Resumo
The data resulted from a survey on anti-Leishmania spp antibodies in serum samples from dogs from 38 municipalities located in the mid-west region of São Paulo State (Marília), during the period from 1999 to 2003, were assessed. Also, the rates of these antibodies detection in dogs serum samples from three municipalities at two distinct periods (1999 - 2003 and 2004 - 2005) were analyzed. From 1999 to 2003, the anti- Leishmania spp antibodies were determined by indirect immunofluorescence assay (IFA); and in the second period of time, enzyme immunoassay (EIA) was used for screening, and IFA as confirmatory testing. The antibodies survey carried out in the period of 1999-2003 suggests that no circulation of Leishmania occurred in that area. Canine surveys conducted in Adamantina, Guarantã and Lucélia municipalities from 2004 to 2005 indicate the occurrence this parasite in the investigated region, as the specific antibodies were detected in 14%, 8%, and 2.5% of dogs serum samples, respectively. Up to April 2008, seven municipalities in Marília region recorded human cases of AVL, and two registered the occurrence of the disease only in dogs; the related vector was detected in at least five municipalities. The increase of AVL cases in the mid-west region of Sao Paulo state certainly requires an improved prevention program and needs to strengthen this disease control activities.
No período de 1999 a 2003, foi realizado o inquérito sorológico pesquisa de anticorpos anti-Leishmania spp em amostras de soro coletadas de cães de 38 municípios da região centro-oeste do estado de São Paulo (Marília). Foram avaliadas as freqüências de reatividade para anticorpos anti-Leishmania spp detectadas em amostras de soros de cães oriundos de três municípios em dois períodos distintos (1999 2003 e 2004 2005). No primeiro período, a detecção de anticorpos específicos foi realizada por meio do teste de imunofluorescência indireta (IFI); no segundo período, foi utilizado o ensaio imunoenzimático (EIE) como teste de triagem e a reação de IFI como teste confirmatório. A investigação efetuada no período de 1999-2003 sugere a ausência de circulação da Leishmania naquela área. O inquérito realizado na população canina nas cidades de Adamantina, Guarantã e Lucélia no período de 2004 a 2005 indica a introdução deste parasita na região, em função da ocorrência de soro positividade para anticorpos anti-Leishmania spp, respectivamente em 14%, 8% e 2,5% das amostras. Até abril de 2008, sete municípios da região de Marília notificaram casos humanos de LVA, dois registraram ocorrência da doença somente em cães; o vetor foi detectado em pelo menos cinco municípios. A expansão da LVA na região centro-oeste do território paulista requer certamente a melhoria das atividades de prevenção
Resumo
Taking into account the problems on the human T-cell lymphotropic virus type 1 and 2 (HTLV-1 andHTLV-2) laboratory diagnosis in samples analyzed at Instituto Adolfo Lutz, São Paulo, it was proposed anew algorithm employing two blood samples serially collected. The first serum sample was for serological screening using two enzyme immunoassays (EIAs), and the second blood sample collected on EDTA was for retesting EIAs and to confirm HTLV-1/2 infection by Western blot (WB) and polymerase chain reaction (PCR). The results obtained on 313 blood samples showed inefficiency of this algorithm as only 25% of EIAs positive samples had a second blood sample collected, and of which the blood were correctly collected on EDTA from three patients only. No feasible data were achieved to compare the actual performance of PCR in relation to WB. Thus, we started to use a simple algorithm (one step) for diagnosing HTLV-1/2 ona single blood sample collected on EDTA for screening and confirmatory assays.
Em vista dos problemas detectados no diagnóstico de infecção pelos vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1 e -2 (HTLV-1 e HTLV-2) em casuística encaminhada ao Instituto Adolfo Lutz de São Paulo, foi proposto um novo algoritmo de testes laboratoriais que utiliza duas amostras de sangue seqüenciais. Na primeira o sangue é coletado em tubo seco e feita triagem sorológica com dois ensaios imunoenzimáticos (EIAs). Na segunda, o sangue é coletado em tubo contendo o anticoagulante ácido etilenodiamino tetraacético (EDTA) para a repetição dos EIAs e para os testes confirmatórios de Western blot (WB) e reação em cadeia da polimerase (PCR). Os resultados obtidos com 313 amostras de sangue mostraram ineficiênciado algoritmo, pois nos casos EIA reagentes, apenas 25% tiveram uma segunda amostra de sangue coletada e destas, apenas três em EDTA. Portanto, não foi possível comparar o desempenho da PCR em relação ao WB. Um algoritmo simples, de coleta única de sangue em tubo contendo EDTA foi proposto e vem sendo utilizado para a triagem e para os testes confirmatórios.
Resumo
The aim of the present study was to standardize the use of blood collected on filter paper in seroepidemiological studies of human herpesvirus 8 (HHV-8) infection. HHV-8 latent and lytic antibodies were searched in eluates of blood collected on Schleicher Schuell membrane from 28 KS/AIDS patients and 10 health individuals without KS, using in house immunofluorescence assays (IFAs). Serum samples from the same individuals were previously evaluated by IFALANA and IFA-lytic, and the results were compared to the results obtained in this study. IFAs were conducted according to criteria established at Immunology Department of Instituto Adolfo Lutz, using BCBL-1 cells line stimulated or not with phorbol ester, and FITC-anti human IgG conjugate. Non-specific stainning on IFAs were detected when 1:50 and 1:100 blood eluated dilutions were employed. This unespecificity disappeared on subsequent blood dilutions. Concordant positive and negative results were obtained between sera and blood samples, but some minor differences were observed on antibodies title. The results obtained confirmed the use of blood collected on paper filter for HHV-8 seroepidemiological purposes.
O presente trabalho objetivou a otimização e a avaliação da coleta de sangue em papel de filtro para ser usada em levantamentos soroepidemiológicos de infecção por herpesvírus humano 8 (HHV-8). Foram utilizados os ensaios de imunofluorescência indireta (IFI) LANA e Lítico para a pesquisa de anticorpos anti-HHV-8 em amostras de sangue colhidas em membrana Schleicher Schuell de 28 pacientes com sarcoma de Kaposi (SK)/AIDS e 10 indivíduos sadios sem SK, dos quais os soros haviam sido anteriormente usados na padronização destas técnicas. Lâminas contendo células da linhagem BCBL-1 estimuladas ou não com éster de forbol, eluatos de sangue e conjugado anti-imunoglobulina humana marcado com fluoresceína foram empregados nas reações sorológicas e, as reações e os critérios de positividade seguiram os previamente estabelecidos na Seção de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz. Foi detectada fluorescência verde-amarelada na maioria das células nas diluições 1:50 e 1:100. Isto dificultou a leitura da IFI-Lítico, principalmente em diluições baixas, mas não interferiu na IFI-LANA cujo padrão pontilhado no núcleo coexistiu com a fluorescência de membrana. À medida que se seguiram as diluições, houve desaparecimento da inespecificidade e a leitura prosseguiu normalmente. Houve concordância de resultados positivos e negativos, com diferenças mínimas nos títulos de anticorpos. Os resultados obtid
Resumo
The data resulted from a survey on anti-Leishmania spp antibodies in serum samples from dogs from 38 municipalities located in the mid-west region of São Paulo State (Marília), during the period from 1999 to 2003, were assessed. Also, the rates of these antibodies detection in dogs serum samples from three municipalities at two distinct periods (1999 - 2003 and 2004 - 2005) were analyzed. From 1999 to 2003, the anti- Leishmania spp antibodies were determined by indirect immunofluorescence assay (IFA); and in the second period of time, enzyme immunoassay (EIA) was used for screening, and IFA as confirmatory testing. The antibodies survey carried out in the period of 1999-2003 suggests that no circulation of Leishmania occurred in that area. Canine surveys conducted in Adamantina, Guarantã and Lucélia municipalities from 2004 to 2005 indicate the occurrence this parasite in the investigated region, as the specific antibodies were detected in 14%, 8%, and 2.5% of dogs serum samples, respectively. Up to April 2008, seven municipalities in Marília region recorded human cases of AVL, and two registered the occurrence of the disease only in dogs; the related vector was detected in at least five municipalities. The increase of AVL cases in the mid-west region of Sao Paulo state certainly requires an improved prevention program and needs to strengthen this disease control activities.
No período de 1999 a 2003, foi realizado o inquérito sorológico pesquisa de anticorpos anti-Leishmania spp em amostras de soro coletadas de cães de 38 municípios da região centro-oeste do estado de São Paulo (Marília). Foram avaliadas as freqüências de reatividade para anticorpos anti-Leishmania spp detectadas em amostras de soros de cães oriundos de três municípios em dois períodos distintos (1999 2003 e 2004 2005). No primeiro período, a detecção de anticorpos específicos foi realizada por meio do teste de imunofluorescência indireta (IFI); no segundo período, foi utilizado o ensaio imunoenzimático (EIE) como teste de triagem e a reação de IFI como teste confirmatório. A investigação efetuada no período de 1999-2003 sugere a ausência de circulação da Leishmania naquela área. O inquérito realizado na população canina nas cidades de Adamantina, Guarantã e Lucélia no período de 2004 a 2005 indica a introdução deste parasita na região, em função da ocorrência de soro positividade para anticorpos anti-Leishmania spp, respectivamente em 14%, 8% e 2,5% das amostras. Até abril de 2008, sete municípios da região de Marília notificaram casos humanos de LVA, dois registraram ocorrência da doença somente em cães; o vetor foi detectado em pelo menos cinco municípios. A expansão da LVA na região centro-oeste do território paulista requer certamente a melhoria das atividades de prevenção