Dose inseminante e embriogênese na fertilização assistida de carpa comum no nordeste brasileiro / Inseminating dose and embryogenesis in assisted fertilization of common carp in northeastern of Brazil

A presente pesquisa visou determinar a dose inseminante para a fertilização assistida da carpa comum, e o registro em imagens e o tempo de desenvolvimento de cada fase embrionária desta espécie em latitude equatorial. Verificou-se que a porcentagem de fertilização aumentou de forma linear, atingindo um platô em 45,5% na proporção de 208.295 espermatozoides/oócito. Assim, recomenda-se o uso da dose inseminante de aproximadamente 200.000 espermatozoides/oócito na rotina de fertilização assistida dessa espécie, no nordeste brasileiro. Além disso, o desenvolvimento embrionário da carpa em latitude equatorial segue a cronologia semelhante ao relatado para a espécie em clima temperado.(AU)

The present research aimed at determining insemination dose for artificial fertilization of common carp, and record images and time in the development of each embryonic stage of the species in equatorial latitude. The fertilization rate increased linearly up to the proportion of 208.295 spermatozoa/oocyte, and, from this point, the fertilization rate was maintained at 45.5%. Therefore, we recommend the use of the insemination dose of approximately 200.000 sperm/oocyte in the artificial fertilization routine of common carpin brazilian northeast. Moreover, embryonic development of carp in equatorial latitude follows the chronology similar to that reported for the species in temperate zones.(AU)

Dose inseminante e embriogênese na fertilização assistida de carpa comum no nordeste brasileiro / Inseminating dose and embryogenesis in assisted fertilization of common carp in northeastern of Brazil

A presente pesquisa visou determinar a dose inseminante para a fertilização assistida da carpa comum, e o registro em imagens e o tempo de desenvolvimento de cada fase embrionária desta espécie em latitude equatorial. Verificou-se que a porcentagem de fertilização aumentou de forma linear, atingindo um platô em 45,5% na proporção de 208.295 espermatozoides/oócito. Assim, recomenda-se o uso da dose inseminante de aproximadamente 200.000 espermatozoides/oócito na rotina de fertilização assistida dessa espécie, no nordeste brasileiro. Além disso, o desenvolvimento embrionário da carpa em latitude equatorial segue a cronologia semelhante ao relatado para a espécie em clima temperado.

The present research aimed at determining insemination dose for artificial fertilization of common carp, and record images and time in the development of each embryonic stage of the species in equatorial latitude. The fertilization rate increased linearly up to the proportion of 208.295 spermatozoa/oocyte, and, from this point, the fertilization rate was maintained at 45.5%. Therefore, we recommend the use of the insemination dose of approximately 200.000 sperm/oocyte in the artificial fertilization routine of common carpin brazilian northeast. Moreover, embryonic development of carp in equatorial latitude follows the chronology similar to that reported for the species in temperate zones.

Qualidade do sêmen de tambaqui(Colossoma macropomum) criopreservado em diferentes concentrações de gema de ovo / Quality of tambaqui (Colossoma macropomum) semen cryopreserved in different concentrations of egg yolk

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da adição de gema de ovo (GO) sobre a cinética dos espermatozoides de tambaquis após a criopreservação. Utilizaram-se vinte machos de tambaquis (n= 4 pools), que foram induzidos hormonalmente com extrato hipofisário de carpa, para espermiação. Quatorze horas após a indução, realizou-se a coleta seminal. O sêmen de cada pool foi diluído em Ringer adicionado de 10% de dimetilsulfóxido (DMSO) acrescido ou não de GO (T1: sem acréscimo de GO; T2: com 5% de GO e T3: com 10% de GO). O sêmen tratado foi envasado em palhetas de 0,5 mL, congelado em vapor de nitrogênio líquido (dry shipper-30 min/-153 °C) e posteriormente transferidas para nitrogênio líquido. As palhetas foram descongeladas em banho-maria a 37 °C/30 segundos. A taxa de motilidade (%) e a velocidade curvilinear espermática (µm/s) foram analisadas em sistema computadorizado (CASA). Os dados foram expressos em média ± desvio padrão e foi aplicado o teste de Tukey (P<0,05). Houve uma redução significativa na porcentagem de espermatozoides móveis e velocidade curvilinear após a adição de GO independente da concentração. Logo, a adição de GO ao Ringer + DMSO teve efeito negativo sobre a motilidade do sêmen congelado de tambaqui

The aim of this study was to evaluate the effect of egg yolk (EY) addition on the sperm kinects after cryopreservation. We used twenty tambaqui males (n = 4 pools), which were induced homonally to spermiation with carp pituitary extract. Fourteen hours after induction, a seminal collection was performed. The semen from each pool was diluted with Ringer added 10% DMSO on the presence or absence of egg yolk (T1: no additional EY; T2: 5% EY; and T3: 10% EY). The treated semen was loaded in 0.5 mL straws, frozen in a nitrogen vapor vessel (dry shipper) (30 min / -153 °C), and then transferred to liquid nitrogen. Straws were thawed in a water bath at 37 °C / 30 seconds. The analyses of motility rate (%) and sperm curvilinear velocity (µm/s) were performed on computerized system (CASA). Data were expressed as mean ± standard deviation, and Tukey test was applied (P<0.05). There was a significant reduction in the percentage of motile spermatozoa and curvilinear velocity after the addition of egg yolk to the crioprotection solution, regardless of the concentration. Therefore, the addition of EY to Ringer + DMSO had negative effect on motility of tambaqui frozen sperm

Qualidade do sêmen de tambaqui(Colossoma macropomum) criopreservado em diferentes concentrações de gema de ovo / Quality of tambaqui (Colossoma macropomum) semen cryopreserved in different concentrations of egg yolk

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da adição de gema de ovo (GO) sobre a cinética dos espermatozoides de tambaquis após a criopreservação. Utilizaram-se vinte machos de tambaquis (n= 4 pools), que foram induzidos hormonalmente com extrato hipofisário de carpa, para espermiação. Quatorze horas após a indução, realizou-se a coleta seminal. O sêmen de cada pool foi diluído em Ringer adicionado de 10% de dimetilsulfóxido (DMSO) acrescido ou não de GO (T1: sem acréscimo de GO; T2: com 5% de GO e T3: com 10% de GO). O sêmen tratado foi envasado em palhetas de 0,5 mL, congelado em vapor de nitrogênio líquido (dry shipper-30 min/-153 °C) e posteriormente transferidas para nitrogênio líquido. As palhetas foram descongeladas em banho-maria a 37 °C/30 segundos. A taxa de motilidade (%) e a velocidade curvilinear espermática (µm/s) foram analisadas em sistema computadorizado (CASA). Os dados foram expressos em média ± desvio padrão e foi aplicado o teste de Tukey (P<0,05). Houve uma redução significativa na porcentagem de espermatozoides móveis e velocidade curvilinear após a adição de GO independente da concentração. Logo, a adição de GO ao Ringer + DMSO teve efeito negativo sobre a motilidade do sêmen congelado de tambaqui(AU)

The aim of this study was to evaluate the effect of egg yolk (EY) addition on the sperm kinects after cryopreservation. We used twenty tambaqui males (n = 4 pools), which were induced homonally to spermiation with carp pituitary extract. Fourteen hours after induction, a seminal collection was performed. The semen from each pool was diluted with Ringer added 10% DMSO on the presence or absence of egg yolk (T1: no additional EY; T2: 5% EY; and T3: 10% EY). The treated semen was loaded in 0.5 mL straws, frozen in a nitrogen vapor vessel (dry shipper) (30 min / -153 °C), and then transferred to liquid nitrogen. Straws were thawed in a water bath at 37 °C / 30 seconds. The analyses of motility rate (%) and sperm curvilinear velocity (µm/s) were performed on computerized system (CASA). Data were expressed as mean ± standard deviation, and Tukey test was applied (P<0.05). There was a significant reduction in the percentage of motile spermatozoa and curvilinear velocity after the addition of egg yolk to the crioprotection solution, regardless of the concentration. Therefore, the addition of EY to Ringer + DMSO had negative effect on motility of tambaqui frozen sperm(AU)

QUALIDADE DO SÊMEN DE TAMBAQUI (Colossoma macropomum) CRIOPRESERVADO EM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE GEMA DE OVO

Abstract The aim of this study was to evaluate the effect of egg yolk (EY) addition on the sperm kinects after cryopreservation. We used twenty tambaqui males (n = 4 pools), which were induced homonally to spermiation with carp pituitary extract. Fourteen hours after induction, a seminal collection was performed. The semen from each pool was diluted with Ringer added 10% DMSO on the presence or absence of egg yolk (T1: no additional EY; T2: 5% EY; and T3: 10% EY). The treated semen was loaded in 0.5 mL straws, frozen in a nitrogen vapor vessel (dry shipper) (30 min / -153 °C), and then transferred to liquid nitrogen. Straws were thawed in a water bath at 37 °C / 30 seconds. The analyses of motility rate (%) and sperm curvilinear velocity (µm/s) were performed on computerized system (CASA). Data were expressed as mean ± standard deviation, and Tukey test was applied (P 0.05). There was a significant reduction in the percentage of motile spermatozoa and curvilinear velocity after the addition of egg yolk to the crioprotection solution, regardless of the concentration. Therefore, the addition of EY to Ringer + DMSO had negative effect on motility of tambaqui frozen sperm.

Resumo O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da adição de gema de ovo (GO) sobre a cinética dos espermatozoides de tambaquis após a criopreservação. Utilizaram-se vinte machos de tambaquis (n= 4 pools), que foram induzidos hormonalmente com extrato hipofisário de carpa, para espermiação. Quatorze horas após a indução, realizou-se a coleta seminal. O sêmen de cada pool foi diluído em Ringer adicionado de 10% de dimetilsulfóxido (DMSO) acrescido ou não de GO (T1: sem acréscimo de GO; T2: com 5% de GO e T3: com 10% de GO). O sêmen tratado foi envasado em palhetas de 0,5 mL, congelado em vapor de nitrogênio líquido (dry shipper-30 min/-153 °C) e posteriormente transferidas para nitrogênio líquido. As palhetas foram descongeladas em banho-maria a 37 °C/30 segundos. A taxa de motilidade (%) e a velocidade curvilinear espermática (µm/s) foram analisadas em sistema computadorizado (CASA). Os dados foram expressos em média ± desvio padrão e foi aplicado o teste de Tukey (P 0,05). Houve uma redução significativa na porcentagem de espermatozoides móveis e velocidade curvilinear após a adição de GO independente da concentração. Logo, a adição de GO ao Ringer + DMSO teve efeito negativo sobre a motilidade do sêmen congelado de tambaqui.

Biotécnicas aplicadas a reprodução de ciprinídeos / Biotechs applied the reproduction of cyprinids

Esta revisão relata as variações de cada etapa que abrange o processo de crioprervação seminal e fertilização assistida artificial em ciprinídeos. Os diluidores mais utilizados para a criopreservação do sêmen de carpa são uma combinação de sais e açucares associados aos crioprotetores DMSO ou metanol. Para o armazenamento em nitrogênio líquido as amostras podem ser envasadas em palhetas de diferentes volumes e congeladas em caixas térmicas de poliestireno, refrigeradores programáveis, dry shippers ou botijões criogênicos. Após o descongelamento, uma alíquota do sêmen criopreservado é retirada para o cálculo da dose inseminante e realização da fertilização assistida artificial. Em seguida, os ovos fertilizados são tratados com uréia, NaCl e ácido tânico e transferidos para um sistema de incubação. Diante de uma variedade de protocolos relatados pela literatura, ainda é fundamental o aperfeiçoamento continuado destas biotécnicas para permitir o aprimoramento dos programas de reprodução de ciprinídeos.(AU)

This review reports the variations of each stage which covers the process of sperm cryopreservation and artificial fertilization in cyprinids. The most commonly used extenders for sperm cryopreservation of carp are a combination of salts and sugars associated with DMSO or methanol. The samples can be packaged in straws of different volumes for storage in liquid nitrogen and frozen in styrofoam boxes, computer-controlled freezer, dry shippers or cryogenic vessel. After thawing an aliquot of cryopreserved semen is taken for the calculation of insemination dose and realization of artificial assisted fertilization. Then fertilized eggs are treated with urea, NaCl and tannic acid and transferred to incubation system. Faced with a variety of protocols reported in the literature, it is still essential to continued improvement of these biotechnologies to enable the improvement of breeding programs for cyprinids.(AU)

Biotécnicas aplicadas a reprodução de ciprinídeos / Biotechs applied the reproduction of cyprinids

Esta revisão relata as variações de cada etapa que abrange o processo de crioprervação seminal e fertilização assistida artificial em ciprinídeos. Os diluidores mais utilizados para a criopreservação do sêmen de carpa são uma combinação de sais e açucares associados aos crioprotetores DMSO ou metanol. Para o armazenamento em nitrogênio líquido as amostras podem ser envasadas em palhetas de diferentes volumes e congeladas em caixas térmicas de poliestireno, refrigeradores programáveis, dry shippers ou botijões criogênicos. Após o descongelamento, uma alíquota do sêmen criopreservado é retirada para o cálculo da dose inseminante e realização da fertilização assistida artificial. Em seguida, os ovos fertilizados são tratados com uréia, NaCl e ácido tânico e transferidos para um sistema de incubação. Diante de uma variedade de protocolos relatados pela literatura, ainda é fundamental o aperfeiçoamento continuado destas biotécnicas para permitir o aprimoramento dos programas de reprodução de ciprinídeos.

This review reports the variations of each stage which covers the process of sperm cryopreservation and artificial fertilization in cyprinids. The most commonly used extenders for sperm cryopreservation of carp are a combination of salts and sugars associated with DMSO or methanol. The samples can be packaged in straws of different volumes for storage in liquid nitrogen and frozen in styrofoam boxes, computer-controlled freezer, dry shippers or cryogenic vessel. After thawing an aliquot of cryopreserved semen is taken for the calculation of insemination dose and realization of artificial assisted fertilization. Then fertilized eggs are treated with urea, NaCl and tannic acid and transferred to incubation system. Faced with a variety of protocols reported in the literature, it is still essential to continued improvement of these biotechnologies to enable the improvement of breeding programs for cyprinids.

Meios de congelação para conservação de sêmen de peixes da família characidae / Cryopreservation extenders for fishes sperm of Characidae family

Os peixes caracídeos possuem grande diversidade de espécies, considerável importância ecológica e expressivo valor comercial. A criopreservação de sêmen é uma técnica utilizada para contribuir na operacionalização dos programas de reprodução dessas espécies cultivadas ou em vias de extinção. Para garantir a sobrevivências dos espermatozóides durante a criopreservação é necessário adicionar soluções diluidoras e crioprotetoras, que reagem com o sêmen de forma peculiar dependendo da espécie animal. Portanto, o objetivo dessa revisão foi buscar identificar diluentes adotados para criopreservação de sêmen de alguns peixes caracídeos. Os diluidores mais utilizados são glicose, BTS e, mais recentemente, a água de coco em pó (ACP®) associados aos crioprotetores DMSO, glicerol ou metilglicol. Diante da grande variedade de protocolos, conclui-se que é de grande importância incentivar o estudo das particularidades do sêmen de caracídeos e dos meios de congelação, para padronizar a técnica de criopreservação de sêmen de peixes deste grupo.

family has a great diversity of species, an enormous ecological importance and commercial value. The sperm cryopreservation is a technique used to assist reproductive programs of cultivated or endangered species. To ensure the sperm survival during cryopreservation, it is necessary to add extenders and cryoprotective solutions, which react with the sperm in a peculiar way, depending on the animal specie. Thus, the objective of this review was to identify extenders used in the cryopreservation technique for Characid fishes. The sperm cryopreservation review in Characid fishes report that the most commonly used extenders are glucose, BTS and powder coconut water (PCW®) associated with glycerol, DMSO and methyl glycol. Due to the wide range of protocols, it can be concluded that is very important to encourage the study of the particularities of Characid fish semen and freezing substances to standardization of cryopreservation techniques of semen in this particular fish group.

Meios de congelação para conservação de sêmen de peixes da família characidae / Cryopreservation extenders for fishes sperm of Characidae family

Os peixes caracídeos possuem grande diversidade de espécies, considerável importância ecológica e expressivo valor comercial. A criopreservação de sêmen é uma técnica utilizada para contribuir na operacionalização dos programas de reprodução dessas espécies cultivadas ou em vias de extinção. Para garantir a sobrevivências dos espermatozóides durante a criopreservação é necessário adicionar soluções diluidoras e crioprotetoras, que reagem com o sêmen de forma peculiar dependendo da espécie animal. Portanto, o objetivo dessa revisão foi buscar identificar diluentes adotados para criopreservação de sêmen de alguns peixes caracídeos. Os diluidores mais utilizados são glicose, BTS e, mais recentemente, a água de coco em pó (ACP®) associados aos crioprotetores DMSO, glicerol ou metilglicol. Diante da grande variedade de protocolos, conclui-se que é de grande importância incentivar o estudo das particularidades do sêmen de caracídeos e dos meios de congelação, para padronizar a técnica de criopreservação de sêmen de peixes deste grupo.(AU)

family has a great diversity of species, an enormous ecological importance and commercial value. The sperm cryopreservation is a technique used to assist reproductive programs of cultivated or endangered species. To ensure the sperm survival during cryopreservation, it is necessary to add extenders and cryoprotective solutions, which react with the sperm in a peculiar way, depending on the animal specie. Thus, the objective of this review was to identify extenders used in the cryopreservation technique for Characid fishes. The sperm cryopreservation review in Characid fishes report that the most commonly used extenders are glucose, BTS and powder coconut water (PCW®) associated with glycerol, DMSO and methyl glycol. Due to the wide range of protocols, it can be concluded that is very important to encourage the study of the particularities of Characid fish semen and freezing substances to standardization of cryopreservation techniques of semen in this particular fish group.(AU)

Efeito de diferentes taxas de diluição e protocolos de congelação sobre a cinética e morfologia de espermatozoides de carpa comum (Cyprinus carpio) criopreservados em água de coco em pó (ACP 104) / Effect of different rates of dilution and freezing protocols on the kinetics and morphology of sperm of common carp (Cyprinus carpio) cryopreserved in powdered coconut water (ACP - 104)

A carpa comum, Cyprinus carpio, é considerada uma das espécies domesticadas com grande tolerância e resistência a uma ampla variedade de habitats aquáticos, tendo sida introduzida no nordeste do Brasil pelo Departamento Nacional de Obras Contras às Secas (DNOCS) no ano de 1977. A carpa comum é uma espécie de alto valor comercial, forte apelo culinário e esportivo, sendo uma das espécies mais cultivadas em todo o mundo. O objetivo desse trabalho foi avaliar um protocolo de criopreservação de sêmen de carpa comum em ACP-104 e CCSE2 (NaCl e sacarose) utilizando dois métodos de congelação. A partir do sêmen coletado de 30 machos maduros foram determinadas as características seminais. Para a avaliação da concentração espermática, o sêmen fresco foi diluído na proporção de 1:4000 em solução de citrato-formol 4%. Para verificar o efeito dos diluentes e métodos de congelação foram formados onze pools e diluídos em ACP-104 + DMSO 10% ou CCSE2 + DMSO 10%, na taxa de diluição de 1:3 e envasados em palhetas de 0,25 mL. Para cada tratamento resultante foram congeladas quatro palhetas em vapores de nitrogênio líquido em dry shipper ou caixa térmica de poliestireno, sendo depois transferidas e armazenadas em botijões criogênicos. Para verificar o efeito das taxas de diluição os pools também foram diluídos em ACP-104 + DMSO 10% e submetido às diluições de 1:1 e 1:3. As amostras foram envasadas em palhetas de mesmo volume e número de replicatas, sendo congeladas em vapores de nitrogênio líquido em caixa térmica de poliestireno e depois transferidas e armazenadas em botijões criogênicos. O sêmen foi descongelado em banho Maria a 25C por 30 segundos e os parâmetros de motilidade e velocidade seminal foram avaliados com uso do Sperm Class Analyser (SCA). A análise das patologias espermáticas do sêmen fresco, diluído em 1:500, e pós-descongelado, diluído em 1:250 em citrato- formol 4%, foram realizados utilizando o corante azul de bromofenol. Os dados foram agrupados como média desvio padrão e comparados utilizando ANOVA e teste de Games-Howell, adotando um nível de significância de 0,05. Não houve diferença significativa (p<0,05) entre os diluentes, os métodos de congelação e as taxas de diluição empregadas sobre os parâmetros espermáticos e morfológicos de sêmen pós-descongelação de carpa comum. Embora todos os parâmetros espermáticos e morfológicos analisados entre os tratamentos tenham apresentado diferença significativa (p<0,05) em relação ao sêmen fresco (controle), os resultados foram favoráveis para a criopreservação do sêmen de Cyprinus carpio.

The common carp, Cyprinus carpio, is considered one of domesticated species with high tolerance and resistance to a wide variety of aquatic habitats, being introduced in northeastern Brazil by the National Department of Works Cons Drought (DNOCS) in 1977. The common carp is a species of high commercial value, strong appeal culinary and sports, one of the most cultivated species in the world. The aim of this study was to evaluate a protocol for semen cryopreservation of common carp in ACP-104 and CCSE2 using two freezing methods. The semen collected from 30 sexually mature males were analysed seminal characteristics.The fresh semen was diluted 1:4000 in solution in the proportion of citrate-formaldehyde 4% for the evaluation of sperm concentration. Eleven pools were diluted in 10% DMSO combined with ACP-104 or CCSE2 the dilution rate of 1:3 using 0.25 ml straws to determine the effect of diluent and freezing methods. For each treatment resulting four straws were frozen in liquid nitrogen vapors in dry shipper or styrofoam cooler, and later transferred to cryogenic cylinders. The pools were also diluted in 10% DMSO and ACP-104 at dilutions of 1:1 and 1:3 to check the effect of dilution rates. These samples were packaged into straws same volume and number of replicates, and frozen in liquid nitrogen vapors in styrofoam cooler and then transferred to cryogenic cylinders. The semen was thawed in a water bath at 25 C for 30 seconds and evaluated parameters of motility and velocity through the seminal program computerized semen analysis (SCA). The analysis of sperm pathologies of fresh semen, diluted 1:500, and post-thawed, diluted 1:250 in citrate-formaldehyde 4%, were performed using the bromophenol blue dye. All data were expressed as mean standard deviation and compared using ANOVA and Games-Howell test, considered at 5% of significance level. No significant difference (p<0.05) between the two extenders, two freezing methods and the two dilution rates on sperm and morphological parameters post-thawed semen of common carp. Although all sperm and morphological parameters analyzed between treatments showed significant differences (p<0.05) compared to fresh semen (control), they were favorable results for the cryopreservation of semen of Cyprinus carpio.

Efeito de diferentes taxas de diluição e protocolos de congelação sobre a cinética e morfologia de espermatozoides de carpa comum (Cyprinus carpio) criopreservados em água de coco em pó (ACP 104) / Effect of different rates of dilution and freezing protocols on the kinetics and morphology of sperm of common carp (Cyprinus carpio) cryopreserved in powdered coconut water (ACP - 104)

A carpa comum, Cyprinus carpio, é considerada uma das espécies domesticadas com grande tolerância e resistência a uma ampla variedade de habitats aquáticos, tendo sida introduzida no nordeste do Brasil pelo Departamento Nacional de Obras Contras às Secas (DNOCS) no ano de 1977. A carpa comum é uma espécie de alto valor comercial, forte apelo culinário e esportivo, sendo uma das espécies mais cultivadas em todo o mundo. O objetivo desse trabalho foi avaliar um protocolo de criopreservação de sêmen de carpa comum em ACP-104 e CCSE2 (NaCl e sacarose) utilizando dois métodos de congelação. A partir do sêmen coletado de 30 machos maduros foram determinadas as características seminais. Para a avaliação da concentração espermática, o sêmen fresco foi diluído na proporção de 1:4000 em solução de citrato-formol 4%. Para verificar o efeito dos diluentes e métodos de congelação foram formados onze pools e diluídos em ACP-104 + DMSO 10% ou CCSE2 + DMSO 10%, na taxa de diluição de 1:3 e envasados em palhetas de 0,25 mL. Para cada tratamento resultante foram congeladas quatro palhetas em vapores de nitrogênio líquido em dry shipper ou caixa térmica de poliestireno, sendo depois transferidas e armazenadas em botijões criogênicos. Para verificar o efeito das taxas de diluição os pools também foram diluídos em ACP-104 + DMSO 10% e submetido às diluições de 1:1 e 1:3. As amostras foram envasadas em palhetas de mesmo volume e número de replicatas, sendo congeladas em vapores de nitrogênio líquido em caixa térmica de poliestireno e depois transferidas e armazenadas em botijões criogênicos. O sêmen foi descongelado em banho Maria a 25C por 30 segundos e os parâmetros de motilidade e velocidade seminal foram avaliados com uso do Sperm Class Analyser (SCA). A análise das patologias espermáticas do sêmen fresco, diluído em 1:500, e pós-descongelado, diluído em 1:250 em citrato- formol 4%, foram realizados utilizando o corante azul de bromofenol. Os dados foram agrupados como média desvio padrão e comparados utilizando ANOVA e teste de Games-Howell, adotando um nível de significância de 0,05. Não houve diferença significativa (p<0,05) entre os diluentes, os métodos de congelação e as taxas de diluição empregadas sobre os parâmetros espermáticos e morfológicos de sêmen pós-descongelação de carpa comum. Embora todos os parâmetros espermáticos e morfológicos analisados entre os tratamentos tenham apresentado diferença significativa (p<0,05) em relação ao sêmen fresco (controle), os resultados foram favoráveis para a criopreservação do sêmen de Cyprinus carpio.(AU)

The common carp, Cyprinus carpio, is considered one of domesticated species with high tolerance and resistance to a wide variety of aquatic habitats, being introduced in northeastern Brazil by the National Department of Works Cons Drought (DNOCS) in 1977. The common carp is a species of high commercial value, strong appeal culinary and sports, one of the most cultivated species in the world. The aim of this study was to evaluate a protocol for semen cryopreservation of common carp in ACP-104 and CCSE2 using two freezing methods. The semen collected from 30 sexually mature males were analysed seminal characteristics.The fresh semen was diluted 1:4000 in solution in the proportion of citrate-formaldehyde 4% for the evaluation of sperm concentration. Eleven pools were diluted in 10% DMSO combined with ACP-104 or CCSE2 the dilution rate of 1:3 using 0.25 ml straws to determine the effect of diluent and freezing methods. For each treatment resulting four straws were frozen in liquid nitrogen vapors in dry shipper or styrofoam cooler, and later transferred to cryogenic cylinders. The pools were also diluted in 10% DMSO and ACP-104 at dilutions of 1:1 and 1:3 to check the effect of dilution rates. These samples were packaged into straws same volume and number of replicates, and frozen in liquid nitrogen vapors in styrofoam cooler and then transferred to cryogenic cylinders. The semen was thawed in a water bath at 25 C for 30 seconds and evaluated parameters of motility and velocity through the seminal program computerized semen analysis (SCA). The analysis of sperm pathologies of fresh semen, diluted 1:500, and post-thawed, diluted 1:250 in citrate-formaldehyde 4%, were performed using the bromophenol blue dye. All data were expressed as mean standard deviation and compared using ANOVA and Games-Howell test, considered at 5% of significance level. No significant difference (p<0.05) between the two extenders, two freezing methods and the two dilution rates on sperm and morphological parameters post-thawed semen of common carp. Although all sperm and morphological parameters analyzed between treatments showed significant differences (p<0.05) compared to fresh semen (control), they were favorable results for the cryopreservation of semen of Cyprinus carpio.(AU)