Resumo
Botryosphaeria sp. is a ligninolytic fungus that produces laccase. It was previously established that veratryl alcohol (VA) strongly induced laccase production in this ascomyceteous. It is well known that surfactants such as Tween - 80 can increase the production of some fungal exo-enzymes. It has been reported that Tween-80 can also induce laccase production in basidiomycetes. In this work, the influence of Tweens 20, 40, 60 and 80 on the production of constitutive laccases (in the absence of VA) and inducible laccases (in the presence of VA) by Botryosphaeria sp. was evaluated, separately. Laccase activity was assayed using two putative laccase substrates: ABTS (PPO - I) and DMP (PPO - II). All of the Tweens examined increased the production of both constitutive and inducible laccase PPO - I, but did not affect the production of constitutive laccase PPO - II. Tweens 60 and 20 increased the production of inducible laccase PPO - II, while Tween 80 and 40 did not cause any effect
O Botryosphaeria sp. é um fungo ligninolítico produtor de lacases. Estudos anteriores demonstraram que o álcool veratrílico (AV) induziu fortemente a produção de lacases nesse ascomiceto. Sabe-se que surfactantes tais como o Tween - 80 podem aumentar a produção de algumas exoenzimas fúngicas. Tem sido relatado que o Tween-80 pode induzir a produção de lacase em basidiomicetos. No presente trabalho, foi avaliada a influência dos Tweens 80, 60, 40 e 20 na produção de lacases constitutivas (ausência de AV) e indutivas (presença de AV) pelo Botryosphaeria sp. A atividade de lacase foi determinada usando-se dois substratos diferentes, o ABTS (PPO - I) e o DMP (PPO - II). Todos os Tweens estudados aumentaram a produção das lacases (PPO - I) constitutivas e indutivas e não afetaram a produção da lacase (PPO - II) constitutiva. Os Tweens 60 e 20 aumentaram a produção da lacase (PPO - II) indutiva, enquanto que os Tweens 80 e 40 não causaram nenhum efeito
Resumo
This work presents a simple and rapid technique to select fungal strains with the ability to produce laccases. Fifteen strains of Colletotrichum spp. from the Amazon region (isolated from cumarú, puerária, cupuaçu and weed plants), as well as a strain isolated from espinheira santa in the south of Brazil, were found to produce laccases. Laccase activity was assayed using ABTS and DMP as putative substrates. Only Colletotrichum isolates of puero (P2 and P3) did not present activity towards DMP. Isolates D3 (weed plants), M3 (espinheira santa), C2 and C3 (cumarú) were selected, and were compared with the basidiomycete Pleurotus ostreatus used as a reference laccase producer under stationary and submerged culture conditions. Highest laccase activity was detected only in the stationary cultures of Colletotrichum isolate D3 assayed against ABTS (35 U/l) and DMP (8 U/l).
O presente trabalho apresenta uma metodologia simples e rápida para selecionar isolados fúngicos produtores de lacases. Foram avaliados quinze isolados de Colletotrichum da biodiversidade da Amazônia (obtidos de cumarú, puerária, cupuaçu e plantas daninhas), além de um isolado de espinheira santa do sul do país, quanto à produção de lacases. A atividade da enzima foi determinada utilizandose os substratos ABTS e o DMP. Somente os isolados de puerária P2 e P3 não apresentaram atividade sobre o substrato DMP. Os isolados D3 (planta daninha), M3 (espinheira santa), C2 e C3 (cumarú) foram selecionados e comparados quanto à produção de lacases em cultivos líquidos estáticos e agitados, utilizando-se o Pleurotus ostreatus, um basidiomiceto produtor de lacase, como referência. A maior atividade de lacase foi detectada apenas nos cultivos estáticos do isolado D3 (35U/l em ABTS; 8U/l em e DMP).
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Botryosphaeria sp. is a ligninolytic fungus that produces laccase. It was previously established that veratryl alcohol (VA) strongly induced laccase production in this ascomyceteous. It is well known that surfactants such as Tween - 80 can increase the production of some fungal exo-enzymes. It has been reported that Tween-80 can also induce laccase production in basidiomycetes. In this work, the influence of Tweens 20, 40, 60 and 80 on the production of constitutive laccases (in the absence of VA) and inducible laccases (in the presence of VA) by Botryosphaeria sp. was evaluated, separately. Laccase activity was assayed using two putative laccase substrates: ABTS (PPO - I) and DMP (PPO - II). All of the Tweens examined increased the production of both constitutive and inducible laccase PPO - I, but did not affect the production of constitutive laccase PPO - II. Tweens 60 and 20 increased the production of inducible laccase PPO - II, while Tween 80 and 40 did not cause any effect
O Botryosphaeria sp. é um fungo ligninolítico produtor de lacases. Estudos anteriores demonstraram que o álcool veratrílico (AV) induziu fortemente a produção de lacases nesse ascomiceto. Sabe-se que surfactantes tais como o Tween - 80 podem aumentar a produção de algumas exoenzimas fúngicas. Tem sido relatado que o Tween-80 pode induzir a produção de lacase em basidiomicetos. No presente trabalho, foi avaliada a influência dos Tweens 80, 60, 40 e 20 na produção de lacases constitutivas (ausência de AV) e indutivas (presença de AV) pelo Botryosphaeria sp. A atividade de lacase foi determinada usando-se dois substratos diferentes, o ABTS (PPO - I) e o DMP (PPO - II). Todos os Tweens estudados aumentaram a produção das lacases (PPO - I) constitutivas e indutivas e não afetaram a produção da lacase (PPO - II) constitutiva. Os Tweens 60 e 20 aumentaram a produção da lacase (PPO - II) indutiva, enquanto que os Tweens 80 e 40 não causaram nenhum efeito
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This work presents a simple and rapid technique to select fungal strains with the ability to produce laccases. Fifteen strains of Colletotrichum spp. from the Amazon region (isolated from cumarú, puerária, cupuaçu and weed plants), as well as a strain isolated from espinheira santa in the south of Brazil, were found to produce laccases. Laccase activity was assayed using ABTS and DMP as putative substrates. Only Colletotrichum isolates of puero (P2 and P3) did not present activity towards DMP. Isolates D3 (weed plants), M3 (espinheira santa), C2 and C3 (cumarú) were selected, and were compared with the basidiomycete Pleurotus ostreatus used as a reference laccase producer under stationary and submerged culture conditions. Highest laccase activity was detected only in the stationary cultures of Colletotrichum isolate D3 assayed against ABTS (35 U/l) and DMP (8 U/l).
O presente trabalho apresenta uma metodologia simples e rápida para selecionar isolados fúngicos produtores de lacases. Foram avaliados quinze isolados de Colletotrichum da biodiversidade da Amazônia (obtidos de cumarú, puerária, cupuaçu e plantas daninhas), além de um isolado de espinheira santa do sul do país, quanto à produção de lacases. A atividade da enzima foi determinada utilizandose os substratos ABTS e o DMP. Somente os isolados de puerária P2 e P3 não apresentaram atividade sobre o substrato DMP. Os isolados D3 (planta daninha), M3 (espinheira santa), C2 e C3 (cumarú) foram selecionados e comparados quanto à produção de lacases em cultivos líquidos estáticos e agitados, utilizando-se o Pleurotus ostreatus, um basidiomiceto produtor de lacase, como referência. A maior atividade de lacase foi detectada apenas nos cultivos estáticos do isolado D3 (35U/l em ABTS; 8U/l em e DMP).
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Oligosaccharides participate in the formation of dietary fiber and are mainly used as prebiotic agents. This review presents ways of obtaining these sugars, which can be produced by synthesis (chemical or enzymatic), or through depolymerization of polysaccharides (physical, chemical or enzymatic). Oligosaccharides have also been used commercially as an ingredient in cosmetics, pharmaceuticals, agricultural products and especially in the food industry because of their physical properties. The potential applications of oligosaccharides in several areas such as food, animal feed, pharmaceuticals and cosmetics have contributed to the increase in scientific research on these carbohydrates. The use of oligosaccharides as immuno-modulatory agents and biological response modifiers has been recently described, and their effects as anti-inflammatory and in reducing cholesterol. An overview of the various nutraceutical and biological functions of these carbohydrates in order to benefit human health is also reported.
Os oligossacarídeos participam da constituição da fibra alimentar e são principalmente utilizados como prebióticos. Esta revisão apresenta as vias de obtenção destes açúcares, os quais podem ser produzidos por síntese (química ou enzimática) ou da despolimerização de polissacarídeos (física, química ou enzimática), como descrito na presente revisão. Os oligossacarídeos vêm sendo utilizados comercialmente como ingredientes de cosméticos, medicamentos, produtos agrícolas e principalmente na indústria alimentícia. O potencial de aplicações dos oligossacarídeos nessas áreas nas mais diversas áreas tais como alimentos, rações animais, fármacos e cosméticos tem contribuído para o aumento das investigações científicas. O uso de oligossacarídeos como agentes imunomoduladores e modificadores de respostas biológicas foi recentemente descrito, assim como seus efeitos como compostos antiinflamatórios e hipocolesterolêmicos. Uma visão geral sobre as diversas funções nutracêuticas e biológicas destes oligômeros de carboidratos visando benefícios para a saúde humana também foi reportada.
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Sugarcane bagasse was used as substrate for xylanase production by means of a strain of Trichoderma harzianum Rifai isolated from decaying Aspidosperma sp. (peroba) wood. The bagasse was washed, dried, milled and wetted with minimal salts medium and the cultures grown at 28 ± 2ºC for 7 days. Two extraction methods were tested for enzyme recovery: (A) Tween 80, 0.1% (v/v), in physiological saline, and (B) 50mM sodium acetate buffer, pH 5.0, under agitation (180rpm) for 15, 30 and 60min. After a single extraction, both extraction methods recovered an average of 15U/ml of xylanase activity, independent on the time of shaking. A second and third extraction recovered 10.4 and 6.6U/ml xylanase, respectively. The effect of volume size for extraction, and sugarcane bagasse concentration, on xylanase production were also investigated. The growth profile of Trichoderma harzianum was followed over 20 days on 14% (w/v) bagasse, and highest xylanase activity (288U/ml) appeared on the seventh day. The enzymatic extract after precipitation with ammonium sulphate was submitted to electrophoresis on polyacrylamide gels and showed 4 protein-staining bands, one of which exhibited xylanase activity.
Bagaço de cana-de-açúcar foi utilizado como substrato para a produção de xilanase pelo Trichoderma harzianum Rifai, isolado previamente de peroba (Aspidosperma sp) em decomposição. Após ter sido lavado, seco e moído, o bagaço foi umedecido com meio mínimo de Vogel e autoclavado. Dois métodos de extração foram avaliados para recuperação da enzima: (A) Tween 80 0,1% em salina fisiológica (v/v) e (B) tampão acetato pH 5 (50mM) sob agitação (180rpm) durante 15, 30 e 60 minutos. Em média, foram recuperados 15U/ml de atividade xilanásica com ambos os extratores, após uma única extração, independente do tempo de agitação. Uma segunda e terceira reextrações recuperaram 10,4 e 6,6U/ml, respectivamente. O efeito de diferentes volumes de extração e a concentração de bagaço de cana para a produção da xilanase também foram investigados. A curva de crescimento de Trichoderma harzianum foi avaliada durante 20 dias e a maior atividade xilanásica (288U/ml) foi obtida no sétimo dia de cultivo. O extrato enzimático, após precipitação com sulfato de amônio, foi submetido à eletroforese em gel de poliacrilamida e apresentou 4 bandas de proteína, das quais apenas uma demonstrou atividade xilanásica.
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Previous studies showed that ethanolic extract of Ocimum gratissimum inhibited growth of Penicillium chrysogenum, Rhizoctonia sp, Aspergillus niger and Alternaria sp, isolated from tomato and carrot. The aim of this study was to identify the chemical constituents of Ocimum gratissim. Aerial parts of the plant were treated with hexane-dichloromethane-ethanol mixture (1:3:1) at room temperature. The obtained extract was chromatographed on silica gel column eluted with hexane, dichloromethane and ethanol. Fractions eluted with dichloromethane were rechromatographed on a column of silica gel to yield alyphatic hydrocarbon mixture (C31, C33, C34 e C35), eugenol, caryophyllene oxide and a mixture of stigmasterol and sitosterol. The structures of the compounds were deduced by spectral data analysis and by comparison with literature values. Recent studies showed that eugenol is probably one of the responsibles for antifungal activity of O. gratissimum.
Ensaios anteriores de atividade antifúngica do extrato etanólico de Ocimum gratissimum, utilizando a técnica de difusão em meio sólido, evidenciaram a inibição do crescimento de Penicillium chrysogenum, Rhizoctonia sp, Aspergillus niger e de duas espécies de Alternaria sp isoladas de tomate e de cenoura. O objetivo deste trabalho foi identificar os possíveis constituintes químicos responsáveis pela atividade antifúngica da planta, por meio de estudo químico do extrato hexano-diclorometano-etanol (1:3:1) das partes aéreas de O. gratissimum. O extrato foi cromatografado em coluna de sílica gel, eluída com hexano, diclorometano e etanol. A purificação em coluna cromatográfica de sílica gel das frações eluídas com diclorometano (5,9g) resultou na obtenção de quatro constituintes: uma mistura de hidrocarbonetos saturados de cadeia longa (C31, C33, C34 e C35), eugenol, óxido de cariofileno e uma mistura de estigmasterolsitosterol. Os constituintes foram identificados através das análises por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas e das espectrometrias no infravermelho, de ressonância magnética nuclear de 1H e de 13C e comparação com dados espectrais da literatura. Entre os constituintes isolados, concluiuse que o eugenol é um dos prováveis responsáveis pela atividade antifúngica de O. gratissimum, pois registros da literatura comprovaram a atividade deste constituin
Resumo
Corn cob as a lignocellulosic feedstock could be a viable option for edible mushroom production by fungi of the genus Pleurotus considering that there are enormous amounts of this agricultural waste in the State of Parana, as well in the whole Brazil territory. This work evaluated three strains of Pleurotus sp., Pleurotus ostreatus (white and CCB), P. Eryngii (salmon), as laccase producers using liquid extract of corn cob, and solid medium based on corn cob without adding other nutritional sources. A strain of Pleurotus ostreatus (white) produced the highest titres of laccase in liquid medium (1.2 U L-1) and also on solid medium (~ 2.8 U kg-1) among the three strains evaluated. The additon of active charcoal increased the biological efficency (30.3 %) of P. eryngii (salmon) when compared in its absence (12.7 %). However, the strain of P. ostreatus (white) did not present statistical difference among the treatments demonstrating that the addition of active charcoal to the solid medium for mushroom production can promote an increase in the biological efficiency depending upon the fungal strain used.
O sabugo de milho é uma matéria prima lignocelulósica que pode ser uma opção viável para a produção de cogumelos comestíveis por fungos do gênero Pleurotus, considerando-se que existe uma enorme quantidade deste resíduo agrícola no Estado do Paraná e em todo o Brasil. Este trabalho avaliou três linhagens de Pleurotus sp., Pleurotus ostreatus (branco e CCB) e P. Eryngii (Salmão), como produtoras de lacase utilizando-se extrato líquido de sabugo de milho e em meio sólido à base de sabugo de milho, sem adicionar outras fontes de nutrientes. A linhagem de Pleurotus ostreatus (branco) produziu os maiores títulos de lacase no meio líquido (1,2 U L-1) e também no sólido (~ 2,8 U kg-1) dentre as três linhagens avaliadas. A adição de carvão ativo aumentou a eficiência biológica (30,3 %) do P. eryngii (salmão) quando comparada com a ausência do mesmo (12,7 %). Entretanto, a linhagem de P. ostreatus (branco) não apresentou diferença estatística entre os tratamentos, mostrando que a adição de carvão ativo ao meio sólido, para a produção de cogumelos, pode proporcionar um aumento na eficiência biológica, dependendo da linhagem utilizada.
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Corn cob as a lignocellulosic feedstock could be a viable option for edible mushroom production by fungi of the genus Pleurotus considering that there are enormous amounts of this agricultural waste in the State of Parana, as well in the whole Brazil territory. This work evaluated three strains of Pleurotus sp., Pleurotus ostreatus (white and CCB), P. Eryngii (salmon), as laccase producers using liquid extract of corn cob, and solid medium based on corn cob without adding other nutritional sources. A strain of Pleurotus ostreatus (white) produced the highest titres of laccase in liquid medium (1.2 U L-1) and also on solid medium (~ 2.8 U kg-1) among the three strains evaluated. The additon of active charcoal increased the biological efficency (30.3 %) of P. eryngii (salmon) when compared in its absence (12.7 %). However, the strain of P. ostreatus (white) did not present statistical difference among the treatments demonstrating that the addition of active charcoal to the solid medium for mushroom production can promote an increase in the biological efficiency depending upon the fungal strain used.
O sabugo de milho é uma matéria prima lignocelulósica que pode ser uma opção viável para a produção de cogumelos comestíveis por fungos do gênero Pleurotus, considerando-se que existe uma enorme quantidade deste resíduo agrícola no Estado do Paraná e em todo o Brasil. Este trabalho avaliou três linhagens de Pleurotus sp., Pleurotus ostreatus (branco e CCB) e P. Eryngii (Salmão), como produtoras de lacase utilizando-se extrato líquido de sabugo de milho e em meio sólido à base de sabugo de milho, sem adicionar outras fontes de nutrientes. A linhagem de Pleurotus ostreatus (branco) produziu os maiores títulos de lacase no meio líquido (1,2 U L-1) e também no sólido (~ 2,8 U kg-1) dentre as três linhagens avaliadas. A adição de carvão ativo aumentou a eficiência biológica (30,3 %) do P. eryngii (salmão) quando comparada com a ausência do mesmo (12,7 %). Entretanto, a linhagem de P. ostreatus (branco) não apresentou diferença estatística entre os tratamentos, mostrando que a adição de carvão ativo ao meio sólido, para a produção de cogumelos, pode proporcionar um aumento na eficiência biológica, dependendo da linhagem utilizada.
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Previous studies showed that ethanolic extract of Ocimum gratissimum inhibited growth of Penicillium chrysogenum, Rhizoctonia sp, Aspergillus niger and Alternaria sp, isolated from tomato and carrot. The aim of this study was to identify the chemical constituents of Ocimum gratissim. Aerial parts of the plant were treated with hexane-dichloromethane-ethanol mixture (1:3:1) at room temperature. The obtained extract was chromatographed on silica gel column eluted with hexane, dichloromethane and ethanol. Fractions eluted with dichloromethane were rechromatographed on a column of silica gel to yield alyphatic hydrocarbon mixture (C31, C33, C34 e C35), eugenol, caryophyllene oxide and a mixture of stigmasterol and sitosterol. The structures of the compounds were deduced by spectral data analysis and by comparison with literature values. Recent studies showed that eugenol is probably one of the responsibles for antifungal activity of O. gratissimum.
Ensaios anteriores de atividade antifúngica do extrato etanólico de Ocimum gratissimum, utilizando a técnica de difusão em meio sólido, evidenciaram a inibição do crescimento de Penicillium chrysogenum, Rhizoctonia sp, Aspergillus niger e de duas espécies de Alternaria sp isoladas de tomate e de cenoura. O objetivo deste trabalho foi identificar os possíveis constituintes químicos responsáveis pela atividade antifúngica da planta, por meio de estudo químico do extrato hexano-diclorometano-etanol (1:3:1) das partes aéreas de O. gratissimum. O extrato foi cromatografado em coluna de sílica gel, eluída com hexano, diclorometano e etanol. A purificação em coluna cromatográfica de sílica gel das frações eluídas com diclorometano (5,9g) resultou na obtenção de quatro constituintes: uma mistura de hidrocarbonetos saturados de cadeia longa (C31, C33, C34 e C35), eugenol, óxido de cariofileno e uma mistura de estigmasterolsitosterol. Os constituintes foram identificados através das análises por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas e das espectrometrias no infravermelho, de ressonância magnética nuclear de 1H e de 13C e comparação com dados espectrais da literatura. Entre os constituintes isolados, concluiuse que o eugenol é um dos prováveis responsáveis pela atividade antifúngica de O. gratissimum, pois registros da literatura comprovaram a atividade deste constituin
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The cell wall is a rigid structure essential for the survival of fungi. A knowledge of its composition is therefore useful for the development of novel anti-fungal drugs. In this context, polysaccharides as main components of the fungal cell wall have been the subject of intense scientific study over the years. The information gained from the knowledge of the structure of these macrobiomolecules could therefore be valuable in elucidating the mechanisms of their biosynthesis in the cell walls of pathogenic fungi infecting plants and animals alike. Determination of the chemical structures of these polysaccharides (endo) is preceded by their extraction and purification. The extractions, generally lead to neutral and/ or alkaline soluble biopolymers in groups according to their solubilities. Mixtures of polysaccharides in these extracts can then be purified by a combination of chemical and chromatographic methods. Following purification, the polysaccharides, considered homogeneous, can be characterized structurally using conventional techniques of carbohydrate chemistry, such as hydrolysis, methylation analysis, and FT-IR, 13C- and 1H- NMR spectroscopy. This review surveys the main scientific literature that characterizes polysaccharides constituting the fungal cell wall.
A parede celular é uma estrutura rígida, essencial para a sobrevivência dos fungos, e o conhecimento de sua composição poderá ser útil para o desenvolvimento de novas drogas antifúngicas. Neste contexto, os polissacarídeos estão entre os seus principais componentes que têm sido alvos de intensa investigação científica. As informações, provenientes do conhecimento da estrutura dessas macromoléculas, poderão ser valiosas para o entendimento dos mecanismos de síntese da parede celular de fungos causadores de patologias, tanto em plantas quanto em animais. A determinação da estrutura química de um endopolissacarídeo deve ser precedida por experimentos de extração e purificação. As extrações, geralmente conduzidas em soluções aquosas neutras e/ou alcalinas, separaram as biomoléculas em grupos, de acordo com suas solubilidades. Os extratos, contendo mistura de polissacarídeos, podem ser purificados pela combinação de métodos químicos e cromatográficos. Após purificação, os polissacarídeos considerados homogêneos são caracterizados estruturalmente com as técnicas convencionais em química de carboidratos tais como hidrólise, metilação, FT-IR e RMN-13C e 1H. Esta revisão tem como proposta efetuar um levantamento das principais investigações científicas conduzidas com o objetivo de caracterizar polissacarídeos da parede celular fúngica.
Resumo
Study the prevalence of gonorrhoea among a female population in the city of Londrina; values between 2,3% and 15,4% were found. The general prevalence of vaginal discharge in the population was 68,5%. An attempt to implant a routine procedure for detecting gonorrhoea among the studied population was considered inviable.
Estudo da prevalência de gonorréia em uma população feminina adulta de um bairro de Londrina, onde existe uma unidade sanitária. A prevalência encontrada varia entre 2,3 e 15,4%. Constatou-se também que a prevalência geral de corrimento vaginal na população foi de 68,5%. Procurou-se verificar a possibilidade de se implantar na unidade sanitária um método rotineiro, rápido e eficaz de detecção de gonorréia em corrimentos vaginais, usando-se o Hospital Universitário como serviço de referência. O método, nas condições atuais, mostrou-se inviável.
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Study the prevalence of gonorrhoea among a female population in the city of Londrina; values between 2,3% and 15,4% were found. The general prevalence of vaginal discharge in the population was 68,5%. An attempt to implant a routine procedure for detecting gonorrhoea among the studied population was considered inviable.
Estudo da prevalência de gonorréia em uma população feminina adulta de um bairro de Londrina, onde existe uma unidade sanitária. A prevalência encontrada varia entre 2,3 e 15,4%. Constatou-se também que a prevalência geral de corrimento vaginal na população foi de 68,5%. Procurou-se verificar a possibilidade de se implantar na unidade sanitária um método rotineiro, rápido e eficaz de detecção de gonorréia em corrimentos vaginais, usando-se o Hospital Universitário como serviço de referência. O método, nas condições atuais, mostrou-se inviável.