Paracoccidioidomycosis in wild and domestic animals / Paracoccidiodomicose em animais silvestres e domésticos

Paracoccidiodomycosis is the most prevalent systemic mycosis in Latin América, mainly in Brazil. Although many studies have been done about the pathology and diagnosis of this mycosis little is known about the eco-epidemiology of the etiological agent Paracoccidioides brasiliensis. The fungus habitat also is unknown although is thought that the fungus lives as a saprobe in soil. The participation of other animal species in P. brasiliensis ecology is poorly understood and fungus isolation from animals as bat and penguin were not reproducible. The armadillos Dasypus novencinctus probably play a role in the fungus eco-epidemiology taking into account that several isolates were obtained from these animals. Seroepidemiologic studies have shown that dogs are infected by P. brasiliensis mainly in rural areas and recently was reported the first case o natural paracoccidioidomycosis in dogs. The role of other animal species in the eco-epidemiology of P. brasiliensis remains doubtful.

A paracoccidioidomicose é a micose sistêmica mais prevalente na América Latina, principalmente no Brasil. Apesar de existirem vários estudos sobre o diagnóstico e patologia dessa micose, pouco se conhece sobre a ecologia do agente etiológico Paracoccidioides brasiliensis. Seu habitat ainda não foi determinado, mas provavelmente o fungo vive saprofiticamente no solo. Há também pouca informação quanto a participação de outras espécies de animais na eco-epidemiologia do fungo e os isolamentos obtidos de animais como morcego e pingüim não foram reprodutíveis. Até o presente, o fungo tem sido isolado com maior freqüência do tatu, Dasypus novencinctus. Estudos soroepidemiológicos demonstraram que a infecção é freqüente em cães, principalmente da área rural e recentemente foi relatado o primeiro caso de paracoccidiodomicose natural em cão. O papel de outras espécies de animais na eco-epidemiologia do fungo ainda não está esclarecido.

Detection of antibodies to Paracoccidioides brasiliensis in horses from northern Region of Paraná State / Detecção de anticorpos para Paracoccidioides brasiliensis em cavalos da região norte do Estado do Paraná

Paracoccidioidomycosis, caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis, is the most prevalent human systemic mycosis in Latin America. Paracoccidioidomycosis affects mainly male rural workers, causing granulomatous lesions in organs such as lungs, liver and spleen. The participation of other animal species in the fungus eco-epidemiology in not well understood. The aim of this study was to evaluate the infection by P. brasiliensis in horses from the Northern Region of Paraná State. The serum samples from 100 horses were assayed by ELISA and Immunodiffusion test, using gp43 and exoantigen as antigens, respectively. A seropositivity of 30% was observed by ELISA test, although all samples were negative by immunodiffusion test. These results suggest that horses can be indicator of fungus presence in the ambient.

A paracoccidioidomicose, causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, é a micose sistêmica de maior prevalência em humanos na América Latina. A paracoccidioidomicose afeta principalmente trabalhadores rurais do sexo masculino, provocando lesões granulomatosas em órgãos como pulmões, fígado e baço. A participação de outras espécies de animais na eco-epidemiologia do fungo não é bem compreendida. Este trabalho teve como objetivo avaliar a infecção por P. brasiliensis em cavalos da Região Norte do Estado do Paraná. Foram analisadas 100 amostras de soros de cavalos por ELISA e por Imunodifusão em gel de agar, utilizando como antígenos a gp43 e o exoantígeno de P. brasiliensis, respectivamente. A soropositividade observada foi de 30% por ELISA enquanto que por imunodifusão todos os soros foram negativos. Os resultados obtidos sugerem que cavalos podem ser indicadores da presença do fungo no meio ambiente.

Immunoassays: an alternative for toxigenic fungi detection in foods / Imunoensaios: uma alternativa para a detecção de fungos toxigênicos em alimentos

Constant monitoring of mould contamination is essential in order to assure the food quality and safety and reduce the economic losses, as well as to minimize the potential hazards to human and animal health. The traditional methods for mould identification and detection (culture in several media, microscopic examination and chemical analysis) are usually time-consuming and require trained staff. Immunoassays, particularly enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) could be a promising alternative to the traditional methods due to high sensitivity, specificity, reproducibility and potential for use in rapid quality control. Among ELISAs, those based on exoantigens are the most employed in the resolution of taxonomic problems, detection and identification of toxigenic fungi. This review discusses the basic principles of immunoassays, methods of mould detection and the several ELISAs developed for toxigenic fungi detection in food.

O monitoramento constante da contaminação fúngica é imprescindível para assegurar a qualidade e segurança dos alimentos, reduzindo as perdas econômicas, assim como os riscos à saúde humana e animal. Os métodos tradicionais de identificação e detecção de fungos (cultivo em diversos meios, exame microscópico e análises bioquímicas) geralmente consomem muito tempo e exigem pessoal com experiência. Os imunoensaios, particularmente os ensaios imunoenzimáticos, constituem uma alternativa promissora aos métodos tradicionais devido à alta sensibilidade, especificidade, reprodutibilidade e potencial como método rápido de controle de qualidade. Dentre os ensaios imunoenzimáticos, aqueles baseados em exoantígenos são os mais empregados na resolução de problemas taxonômicos, detecção e identificação de fungos toxigênicos. Nesta revisão serão abordados conceitos básicos de imunoensaios, métodos de detecção de fungos, assim como diversos ensaios imunoenzimáticos para a detecção de fungos toxigênicos em alimentos.

Detection of antibodies to Paracoccidioides brasiliensis in horses from northern Region of Paraná State / Detecção de anticorpos para Paracoccidioides brasiliensis em cavalos da região norte do Estado do Paraná

Paracoccidioidomycosis, caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis, is the most prevalent human systemic mycosis in Latin America. Paracoccidioidomycosis affects mainly male rural workers, causing granulomatous lesions in organs such as lungs, liver and spleen. The participation of other animal species in the fungus eco-epidemiology in not well understood. The aim of this study was to evaluate the infection by P. brasiliensis in horses from the Northern Region of Paraná State. The serum samples from 100 horses were assayed by ELISA and Immunodiffusion test, using gp43 and exoantigen as antigens, respectively. A seropositivity of 30% was observed by ELISA test, although all samples were negative by immunodiffusion test. These results suggest that horses can be indicator of fungus presence in the ambient.

A paracoccidioidomicose, causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, é a micose sistêmica de maior prevalência em humanos na América Latina. A paracoccidioidomicose afeta principalmente trabalhadores rurais do sexo masculino, provocando lesões granulomatosas em órgãos como pulmões, fígado e baço. A participação de outras espécies de animais na eco-epidemiologia do fungo não é bem compreendida. Este trabalho teve como objetivo avaliar a infecção por P. brasiliensis em cavalos da Região Norte do Estado do Paraná. Foram analisadas 100 amostras de soros de cavalos por ELISA e por Imunodifusão em gel de agar, utilizando como antígenos a gp43 e o exoantígeno de P. brasiliensis, respectivamente. A soropositividade observada foi de 30% por ELISA enquanto que por imunodifusão todos os soros foram negativos. Os resultados obtidos sugerem que cavalos podem ser indicadores da presença do fungo no meio ambiente.

Ecological aspects of Bacillus thuringiensis in an Oxisol

Bacillus thuringiensis is a Gram positive, sporangial bacterium, known for its insecticidal habilities. Survival and conjugation ability of B. thuringiensis strains were investigated; vegetative cells were evaluated in non-sterile soil. Vegetative cells decreased rapidly in number, and after 48 hours the population was predominantly spores. No plasmid transfer was observed in non-sterile soil, probably because the cells died and the remaining cells sporulated quickly. Soil is not a favorable environment for B. thuringiensis multiplication and conjugation. The fate of purified B. thuringiensis toxin was analyzed by extractable toxin quantification using ELISA. The extractable toxin probably declined due to binding on surface-active particles in the soil.

O comportamento de células vegetativas do Bacillus thuringiensis foi estudado em solo não esterilizado. Após o inóculo grande parte das células morrem e o restante esporula em 24 horas. Não foi observada conjugação provavelmente porque poucas células sobrevivem no solo e rapidamente esporulam, mostrando que este não é o ambiente propício para a multiplicação e conjugação desta bactéria. A toxina purificada, portanto livre de células, diminui rapidamente sua quantidade em solo não esterilizado. Provavelmente a ligação da toxina na fração argilosa do solo é a principal responsável por este fenômeno.

Evaluation of carbon and nitrogen sources on fumonisin B1 production by Fusarium verticillioides in defined culture médium / Avaliação de fontes de carbono e nitrogênio na produção de fumonisina B1 por Fusarium verticillioides em meio líquido definido

Fusarium verticillioides Sacc. Niremberg (= F. moniliforme Sheldon) is a primary corn pathogen and the main fumonisin producer. Considering that the nutrient quality and its concentration in the culture medium have an important role in fumonisin production, the aim of this study was to evaluate fumonisin B1 (FB1 ) production by F. verticillioides in a liquid culture medium with different carbon and nitrogen sources. Three strains (103F, 113B and 103BR) were inoculated in nine liquid culture media with different carbon sources (glucose, fructose and maltose) at the concentration of 20 g/L and nitrogen (leucine, alanine and valine) at the concentration of 1 g/L. After selecting the strain (103F) and carbon/nitrogen sources (maltose/leucine) that provided the highest FB1 production, culture media with different maltose and leucine concentrations were evaluated. Keeping the leucine concentration at 1 g/L and increasing the maltose concentration from 20 g/L to 40 g/L, the FB1 production increased from 3.9 ?g/mL to 4.7 ?g/mL (p 0.05). On the other hand, keeping the maltose concentration at 40 g/L and decreasing the leucine concentration to 50% (from 2 g/L to 1 g/L) the FB1 production increased from 2.3 ?g/mL to 4.7 ?g/mL (p 0.05). FB1 production varied according to the F. verticillioides strain, concentration and carbon/nitrogen source in the liquid culture medium and the i

Fusarium verticillioides Sacc. Niremberg (= F. moniliforme Sheldon) é um patógeno primário de milho e principal produtor de fumonisinas. Considerando que a qualidade e a concentração de nutrientes no substrato apresentam papel importante na produção de fumonisinas, este trabalho teve como objetivo avaliar a produção de fumonisina B1 (FB1) por F. verticillioides em cultivo líquido com diferentes fontes de carbono e nitrogênio. Três cepas (103F, 113B e 103BR) foram inoculadas em nove meios de cultivo líquido com diferentes fontes de carbono (glucose, frutose e maltose) na concentração de 20 g/L e nitrogênio (leucina, alanina e valina) na concentração de 1 g/L. Após a seleção da cepa (103F) e fonte de carbono/nitrogênio (maltose/leucina) que proporcionaram maior produção de FB1, foram avaliados meios variando as concentrações de maltose e leucina. Fixando a concentração de leucina em 1 g/L e aumentando a concentração de maltose de 20 g/L para 40 g/L ocorreu um aumento na produção de FB1 de 3,9 ?g/mL para 4,7 ?g/mL (p 0,05). Por outro lado, fixando a concentração de maltose em 40 g/L e diminuindo a concentração de leucina em 50% (de 2 g/L para 1 g/L) ocorreu um aumento na produção de FB1 de 2,3 ?g/mL para 4,7 ?g/mL (p 0,05). A produção de FB1 variou de acordo com a cepa de F. verticillioides, concentração e fonte de carbono/nitrogênio no meio líquido, sendo que o aumento

Evaluation of carbon and nitrogen sources on fumonisin B1 production by Fusarium verticillioides in defined culture médium / Avaliação de fontes de carbono e nitrogênio na produção de fumonisina B1 por Fusarium verticillioides em meio líquido definido

Fusarium verticillioides Sacc. Niremberg (= F. moniliforme Sheldon) is a primary corn pathogen and the main fumonisin producer. Considering that the nutrient quality and its concentration in the culture medium have an important role in fumonisin production, the aim of this study was to evaluate fumonisin B1 (FB1 ) production by F. verticillioides in a liquid culture medium with different carbon and nitrogen sources. Three strains (103F, 113B and 103BR) were inoculated in nine liquid culture media with different carbon sources (glucose, fructose and maltose) at the concentration of 20 g/L and nitrogen (leucine, alanine and valine) at the concentration of 1 g/L. After selecting the strain (103F) and carbon/nitrogen sources (maltose/leucine) that provided the highest FB1 production, culture media with different maltose and leucine concentrations were evaluated. Keeping the leucine concentration at 1 g/L and increasing the maltose concentration from 20 g/L to 40 g/L, the FB1 production increased from 3.9 ?g/mL to 4.7 ?g/mL (p 0.05). On the other hand, keeping the maltose concentration at 40 g/L and decreasing the leucine concentration to 50% (from 2 g/L to 1 g/L) the FB1 production increased from 2.3 ?g/mL to 4.7 ?g/mL (p 0.05). FB1 production varied according to the F. verticillioides strain, concentration and carbon/nitrogen source in the liquid culture medium and the i

Fusarium verticillioides Sacc. Niremberg (= F. moniliforme Sheldon) é um patógeno primário de milho e principal produtor de fumonisinas. Considerando que a qualidade e a concentração de nutrientes no substrato apresentam papel importante na produção de fumonisinas, este trabalho teve como objetivo avaliar a produção de fumonisina B1 (FB1) por F. verticillioides em cultivo líquido com diferentes fontes de carbono e nitrogênio. Três cepas (103F, 113B e 103BR) foram inoculadas em nove meios de cultivo líquido com diferentes fontes de carbono (glucose, frutose e maltose) na concentração de 20 g/L e nitrogênio (leucina, alanina e valina) na concentração de 1 g/L. Após a seleção da cepa (103F) e fonte de carbono/nitrogênio (maltose/leucina) que proporcionaram maior produção de FB1, foram avaliados meios variando as concentrações de maltose e leucina. Fixando a concentração de leucina em 1 g/L e aumentando a concentração de maltose de 20 g/L para 40 g/L ocorreu um aumento na produção de FB1 de 3,9 ?g/mL para 4,7 ?g/mL (p 0,05). Por outro lado, fixando a concentração de maltose em 40 g/L e diminuindo a concentração de leucina em 50% (de 2 g/L para 1 g/L) ocorreu um aumento na produção de FB1 de 2,3 ?g/mL para 4,7 ?g/mL (p 0,05). A produção de FB1 variou de acordo com a cepa de F. verticillioides, concentração e fonte de carbono/nitrogênio no meio líquido, sendo que o aumento

Production and characterization of Fusarium verticillioides exoantigens / Produção e caracterização de exoantígenos de Fusarium verticillioides

Fusarium verticillioides Sacc. Niremberg (=F. moniliforme Sheldon) is a primary corn pathogen and the main fumonisin producer. This fungus can cause significant economical losses for the farmers, grain processors, animal producers and risk for human and animal health. Several methods for mould detection have been used, however most of these are time-consuming and require trained staff. Otherwise, immunoassays (particularly enzyme-linked immunosorbent assay, or ELISA) provide several advantages and potential for use in rapid quality control. In this work exoantigens from eight F. verticillioides isolates were obtained for further production of polyclonal antibodies. The electrophoretic profile of these antigens showed protein bands with molecular mass ranging from 17 to 170 kDa. The antigens from 3 isolates (97K, 113F and 162A) were selected for polyclonal antibodies production, based on protein concentration and number of bands. Antiserum against F. verticillioides 97K exoantigens, which showed the highest titre in indirect ELISA (1:12.800), has potential for the immunodetection of F. verticillioides.

Fusarium verticillioides Sacc. Niremberg (=F. moniliforme Sheldon) é um patógeno primário de milho e principal produtor de fumonisinas. Este fungo pode causar perdas econômicas significativas para produtores e processadores de grãos, criadores de animais, além de representar sérios riscos à saúde humana e animal. Diversos métodos para a detecção de fungos têm sido utilizados, porém a maioria demanda tempo e pessoal treinado. Por outro lado, os métodos imunológicos, particularmente os ensaios imunoenzimáticos, apresentam diversas vantagens para o emprego rápido em controle de qualidade. Neste trabalho, foram obtidos exoantígenos de 8 isolados de F. verticillioides para a produção de anticorpos policlonais. O perfil eletroforético dos antígenos apresentou bandas com massas moleculares aparentes variando entre 17 e 170 kDa. Os antígenos de 3 isolados (97K, 113F e 162A), tendo como base a concentração de proteínas e número de bandas, foram escolhidos para a produção de anticorpos policlonais. O soro imune anti-97K, com maior título no ELISA indireto (1:12.800), apresenta potencial para a imunodetecção de Fusarium verticillioides.

Ecological aspects of Bacillus thuringiensis in an Oxisol

Bacillus thuringiensis is a Gram positive, sporangial bacterium, known for its insecticidal habilities. Survival and conjugation ability of B. thuringiensis strains were investigated; vegetative cells were evaluated in non-sterile soil. Vegetative cells decreased rapidly in number, and after 48 hours the population was predominantly spores. No plasmid transfer was observed in non-sterile soil, probably because the cells died and the remaining cells sporulated quickly. Soil is not a favorable environment for B. thuringiensis multiplication and conjugation. The fate of purified B. thuringiensis toxin was analyzed by extractable toxin quantification using ELISA. The extractable toxin probably declined due to binding on surface-active particles in the soil.

O comportamento de células vegetativas do Bacillus thuringiensis foi estudado em solo não esterilizado. Após o inóculo grande parte das células morrem e o restante esporula em 24 horas. Não foi observada conjugação provavelmente porque poucas células sobrevivem no solo e rapidamente esporulam, mostrando que este não é o ambiente propício para a multiplicação e conjugação desta bactéria. A toxina purificada, portanto livre de células, diminui rapidamente sua quantidade em solo não esterilizado. Provavelmente a ligação da toxina na fração argilosa do solo é a principal responsável por este fenômeno.