Resumo
A medicina comparativa torna-se cada vez mais importante para obtenção de estudos aprofundados em diversas áreas incluindo a oncologia, possibilitando melhor conhecimento da genética do câncer e desenvolvimentos de novas terapias. A expressão do IGF2BP-1 tem sido correlacionada com lesões pré-neoplásicas e neoplasias de maior agressividade, além de estar correlacionada com mau prognóstico em pacientes oncológicos com melanomas, sarcomas e carcinomas. A proposta geral desta pesquisa é identificar a expressão do IGF2BP-1 em linhagens celulares de osteossarcoma (OSA) canino e murino, bem como correlacionar sua expressão com o comportamento celular e avaliar a intensidade de marcação desta proteína através de imuno-histoquímica em amostras de OSA canino. Os resultados deste ensaio demonstraram que o IGF2BP-1 reduziu o potencial de formação de colônias, aumentou o potencial de invasão e migração celular e gerou aumento da expressão dos genes ABCG2, AXIN2, BTrCP, VEGF, CD133 e C-MYC em células de OSA murinho. A expressão deste gene em células de cão aumentou a formação de colônias, reduziu o potencial de invasão e migração celular e o silenciamento parcial do IGF2BP-1 gerou redução da expressão dos genes CCND1, CD133, CMYC e FZD6 em células de OSA canino. O silenciamento parcial do IGF2BP-1 gerou aumento dos genes AXIN-2 e VEGF em células de OSA canino. A imuno-histoquímica é um método eficaz para detecção do IGF2BP-1 em amostras de OSA canino evidenciando marcação citoplasmática forte na maioria das amostras, por meio de análise qualitativa. Com este estudo, podemos entender melhor a complexidade genética do câncer, concluindo que o IGF2BP-1 induz a modificações epigenéticas celulares levando a alterações indutoras ou supressoras tumorais através da ativação de diversas vias que contribuem para regulação do metabolismo celular, proliferação, angiogênese, quimiorresistência entre outras características que podem contribuir para o processo de tumorigênese.
Comparative medicine is becoming increasingly important to obtain studies in several areas including oncology, enabling better knowledge of cancer genetics and developments of new therapies. The expression of IGF2BP-1 has been correlated with pre-neoplastic lesions and neoplasms with more aggressiveness, in addition to being correlated with poor prognosis in cancer patients with melanomas, sarcomas and carcinomas. The general proposal of this research is to identify the expression of IGF2BP-1 in canine and murine osteosarcoma (OSA) cell lines, as well as to correlate its expression with cellular behavior to evaluate the staning intensity of this protein through immunohistochemistry in samples of canine OSA. The results of this assay demonstrated that IGF2BP-1 reduced the potential for colony formation, increased cell invasion and migration potential, and increased expression of genes ABCG2, AXIN2, BTrCP, VEGF, CD133 and C-MYC in murine OSA cells lines. Expression of this gene in canine OSA cells increased colony formation, reduced potential of cell invasion and migration, and partial silencing of IGF2BP-1 generated reduced expression of the CCND1, CD133, CMYC and FZD6 genes in canine OSA cells. Partial silencing of IGF2BP-1 generated increased AXIN-2 and VEGF genes in canine OSA cells. Immunohistochemistry is an effective method for detecting IGF2BP-1 in canine OSA samples showing strong cytoplasmic staining in most of samples through qualitative analysis. In this study, we can better understand the genetic complexity of cancer, concluding that IGF2BP-1 induces cellular epigenetic changes leading to tumor-inducing or suppressive changes through the activation of several pathways that contribute to the regulation of cellular metabolism, proliferation, angiogenesis, chemoresistance among other features that may contribute to the process of tumorigenesis.
Resumo
O Cloridrato de Doxorrubicina(DOX) é considerado um dos agentes mais ativos disponíveis para o tratamento quimioterápico do câncer, além de ser um dos antineoplásicos mais utilizados para o tratamento de tumor venéreo transmissível canino resistente à vincristina. Com intuito de melhor conhecimento dos efeitos adversos promovidos pelo uso da DOX em cães, foi delineado um estudo composto por um grupo de 10 cães domésticos, do sexo feminino, sem raça definida, com peso entre 4,5 e 24 kg e idade média de 5 anos, portadores de TVT de ocorrência natural, confirmados por avaliação citológica, sem metástases clinicamente detectáveis ou quimioterapia prévia, que receberam o Cloridrato de Doxorrubicina na dose de 30 mg/m2 ou 1mg/kg para os animais com peso inferior a 15kg. Foram avaliados os efeitos da DOX sob o sangue periférico e medula óssea, além de avaliação da bioquímica sanguínea e resposta de citotoxicidade tumoral. A determinação da toxicidade gerada pelo tratamento quimioterápico com DOX baseou-se nos critérios de efeitos adversos estabelecidos pelo consenso da cooperativa de oncologia veterinária (VCOOG). Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística pelo método de variância com medidas repetidas; regressão linear, quadrática e cúbica e quando houve diferença significativa entre médias (P < 0,05), estas foram comparadas entre si pelo teste de Tukey. Os valores da série vermelha do sangue não apresentaram alterações significativas entre os momentos; a contagem de leucócitos totais foi significativamente maior no momento inicial (M0) quando comparada com o 14º dia após a quarta sessão (M7); os neutrófilos segmentados apresentaram redução significativa no 14º dia após a primeira e após a terceira sessão quimioterápica quando comparados com o momento inicial; os valores de linfócitos, basófilos, eosinófilos e neutrófilos bastonetes não diferiram entre os momentos avaliados. No mielograma, as contagens de rubrícitos, metarubrícitos apresentaram aumento significativo 21 dias após o término do tratamento quimioterápico (M8); a relação mieloide:eritroide apresentou diminuição significativa ao final do tratamento (M8); os neutrófilos bastonetes e neutrófilos segmentados, demonstraram redução dos valores no M8. Os parâmetros bioquímicos (ALT, AST, FA, albumina, creatinina, ureia e proteína total), mesmo variação dos valores estatisticamente significativos entre os momentos, permaneceram dentro dos parâmetros de normalidade para a espécie canina. A mensuração tumoral em cm² realizada através de ultrassonografia confirmou que o tumor foi significativamente maior no M0 diferenciando-se dos demais momentos (M2 M8) em virtude de uma alta resposta de citotoxicidade tumoral logo após a primeira sessão quimioterápica com DOX. Os resultados obtidos neste estudo evidenciaram que o uso de DOX na dose cumulativa de 120mg/m² no tratamento de cães portadores de TVT foi eficaz para a cura do tumor na maioria dos pacientes, e o grau de toxicidade do fármaco não promoveu alterações clínicas graves.
Doxorubicin (DOX) is considered one of the most active agent avaliable for chemotherapy treatment of cancer, in addition to be one of the most antineoplastic drug used for the treatment of canine Transmissible Venereal Tumor resistant to vincristine. For a better understanding of the side effects caused by the use of DOX in dogs, we did an study composed by 10 domestic, female, mixed breed dogs with Transmissible Venereal Tumor of natural ocurrence, diagnosed by cytology, with no evidence of metastasis and without previous chemotherapy treatment, that received DOX in dose of 30 mg/m² ou 1 mg/kg for animals weighing less than 15 kg. Were evaluated the effects of DOX in the peripheral blood and bone marrow, blood biochemistry and tumor cytotoxicity response. In order to standardize the toxicity level, we applied the terminology based on the addapted tables of the veterinary co-operative oncology group-Common terminology criteria for adverse events VCOG-CTCAE). Statistical data were analyzed by the variance method with repeated measures; linear regression, quadratic and cubic and when there was a significant difference between means (P <0.05), these were compared by Tukey test. The values of red blood series did not change significantly between moments; the white blood cell count was significantly higher at baseline (M0) when compared to the 14th day after the fourth session (M7); segmented neutrophils had significant reduction on the 14th day after the first and third chemotherapy session when compared with the initial moment; lymphocytes, basophils, eosinophils and neutrophils rods did not differ between the moments. In The myelogram, rubrícitos, metarubrícitos ratio, showed a significant increase 21 days after the end of chemotherapy (M8), and myeloid: erythroid relationship showed significantly decreased after the treatment (M8); neutrophils rods and segmented neutrophils showed reduced values in M8. Biochemical parameters (ALT, AST, AP, albumin, creatinine, urea and total protein), even with a statistically significant variation in values between moments, remained within normal parameters for dogs. The tumor size were measured in cm² by ultrasound and confirm that was significantly higher in M0, differing from the other moments (M2 M8) because of a high response tumor cytotoxicity after the first chemotherapy session with DOX. The results of this study showed that the use of DOX in cumulative dose of 120mg/m² in the treatment of dogs with TVT was effective in tumor cure in most patients, and the degree of toxicity of the drug did not cause clinically significant changes.