Resumo
Nesta Tese, constituída de dois experimentos, objetivou-se testar, in vitro e in vivo, a adição de diferentes pós-diluentes ao sêmen equino descongelado e seus efeitos sobre a motilidade espermática e a atividade da acrosina imediatamente após o descongelamente e durante o teste de termoresistência (TTR). A avaliação in vivo foi realizada considerando-se a fertilidade de éguas artificialmente inseminadas. O sêmen foi envasado em palhetas de 4 mL, descongelado a 50°C por 40 segundos e incubado a 37ºC no TTR durante 90 e 120 minutos, respectivamente, no primeiro e no segundo experiemento. No primeiro adicionou-se a Solução Ringer e o Diluente Merk ao sêmen de dois reprodutores (R1 e R2). Somente a motilidade progressiva no sêmen do R2 decresceu (P<0.05), respectivamente, aos 60 e 90 minutos no sêmen do grupo Controle (14.3±7.7; 3.3±2.7) em relação ao acrescido do Diluente Merk (23.0±2.7; 10.0±0.0), não diferindo daquele acrescido da Solução Riger (20.0±5.0; 8.0±4.4). A motilidade total no sêmen de ambos os animais decresceu (P<0.05), respectivamente, aos 60 e 90 minutos no sêmen do grupo Controle (R1= 26.0±4.1 vs 7.0±2.7; R2= 20.0±3.5 vs 6.0±2.2) em relação ao acrescido da Solução Ringer (R1= 35.0±5.0 vs 19.0±6.5; R2= 32.0±3.7 vs 13.0±2.7) e do Diluente Merk (R1= 40.0±5.0 vs 23.0±6.7; R2= 38.0±5.7 vs 22.0±2.7). A atividade da acrosina no sêmen de ambos os animais não diferiu (P>0.05) entre os tratamentos, mas a atividade no sêmen do R1 foi superior (P<0.05) a do R2 em todas as avaliações no TTR. Imediatamente após o descongelamento e após 90 minutos do TTR, a atividade dessa enzima (%) no sêmen do grupo Controle foi, respectivamente, de 89.6±1.6 vs 81.4±1.8 (R1) e de 86.6±1.9 vs 73.8±3.5 (R2), no acrescido da Solução Ringer foi de 89.1±1.6 vs 81.4±1.3 (R1) e de 87.0±1.5 vs 74.2± (R2) e no acrescido do Diluente Merk foi de 89.2±1.3 vs 81.8±1.0 (R1) e de 86.9±1.6 vs 74.6±3.3 (R2). A prenhez (%) com o sêmen do grupo Controle foi de 50.0 (R1) e 20.0 (R2), com o acrescido da Solução Ringer foi de 50.0 (R1) e 30.0 (R2) e com o acrescido do Diluente Merk foi de 60.0 (R1) e 30.0 (R2) não havendo diferença (P>0.05) entre os tratamentos e entre os animais. No segundo experimento adicionou-se ao sêmen de 10 reprodutores, as soluções Fisiológica, Tyrode ou o Diluente de Congelamento sem conter glicerol. A motilidade progressiva decresceu (P<0.05) a partir de 30 minutos no sêmen descongelado (44.3±7.7 vs viii 33.6±11.6) e no da Solução Fisiológica (44.3±7.9 vs 35.4±11.5) e somente a partir de 60 minutos no sêmen contendo solução tyrode (44.4±8.1 vs 28.6±12.2) ou Diluente de Congelamento (44.4±8.1 vs 28.7±13.2). A motilidade total decresceu (P<0.05) a partir de 60 minutos no sêmen descongelado (53.1±6.1 vs 37.5±13.4) e no da Solução Fisiológica (53.2±6.0 vs 40.1±11.4) e somente a partir de 90 minutos no sêmen contendo Solução Tyrode (53.5±6.3 vs 36.8±12.5) ou Diluente de Congelamento (53.6±5.9 vs 37.9±14.3). A atividade da acrosina quantificada no início do TTR (92.5±6.2) somente decresceu (P<0.05) a partir de 60 minutos sem diferir (P>0.05) entre os tratamentos. Ao término do TTR, sua atividade no sêmen descongelado (71.8±9.9) também não diferiu (P>0.05) daquelas do sêmen diluído com Solução Fisiológica (70.2±9.2), Solução Tyrode (70.2±10.2) e Diluente de Congelamento (69.0±9.7). Os resultados de prenhez obtidos com a inseminação artificial utilizando o sêmen descongelado (37.8%) não diferiu (P<0.05) daqueles com o sêmen diluído em Solução Fisiológica (40.0%), Solução Tyrode (38.5%) ou Diluente de Congelamento (34.7%). Os resultados permitem concluir que a precisão diagnóstica da motilidade espermática é igualmente eficiente aquela da atividade da acrosina e que ambas podem ser utilizadas para predizer a capacidade fecundante dos espermatozóides. Ainda permitem concluir que a adição de pós-diluentes ao sêmen descongelado não contribui para aumentar fertilidade de éguas artificialmente inseminadas.
In this thesis, consisting of two experiments, aimed to test, in vitro and in vivo, the addition of different post-diluents to thawed equine semen and their effects on sperm motility and acrosine activity immediately after thawing and during the test. Resistance Resistance (TTR). In vivo evaluation was performed considering the fertility of artificially inseminated mares. Semen was packaged in 4 mL straws, thawed at 50 ° C for 40 seconds and incubated at 37 ° C in TTR for 90 and 120 minutes, respectively, in the first and second experiments. In the first, Ringer's Solution and Merk Diluent were added to the semen of two breeders (R1 and R2). Only the progressive motility in R2 semen decreased (P <0.05), respectively, at 60 and 90 minutes in the Control group semen (14.3 ± 7.7; 3.3 ± 2.7) in relation to the Merk Diluent plus (23.0 ± 2.7; 10.0 ± 0.0), not differing from that added with the Riger Solution (20.0 ± 5.0; 8.0 ± 4.4). The total semen motility of both animals decreased (P <0.05), respectively, at 60 and 90 minutes in the Control group semen (R1 = 26.0 ± 4.1 vs 7.0 ± 2.7; R2 = 20.0 ± 3.5 vs 6.0 ± 2.2) in increase of Ringer's Solution (R1 = 35.0 ± 5.0 vs 19.0 ± 6.5; R2 = 32.0 ± 3.7 vs 13.0 ± 2.7) and Merk Diluent (R1 = 40.0 ± 5.0 vs 23.0 ± 6.7; R2 = 38.0 ± 5.7 vs 22.0 ± 2.7). The acrosine activity in semen of both animals did not differ (P> 0.05) between treatments, but the activity in semen of R1 was higher (P <0.05) than of R2 in all TTR evaluations. Immediately after thawing and after 90 minutes of TTR, the activity of this enzyme (%) in the Control group semen was, respectively, 89.6 ± 1.6 vs 81.4 ± 1.8 (R1) and 86.6 ± 1.9 vs 73.8 ± 3.5 (R2). , plus Ringer's Solution was 89.1 ± 1.6 vs 81.4 ± 1.3 (R1) and 87.0 ± 1.5 vs 74.2 ± (R2) and plus Merk Diluent was 89.2 ± 1.3 vs 81.8 ± 1.0 (R1) and 86.9 ± 1.6 vs 74.6 ± 3.3 (R2). Pregnancy (%) with Control group semen was 50.0 (R1) and 20.0 (R2), with Ringer's Solution plus 50.0 (R1) and 30.0 (R2) and with Merk Diluent plus 60.0. (R1) and 30.0 (R2) with no difference (P> 0.05) between treatments and between animals. In the second experiment was added to the semen of 10 breeders, Physiological solutions, Tyrode or Freezing Diluent without glycerol. Progressive motility decreased (P <0.05) from 30 minutes in thawed semen (44.3 ± 7.7 vs 33.6 ± 11.6) and in Physiological Solution (44.3 ± 7.9 vs 35.4 ± 11.5) and only from 60 minutes in semen containing tyrode solution (44.4 ± 8.1 vs 28.6 ± 12.2) or Freezing Diluent (44.4 ± 8.1 vs 28.7 ± x 13.2). Total motility decreased (P <0.05) from 60 minutes in thawed semen (53.1 ± 6.1 vs 37.5 ± 13.4) and in Physiological Solution (53.2 ± 6.0 vs 40.1 ± 11.4) and only from 90 minutes in semen containing Tyrode Solution (53.5 ± 6.3 vs 36.8 ± 12.5) or Freezing Diluent (53.6 ± 5.9 vs 37.9 ± 14.3). Acrosine activity quantified at the onset of TTR (92.5 ± 6.2) only decreased (P <0.05) from 60 minutes without differing (P> 0.05) between treatments. At the end of TTR, its activity in thawed semen (71.8 ± 9.9) also did not differ (P> 0.05) from those of semen diluted with Physiological Solution (70.2 ± 9.2), Tyrode Solution (70.2 ± 10.2) and Freezing Diluent (69.0 ± 9.7). Pregnancy results obtained with artificial insemination using thawed semen (37.8%) did not differ (P <0.05) from those with semen diluted in Physiological Solution (40.0%), Tyrode Solution (38.5%) or Freezing Diluent (34.7%). ). The results allow us to conclude that the diagnostic accuracy of sperm motility is equally efficient as that of acrosine activity and that both can be used to predict sperm fertilization capacity. It is also concluded that the addition of post-diluents to thawed semen does not contribute to increase fertility of artificially inseminated mares.
Resumo
Objetivou-se nesse trabalho avaliar o melhor dia para realização da inovulação, através do ultrassom doppler as características morfológicas do corpo lúteo (CL) e da perfusão sanguínea pela análise dos pontos de pixels, comparando com a concentração de Progesterona (P4) no dia da inovulação. Atualmente, além das características morfoecogênicas obtidas por imagens no modo-B, é possível avaliar mudanças na hemodinâmica uterina e ovariana durante todo o ciclo estral e ao longo da gestação por meio da ultrassonografia colorida Doppler. A íntima relação entre a função secretora do CL e a perfusão sanguínea luteal durante o diestro e a gestação pode auxiliar na seleção de receptoras de embriões. O grupos do experimento foram divididos de acordo com o dia de inovulção G1(dia 3), G2(dia 4), G3(dia 5) e G4(dia 6) utilizando no experimento 30 éguas receptoras mestiças, os animais foram selecionados aleatóriamente e avaliados apenas no dia da inovulação. As características examinadas pós ovulação foram tônus, morfoecogenicidade e vascularização do útero, o diâmetro e área do corpo lúteo, vascularização objetiva (concentração de pixels) e vascularização subjetiva. Também foram coletadas amostras de sangue para determinar a concentração sérica de progesterona. Foi encontrada uma alta correlação entre a concentração sérica de P4, a vascularização objetiva e a vascularização subjetiva do CL, indicando que a avalição da receptora utilizando a ferramenta do ultrassom doppler aumenta a segurança na seleçao da receptora.
The objective of this study was to evaluate the best day to perform the embryo transfer, using ultrasound Doppler morphological characteristics of the corpus luteum (CL) and blood perfusion by analyzing the points of pixels compared to the concentration of progesterone (P4) on the day of embryo transfer. Currently, in addition to morfoecogênicas characteristics obtained by the B-mode images, it is possible to evaluate changes in the uterine hemodynamics and ovarian throughout the estrous cycle and during pregnancy by Doppler color ultrasound. The intimate relationship between the secretory function of the CL and luteal blood perfusion during diestrus and pregnancy may help to select embryos to recipients. This work was divided into study according to the day of inovulção G1 (day 3), G2 (4th), G3 (5th) and G4 (6th) using in the experiment 30 mares crossbred receptor, the animals were selected randomly and evaluated only on the day of embryo transfer. The post ovulation characteristics examined were tone, morphoechogenicity and vascularization of the uterus, the cervix tone, diameter and corpus luteum area, objective vascularization (concentration of pixels) and vascularization subjective. Also, blood samples were taken to determine the serum concentration of progesterone. a high correlation between the serum concentration of P4 was found, the objective and the subjective vascularization vascularization of CL, indicating that the evaluation of the receiver using the Doppler ultrasound tool increases security in the selection of the recipient.