Standardization of the indirect immunofluorescence assay to search for human herpesvirus 8 (HHV-8) antibodies using blood collected on filter paper / Otimização e avaliação do ensaio de imunofluorescência indireta para pesquisa de anticorpos anti-herpesvírus humano 8 (HHV-8) usando sangue colhido em papel de filtro
Matie Kinoshita Silva, Joyce; Cavalheiro Magri, Mariana; Jacob, Fabrício; de los Santos-Fortuna, Elizabeth; Caterino-de-Araújo, Adele.
R. Inst. Adolfo Lutz;
66(1): 68-72, 2007.
Artigo
em Português
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| ID: vti-452550
Resumo
The aim of the present study was to standardize the use of blood collected on filter paper in seroepidemiological studies of human herpesvirus 8 (HHV-8) infection. HHV-8 latent and lytic antibodies were searched in eluates of blood collected on Schleicher Schuell membrane from 28 KS/AIDS patients and 10 health individuals without KS, using in house immunofluorescence assays (IFAs). Serum samples from the same individuals were previously evaluated by IFALANA and IFA-lytic, and the results were compared to the results obtained in this study. IFAs were conducted according to criteria established at Immunology Department of Instituto Adolfo Lutz, using BCBL-1 cells line stimulated or not with phorbol ester, and FITC-anti human IgG conjugate. Non-specific stainning on IFAs were detected when 1:50 and 1:100 blood eluated dilutions were employed. This unespecificity disappeared on subsequent blood dilutions. Concordant positive and negative results were obtained between sera and blood samples, but some minor differences were observed on antibodies title. The results obtained confirmed the use of blood collected on paper filter for HHV-8 seroepidemiological purposes.O presente trabalho objetivou a otimização e a avaliação da coleta de sangue em papel de filtro para ser usada em levantamentos soroepidemiológicos de infecção por herpesvírus humano 8 (HHV-8). Foram utilizados os ensaios de imunofluorescência indireta (IFI) LANA e Lítico para a pesquisa de anticorpos anti-HHV-8 em amostras de sangue colhidas em membrana Schleicher Schuell de 28 pacientes com sarcoma de Kaposi (SK)/AIDS e 10 indivíduos sadios sem SK, dos quais os soros haviam sido anteriormente usados na padronização destas técnicas. Lâminas contendo células da linhagem BCBL-1 estimuladas ou não com éster de forbol, eluatos de sangue e conjugado anti-imunoglobulina humana marcado com fluoresceína foram empregados nas reações sorológicas e, as reações e os critérios de positividade seguiram os previamente estabelecidos na Seção de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz. Foi detectada fluorescência verde-amarelada na maioria das células nas diluições 1:50 e 1:100. Isto dificultou a leitura da IFI-Lítico, principalmente em diluições baixas, mas não interferiu na IFI-LANA cujo padrão pontilhado no núcleo coexistiu com a fluorescência de membrana. À medida que se seguiram as diluições, houve desaparecimento da inespecificidade e a leitura prosseguiu normalmente. Houve concordância de resultados positivos e negativos, com diferenças mínimas nos títulos de anticorpos. Os resultados obtid
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