Caracterização fenotípica e molecular de cepas de Mycobacterium abscessus quanto ao perfil de resistência à Claritromicina / Phenotypic and Molecular characterization of Mycobacterium abscessus isolates by clarithromycin resistance profile

RESUMO

Mycobacterium abscessus é a espécie entre as micobactérias de crescimento rápido (MCR) mais comum como agente etiológico de doença pulmonar, apresentando elevada resistência aos antibióticos utilizados no tratamento. É uma das espécies mais frequentes isoladas, sendo responsável por 80% das infecções pulmonares causadas por MCR. Alguns estudos relataram resistência adquirida e induzida a claritromicina, um dos principais fármacos utilizados no tratamento. O objetivo deste trabalho foi caracterizar os isolados do grupo M. abscessus quanto ao perfil de resistência a claritromicina de pacientes do Estado de São Paulo, isolados no período de 2010 a 2011, pelo padrão de mutação nos genes erm(41) e rrl. Foram incluídos no estudo os isolados identificados como M. abscessus tipo 1 e tipo 2 pela técnica PRA-hsp65 na rotina diagnóstica do Instituto Adolfo Lutz. A confirmação da espécie foi realizada pelo sequenciamento do gene rpoB. O teste de suscetibilidade a claritromicina foi realizado de acordo com as recomendações do CLSI (2011) e com incubação estendida por 14 dias com leituras nos dias 5, 7 e 10. A préincubação dos isolados com 0,01 e 0,1ug/ml de claritromicina foi testada para verificar se uma incubação prévia era capaz de induzir a resistência. O perfilgenético dos isolados foi obtido por meio do sequenciamento dos genes rrl e erm(41). Foram selecionados 151 isolados, mas somente 135 foram viáveis para análise. Destes, 78 eram M. abscessus tipo 1 e 57 tipo 2. Dos isolados M. abscessus tipo 1, todos foram identificados como “M. abscessus” pelo sequenciamento do gene rpoB, e daqueles identificados como tipo 2, dois foram identificados como “M. abscessus”, 27 “M. massiliense”, 27 “M. bolletii” e um M. porcinum, este último, excluído da análise. O CIM foi padronizado para ser lidocom o corante vital resazurina, apresentando elevado valor de correlação com a leitura visual (93,3%). No CIM com leitura em 14 dias, 10 isolados de “M. abscessus” foram sensíveis...

ABSTRACT

Mycobacterium abscessus is the most common etiological agent of pulmonary disease among the rapidly growing mycobacteria (RGM), exhibiting high resistance to the antibiotics used in the treatment. It is one of the most frequently isolated species, accounting for 80% of lung infections caused by RGM. Some studies reported acquired and induced resistance to clarithromycin, a major drug used in the treatment. The aim of this study was to characterize M. abscessus isolates according to the clarithromycin resistance profile from patients of the State of São Paulo, isolated in the period from 2010 to 2011, by mutations patterns in the erm(41) and rrl genes. Isolates identified as M. abscessus type 1 and type 2 by PRA-hsp65 technique for the routine diagnosisat Institute Adolfo Lutz were included in the study. Species confirmation was performed by rpoB gene sequencing. The clarithromycin susceptibility test was performed according to the CLSI recommendations (2011), and with extendedincubation for 14 days with readings on days 5, 7, and 10. Pre-incubation of the isolates with 0.01 and 0.1µg/ml of clarithromycin was tested to verify if the preincubation could induce resistance. The genetic profile of the isolates was obtained by sequencing rrl and erm(41) genes. We selected 151 isolates, but only 135 were viable for analysis. Of these, 78 were M. abscessus type 1 and 57type 2. The isolates M. abscessus type 1, all were identified as “M. abscessus” by sequencing the rpoB gene, and among those identified as type 2, two were identified as “M. abscessus”, 27 “M. massiliense”, 27 “M. bolletii” and one M. porcinum, the last being excluded from the analysis. The MIC was standardized to be read with the vital dye resazurin, showing high correlation value with visual readings (93.3%). In MIC with readings after 14 days, 10 isolates of “M. abscessus” were susceptible (S), 64 with inducible resistance (IR) and four 10 resistant (R). Among “M. bolletii” isolates, five...