P-glycoprotein and multidrug resistance-associated protein-1 expression in acute myeloid leukemia: Biological and prognosis implications.

BACKGROUND: Despite the advances in the cure rate for acute myeloid leukemia (AML), a considerable number of patients die from the disease due to the occurrence of multidrug resistance (MDR). Overexpression of the transporter proteins, such as P-glycoprotein (Pgp) and multidrug resistance-associated protein (MRP), confers resistance to the treatment of these leukemias. METHODS: To analyze the expression of the Pgp and MRP1 in patients with AML and determine their correlation between expression and demographic, clinical, and laboratorial variables, bone marrow and peripheral blood samples from 346 patients with a diagnosis of AML were assessed for the expression of Pgp and MRP1 by flow cytometry. RESULTS: The expression of Pgp and MRP1 was found in 111 (32.1%) and 133 (38.4%) patients, respectively, with greater prevalence in older patients and lower in children, while also observing a high incidence in patients with refractory, recurrence, and secondary disease in comparison with the cases of de novo AML. Regarding the laboratory findings, we observed an association between the expression of Pgp and MRP1 and CD34, CD7, and also M7, M5a, and M2-AML of French-American-British classification. CONCLUSIONS: The results showed that the detection of MDR phenotype by flow cytometry can be a molecular marker for prognosis of patients with AML.

Flow cytometry immunophenotyping evaluation in acute lymphoblastic leukemia: correlation to factors affecting clinic outcome.

The authors conducted a flow cytometry immunophenotyping study in patients with acute lymphoblastic leukemia (ALL) from Natal, Rio Grande do Norte, Brazil. The patients (n = 126) were newly diagnosed using a panel of monoclonal antibodies: CD1a, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD10, CD13, CD33, CD14, CD19, CD22, CD79a, CD117, CD34, anti-IgM, anti-TdT, anti-HLA-Dr, and anti-human kappa and lambda light chains. Additional data, such as patients' age and gender, clinical and laboratory findings such as presence of tumor masses, lymphadenopathy, hepatomegaly, splenomegaly, leukemic infiltration in the central nervous system (CNS) were also investigated. Results showed that 56.7% of the cases were B-lineage ALL and 55% were T-cell ALL. Also, we found that males were more affected by the disease, regardless of immunological classification. The correlation between age and immunological subtypes showed that the B-lineage ALL occurred more frequently in patients aged under 15 while the T-cell ALL subtype was more frequent in adults. Immunophenotypic profiles and morphological subtypes showed a direct correlation between L3 subtype and B-lineage ALL, while L1 and L2 subtypes correlated more often with B-cell lineage and T-cell ALL, respectively. Correlation analysis between immunophenotypic and clinical profiles showed that T-cell ALL was more associated with a higher incidence of lymphadenopathy, hepatomegaly, splenomegaly and CNS leukemic infiltration, also showing a greater blast cell count in peripheral blood than the other subgroups. The presented data suggest that immunophenotyping is an important method in the diagnosis, monitoring and prognostic assessment in determining the pathological mechanisms of evolution of ALL.

Detection of CD5 in B-cell chronic lymphoproliferative diseases by flow cytometry: a strong expression in B-cell chronic lymphocytic leukemia.

PURPOSE: CD5 is a T cell marker, aberrantly express in B cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) and mantle cell lymphoma (MCL). Other chronic B cell malignancies including hairy cell leukemia (HCL) and B cell prolymphocytic leukemia (B-PLL) are CD5 negative or express this antigen in a weak way. In this study, CD5 expression was investigated in leukemic cells from 42 patients with chronic B cell lymphoproliferative disease. METHODS: We studied the CD5 expression in leukemic cells from 42 patients with chronic B-cell malignancies by flow cytometry. Demographic features such as age, sex and clinical date were also analyzed. RESULTS: There were 22 males and 20 females. The immunophenotyping showed that 35 cases were B-CLL, 3 B-PLL and HCL and one patient was MCL. CD5 expression was present in all B-CLL and MCL. Low expression of CD5 was observed in one patient with B-PLL and negative in all cases of HCL. CONCLUSION: Our date demonstrated that CD5 expression can help distinguish among B-CLL from HCL and B-PLL, but is similar expressed in MCL.

Detection of CD5 in B-cell chronic lymphoproliferative diseases by flow cytometry: a strong expression in B-cell chronic lymphocytic leukemia

OBJETIVOS: CD5 é um marcador normalmente expresso nas células T e de forma aberrante nas células B da leucemia linfocítica crônica (LLC) e no linfoma de células do manto (LCM). Outras doenças linfoproliferativas crônicas como a hairy cell leukemia (HCL) e leukemia prolinfocítica de células B (LPL-B), são geralmente CD5 negativas ou expressam fracamente este antígeno. Neste trabalho investigou-se o padrão de expressão do CD5 em 42 pacientes com doenças linfoproliferativas crônicas de células B (DLC-B). METODOS: Investigamos a expressão de CD5 em células leucêmicas de 42 pacientes com DLC-B através da citometria de fluxo. Dados demográficos, tais como idade e sexo, bem como dados clínicos e laboratoriais também foram analisados. RESULTADOS: A imunofenotipagem mostrou que 35 casos foram LLC, 3 LPL-B, 3 HCL e um caso de LMC. O CD5 mostrou-se fortemente expresso em todos os casos de LLC e LMC. Baixa expressão desse antígeno foi observada em um caso de LPL-B, mostrando-se negativamente expresso em todos os casos de HCL. CONCLUSÃO: Nossos resultados demonstram que o padrão de expressão do CD5 pode auxiliar na distinção entre LLC da HCL e LPL-B, sendo no entanto similares na HCL e LCM.

Determinação de monoclonalidade nas doenças linfoproliferativas crônicas de células B por citometria de fluxo / Monoclonality detrmination by flow cytometry in B cell chronic lymphoproliferative diseases

Diversos estudos têm sugerido que a análise de distribuição de cadeias leves de imunoglobulinas kappa e lambda através da citometria de fluxo (FC), fornece evidências de perfil de monoclonalidade de células tumorais de origem B, em pacientes com doenças linfoproleferativas crônicas de células B (DLC-B). Objetivos: Investigar a eficácia da citometria de fluxo (CF) na detrminação da monoclonalidade de DLC-B mediante o estudo da expressão de cadeias imunoglobulinas kappa e lambda. Materiais e métodos: Foram analisadas amostras de sangue periférico de 43 pacientes com DLC-B. As amostras foram imunofenotipadas por CF com um painel constituído de anticorpos monoclonais (AcMo): CD3, CD4, CD5, CD7,CD8, CD14, CD16, CD19, CD22, CD23, CD25, CD38, CD45, CD56, HLADR, anti-cadeia pesada das imunoglobulinas (IgH), anti-cadeia pesada da imunoglobulina (IgM) e anti-cadeias leves das imunoglobulinas kappa e lambda.Adicionalmente informações sobre idade, sexo e dados clínicos e laboratoriais presentes ao diagnóstico foram avaliados. Resultados: Observou-se uma relação kappa/lambda maior que 10:1 indicativa de proliferação maligna B em todas as amostras estudadas com expressão de cadeia leve do tipo kappa em 86% e lambda 14% das amostras. Análises dos resultados da imunofenotipagem associados a dados clínicos e hematológicos confirmaram 35 casos de leucemia linfocítico crónica, 3 casos de leucemia pró-linfocítica B, 3 hairy cell leukemia, 1 linfoma de células do manto e macroglobulinemia de Waldenstrom também em um caso. Conclusões. Os resultados obtidos mostraram que a análises da expressão das cadeias leves kappa e lambda pela CF é uma metodologia rápida e eficaz na detecção de proliferação maligna de linfócitos B.

Expressäo da molécula CD5 na leucemia linfocítica crônica / Expression of molecule CD5 in chronic lymphocytic leukemia

O CD5 é um antígeno normalmente associado ao linfócito T que se expressa de forma aberrante na leucemia linfóide crônica de células B (LLC-B) e no linfoma de células do manto (LCM). Outras neoplasias crônicas de células B como a leucemia prolinfocítica (LPL-B) e "haity cell leukemia" (HCL), säo geralmente CD5 negativas ou expressam fracamente este antígeno. Neste trabalho foi investigada a expressäo do CD5 em 42 pacientes com doenças linfoproliferativas crônica de células B, com um painel de anticorpos monoclonais específicos para doenças linfoproliferativa crônica como: CD3, CD4, CD5, CD7, CD8, CD10, CD14, CD16/56, CD19, CD22, CD23, HLADR, CD45, anti cadeia pesada (IgH) e leves kappa e lambda das imunoglobulinas. Os parâmetros hematológicos foram obtidos por analisador hematológico automático e a citomorfologia pela microscopia óptica de filme sangüíneo corado pelo Leishmann. Informaçöes adicionais referentes a dados clínicos relacionados a estas doenças também foram coletados. Vinte e dois pacientes eram do sexo masculino e vinte do sexo feminino, tendo a idade variado de 48 a 80 anos de idade. A imunofenotipagem mostrou que 35 pacientes tinham LLC, 3 eram HCL, 3 tinham LPL-B e um caso diagnosticado como LCM. A linfadenopatia r a esplenomegalia foram os achados clínicos mais freqüentes, observados em 73,8 porcento e 71,4 porcento dos casos respectivamente. A expressäo do CD5 mostrou-se presente em todos os casos de LLC e LCM; nos casos de LPL-B este marcador apresentou-se fracamente positivo em um caso. Na HCL, estretanto, o CD5 foi negativo em todos os casos. Concluindo, estes dados demonstraram que a expressäo do CD5 é relevante na distinçäo entre LLC de outras neoplasias crônicas linfóides de célula B como a HCL e LPL-B, näo apresentando valor significativo no diagnóstico diferencial entre a LLC e LCM

Avaliação imunológica da leucemia mielóide aguda através da citometria de fluxo / Immunological evaluation of the acute myeloid leukemia by flow cytometry

Embora a citomorfologia ainda seja importante no diagnóstico das leucemias agudas (MA), a imunofenotipagem têm se tornado essencial no diagnóstico e acompanhamento destas deoplasias. Dentre estes métodos a citometria de fluxo tem se destacado na metodologia moderna, apresentando caracteristicas de análise multiparamétrica e quantitativa de células sanguíneas normais e leucêmicas. O objetivo deste trabalho foio de realizar estudo retrospectivo de imunofenotipagem em 38 casos de LMA. A imunofenotipagem foi realizada em constituido de CD13, CD33, CD34, CD45, CD14, CD7, CD3, CD4, CD19, CD10, HLADR e IgM. Os parâmetros hematológicos foram obtidos em contadores hematológicos e a citomorfologia em distensões sanguíneas e de medula óssea coradas peloLeishmann. Paralelamente também foram obtidas informações referentes aos doentes tais como idade e sexo, bem como dados clínicos relacionados à doença. Dos 38 individuos analisados, 23 casos eram do sexo masculino e 15 do sexo feminino. Em relação a faixa etária constatou-se um maior número de casos adultos. Com relação aos dados clínicos, observou-se que a hepatomegalia e a esplenomegalia estiveram presentes na maioria dos casos com 87,5% e 50% dos casos respectivamente.A imunofenotipagem demonstrou um perfil caracteristico de LMA com expressão de CD 13/CD33 em todos os casos, o CD34 na maioria dos casos. O CD14 foi reativo nas leucemias monociticas, tendo sido também observado negatividade aos atigenos linfóides como o CD19, CD10 e CD3 com exceção do CD7 que esteve presente em 5 casos. Em relação a citomorfologia, observou-se uma correlação direta entre a citomorfologia e a classificação FAB, havendo um predominio do tipo de mielo monocitico LMA M4 que correspondeu a 41,7% dos casos. Estes dados demonstram a importância da imunofenotipagem no diagnóstico diferencial das LMA, bem como, no acompanhamento das neoplasias.

Avaliação das alterações hematológicas e imunológicas em indivíduos infectados com o vírus da imunodeficiência humana / Evaluation of the hematological and immunological alteration in individuals infected with the human immunodeficiency virus

Várias alterações hematológicas estão presentes em indivíduos infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), sendo que a incidência de citopenias parece aumentar com a progressão da doença. Dentre as principais alterações, destaca-se a diminuição progressiva do número de linfócitos no sangue periférico, principalmente da subpopulação T helper (CD3+/CD4+ ), levando esses indivíduos a um quadro de imunodeficiência celular. Objetivando investigar as principais alterações imunológicas e hepatológicas em indivíduos infectados pelo HIV, foram analisadas amostras de sangue periférico de 100 indivíduos soropositivos para o HIV (60 homens e 40 mulheres), procurando correlacionar os níveis de linfócitos TCD4 com os diversos parâmetros hematológicos, tais como: a leucometria, contagem de linfócitos, contagem de plaquetas e dosagem de hemoglobina. Os parâmetros hematológicos foram determinados por analisadores hematológicos e a subpopulação linfocitária pela citometria de fluxo após sua marcação com anticorpos monoclonais específicos. Os resultados demonstraram que 25% dos casos apresentaram contagem de linfócitos TCD4 ≥ 500/mm³, em 55% dos casos a contagem esteve entre 499 e 200/mm³ e inferior a 200/mm³ em 30% dos casos. Correlacionando os níveis de linfócitos TCD4 com as alterações hematológicas, observou-se que a linfopenia mostrou-se mais acentuada no grupo de indivíduos cujas contagens de células TCD4 estavam inferiores a 200/mm³, correspondendo a 18% dos casos. A contagem de plaquetas mostrou-se dentro dos limites de normalidade na maioria dos casos; a trombocitopenia, entretanto, esteve presente em 29% dos casos, dos quais 20% apresentaram níveis de linfócitos TCD4 menores que 200/mm³. A anemia por sua vez esteve presente em 20% das mulheres e em 50% dos homens, correlacionando mais com baixas contagens de linfócitos TCD4. Com estes dados, concluímos que os valores da contagem de linfócitos TCD4 de certo modo correlacionou-se com as variações do quadro hematológico, apresentando na maioria dos casos, citopenias, tais como a anemia, a trombocitopenia e a linfopenia, mostrando a importância destes exames no acompanhamento de indivíduos infectados pelo HIV.