Uso da água de coco em pó no processo de congelação do sêmen suíno: III. Avaliação do diluente ACP-103® na ressuspensão / The coconut water powdered use in the swine semen freezing process: III. Evaluation of the ACP-103® extender in resuspension

O sêmen de oito reprodutores suínos foi coletado através da técnica da mão enluvada, sendo utilizado 10,2 x109 sptz do ejaculado total para cada tratamento. A qualidade do sêmen foi avaliada pela concentração (x106 sptz/mL), volume (mL), total de espermatozoides (x109 sptz), vigor espermático (0 a 5), percentagem de células móveis (%), morfologia espermática (%) e integridade de membrana (%). O sêmen foi diluído no Beltsville Thawing Solution (BTS) e na água de coco em pó (ACP) com antibiótico, em partes iguais (1:1). O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, utilizando-se o teste de Mann Whitney, com análise das diferenças entre médias feita por variância multifatorial com o General Linear Models do programa Statistical Analysis System (SAS 6.03), a um intervalo de confiança de p<0,05. A água de coco proporcionou um meio de conservação que manteve um maior número de espermatozoides com acrossoma intacto, podendo ser recomendado para uso rotineiro em laboratórios de reprodução. De uma maneira geral as modificações propostas pelo protocolo de trabalho não apresentaram os efeitos esperados, tendo o ACP apresentado melhores resultados em relação ao uso do BTS.(AU)

The semen of eight male swine was collected by the glove-hand technique. A total of 10.2 x109 sptz was collected and distributed among the treatments. The semen quality was evaluated by means of concentration (x106 sptz/mL), volume (mL), total of spermatozoa (x109 sptz), spermatic strength (0 to 5), motility (%) and morphology (%) and membrane integrity of the spermatozoa (%). The semen was diluted in Beltsville Thawing Solution (BTS) or in coconut water (ACP), in dilution of 1:1. Randomized block design was used and the Mann-Whitney test was performed in the Lineal General Models of Statistical Analysis System Program (SAS 6.03). A 5% significance level was adopted. The coconut water extender provided the maintenance of a larger number of spermatozoids with intact acrosome and could be recommended for routine use in reproduction laboratories. However, the modifications proposed in the present study did not present as good results as use of the ACP did in comparison with the BTS solution.(AU)

Uso da água de coco em pó no processo de congelação do sêmen suíno: III. Avaliação do diluente ACP-103® na ressuspensão / The coconut water powdered use in the swine semen freezing process: III. Evaluation of the ACP-103® extender in resuspension

O sêmen de oito reprodutores suínos foi coletado através da técnica da mão enluvada, sendo utilizado 10,2 x109 sptz do ejaculado total para cada tratamento. A qualidade do sêmen foi avaliada pela concentração (x106 sptz/mL), volume (mL), total de espermatozoides (x109 sptz), vigor espermático (0 a 5), percentagem de células móveis (%), morfologia espermática (%) e integridade de membrana (%). O sêmen foi diluído no Beltsville Thawing Solution (BTS) e na água de coco em pó (ACP) com antibiótico, em partes iguais (1:1). O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, utilizando-se o teste de Mann Whitney, com análise das diferenças entre médias feita por variância multifatorial com o General Linear Models do programa Statistical Analysis System (SAS 6.03), a um intervalo de confiança de p<0,05. A água de coco proporcionou um meio de conservação que manteve um maior número de espermatozoides com acrossoma intacto, podendo ser recomendado para uso rotineiro em laboratórios de reprodução. De uma maneira geral as modificações propostas pelo protocolo de trabalho não apresentaram os efeitos esperados, tendo o ACP apresentado melhores resultados em relação ao uso do BTS.

The semen of eight male swine was collected by the glove-hand technique. A total of 10.2 x109 sptz was collected and distributed among the treatments. The semen quality was evaluated by means of concentration (x106 sptz/mL), volume (mL), total of spermatozoa (x109 sptz), spermatic strength (0 to 5), motility (%) and morphology (%) and membrane integrity of the spermatozoa (%). The semen was diluted in Beltsville Thawing Solution (BTS) or in coconut water (ACP), in dilution of 1:1. Randomized block design was used and the Mann-Whitney test was performed in the Lineal General Models of Statistical Analysis System Program (SAS 6.03). A 5% significance level was adopted. The coconut water extender provided the maintenance of a larger number of spermatozoids with intact acrosome and could be recommended for routine use in reproduction laboratories. However, the modifications proposed in the present study did not present as good results as use of the ACP did in comparison with the BTS solution.

Uso do diluente BTS no processo de congelação do sêmen suíno: II. Modificações na técnica / The BTS extender use in the swine semen freezing process: II. Modificantions in the technique

O sêmen de sete reprodutores foi coletado utilizando a técnica da mão enluvada sendo utilizado o ejaculado total. De cada ejaculado foi retirado 10,2 x109 sptz para cada tratamento. A qualidade do sêmen foi avaliada pela concentração (x106 sptz/mL), volume (mL), total de espermatozoides (x109 sptz), vigor espermático (0 a 5), porcentagem de células móveis (%), morfologia espermática (%) e integridade de membrana espermática (%). O sêmen foi diluído no Beltsville Thawing Solution (BTS). O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, utilizando-se o teste de Mann Whitney, com análise das diferenças entre médias feita por variância multifatorial com o General Linear Models do programa Statistical Analysis System (SAS 6.03), a um intervalo de confiança de p<0,05. Vários tratamentos foram propostos: diferentes volumes do diluente de resfriamento/congelação (18mL, 9mL, 6mL, 4mL); diferentes açúcares (glicose, frutose, lactose, sacarose); diferentes crioprotetores (glicerol, etileno glicol, propileno glicol, óleo mineral) e uso da gema de ovo em pó. O menor volume do diluente gema de ovo usado sem influenciar negativamente a qualidade espermática foi de 6 mL. A glicose obteve os melhores resultados, particularmente na de porcentagem de membrana intacta (25%). Dentre os crioprotetores utilizados, é desaconselhável o uso do óleo vegetal devido a menor motilidade espermática (15%) e de células com membrana intacta (0%). O uso da gema de ovo em pó pode ser recomendado devido a sua melhor qualidade sanitária. De uma maneira geral as modificações propostas pelo protocolo de trabalho não apresentaram os efeitos esperados.

The semen of seven swine males was collected by the glove handled technique, being used the total ejaculated. It was separate from each one a total of 10,2 x109 sptz, distributed among the treatments. The semen quality was evaluated by the concentration (x106 sptz/mL), volume (mL), total of spermatozoas (x109 sptz), spermatic vigour (0 to 5), movable cells (%), spermatic morphology (%) and spermatic membrane integrity (%). The semen was diluted in Beltsville Thawing Solution. The experimental statistic test used was the maybe blocks, with the Mann Whitney analysis, in the Lineal General Models of Statistical Analysis System Program (SAS 6.03), with a trust interval of p<0,05. Several treatments were proposed: differents volumes of freezing extender (18mL, 9mL, 6mL, 4mL); differents sugars (glucose, fructose, lactose, sucrose); different cryoprotectants (glycerol, ethylene glycol, propylene glycol, mineral oil) and use of yolk egg powdered. The smallest volume in the egg yolk extender used without negative influence in the spermatic quality was 6mL. The glucose obtained the best results, particularly in the percentage of intact membrane (25%). Among the cryoprotectants used, the use of the mineral oil is inadvisable due the smaller spermatic mobility (15%) and the cells with intact membrane (0%). The use of the egg yolk powdered can be recommended due to your best sanitary quality. In a general way the modifications proposed by the work protocol they didn't present the expected effects.

Uso do diluente BTS no processo de congelação do sêmen suíno: II. Modificações na técnica / The BTS extender use in the swine semen freezing process: II. Modificantions in the technique

O sêmen de sete reprodutores foi coletado utilizando a técnica da mão enluvada sendo utilizado o ejaculado total. De cada ejaculado foi retirado 10,2 x109 sptz para cada tratamento. A qualidade do sêmen foi avaliada pela concentração (x106 sptz/mL), volume (mL), total de espermatozoides (x109 sptz), vigor espermático (0 a 5), porcentagem de células móveis (%), morfologia espermática (%) e integridade de membrana espermática (%). O sêmen foi diluído no Beltsville Thawing Solution (BTS). O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, utilizando-se o teste de Mann Whitney, com análise das diferenças entre médias feita por variância multifatorial com o General Linear Models do programa Statistical Analysis System (SAS 6.03), a um intervalo de confiança de p<0,05. Vários tratamentos foram propostos: diferentes volumes do diluente de resfriamento/congelação (18mL, 9mL, 6mL, 4mL); diferentes açúcares (glicose, frutose, lactose, sacarose); diferentes crioprotetores (glicerol, etileno glicol, propileno glicol, óleo mineral) e uso da gema de ovo em pó. O menor volume do diluente gema de ovo usado sem influenciar negativamente a qualidade espermática foi de 6 mL. A glicose obteve os melhores resultados, particularmente na de porcentagem de membrana intacta (25%). Dentre os crioprotetores utilizados, é desaconselhável o uso do óleo vegetal devido a menor motilidade espermática (15%) e de células com membrana intacta (0%). O uso da gema de ovo em pó pode ser recomendado devido a sua melhor qualidade sanitária. De uma maneira geral as modificações propostas pelo protocolo de trabalho não apresentaram os efeitos esperados. (AU)

The semen of seven swine males was collected by the glove handled technique, being used the total ejaculated. It was separate from each one a total of 10,2 x109 sptz, distributed among the treatments. The semen quality was evaluated by the concentration (x106 sptz/mL), volume (mL), total of spermatozoas (x109 sptz), spermatic vigour (0 to 5), movable cells (%), spermatic morphology (%) and spermatic membrane integrity (%). The semen was diluted in Beltsville Thawing Solution. The experimental statistic test used was the maybe blocks, with the Mann Whitney analysis, in the Lineal General Models of Statistical Analysis System Program (SAS 6.03), with a trust interval of p<0,05. Several treatments were proposed: differents volumes of freezing extender (18mL, 9mL, 6mL, 4mL); differents sugars (glucose, fructose, lactose, sucrose); different cryoprotectants (glycerol, ethylene glycol, propylene glycol, mineral oil) and use of yolk egg powdered. The smallest volume in the egg yolk extender used without negative influence in the spermatic quality was 6mL. The glucose obtained the best results, particularly in the percentage of intact membrane (25%). Among the cryoprotectants used, the use of the mineral oil is inadvisable due the smaller spermatic mobility (15%) and the cells with intact membrane (0%). The use of the egg yolk powdered can be recommended due to your best sanitary quality. In a general way the modifications proposed by the work protocol they didn't present the expected effects. (AU)

Uso da água de coco em pó no processo de congelação do sêmen suíno: I. Controle durante o abaixamento da temperatura entre 30 e 15 °C / The coconut water powdered use in the swine semen freezing process: I. Controls during the temperature fall

O sêmen de oito reprodutores foi coletado utilizando a técnica da mão enluvada sendo utilizado o ejaculado total. De cada ejaculado foi retirado 10,2 x109 sptz para cada tratamento. A qualidade do sêmen foi avaliada pela concentração (x106 sptz/mL), volume (mL), total de espermatozoides (x109 sptz), vigor espermático (0 a 5), porcentagem de células móveis (%), morfologia espermática (%) e integridade de membrana (%). O sêmen foi diluído no Beltsville Thawing Solution (BTS) e na água de coco em pó (ACP). O ejaculado foi diluído em partes iguais (1:1) e incubado entre 30 oC e 15 oC. Os exames da integridade do acrossoma e vitalidade foram feitos no sêmen puro e diluído pela técnica do azul de bromo-fenol em aumento de 1000x. A integridade da membrana plasmática foi avaliada pela coloração fluorescente em microscopia óptica de campo escuro. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, utilizando-se os testes de Mann Whitney, Tukey e Student, com análise das diferenças entre médias feita por variância multifatorial com o General Linear Models do programa Statistical Analysis System (SAS 6.03), a um intervalo de confiança de p<0,05. As avaliações do sêmen in natura, apresentaram valores médios de vigor espermático (4,2) e de porcentagem de espermatozoides móveis (92%) acima dos parâmetros mínimos exigidos (3,0 e 70%) para sua utilização em programas de inseminação artificial. Na característica porcentagem de células móveis, o ACP (74%) foi significativamente melhor que o BTS (67%) a 15 oC. Os melhores resultados foram obtidos com o uso do diluente ACP: acrossoma intacto (49,2%); células vivas (62,5%) e membrana íntegra (65,6%). O diluente ACP proporcionou um meio de conservação que manteve maior número de espermatozoides vivos com membranas íntegras, podendo ser recomendado para uso(...)

The semen of eight swine males was collected by the glove handled technique, being used the total ejaculated. It was retired from each ejaculated a total of 10.2 x109 sptz, distributed among the treatments. The semen quality was evaluated by the concentration (x106 sptz/mL), volume (mL), total of spermatozoa (x109 sptz), spermatic vigour (0 to 5), movable cells (%), spermatic morphology (%) and membrane integrity (%). The semen was diluted in Beltsville Thawing Solution (BTS) and the coconut water powdered extender (ACP), in the same parts (1:1) and incubated between 30 oC and 15 oC. The exams of acrossome integrity and vitality, were made in the pure and diluted semen, by the bromophenol blue technique in increase at 1000x. The integrity of plasmatic membranes was evaluated by the fluorescent coloration in optical microscopy of dark field. The experimental statistic test used was the maybe blocks, with the Mann Whitney, Tukey and Student analysis, in the Lineal General Models of Statistical Analysis System Program (SAS 6.03), with a trust interval of p<0.05. The in nature semen evaluations, presented medium values of spermatic vigour (4.2) and the movable spermatozoa (92%) above the minimum demanded parameters (3.0 and 70%) for your use in artificial insemination programs. In the percentage of movable cells characteristic, the ACP extender (74%) it was significantly better than BTS (67%) at 15 oC. The best results were obtained with use of the ACP extender: intact acrossome (49.2%); alive cells (62.5%) and complete membrane (65.6%). The coconut water extender provided a conservation middle that maintained a larger number of alive spermatozoids with integrate membranes and could be recommended for routine use in reproduction laboratories. The ACP extender demonstrated to be a good middle of swine spermatozoa conservation in temperatures between 17 and 15 °C, and may be indicated for use in artificial insemination programs.

Uso da água de coco em pó no processo de congelação do sêmen suíno: I. Controle durante o abaixamento da temperatura entre 30 e 15 °C / The coconut water powdered use in the swine semen freezing process: I. Controls during the temperature fall

O sêmen de oito reprodutores foi coletado utilizando a técnica da mão enluvada sendo utilizado o ejaculado total. De cada ejaculado foi retirado 10,2 x109 sptz para cada tratamento. A qualidade do sêmen foi avaliada pela concentração (x106 sptz/mL), volume (mL), total de espermatozoides (x109 sptz), vigor espermático (0 a 5), porcentagem de células móveis (%), morfologia espermática (%) e integridade de membrana (%). O sêmen foi diluído no Beltsville Thawing Solution (BTS) e na água de coco em pó (ACP). O ejaculado foi diluído em partes iguais (1:1) e incubado entre 30 oC e 15 oC. Os exames da integridade do acrossoma e vitalidade foram feitos no sêmen puro e diluído pela técnica do azul de bromo-fenol em aumento de 1000x. A integridade da membrana plasmática foi avaliada pela coloração fluorescente em microscopia óptica de campo escuro. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, utilizando-se os testes de Mann Whitney, Tukey e Student, com análise das diferenças entre médias feita por variância multifatorial com o General Linear Models do programa Statistical Analysis System (SAS 6.03), a um intervalo de confiança de p<0,05. As avaliações do sêmen in natura, apresentaram valores médios de vigor espermático (4,2) e de porcentagem de espermatozoides móveis (92%) acima dos parâmetros mínimos exigidos (3,0 e 70%) para sua utilização em programas de inseminação artificial. Na característica porcentagem de células móveis, o ACP (74%) foi significativamente melhor que o BTS (67%) a 15 oC. Os melhores resultados foram obtidos com o uso do diluente ACP: acrossoma intacto (49,2%); células vivas (62,5%) e membrana íntegra (65,6%). O diluente ACP proporcionou um meio de conservação que manteve maior número de espermatozoides vivos com membranas íntegras, podendo ser recomendado para uso(...)(AU)

The semen of eight swine males was collected by the glove handled technique, being used the total ejaculated. It was retired from each ejaculated a total of 10.2 x109 sptz, distributed among the treatments. The semen quality was evaluated by the concentration (x106 sptz/mL), volume (mL), total of spermatozoa (x109 sptz), spermatic vigour (0 to 5), movable cells (%), spermatic morphology (%) and membrane integrity (%). The semen was diluted in Beltsville Thawing Solution (BTS) and the coconut water powdered extender (ACP), in the same parts (1:1) and incubated between 30 oC and 15 oC. The exams of acrossome integrity and vitality, were made in the pure and diluted semen, by the bromophenol blue technique in increase at 1000x. The integrity of plasmatic membranes was evaluated by the fluorescent coloration in optical microscopy of dark field. The experimental statistic test used was the maybe blocks, with the Mann Whitney, Tukey and Student analysis, in the Lineal General Models of Statistical Analysis System Program (SAS 6.03), with a trust interval of p<0.05. The in nature semen evaluations, presented medium values of spermatic vigour (4.2) and the movable spermatozoa (92%) above the minimum demanded parameters (3.0 and 70%) for your use in artificial insemination programs. In the percentage of movable cells characteristic, the ACP extender (74%) it was significantly better than BTS (67%) at 15 oC. The best results were obtained with use of the ACP extender: intact acrossome (49.2%); alive cells (62.5%) and complete membrane (65.6%). The coconut water extender provided a conservation middle that maintained a larger number of alive spermatozoids with integrate membranes and could be recommended for routine use in reproduction laboratories. The ACP extender demonstrated to be a good middle of swine spermatozoa conservation in temperatures between 17 and 15 °C, and may be indicated for use in artificial insemination programs.(AU)

Uso do diluente água de coco em pó (ACP-103®) na conservação prolongada do sêmen do varrão: avaliação in vitro e in vivo / Use of powder coconut water as extender (ACP-103®) for boar semen longer preservation: in vitro and in vivo evaluations

O sêmen de oito reprodutores foi coletado e de cada ejaculado separou-se um total de 1,75x10(9)sptz, com concentração de 35x10(6)sptz/mL. Usou-se o Beltsville Thawing Solution (BTS) como controle para testar o diluente água de coco em pó (ACP). O dia de coleta foi o dia zero (D0), sendo o sêmen conservado durante cinco dias, com análises diárias no D0 e nos quatro dias seguintes (D1, D2, D3 e D4). A avaliação da qualidade espermática baseou-se nos resultados do vigor espermático, da porcentagem de células móveis, da morfologia espermática, da integridade da membrana plasmática e dos resultados de fertilidade. As avaliações do vigor espermático (4,1) e da porcentagem de espermatozoides móveis (91 por cento) ficaram acima dos parâmetros mínimos exigidos (3,0 e 70 por cento) para sua utilização em programas de inseminação artificial, pois não houve influência sobre as variáveis analisadas pelo protocolo experimental. O resultado médio da resistência osmótica foi de 71,3 por cento de espermatozoides com cauda enrolada. Não houve diferenças entre os dois diluentes testados para a característica células com acrossoma intacto (BTS = 67,1 por cento; ACP = 71,2 por cento). O sêmen diluído em ACP apresentou maior número de células vivas (77,7 por cento) com membrana plasmática íntegra (74,2 por cento) após a conservação. A escolha do diluente ACP é aconselhável para uso de rotina em laboratórios que trabalhem com conservação de sêmen suíno. Apesar dos bons resultados in vitro obtidos com o diluente ACP, o BTS apresentou os melhores resultados de fertilidade, 86,7 por cento e 96,7 por cento, respectivamente.(AU)

The semen of eight boars was collected and a total of 1.75x10(9) spermatozoa were separated from each ejaculate, obtaining a concentration of 35x10(6)sptz/mL. The Beltsville Thawing Solution (BTS) was used as control, being tested the powder coconut water as extender (PCW). The day of collection was considered day zero (D0), and the semen was conserved for five days, with analyses on D0 and on four subsequent days (D1, D2, D3, and D4). The evaluation of spermatic quality was based on the results of spermatozoa vigour, cells motility, spermatic morphology, plasmatic membrane integrity, and fertility. The evaluations of the in natura semen presented mean values of spermatozoa vigour (4.1) and mobile spermatozoids percentage (91 percent) above the demanded minimum parameters (3.0 and 70 percent) for its use in artificial insemination programs without influencing on the analyzed variables. The mean results of the osmotic resistance were excellent, with 71.3 percent of spermatozoids with coiled tail. There were no differences between the two extenders tested for the characteristic cells with intact acrossome (BTS = 67.1 percent; PCW = 71.2 percent). The semen diluted in PCW extender presented a higher number of alive cells (77.7 percent) with a complete plasmatic membrane (74.2 percent) after conservation period. The choice of PCW extender is advisable for the routine use in laboratories that work with conservation of swine semen. In spite of the good results in vitro with the PCW extender, the BTS presented the best fertility results, 86.7 percent and 96.7 percent, respectively.(AU)

Utilização de uma técnica rápida em camada delgada para avaliação da atividade micobactericida de desinfetantes químicos

ABSTRACT The mycobactericidal activity of sodium hypochlorite (2.5% of active chlorine) was evaluated against a strain of Mycobacterium bovis using the modified thin-layer Middlebrook 7H11 cultivation technique and it was compared to the test made in tubes with Stonebrink medium. The assays were performed either in the presence or absence of organic matter, at temperatures of 4° C and 21 ± 2° C. The colonycounting results were transformed into reduction percentages (Tabela 1) which were compared between the two techniques, showing the disinfectant had similar reduction percentages between plates and tubes in all conditions tested (Mann-Whitney test p 0.05; = 5%). The 2.5% sodium hypochlorite had a mycobactericidal activity of 100% in all conditions, except when in the presence of organic matter and at 4º C (Kurskall-Wallis test and Dunn test, p > 0.05). The reduction percentage was higher when in the absence of organic matter and at 21 ± 2° C (Mann-Whitney test p > 0.05). The modified thin layer cultivation technique was practicable for the realization of the disinfectant tests and allowed an earlier visualization of the colonies (7 days medium). The 2.5% sodium hypochlorite had its mycobactericidal activity diminished when in the presence of organic matter and at the temperature of 4° C.

RESUMO A atividade micobactericida do hipoclorito de sódio (2,5 % de cloro ativo) foi avaliada frente a uma estirpe de Mycobacterium bovis utilizando-se a técnica de cultivo em camada delgada de ágar Middlebrook 7H11 modificado, a qual foi comparada ao teste padrão realizado em tubos contendo meio de Stonebrink. Os testes foram realizados na presença e ausência de matéria orgânica e em duas temperaturas (21 ± 2° C e à 4° C). Os resultados obtidos nas contagens das unidades formadoras de colônias (U.F.C) nas placas e tubos foram transformados em percentual de redução (Tabela 1) os quais foram comparados entre as duas técnicas, mostrando que o hipoclorito de sódio apresentou percentuais iguais entre as placas e os tubos em todas as condições testadas (teste de Mann-Wihtney p > 0,05; = 5%). O desinfetante atingiu atividade micobactericida de 100 % em todas as condições, exceto quando à temperatura de 4° C e presença de matéria orgânica (teste de Kruskal-Wallis e teste de Dunn; p 0,05 ). O percentual de redução foi maior quando na ausência de matéria orgânica e à temperatura ambiente (teste de Mann-Wihtney; p 0,05). A técnica de cultivo em camada delgada mostrou-se viável para realização de testes de desinfetantes e permitiu uma visualização precoce das micobactérias (média de 7 dias). O hipoclorito de sódio 2,5% teve a atividade micobactericida diminuída quando na presença de matéria orgânica e à temperatura de 4° C.