Renovación contextual de la distribución temporal del responder / Contextual Renewal of Temporal Patterns of Responding

Resumen Se ha reportado que en ciertos fenómenos (recuperación espontánea, readquisición, resurgencia y renovación contextual) es posible observar la recuperación de una respuesta previamente extinguida. La renovación contextual, se refiere a la reaparición de una respuesta extinguida que resulta de un cambio de contexto entre la fase de extinción y prueba. El propósito del presente trabajo consistió en evaluar la renovación contextual, atendiendo tanto a la distribución temporal del responder, como a la tasa de respuesta. Se encontró una recuperación de la tasa de respuesta, siendo un resultado consistente con los reportados en el área de renovación contextual. Además, se pudo identificar una renovación de la distribución temporal de respuesta. Los resultados se discuten reconociendo que la tasa y la distribución temporal constituyen dos dimensiones de la ejecución que son moduladas por los cambios de contexto.

Abstract It has been reported that in certain phenomena (spontaneous recovery, reacquisition, resurgence and contextual renewal) it is possible to observe the recovery of a previously extinguished response. Contextual renewal refers to the reappearance of an extinguished response that result from a change of context between the extinction and testing phase. The purpose of the present study was to evaluate contextual renewal, considering both the temporal distribution of the responses and the response rate. A recovery of the response rate was found, being a result consistent with those reported in the area of ​​contextual renewal. In addition, a renewal of the temporal distribution of the responses could be identified. The results are discussed by recognizing that rate and temporal distribution are two behavioral dimensions that are modulated by contextual changes.

Novos reguladores de resposta envolvidos na virulência de Pseudomonas aeruginosa / New response regulators involved in Pseudomonas aeruginosa virulence

Os sistemas de sinalização de dois componentes são sistemas prevalentes em bactérias, permitindo a adaptação a diferentes condições ambientais. O sistema de dois componentes classicamente possui uma proteína histidina quinase, o primeiro componente, capaz de reconhecer o estímulo ambiental e fosforilar o regulador de resposta, o segundo componente. Pseudomonas aeruginosa é uma proteobactéria ubíqua, capaz de infectar hospedeiros filogeneticamente distintos. Esse patógeno oportunista apresenta um dos maiores conjuntos de sistemas de dois componentes em bactérias, que permite que ela sobreviva numa grande gama de ambientes, incluindo humanos. P. aeruginosa UCBPP-PA14 apresenta pelo menos 64 histidina quinases e 76 reguladores de resposta codificados em seu genoma. Diversos sistemas de dois componentes já foram correlacionados com a virulência, sendo o sistema GacSA o exemplo melhor caracterizado. Há poucos estudos sistemáticos sobre o envolvimendo dos reguladores de resposta na virulência de P. aeruginosa e os sinais que induzem a ativação dos reguladores de resposta precisam ser encontrados. Para identificar novos reguladores de resposta envolvidos na patogenicidade, infecções in vitro em macrófagos e in vivo em Drosophila melanogaster foram realizadas neste trabalho. Os macrófagos foram infectados com cada mutante dos reguladores de resposta ou com a linhagem selvagem, e a produção da citocina pró-inflamatória TNF-α e o clearance bacteriano foram determinados. Alternativamente, as moscas foram infectadas utilizando-se a estratégia de feeding e a sobrevivência foi verificada. Utilizando-se essas abordagens, a identificação de diversos reguladores de resposta com papel na virulência foi alcançada, além de se corfirmar o papel de reguladores de resposta já estudados. Um dos novos genes envolvidos em virulência, PA14_26570 (nomeado neste trabalho de atvR), codifica um regulador de resposta atípico com substituição no aspartato fosforilável para glutamato, o que usualmente induz um estado sempre ativo. Um mutante não polar em atvR foi construído e macrófagos infectados com a linhagem ΔatvR confirmaram um maior clearance bacteriano e maior produção de TNF-α em comparação aos macrófagos infectados com a linhagem selvagem. Para comprovar a participação de AtvR durante a patogênese, um modelo de pneumonia aguda em camundongos foi utilizado. Camundongos infectados com a linhagem ΔatvR apresentaram uma maior sobrevivência em comparação aos camundongos infectados com a linhagem selvagem. Além disso, os camundongos infectados com ΔatvR apresentaram menor carga bacteriana, aumento no recrutamento de neutrófilos ativados e aumento na produção de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IFN-γ). Utilizando-se uma abordagem transcritômica (RNA-Seq), foi determindo diversos genes são regulados positivamente na linhagem superexpressando AtvR em relação à linhagem controle. Dentre esses, os clusters de respiração anaeróbia nar, nir, nor e nos estão incluídos. Esse resultado foi confirmado por qRT-PCR e análises fenotípicas, em que a linhagem ΔatvR apresentou menor crescimento e expressão da nitrato redutase durante condições de hipóxia em comparação à linhagem selvagem. Em suma, neste trabalho foi demonstrado que diversos reguladores de resposta são importantes para a virulência de P. aeruginosa em macrófagos in vitro e in vivo em Drosophila, além de caracterizar o regulador de resposta atípico AtvR, que regula a respiração anaeróbica por desnitrificação, permitindo que P. aeruginosa possa infectar e colonizar o hospedeiro com maior eficiência

Two-component systems are widespread in bacteria, allowing the adaptation to environmental changes. A two-component system is classically composed by a sensor kinase that phosphorylates a cognate response regulator. Pseudomonas aeruginosa is a ubiquitous proteobacterium able to cause disease in several hosts. This opportunistic pathogen presents one of the largest sets of two-component systems known in bacteria, which certainly contributes to its ability to thrive in a wide range of environmental settings, including humans. P. aeruginosa UCBPP-PA14 genome codes for at least 64 sensor kinases and 76 response regulators. Some response regulators are already known to be related to virulence, with the GacSA system as the best characterized. There are no systematic studies about the involvement of P. aeruginosa response regulators in virulence. Moreover, the input signal that triggers the response regulator activation is yet to be uncovered for most systems. To find new response regulators involved in virulence, in vitro infections werecarried out using macrophages. Briefly, the macrophages were infected with each response regulator mutant or the wild-type strain, the pro-inflammatory cytokine production (TNF-α) and the bacterial clearance were evaluated. Using this approach, we identified several response regulators involved in virulence, and we also confirmed the involvement of known response regulators in this process. One of the novel virulence-related response regulators, PA14_26570 (named here as AtvR), is an atypical response regulator with a substitution in the phosphorylable aspartate to glutamate, that usually leads to an always-on state. A non-polar mutant was constructed, and macrophage infection with ΔatvR confirmed an increased bacterial clearance as well as a higher TNF-α production as compared to the wild-type strain. To ascertain the role of AtvR during the pathogenic process, an acute pneumonia model was used. Mice infected with ΔatvR showed an increased survival as compared to mice infected with the wildtype strain. In addition, ΔatvR infected mice showed reduced bacterial burden, increased neutrophil recruitment and activation, as well as increased pro-inflammatory cytokine production (TNF-α and IFN-γ). Also, using a transcriptomic approach (RNASeq), we showed that several genes were upregulated in the strain overexpressing AtvR. These genes include the anaerobic respiration clusters nar, nir, nor and nos. This result was confirmed by qRT-PCR and phenotypic analysis, in which ΔatvR showed reduced growth and nitrate reductase expression during hypoxic conditions as compared to the wild-type strain. In conclusion, we have demonstrated that several response regulators are important for P. aeruginosa virulence in vitro. In addition, we further characterized the atypical response regulator AtvR, which regulates anaerobic respiration via denitrification, allowing this bacterium to infect and colonize the host more efficiently

Obligations, precautions and pending issues in regulatory development for radiopharmaceuticals in Brazil

Radiopharmaceuticals are compounds that have a radionuclide and may be gamma-radiation emitter (γ) or positrons emitter (β+), linked to a molecule with specific diagnostic and therapeutic purposes. The progress in the use of radiopharmaceuticals has culminated to a sector in common with other types of drugs: regulation and surveillance. From 2006 on, production, marketing and use of these drugs were open to the Brazilian market granting much more freedom due to the Constitutional Amendment 49, resulting from the previous Constitutional Amendment 199/03 which removes the Union monopoly for this kind of manipulation and granted this production to other nuclear medicine. From this date on, the amount of this type of sold product have been greatly increased, and the nucleus of surveillance and regulation in Brazil have also advanced in the legislative processes, creating documents that are now more focused on radiopharmaceuticals in the national territory (Resolutions No. 63 and No. 64). In international overview, there is too much to be done in regulatory terms in Brazil, such as adding mainly issues of drugs surveillance to pharmacovigilance practice in radiopharmaceuticals drugs.

Radiofármacos são compostos que possuem um radionucleotídeo, podendo ser emissor de radiação gama (γ) ou emissor de pósitrons (β+), ligado a uma molécula específica com finalidade diagnóstica e terapêutica. O avanço no uso dos radiofármacos tem culminado a um setor em comum com outros tipos de medicamentos: a regulamentação e fiscalização. Após 2006, a produção, a comercialização e a utilização destes medicamentos foram abertas ao mercado interno brasileiro com maior liberdade, pois a Emenda Constitucional 49, vinda da Emenda Constitucional 199/03, que retira da União o monopólio deste tipo de manipulação, ofereceu a outros centros de medicina nuclear a oportunidade desta produção. A partir desta data, a quantidade comercializada deste tipo de medicamento aumentou absurdamente e os núcleos de vigilância e regulamentação do Brasil avançaram também nos processos legislativos, criando os documentos mais voltados a Radiofármacos existentes no território nacional, as Resoluções n° 63 e n° 64. Em visão internacional, há muito ainda a ser feito em termos regulatórios no Brasil somando principalmente os assuntos vigilantes dos medicamentos como a prática de Farmacovigilância em Radiofármacos.

Transcriptional regulation of bidirectional gene pairs by 17-β-estradiol in MCF-7 breast cancer cells

Using cDNA microarray analysis, we previously identified a set of differentially expressed genes in primary breast tumors based on the status of estrogen and progesterone receptors. In the present study, we performed an integrated computer-assisted and manual search of potential estrogen response element (ERE) binding sites in the promoter region of these genes to characterize their potential to be regulated by estrogen receptors (ER). Publicly available databases were used to annotate the position of these genes in the genome and to extract a 5’flanking region 2 kb upstream to 2 kb downstream of the transcription start site for transcription binding site analysis. The search for EREs and other binding sites was performed using several publicly available programs. Overall, approximately 40 percent of the genes analyzed were potentially able to be regulated by estrogen via ER. In addition, 17 percent of these genes are located very close to other genes organized in a head-to-head orientation with less than 1.0 kb between their transcript units, sharing a bidirectional promoter, and could be classified as bidirectional gene pairs. Using quantitative real-time PCR, we further investigated the effects of 17β-estradiol and antiestrogens on the expression of the bidirectional gene pairs in MCF-7 breast cancer cells. Our results showed that some of these gene pairs, such as TXNDC9/EIF5B, GALNS/TRAPPC2L, and SERINC1/PKIB, are modulated by 17β-estradiol via ER in MCF-7 breast cancer cells. Here, we also characterize the promoter region of potential ER-regulated genes and provide new information on the transcriptional regulation of bidirectional gene pairs.

Resurgencia de conductas simbólicas: una aproximación experimental / Resurgence of symbolic behavior: an experimental approach / Ressurgência de condutas simbólicas: uma abordagem experimental

El propósito de este estudio fue evaluar los efectos diferenciales del cambio de consecuencias (de contingencias de reforzamiento a contingencias de castigo) sobre el aprendizaje de discriminaciones condicionales y las relaciones derivadas de estímulos. Se entrenó a siete participantes para que discriminaran cuatro pares de estímulos a través del procedimiento de igualación a la muestra (primer entrenamiento), y se probaron las relaciones derivadas. Posteriormente, los conjuntos de pares fueron reorganizados para establecer las nuevas funciones discriminativas condicionales entre estímulos (segundo entrenamiento; incongruente respecto al inicial). Las respuestas relacionales consistentes con el segundo entrenamiento fueron castigadas en la siguiente fase. Finalmente, las funciones discriminativas condicionales (la entrenada directamente y la derivada) fueron probadas. Un alto número de participantes mostró el fenómeno de resurgencia, el cual es un patrón conductual consistente con el primer entrenamiento de relaciones entre estímulos. Los resultados pueden apoyar la idea de que la resurgencia de conductas es una alteración común tanto en la conducta moldeada por las consecuencias como en la conducta novedosa.

The purpose of this study was to assess the differential effects of consequence change (from reinforcement to punishment contingencies) upon conditional discrimination learning and derived stimulus relations. Seven participants were taught to discriminate four pair-sets of stimuli by means of a matching to sample procedure (early training) and were tested for derived stimulus relations. Later the pair-sets were reorganized in order to establish the new conditional discriminative functions between stimuli (later training, inconsistent with respect to early training). Novel responses were tested as well. Relational responses consistent with the later training received punishment in the following phase. Finally, the conditional discriminative functions (both the one directly trained and the derived one) were tested. A high number of participants showed the resurgence phenomenon, a behavioral pattern consistent with early training both of directly trained and derived stimulus relations. These results can support the idea that resurgence of behavior is a common alteration of contingency-shaped behavioral topographies and novel behavior.

Neste artigo foram avaliados os efeitos diferenciais da modificação de conseqüências (de contingências de reforço a contingências de castigo na aprendizagem de discriminações condicionais e as relações derivadas de estímulos. Sete participantes treinados discriminaram quatro pares de estímulos pela igualação à amostra (primeiro treinamento) e foram provados as relações derivadas. Depois, os conjuntos dos pares foram reorganizados para determinar as novas funções discriminativas condicionais entre estímulos. As respostas relacionais coerentes com o segundo treinamento foram castigadas na etapa seguinte. Ao fim, foram provadas as funções discriminativas condicionais (a treinada diretamente e a derivada). Um grande número de participantes mostrou o fenômeno da ressurgência, um padrão de conduta coerente com o primeiro treinamento de relações entre estímulos. Os achados podem sustentar a ideia de que a ressurgência de condutas é uma modificação comum tanto na conduta moldada pelas conseqüências quanto na conduta nova.

Control of the rat angiotensin I converting enzyme gene by CRE-like sequences

We characterized the role of potential cAMP-responsive elements (CRE) in basal and in induced angiotensin converting enzyme (ACE) gene promoter activity in order to shed light on the regulation of somatic ACE expression. We identified stimulators and repressors of basal expression between 122 and 288 bp and between 415 and 1303 bp upstream from the transcription start site, respectively, using a rabbit endothelial cell (REC) line. These regions also contained elements associated with the response to 8BrcAMP. When screening for CRE motifs we found pCRE, a proximal sequence between 209 and 222 bp. dCRE, a distal tandem of two CRE-like sequences conserved between rats, mice and humans, was detected between 834 and 846 bp. Gel retardation analysis of nuclear extracts of REC indicated that pCRE and dCRE bind to the same protein complexes as bound by a canonical CRE. Mutation of pCRE and dCRE in REC established the former as a positive element and the latter as a negative element. In 293 cells, a renal cell line, pCRE and dCRE are negative regulators. Co-transfection of ATF-2 or ATF-2 plus c-Jun repressed ACE promoter activity, suggesting that the ACE gene is controlled by cellular stress. Although mapping of cAMP responsiveness was consistent with roles for pCRE and dCRE, mutation analysis indicated that they were not required for cAMP responsiveness. We conclude that the basal activity of the somatic ACE promoter is controlled by proximal and distal CREs that can act as enhancers or repressors depending on the cell context.

Respuesta de la glucosa/insulina a una sobrecarga glucosada en sujetos con riesgo a diabetes tipo 2 / Glucose-insulin response to a glucose challenge in individuals at risk for type 2 diabetes

Con el fin de determinar el efecto de ciertos factores de riesgo para diabetes tipo 2 tales como los antecedentes familiares, la obesidad y las dislipidemias, sobre la respuesta glicémica e insulínica a una sobre carga glucosada, se estudiaron 135 individuos (77 mujeres y 58 hombres) en edades entre 20 y 68 años, con glicemias basales menores de 110 mg/dL, pero considerados con riesgo para diabetes tipo 2 por presentar uno o más de los factores citados. Encontramos que la presencia de dichos factores de riesgo no afectó la respuesta glicémica en ningún caso, sin embargo tanto las concentraciones basales de insulina así como la respuesta post sobrecarga fue afectada por la obesidad, tanto en los hombres como en las mujeres, elevándose en forma significativa (p > 0,0001) las concentraciones de insulina. La presencia de dislipidemia elevó en forma significativa (p < 0,0002). Cuando estuvo presente la coexistencia de antecedentes familiares de diabetes tipo 2 y la obesidad, los individuos mostraron una disminución significativa (p < 0,0002) tanto de los valores basales como de la repuesta insulínica. Concluimos que sin alterarse la respuesta glicémica, la presencia de un factor de riesgo como obesidad, dislipidemia o historia familiar de diabetes conduce a hiperinsulinemia basal y estimulada por glucosa, mientras que la coexistencia de obesidad y antecedentes familiares produce un déficit en la secreción de insulina