APPLICATION OF POLIMERASE CHAIN REACTION FOR DETECTION OF Mycoplasma spp IN THE ROUTINE OF CELL CULTURES / APLICAÇÃO DA REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE PARA DETECÇÃO DE Mycoplasma spp NA ROTINA DE CULTIVOS CELULARES

The occurrence of Mycoplasma spp as contaminant of cell cultures in cell culture laboratories of the Escola de Veterinária da UFMG and of the Laboratório Nacional Agropecuário de Minas Gerais was obtained by the use of a fast DNA extraction protocol e by the use of PCR. The PCR sensitivity and specificity were evaluated. The search for Mycoplasmas DNA was done in 83 cell lines samples. We found infected cell lines in both laboratories. The quality of extracted DNA was verified using a beta-actin gene PCR. The Mycoplasmass PCR showed to be fast, sensitive and specific. KEY WORDS: Beta-actin, cell, culture, Mycoplasma spp, PCR.

A ocorrência de Mycoplasma spp como contaminante de cultivos celulares nos laboratórios de cultivo celular da Escola de Veterinária da UFMG e do Laboratório Nacional Agropecuário de Minas Gerais foi estabelecida através da implementação de um protocolo rápido de extração de DNA e pela utilização da PCR. Avaliaram-se a sensibilidade e especificidade da PCR. Realizou-se pesquisa de DNA de Mycoplasmas em 83 amostras de linhagens celulares e encontraram-se linhagens infectadas nos dois laboratórios avaliados. A qualidade do DNA extraído foi verificada utilizando-se a PCR para o gene da beta-actina. A pesquisa de Mycoplasmas por PCR mostrou-se rápida, sensível e específica.PALAVRAS-CHAVES: Beta-actina, celular, cultivo, Mycoplasma spp, PCR.

Outbreak of gas gangrene in a flock of sheeps and goats / Surto de gangrena gasosa em rebanho de ovinos e caprinos

This report describes an occasion of gas gangrene in a flock of 1200 animals between sheeps and goats in the district of Campo Formoso, Bahia, Brazil. In the period of 24 hours to 5 days after having been vaccined against clostridiosis, 40 sheep and 20 goats came to death. Clostridium novyi and Clostridium septicum were detected by the technique of direct immunofluorescence (DIF) in impression of the muscle tissue of the inoculated area.

Este relato descreve um surto de gangrena gasosa em um rebanho de 1200 animais entre ovinos e caprinos em Campo Formoso, Bahia, Brasil. No período de 24 horas a 5 dias após terem sido vacinados contra clostridioses, 40 ovinos e 30 caprinos vieram a óbito. Clostridium novyi e Clostridium septicum foram detectados pela técnica de imunofluorescência direta (IFD) em impressão do tecido do músculo da área de inoculação.

APPLICATION OF POLIMERASE CHAIN REACTION FOR DETECTION OF Mycoplasma spp IN THE ROUTINE OF CELL CULTURES / APLICAÇÃO DA REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE PARA DETECÇÃO DE Mycoplasma spp NA ROTINA DE CULTIVOS CELULARES

The occurrence of Mycoplasma spp as contaminant of cell cultures in cell culture laboratories of the Escola de Veterinária da UFMG and of the Laboratório Nacional Agropecuário de Minas Gerais was obtained by the use of a fast DNA extraction protocol e by the use of PCR. The PCR sensitivity and specificity were evaluated. The search for Mycoplasmas DNA was done in 83 cell lines samples. We found infected cell lines in both laboratories. The quality of extracted DNA was verified using a beta-actin gene PCR. The Mycoplasmass PCR showed to be fast, sensitive and specific. KEY WORDS: Beta-actin, cell, culture, Mycoplasma spp, PCR.

A ocorrência de Mycoplasma spp como contaminante de cultivos celulares nos laboratórios de cultivo celular da Escola de Veterinária da UFMG e do Laboratório Nacional Agropecuário de Minas Gerais foi estabelecida através da implementação de um protocolo rápido de extração de DNA e pela utilização da PCR. Avaliaram-se a sensibilidade e especificidade da PCR. Realizou-se pesquisa de DNA de Mycoplasmas em 83 amostras de linhagens celulares e encontraram-se linhagens infectadas nos dois laboratórios avaliados. A qualidade do DNA extraído foi verificada utilizando-se a PCR para o gene da beta-actina. A pesquisa de Mycoplasmas por PCR mostrou-se rápida, sensível e específica.PALAVRAS-CHAVES: Beta-actina, celular, cultivo, Mycoplasma spp, PCR.

Análise comparativa das lesões causadas por clostrídios histotóxicos em mionecrose induzida experimentalmente / Comparative analysis of lesions caused by histotoxic clostridia in experimentally induced myonecrosis

O estudo comparativo das lesões anatomo-histopatológicas causadas pelos diferentes clostrídios histotóxicos é considerado uma etapa importante no diagnóstico epidemiológico das mionecroses. Para reproduzir experimentalmente a gangrena gasosa causada por Clostridium septicum, C. chauvoei, C. novyi tipo A, C. perfringens tipo A e C. Sordellii foram utilizados cobaios (Cavia porcellus). Os sinais clínicos, lesões macroscópicas e histopatológicas foram comparadas entre os grupos inoculados e uma imuno-istoquímica (IHQ) foi padronizada para detecção dos agentes nos tecidos das cobaias experimentalmente infectadas. Na avaliação clínica os animais apresentaram aumento de volume no ponto de inoculação, desconforto e dificuldade de locomoção. A intensidade e extensão das lesões macroscópicas e microscópicas variaram com o agente inoculado. Na IHQ foi possível identificar cada um dos agentes inoculados, sem a detecção de reações cruzadas. Todos os resultados observados demonstram que este tipo de avaliação das lesões é de extrema importância para o diagnóstico etiológico conclusivo, possibilitando assim a adoção de medidas preventivas acertivas.

The comparative anatomical and histopathological lesions caused by different histotoxic clostridia are considered an important step in the diagnosis of epidemiological mionecrosis. In the present study, guinea pigs (Cavia porcellus) were used to reproduce gas gangrene caused by Clostridium septicum, C. chauvoei, C. novyi type A, C. perfringens type A and C. sordellii. The clinical signs, gross and histopathological lesions were compared between inoculated groups and an immunohistochemistry (IHC) was standardized for detection of agents in tissues. On clinical evaluation, animals showed swelling at the injection point, discomfort and limited mobility. The intensity and extent of gross and microscopic lesions varied with the inoculated agent. IHC was able to identify each agents inoculated without cross reactions. All observed results demonstrate that the evaluation of lesions could be usefull in the presumptive etiologic diagnosis.

Outbreak of gas gangrene in a flock of sheeps and goats / Surto de gangrena gasosa em rebanho de ovinos e caprinos

This report describes an occasion of gas gangrene in a flock of 1200 animals between sheeps and goats in the district of Campo Formoso, Bahia, Brazil. In the period of 24 hours to 5 days after having been vaccined against clostridiosis, 40 sheep and 20 goats came to death. Clostridium novyi and Clostridium septicum were detected by the technique of direct immunofluorescence (DIF) in impression of the muscle tissue of the inoculated area.

Este relato descreve um surto de gangrena gasosa em um rebanho de 1200 animais entre ovinos e caprinos em Campo Formoso, Bahia, Brasil. No período de 24 horas a 5 dias após terem sido vacinados contra clostridioses, 40 ovinos e 30 caprinos vieram a óbito. Clostridium novyi e Clostridium septicum foram detectados pela técnica de imunofluorescência direta (IFD) em impressão do tecido do músculo da área de inoculação.

Análise comparativa das lesões causadas por clostrídios histotóxicos em mionecrose induzida experimentalmente / Comparative analysis of lesions caused by histotoxic clostridia in experimentally induced myonecrosis

O estudo comparativo das lesões anatomo-histopatológicas causadas pelos diferentes clostrídios histotóxicos é considerado uma etapa importante no diagnóstico epidemiológico das mionecroses. Para reproduzir experimentalmente a gangrena gasosa causada por Clostridium septicum, C. chauvoei, C. novyi tipo A, C. perfringens tipo A e C. Sordellii foram utilizados cobaios (Cavia porcellus). Os sinais clínicos, lesões macroscópicas e histopatológicas foram comparadas entre os grupos inoculados e uma imuno-istoquímica (IHQ) foi padronizada para detecção dos agentes nos tecidos das cobaias experimentalmente infectadas. Na avaliação clínica os animais apresentaram aumento de volume no ponto de inoculação, desconforto e dificuldade de locomoção. A intensidade e extensão das lesões macroscópicas e microscópicas variaram com o agente inoculado. Na IHQ foi possível identificar cada um dos agentes inoculados, sem a detecção de reações cruzadas. Todos os resultados observados demonstram que este tipo de avaliação das lesões é de extrema importância para o diagnóstico etiológico conclusivo, possibilitando assim a adoção de medidas preventivas acertivas.

The comparative anatomical and histopathological lesions caused by different histotoxic clostridia are considered an important step in the diagnosis of epidemiological mionecrosis. In the present study, guinea pigs (Cavia porcellus) were used to reproduce gas gangrene caused by Clostridium septicum, C. chauvoei, C. novyi type A, C. perfringens type A and C. sordellii. The clinical signs, gross and histopathological lesions were compared between inoculated groups and an immunohistochemistry (IHC) was standardized for detection of agents in tissues. On clinical evaluation, animals showed swelling at the injection point, discomfort and limited mobility. The intensity and extent of gross and microscopic lesions varied with the inoculated agent. IHC was able to identify each agents inoculated without cross reactions. All observed results demonstrate that the evaluation of lesions could be usefull in the presumptive etiologic diagnosis.