Resumo
Because Canine circovirus (CanineCV) is a new species of the genus Circovirus, several issues related to its epidemiology, pathogenesis and clinical disease remain unknown. Thus, this study aimed to perform the characterization of the first complete genome sequence of CanineCV detected in a dog with diarrhea in Brazil. A stool sample was collected of a ten-month-old female German Shepherd dog which had signs of intermittent hemorrhagic gastroenteritis, vomiting, and a history of eating raw pork. The complete CanineCV genome was sequenced by Next-Generation Sequencing. The sequence had 2,063 nucleotides, showed a typical genomic organization for circovirus, and was grouped with strain 214 described in the United States by phylogenetic analysis. One amino acid change was found in the replicase protein, and because of that it was considered unique to CanineCV. Therefore, the characterization of the complete genome of Brazilian CanineCV can be used in future studies of molecular epidemiology, pathogenesis and development of diagnostic tools for the prevention and control of this disease.(AU)
Como o Canine circovirus (CanineCV) é uma nova espécie do Gênero Circovirus, várias questões relacionadas com a sua epidemiologia, patogenia e doença clínica permanecem desconhecidas. Assim, este estudo objetivou realizar a caracterização da primeira sequência do genoma completo do CanineCV detectado em um cão com diarreia, no Brasil. Uma amostra de fezes foi coletada de um cão da raça Pastor Alemão, fêmea, 10 meses de idade, o qual tinha sinais de gastroenterite hemorrágica intermitente, vômito e uma história de ingestão de carne crua de porco. O genoma completo do CanineCV foi sequenciado pelo Sequenciamento de Nova Geração. A sequência tinha 2.063 nucleotídeos, apresentou uma organização genômica típica para um circovírus e foi agrupado com a cepa 214, descrita nos Estados Unidos pela análise filogenética. Uma mudança de aminoácido foi encontrada na proteína de replicação e por causa disso ela foi considerada única para o CanineCV. Portanto, a caracterização do genoma completo do CanineCV brasileiro pode ser utilizada em futuros estudos de epidemiologia molecular, patogenia e no desenvolvimento de ferramentas de diagnóstico para prevenção e controle desta doença.(AU)
Assuntos
Animais , Cães , Circovirus/genética , Circovirus/isolamento & purificação , Infecções por Circoviridae/epidemiologia , Infecções por Circoviridae/veterinária , Genoma , Gastroenterite/veterináriaResumo
Porcine circovirus type 2 (PCV2) is an emergent virus found in commercial pig farms and may cause clinical or subclinical infection. The collared peccary (Pecari tajacu) and white-lipped peccary (Tayassu pecari) may also be infected by PCV2. Accordingly, the aim of this study was to identify PCV2 in whole blood samples of captive peccaries (16 collared and 6 white-lipped) by conventional and quantitative PCR (qPCR). Although the housekeeping gene (c-myc) DNA was successfully amplified, all 22 peccaries tested were negative for PCV2 by both molecular methods. In conclusion, although PCV2 may be endemic in free ranging wild pigs of Central and Northern Brazil, lack of serological and molecular PCV2 evidence (in whole blood) of both captive and free-range wild pigs may indicate low risk of disease in Southern Brazil.
O circovírus suíno tipo 2 (PCV2) é um vírus emergente encontrado em granjas comerciais de suínos que pode causar infecção clínica ou subclínica. Os catetos (Pecari tajacu) e as queixadas (Tayassu pecari) também podem se infectar com PCV2. Deste modo, o objetivo deste estudo foi identificar o PCV2 em amostras de sangue total de pecaris de cativeiro (16 catetos e seis queixadas) por PCR convencional e quantitativo (qPCR). Embora o gene constitutivo (c-myc) tenha sido amplificado com sucesso, todas as 22 amostras de pecaris avaliadas foram negativas para PCV2 em ambos os métodos moleculares. Em conclusão, embora o PCV2 seja endêmico em suínos selvagens de vida livre do Centro e Norte do Brasil, a ausência de evidência sorológica e molecular de PCV2 (em sangue total) de ambos pecaris de cativeiro e de vida livre no Sul do Brasil podem indicar baixo risco de doença no Sul do Brasil.
Assuntos
Animais , Circovirus , Infecções por Circoviridae/diagnóstico , Infecções por Circoviridae/veterinária , Suínos , Testes Hematológicos , Testes SorológicosResumo
Porcine circovirus type 2 (PCV2) is an emergent virus found in commercial pig farms and may cause clinical or subclinical infection. The collared peccary (Pecari tajacu) and white-lipped peccary (Tayassu pecari) may also be infected by PCV2. Accordingly, the aim of this study was to identify PCV2 in whole blood samples of captive peccaries (16 collared and 6 white-lipped) by conventional and quantitative PCR (qPCR). Although the housekeeping gene (c-myc) DNA was successfully amplified, all 22 peccaries tested were negative for PCV2 by both molecular methods. In conclusion, although PCV2 may be endemic in free ranging wild pigs of Central and Northern Brazil, lack of serological and molecular PCV2 evidence (in whole blood) of both captive and free-range wild pigs may indicate low risk of disease in Southern Brazil.(AU)
O circovírus suíno tipo 2 (PCV2) é um vírus emergente encontrado em granjas comerciais de suínos que pode causar infecção clínica ou subclínica. Os catetos (Pecari tajacu) e as queixadas (Tayassu pecari) também podem se infectar com PCV2. Deste modo, o objetivo deste estudo foi identificar o PCV2 em amostras de sangue total de pecaris de cativeiro (16 catetos e seis queixadas) por PCR convencional e quantitativo (qPCR). Embora o gene constitutivo (c-myc) tenha sido amplificado com sucesso, todas as 22 amostras de pecaris avaliadas foram negativas para PCV2 em ambos os métodos moleculares. Em conclusão, embora o PCV2 seja endêmico em suínos selvagens de vida livre do Centro e Norte do Brasil, a ausência de evidência sorológica e molecular de PCV2 (em sangue total) de ambos pecaris de cativeiro e de vida livre no Sul do Brasil podem indicar baixo risco de doença no Sul do Brasil.(AU)
Assuntos
Animais , Suínos , Circovirus , Infecções por Circoviridae/veterinária , Infecções por Circoviridae/diagnóstico , Testes Sorológicos , Testes HematológicosResumo
The studies of mice susceptibility to PCV2 infection are still controversial, despite the importance of PCV2 infection in pigs. Therefore, the aim of this study is to verify the occurrence of horizontal and vertical transmission of PCV2b in mice experimentally infected. Two experiments were performed. In experiment 1 an infected male mice covered a female to verify vertical infection. The pups were tested to detected viral DNA. In experiment 2 the 21 days of age mice were inoculated with PCV2 and allocated with uninfected, i.e. contactantes, to evaluate the horizontal infection. Subsequently, the contactants and inoculated mice were tested for PCV2 DNA. The samples collected from both experiments had their DNA extracted and were further submitted to polymerase chain reaction (PCR). In experiment 1, after the gestation period, the female farrowed 10 mices of which 60% (6/10) were positive for the agent. In experiment 2, both the inoculated and the contacts animals showed no clinical changes and gross lesions of PCV2 infection, but viral DNA was recovered in four of the five animals of the contactant group. The detection of viral DNA in the offspring of the primo-infected females and in the mice that had contact with inoculated mice demonstrated that PCV2 can be transmitted vertically and horizontally.
Apesar da importância da infecção de PCV2 em suínos, os estudos de susceptibilidade de camundongos para a infecção por PCV2, ainda, são controversos. Portanto, o objetivo do presente estudo é verificar a ocorrência de transmissão horizontal e vertical de PCV2b em camundongos infectados experimentalmente. Foram realizados dois experimentos. No primeiro (experimento 1), para verificar a infecção vertical, um camundongo macho infectado cobriu uma fêmea e os filhotes foram testados. No segundo (experimento 2), para avaliar a infecção horizontal, camundongos de 21 dias de idade inoculados com PCV2 foram alocados com não infectados (caontactantes) e, posteriormente, os contactantes foram testados para PCV2. No experimento 1, após o período de gestação, a fêmea pariu 10 camundongos dos quais 60 % (6/10) foram positivos para o agente. No experimento 2, tanto animais inoculados quanto os contactantes, não apresentaram alterações clinicas e lesões macroscópicas de infecção de PCV2, mas o DNA viral foi recuperado em quatro dos cinco animais do grupo contactante. A detecção de DNA viral em filhotes de fêmeas primo-infectadas e em camundongo que tiveram contato com camundongo inoculados demonstrou que PCV2 pode ser transmitido vertical e horizontalmente. Esses resultados confirmam a importância dos roedores na manutenção e disseminação de PCV2 em granjas de suínos.
Assuntos
Animais , Cobaias , Camundongos , Circovirus/patogenicidade , 28573 , Infecções por Circoviridae/transmissão , Transmissão de Doença Infecciosa/veterinária , Animais de Laboratório/virologia , DNA Viral/análiseResumo
The studies of mice susceptibility to PCV2 infection are still controversial, despite the importance of PCV2 infection in pigs. Therefore, the aim of this study is to verify the occurrence of horizontal and vertical transmission of PCV2b in mice experimentally infected. Two experiments were performed. In experiment 1 an infected male mice covered a female to verify vertical infection. The pups were tested to detected viral DNA. In experiment 2 the 21 days of age mice were inoculated with PCV2 and allocated with uninfected, i.e. contactantes, to evaluate the horizontal infection. Subsequently, the contactants and inoculated mice were tested for PCV2 DNA. The samples collected from both experiments had their DNA extracted and were further submitted to polymerase chain reaction (PCR). In experiment 1, after the gestation period, the female farrowed 10 mices of which 60% (6/10) were positive for the agent. In experiment 2, both the inoculated and the contacts animals showed no clinical changes and gross lesions of PCV2 infection, but viral DNA was recovered in four of the five animals of the contactant group. The detection of viral DNA in the offspring of the primo-infected females and in the mice that had contact with inoculated mice demonstrated that PCV2 can be transmitted vertically and horizontally.(AU)
Apesar da importância da infecção de PCV2 em suínos, os estudos de susceptibilidade de camundongos para a infecção por PCV2, ainda, são controversos. Portanto, o objetivo do presente estudo é verificar a ocorrência de transmissão horizontal e vertical de PCV2b em camundongos infectados experimentalmente. Foram realizados dois experimentos. No primeiro (experimento 1), para verificar a infecção vertical, um camundongo macho infectado cobriu uma fêmea e os filhotes foram testados. No segundo (experimento 2), para avaliar a infecção horizontal, camundongos de 21 dias de idade inoculados com PCV2 foram alocados com não infectados (caontactantes) e, posteriormente, os contactantes foram testados para PCV2. No experimento 1, após o período de gestação, a fêmea pariu 10 camundongos dos quais 60 % (6/10) foram positivos para o agente. No experimento 2, tanto animais inoculados quanto os contactantes, não apresentaram alterações clinicas e lesões macroscópicas de infecção de PCV2, mas o DNA viral foi recuperado em quatro dos cinco animais do grupo contactante. A detecção de DNA viral em filhotes de fêmeas primo-infectadas e em camundongo que tiveram contato com camundongo inoculados demonstrou que PCV2 pode ser transmitido vertical e horizontalmente. Esses resultados confirmam a importância dos roedores na manutenção e disseminação de PCV2 em granjas de suínos.(AU)
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Animais , Cobaias , Camundongos , Circovirus/patogenicidade , Infecções por Circoviridae/transmissão , Transmissão de Doença Infecciosa/veterinária , 28573 , Animais de Laboratório/virologia , DNA Viral/análiseResumo
O objetivo do trabalho é descrever uma estratégia para a obtenção de animais negativos para o PCV2 oriundos de uma granja positiva para este vírus. Dezesseis leitões foram obtidos de fêmeas que tiveram os títulos de IgG anti-PCV2 e o DNA viral testados durante a gestação. Esses leitões, aos sete e dez dias de idade, foram transferidos para a unidade de pesquisa. Durante o período de 7 e 10 aos 49 e 52 dias de idade, amostras de soro, suabes nasal e fecal foram coletadas, a cada sete dias. Após esse período, três animais permaneceram na unidade de pesquisa e foram acompanhados dos 49 aos 114 dias de idade, com coletas realizadas a cada 28 dias. Não houve diferença significativa (p = 0,317) de viremia entre marrãs (n = 6) e porcas (n = 10). Com relação aos níveis de IgG, observou-se diferença significativa (p = 0,0213) entre porcas e marrãs. Os leitões (n = 16), obtidos de duas fêmeas, foram transferidos para a unidade de pesquisa. Os animais entre 7 e 10 dias e aos 49 e 52 dias de idade apresentaram queda de IgG e ausência de IgM anti-PCV2; e as amostras de soro, suabe nasal e fecal foram negativos para o DNA de PCV2. Após os 49 dias, nos três animais mantidos isolados, a detecção de IgG, IgM e DNA para PCV2 permaneceu negativa. Concluindo, a estratégia de manejo utilizada permitiu obter suínos negativos para PCV2 oriundo de granjas positivas para o agente
The present study describes a strategy to obtaining PCV2-negative animals from a PCV2-positive herd. Sixteen piglets were selected from females that had their IgG anti-PCV2 and viral circulation followed during pregnancy. These 7-days old piglets were transferred to the research unit. During the period from 7 to 49 days of age, serum, nasal and fecal swabs were collected every seven days. After this period, three animals remained in the research unit and were followed from 49 to 114 days of age, with samples taken each 28 days. No difference (p = 0.317) in viremia between gilts (n = 6) and sows (n = 10) were observed. Regarding the IgG levels, a significant difference (p = 0.0213) were found between gilts and sows. The piglets (n = 16), obtained from the two females, were transferred to the research unit. The animals between 7 and 10 and 49 and 52 days of age showed a decreased of the IgG title and absence of IgM; the serum and fecal and nasal swabs were negative for PCV2 DNA. After 49 days of age, the three remained animals negative for IgG, IgM and viral DNA for PCV2. In conclusion, the strategy of handling used herein allowed the obtention of PCV-2 negative pigs from PCV2-positive herds.
Assuntos
Animais , Suínos , Viroses/imunologiaResumo
A quantificação de anticorpos é muito importante para monitoramento sorológico em granjas e associação com proteção contra o circovírus suíno tipo 2 (PCV2). Dessa forma este trabalho teve como objetivo padronizar e aplicar ELISA indireto com anticorpo de captura e utilizá-lo na quantificação de anticorpos contra o PCV2 em soros de suínos. Na padronização, os soros teste e os imunoreagentes básicos, incluindo, anticorpo de coelho anti-PCV2 purificado utilizado como captura e suspensão viral tiveram suas concentrações de uso ótimas determinadas. Aplicou-se o índice ELISA (IE) nos resultados dos soros de suínos para correção de variações entre testes. O teste mostrou-se específico do ponto de vista analítico e com alta reprodutibilidade podendo adequadamente ser utilizado na quantificação de anticorpos em soros de suínos contra o PCV2. Na aplicação, um total de 138 amostras de soros foi testado sendo cinco de porcas na gestação e 133 de leitões nascidos dessas porcas, acompanhados nas fases de maternidade ao crescimento em uma granja comercial com SMDS. Na avaliação da resposta de anticorpos contra o vírus, houve uma diminuição dos anticorpos da maternidade para a creche, coincidindo com o declínio dos anticorpos de origem materna e com a ocorrência da soroconversão simultaneamente com a detecção de PCV no sangue total pela PCR quantitativa. Em dois leitões com alta carga relativa de DNA viral e sinais clínicos sugestivos de SMDS, a quantidade de anticorpos detectada foi extremamente baixa
Antibody quantification is important for serological monitoring in swine herds and association with protection against porcine circovirus type 2 (PCV2). The aim of this work was to standardize and apply indirect trapping ELISA and use it in the quantification of antibodies against PCV2 in sera from pigs. The immunoreagents, including rabbit antibody anti-purified PCV2 used as trapping antibody and viral suspension had their optimum use dilution previously determined. The absorbance index (ELISA Index, EI), was used to determine the antibody concentration in pig serum directed against PCV2. The test showed high analytical specificity and reproducibility. A total of 138 serum samples was tested including five sows in gestation and 133 piglets accompanied by phases from lactation to growth in a commercial swine herd where PCV2 was previously detected. In anti PCV2 antibody response it was observed a decreasing in the phases of lactation to nursery due to decline of maternal antibodies. The seroconversion was concurrent with PCV DNA detection by quantitative PCR in total blood. In two piglets with high relative DNA viral load and compatible clinical signs of PMWS, the anti PCV2 antibody concentration was very low
Resumo
Vários estudos têm demonstrado a associação entre a maior concentração viral do circovírus suíno tipo 2 (PCV2) detectado por PCR quantitativa com o desenvolvimento de lesões microscópicas típicas da Síndrome da circovirose suína (SCS). Clinicamente, a SCS é caracterizada principalmente pelo emagrecimento progressivo, acompanhado de dispnéia, aumento de tamanho dos linfonodos, palidez e/ou icterícia das mucosas. A diminuição na taxa de crescimento dos leitões acometidos com a síndrome provoca grave prejuízo econômico para o produtor, o que torna a SCS uma das doenças mais importantes para a suinocultura. Assim, com o objetivo de comparar a concentração viral relativa do circovírus suíno (PCV) com o ganho de peso de leitões provenientes de uma granja comercial com SCS, amostras de sangue total, soro e "swab" nasal foram analisadas por PCR em tempo real com SYBR® Green I e PCR para o circovírus suíno tipo 1 (PCV1), sendo posteriormente, comparadas entre si para determinação de qual amostra seria mais apropriada para a utilização na PCR em tempo real com SYBR® Green I. Foram colhidas 128 amostras de sangue total, 128 de soro e 128 de "swab" nasal, as quais foram obtidas de 32 leitões acompanhados na maternidade, creche, recria e crescimento. Através da comparação das concentrações virais relativas do PCV entre as amostras, o sangue total mostrou-se mais apropriado para a PCR em tempo real, seguido do soro. Os "swabs" nasais não foram considerados apropriados para detecção do PCV pela técnica aplicada, pois o PCV detectado pode representar o vírus sendo eliminado nas secreções nasais e/ou uma contaminação do ambiente. Todas as amostras (n = 107) positivas para PCV por PCR em tempo real foram testadas para PCV1 e resultaram negativas
Several studies have shown the association among the largest viral concentration of Porcine circovirus type 2 (PCV2) detected by quantitative PCR with the development of typical microscopic lesions of Postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). Clinically, PMWS is characterized by the progressive weigh loss, accompanied of dyspnea, enlargement of limph nodes, paleness and/or jaundice of the mucous membranes. The reduce growth rate of the pigs affected with the PMWS cause serious economical damage, making this disease as one of the most important for swine producing area. Like this, with the objective of comparing the relative viral concentration of the PCV with the weight gain of piglets of a commercial farm with PMWS, samples of total blood, serum and nasal swab were analyzed by real time PCR using SYBR® Green I and PCR for the PCV1, and were compared later amongst themselves for determination of which sample would be more appropriate for quantitative PCR. A total of 128 samples of total blood, 128 of serum and 128 of nasal swab were collected, which were obtained of 32 piglets accompanied at the nursery, grower, and finisher stage. After analyses, total blood was shown more appropriate for real time PCR, following by the serum. The nasal swabs were not considered appropriate for quantifications of PCV because detected PCV can represent the virus being eliminated in the nasal secretions and/or an environment contamination. All of the samples (n = 107) positive for PCV in real time PCR were also tested in PCR for PCV1 with negative results. The comparison between viral concentrations in blood or serum samples and the weights of the piglets, a negative correlation was observed
Resumo
Vários estudos têm demonstrado a associação entre a maior concentração viral do circovírus suíno tipo 2 (PCV2) detectado por PCR quantitativa com o desenvolvimento de lesões microscópicas típicas da Síndrome da circovirose suína (SCS). Clinicamente, a SCS é caracterizada principalmente pelo emagrecimento progressivo, acompanhado de dispnéia, aumento de tamanho dos linfonodos, palidez e/ou icterícia das mucosas. A diminuição na taxa de crescimento dos leitões acometidos com a síndrome provoca grave prejuízo econômico para o produtor, o que torna a SCS uma das doenças mais importantes para a suinocultura. Assim, com o objetivo de comparar a concentração viral relativa do circovírus suíno (PCV) com o ganho de peso de leitões provenientes de uma granja comercial com SCS, amostras de sangue total, soro e swab nasal foram analisadas por PCR em tempo real com SYBR® Green I e PCR para o circovírus suíno tipo 1 (PCV1), sendo posteriormente, comparadas entre si para determinação de qual amostra seria mais apropriada para a utilização na PCR em tempo real com SYBR® Green I. Foram colhidas 128 amostras de sangue total, 128 de soro e 128 de swab nasal, as quais foram obtidas de 32 leitões acompanhados na maternidade, creche, recria e crescimento. Através da comparação das concentrações virais relativas do PCV entre as amostras, o sangue total mostrou-se mais apropriado para a PCR em tempo real, seguido do soro. Os swabs nasais não foram considerados apropriados para detecção do PCV pela técnica aplicada, pois o PCV detectado pode representar o vírus sendo eliminado nas secreções nasais e/ou uma contaminação do ambiente. Todas as amostras (n = 107) positivas para PCV por PCR em tempo real foram testadas para PCV1 e resultaram negativas. Analisando a comparação das concentrações virais de cada amostra com os pesos dos leitões, pode-se concluir que com o aumento da concentração viral relativa do PCV no sangue total ou soro, houve uma iminuição no ganho de peso e na relação entre os pesos dos leitões acompanhados no estudo. Palavras-chave: Ganho de peso; Quantificação relativa; PCR em tempo real; PCV2; PCV; Síndrome da circovirose suína