (A1 and/or A2). A putative autocrine mechanism has been proposed to explain the action of adenosine on pituitary hormonal secretion. This mechanism may be dependent on adenosine degradation by the enzyme adenosine deaminase into the extracellular space. The regulation of AMPc and calcium levels in cytoplasm may be part of putative intracellular mechanisms involved in purinergic action. Additionally, hypophysiotrophic effects induced by hypothalamic substances may be modulated by adenosine. The mechanisms involved in this modulatory effects, however, remain elusive.

El corazón como organo endocrino / Heart as an endocrine organ

La adenosina es un metabolito del nucléotido adenina. Su mecanísmo de acción está relacionado a la interacción de dos tipos de receptores. Su principal efecto biológico es la vasodilatación, el cual es consecuencia de la interacción productiva de la adenosina con el receptor A. La adenosina es producida por las células cardíacas durante cualquier situación en la cual el suministro de oxígeno es inadecuado. Sus vías de formación son dos: desfosforilación del 5' - AMP y la hidrólisis del S-adenosil-homocisteína. Las acciones de la ademosina están dirigidas a mantener el equilibrio entre el suministro y la demanda de oxígeno. En situaciones de isquemia, la adenosina puede aumentar el flujo coronario en forma directa (vasodilatación) ó en forma indirecta, inhibiéndo el crecimiento endotelial y previniéndo la obstrucción mecánica de los vasos por neutrófilos y plaquetas