Resumo
As Lentiviroses de Pequenos Ruminantes causam infecções crônicas em caprinos e ovinos, podendo ocasionar mastite, artrite, emagrecimento progressivo, pneumonia e problemas neurológicos. Estas enfermidades têm como principal via de transmissão a ingestão de leite e colostro oriundo de animais infectados, além de possuírem um alto índice de contágio e permanência em rebanhos a nível mundial. Vale ressaltar que, até o momento, não há tratamentos e/ou vacinas eficazes e disponíveis, necessitando, assim, a busca de meios inovadores passíveis de serem implementados no combate a estas enfermidades. Atualmente, vem se desenvolvendo pesquisas para o uso de antivirais tanto de origem sintética, como o dodecil sulfato de sódio (SDS), como de origem fitoquímica, como extratos Azadirachta indica A. Juss (Nim) e Melia azedarach (Cinamomo), que já demostraram ação antiviral com o vírus da imunodeficiência humana (HIV), os vírus da dengue e o herpes vírus tipo 1. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antiviral do SDS e de produtos naturais provenientes de meliáceas contra lentivírus de pequenos ruminantes presente em colostro e leite caprino. Este estudo foi dividido em duas etapas: Na primeira etapa, foi avaliado a ação antiviral do SDS no colostro e leite, em um estudo in vitro e in vivo. No estudo in vitro pode-se observar a ação antiviral do SDS na concentração de 1% no leite, no colostro, a ação antiviral não foi observada. Quanto ao estudo in vivo, esta concentração de 1% não foi eficiente e gerou problemas de saúde nos animais testados. Na segunda etapa, foram testados, in vitro, os extratos etanólicos brutos (EEB) de A. indica e M. azedarach, e as respectivas frações de acetato de etila (FAE) e metanol (FM), na contração de 150 g/mL, nas cepas isoladas de LVPRs (CAEVCO e MVVK1514) e em amostras de colostro e leite infectados pelo lentivírus caprino (LVC). Nas cepas de LVPRs, é possível observar a ação antiviral dos extratos de A. indica e M. azedarach, mais evidente na FAE, ao longo do ciclo replicativo da cepa aos CAEVCO e na cepa de MVVK1514, esta ação ocorreu somente com os extratos de A. indica, também na FAE, quando testados durante a inoculação viral. Em relação as amostras de colostro e leite, a FAE, na mesma concentração, de ambas as meliáceas, demonstrou maior eficácia contra LVC, com efeito antiviral potencializado principalmente no colostro.
Small Ruminant Lentiviroses cause chronic infections in goats and sheep, and can cause mastitis, arthritis, progressive weight loss, pneumonia, and neurological problems. These diseases has their main route of transmission the ingestion of milk and colostrum from infected animals, besides to having a high rate of contagion and permanence in herds worldwide. It is worth mentioning that, until now, there are no effective and available treatments and / or vaccines, thus requiring the search for innovative means that can be implemented in the fight against these diseases. Researches is currently being carried out on the use of antivirals, both synthetic in origin, such as sodium dodecyl sulfate (SDS), as well as phytochemical, such as extracts of Azadirachta indica and Melia azedarach, which have already demonstrated antiviral action with the human immunodeficiency virus (HIV), dengue viruses and herpes virus type 1. Therefore, the objective of this work was to evaluate the antiviral activity of SDS and natural products from meliaceas against small ruminant lentivirus present in colostrum and goat milk. This study was divided into two stages: In the first stage, the antiviral action of SDS on colostrum and milk was evaluated in an in vitro and in vivo study. In the in vitro study it is possible to observe the antiviral action of SDS at a concentration of 1% in milk. In colostrum, the antiviral action was not observed. About the in vivo study, this concentration of 1% was not efficient and generated health problems in the tested animals. In the second stage, the crude ethanolic extracts (BSE) of A. indica and M. azedarach were tested in vitro, with the respective fractions of ethyl acetate (EAF) and methanol (MF), in contraction of 150 g / mL in the isolated strains from LVPRs (CAEVCO and MVVK1514) and in samples of colostrum and milk infected caprine lentivirus (CLV). In the strains of SRLVs, it is possible to observe the antiviral action of the extracts of A. indica and M. azedarach, more evident in FAE, throughout the replicative cycle of the strain to CAEVCO and in the strain of MVVK1514. This action occurred only with the extracts of A. indica, also in EAF, when tested during viral inoculation. Regarding colostrum and milk samples, the EAF, in the same concentration, of both meliaceas, demonstrated greater efficacy against CLV, with antiviral effect potentiated mainly in colostrum.
Resumo
A Artrite-Encefalite Caprina (CAE) é uma enfermidade incurável que afeta caprinos, causando uma infeção multissistêmica e crônica, que ocasiona grandes perdas econômicas. Clinicamente, os animais são acometidos com mastite, artrite, emagrecimento progressivo, pneumonia e problemas neurológicos. O agente causador, o vírus da Artrite-Encefalite Caprina (CAEV) apresenta tropismo por células da linhagem monocítica-fagocitária, que estão diretamente associadas a principal via de transmissão, por meio da ingestão de leite e colostro provindo de cabras infectadas. Deste modo, o controle por esta via é de suma importância. Atualmente, vem se desenvolvendo pesquisas para o uso de aditivos químicos no leite, que possam conservar o colostro ou leite, e inativar agentes microbiológicos presentes. Dentre estes, o dodecil sulfato de sódio (SDS) vem apresentando resultados satisfatórios na inativação química do vírus da imunodeficiência humana (HIV) em leite e como biocida em colostro caprino. Portanto, visou-se avaliar a atividade do SDS como inativador químico do vírus da CAE, tanto in vitro quanto in vivo. No experimento in vitro, avaliou-se a citotoxidade e as propriedades de inativação viral do SDS no colostro e no leite caprino, por meio de culturas de macrófagos e co-cultivo em membrana sinovial caprina (MSC). Fez-se uso do SDS a 1%; 0,5%; 0,25%, durante 15 minutos, nos tratamentos do colostro e do leite. Removeu-se o SDS por meio de lavagens com tampão fosfato. Em seguida, as amostras foram destinadas a testes moleculares e ao co-cultivo com MSC, durantes 63 dias. Após o co-cultivo, houve avaliação dos efeitos citopáticos virais, característicos ao lentivírus caprino, ocasionados nas células de MSC. Experimentalmente, no colostro, observou-se que o SDS (0,25; 0,5 e 1%) apresentou, uma atividade inibitória contra o CAEV, sem ocorrer à inativação viral. No leite, o SDS a 0,25; 0,5% apresentou atividade inibitória contra o CAEV, e na concentração de 1% de SDS houve inativação do vírus em cultura. No teste in vivo, utilizaram-se 31 cabritos recém-nascidos, e negativos para CAE, confirmado por meio de testes de reação em cadeia da polimerase nested (nPCR) e Western Blot (WB). Os cabritos foram alimentados com colostro e leite providos de cabras positivas para CAE, tratados com SDS nas mesmas concentrações do teste in vitro, com tempo de ação de 15 minutos. Os animais foram acompanhados por nPCR nos seguintes momentos: 0 h, 7, 15, 30 dias e mensalmente até seis meses de vida e no WB foram acompanhados a 0 h, 90, 120, 150 e 180 dias. Observou-se que as três concentrações de SDS no colostro não trouxeram alterações clínicas significativas no período de 24h de tratamento. Entretanto, com a continuidade da administração do SDS no leite nas concentrações de 0,5% e 1,0% observou-se diarreia leve, e morte de mais de 50% dos animais, respectivamente. Além disso, as três concentrações de SDS não foram efetivas na inativação do CAEV no colostro e leite caprino, comprovada pela soroconversão dos animais.
Arthritis-Encephalitis Caprina (CAE) is an incurable disease that affects goats. Causes a multisystemic infection and chronic, which causes important economic losses and clinically animals are affected with mastitis, arthritis, progressive weight loss, pneumonia and neurological problems. Caprine Arthritis-Encephalitis virus (CAEV) presents tropism for cells of monocytic-phagocytic lineage, which are directly associated with the main route of viral transmission through milk and colostrum intake stemmed infected goats. Thus, the control in this way is extremely important. Currently, the use of preservatives and chemical additives for milk has been developing, seeking new agents that can save colostrum or milk, and inactivate microbiological agents presente. Among these, sodium dodecyl sulfate (SDS) has been showing satisfactory results in chemical inactivation of human immunodeficiency virus (HIV) milk and goats as a biocide in colostrum. Therefore, sought to evaluate the activity of the SDS in concentrations of 0.25; 0.5; 1% both in vitro and in vivo. In vitro experiment, the cytotoxicity and viral inactivation properties of SDS in colostrum and goat milk it was investigated by culture of macrophages and co-cultivation caprine synovial membrane (CSM). Was made using 1% SDS; 0,5%; 0,25% (more effective concentrations from previous tests with the study of blood macrophages) for 15 minutes in the treatment of colostrum and milk, and this was removed by washing with phosphate buffer. Then, the samples were designed to molecular assays and co-culture with CSM for 63 days. Experimentally, colostrum, it was found that SDS (0,25; 0,5 and 1%) showed an inhibitory activity against CAEV viral inactivation without occur. In milk, SDS 0.25; 0,5% had inhibitory activity against CAEV, and a concentration of 1% SDS was likely inactivation of the virus in culture. In the in vivo test, they used 31 newborn goats, and negative for CAE by means of polymerase chain reaction test (nPCR) and Western blot (WB). These animals were fed colostrum and provided with positive goats milk by CAE, treated with SDS at concentrations of 0,25; 0,5; 1% in 15 minutes activity. The animals were followed by PCR at the following times: 0 hours, 7 days, 15 days, 30 days and monthly up to six months of life and the WB were followed 0h, 90, 120, 150 and 180 days. We observed that the three SDS concentration in colostrum did not cause significant changes in clinical treatment period of 24 hours. However, with continued administration SDS milk in 0.5% and 1,0% concentrations was observed mild diarrhea and death of more than 50% of animals respectively. In addition, the three concentrations of SDS were not effective in the inactivation of CAEV in goats colostrum and milk, confirmed the seroconversion of the animals.