Alternatives for obtaining a continuous cell line from Apis mellifera / Alternativas para a obtenção de uma linhagem celular contínua de abelhas Apis mellifera

In worldwide there are reports of a significant decrease in colonies of the species Apis mellifera, caused by several factors, including viral infections. In order to study and diagnose illnesses caused by viruses, in vitro cell culture is used as a valuable tool. Yet, there are still no immortalized cell lines of honey bee Apis mellifera. Primary cell cultures are promising for this purpose and can supply the lack of continuous strains, but their establishment is difficult and laborious, which often makes them unfeasible for many research centers. Through the use of cell immortalization techniques, it is possible to develop continuous cell lines and thus benefit, in different ways, research related to different species of bees. The choice of technique is challenging, since in addition to the ability to remain viable for countless passages, cells must keep the genotype and phenotype similar or identical to the original tissue. This review intends to present methodologies that can be used to immortalize Apis mellifera cells, aiming to establish a cell line. The genotypic and phenotypic implications of each technique are evaluated, and the purpose of the cell line to be developed.

Ao redor do mundo há relatos da diminuição significativa de colônias da espécie Apis mellifera, causada por diversos fatores, incluindo infecções virais. Para estudo e diagnóstico de enfermidades causadas por vírus utiliza-se, como uma ferramenta valiosa, o cultivo celular in vitro. Contudo, ainda não existem linhagens celulares imortalizadas de abelhas Apis mellifera. Os cultivos celulares primários são promissores para este fim e podem suprir a falta de linhagens contínuas, porém seu estabelecimento é difícil e laborioso o que, muitas vezes, os torna inviáveis para muitos centros de pesquisa. Através do uso de técnicas de imortalização celular é possível desenvolver linhagens contínuas de células e assim beneficiar, de diversas formas, as pesquisas relacionadas às diferentes espécies de abelhas. A escolha da técnica é desafiadora, visto que, além da capacidade de permanecer viável por inúmeras passagens, as células devem manter o genótipo e fenótipo semelhante ou idêntico ao tecido original. O objetivo deste trabalho é apresentar metodologias que podem ser utilizadas para imortalização de células de Apis mellifera, visando o estabelecimento de uma linhagem celular. São avaliadas as implicações genotípicas e fenotípicas de cada técnica, e a finalidade da linhagem celular a ser desenvolvida.

Alternatives for obtaining a continuous cell line from Apis mellifera / Alternativas para a obtenção de uma linhagem celular contínua de abelhas Apis mellifera

ABSTRACT: In worldwide there are reports of a significant decrease in colonies of the species Apis mellifera, caused by several factors, including viral infections. In order to study and diagnose illnesses caused by viruses, in vitro cell culture is used as a valuable tool. Yet, there are still no immortalized cell lines of honey bee Apis mellifera. Primary cell cultures are promising for this purpose and can supply the lack of continuous strains, but their establishment is difficult and laborious, which often makes them unfeasible for many research centers. Through the use of cell immortalization techniques, it is possible to develop continuous cell lines and thus benefit, in different ways, research related to different species of bees. The choice of technique is challenging, since in addition to the ability to remain viable for countless passages, cells must keep the genotype and phenotype similar or identical to the original tissue. This review intends to present methodologies that can be used to immortalize Apis mellifera cells, aiming to establish a cell line. The genotypic and phenotypic implications of each technique are evaluated, and the purpose of the cell line to be developed.

RESUMO: Ao redor do mundo há relatos da diminuição significativa de colônias da espécie Apis mellifera, causada por diversos fatores, incluindo infecções virais. Para estudo e diagnóstico de enfermidades causadas por vírus utiliza-se, como uma ferramenta valiosa, o cultivo celular in vitro. Contudo, ainda não existem linhagens celulares imortalizadas de abelhas Apis mellifera. Os cultivos celulares primários são promissores para este fim e podem suprir a falta de linhagens contínuas, porém seu estabelecimento é difícil e laborioso o que, muitas vezes, os torna inviáveis para muitos centros de pesquisa. Através do uso de técnicas de imortalização celular é possível desenvolver linhagens contínuas de células e assim beneficiar, de diversas formas, as pesquisas relacionadas às diferentes espécies de abelhas. A escolha da técnica é desafiadora, visto que, além da capacidade de permanecer viável por inúmeras passagens, as células devem manter o genótipo e fenótipo semelhante ou idêntico ao tecido original. O objetivo deste trabalho é apresentar metodologias que podem ser utilizadas para imortalização de células de Apis mellifera, visando o estabelecimento de uma linhagem celular. São avaliadas as implicações genotípicas e fenotípicas de cada técnica, e a finalidade da linhagem celular a ser desenvolvida.

Alternatives for obtaining a continuous cell line from Apis mellifera / Alternativas para a obtenção de uma linhagem celular contínua de abelhas Apis mellifera

In worldwide there are reports of a significant decrease in colonies of the species Apis mellifera, caused by several factors, including viral infections. In order to study and diagnose illnesses caused by viruses, in vitro cell culture is used as a valuable tool. Yet, there are still no immortalized cell lines of honey bee Apis mellifera. Primary cell cultures are promising for this purpose and can supply the lack of continuous strains, but their establishment is difficult and laborious, which often makes them unfeasible for many research centers. Through the use of cell immortalization techniques, it is possible to develop continuous cell lines and thus benefit, in different ways, research related to different species of bees. The choice of technique is challenging, since in addition to the ability to remain viable for countless passages, cells must keep the genotype and phenotype similar or identical to the original tissue. This review intends to present methodologies that can be used to immortalize Apis mellifera cells, aiming to establish a cell line. The genotypic and phenotypic implications of each technique are evaluated, and the purpose of the cell line to be developed.(AU)

Ao redor do mundo há relatos da diminuição significativa de colônias da espécie Apis mellifera, causada por diversos fatores, incluindo infecções virais. Para estudo e diagnóstico de enfermidades causadas por vírus utiliza-se, como uma ferramenta valiosa, o cultivo celular in vitro. Contudo, ainda não existem linhagens celulares imortalizadas de abelhas Apis mellifera. Os cultivos celulares primários são promissores para este fim e podem suprir a falta de linhagens contínuas, porém seu estabelecimento é difícil e laborioso o que, muitas vezes, os torna inviáveis para muitos centros de pesquisa. Através do uso de técnicas de imortalização celular é possível desenvolver linhagens contínuas de células e assim beneficiar, de diversas formas, as pesquisas relacionadas às diferentes espécies de abelhas. A escolha da técnica é desafiadora, visto que, além da capacidade de permanecer viável por inúmeras passagens, as células devem manter o genótipo e fenótipo semelhante ou idêntico ao tecido original. O objetivo deste trabalho é apresentar metodologias que podem ser utilizadas para imortalização de células de Apis mellifera, visando o estabelecimento de uma linhagem celular. São avaliadas as implicações genotípicas e fenotípicas de cada técnica, e a finalidade da linhagem celular a ser desenvolvida.(AU)

Fatores de risco associados com a presença de infecções virais em aves domésticas na região Sul do Rio Grande do Sul, Brasil / Risk factors associated with the presence of viral diseases in domestic poultry in the Southern region of Rio Grande do Sul, Brazil

Background: The introduction of any infectious agent into an industrial or subsistence farm worries agribusiness owners in Brazilbecause it reduces product quality and increases treatment costs, although most diseases are untreatable, thus causing economic losseswith morbidity and mortality. Therefore, an epidemiological survey of viral diseases associated with poultry was developed by performing a detailed description of the risk factors that may be related to existing diseases using domestic poultry sample data recordedin the Regional Diagnostic Laboratory (LRD) of College of Veterinary Medicine of the Federal University of Pelotas (UFPel), RioGrande do Sul, Brazil, from 2000 to 2016.Materials, Methods & Results: Epidemiological and clinical-pathological data were collected and then compared with disease databy multivariate analysis using statistical EpiInfo version 6.04 and Microsoft Office Excel 2010 software. The frequencies and 95%confidence intervals (CI), association measures (odds ratio=OR and relative risk=RR), Chi-square test, and the results consideredsignificant with a value of P ≤ 0.05 were described. A total of 410 samples of domestic poultry were tested, and the results showed66 (16.1%) viral diseases. The following conditions were the most commonly found diseases in this study: Marek’s disease (42.4%),Infectious bursal disease (31.8%), Avian leukosis (16.6%), Avian pox (7.5%) and Avian infectious bronchitis (1.5%). In this articlewe discuss the most frequent viral diseases: Marek’s disease (DM) and Gumboro disease. It was also possible to conclude that birdswith Marek’s disease presented higher odds of developing nerve, tegumentary and locomotors signs (P ≤ 0.05). As well as, morelikely to present tumoriform lesions in the liver, spleen, kidneys and heart P ≤ 0.05, as well as lesions in the proventriculus, musclelesions and in the sciatic nerve P ≤ 0.05. Laying poultry...

Potencial antiviral e virucida da melitina e apamina contra herpesvírus bovino tipo 1 e vírus da diarreia viral bovina / Antiviral and virucidal potential of melittin and apamin against bovine herpesvirus type 1 and bovine viral diarrhea virus

A busca por alternativa aos fármacos sintéticos têm revelado descobertas no campo da farmacologia e, nesse sentido, melitina e apamina, dois constituintes do veneno de abelhas, foram descritas com várias ações farmacológicas. Este estudo objetivou avaliar in vitro as capacidades antiviral e virucida destes componentes. Para tanto, células MDBK (Madin Darby Bovine Kidney), após verificação das respectivas doses tóxicas por ensaio MTT ((3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo), foram cultivadas em microplacas e tratadas com diferentes concentrações de apamina, melitina e sua associação. Esse tratamento ocorreu antes e após a infecção com 0,1 MOI (multiplicidade de infecção) de cepas citopatogênicas de herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) cepa Los Angeles e vírus da diarreia viral bovina (BVDV) cepa NADL. Após incubação por 72 horas, 37oC, as células foram submetidas ao ensaio MTT para estimativa da viabilidade celular. Em experimento paralelo, placas que foram submetidas ao mesmo procedimento sofreram ciclo de congelamento e descongelamento das células, para rompimento das mesmas e mensuração dos títulos virais. O ensaio virucida foi realizado incubando-se suspensões de BoHV-1 e BVDV com as soluções de apamina, melitina e associação por 24 horas a 37oC e 22oC. O título viral foi avaliado às 0 horas, 1, 2, 4, 8 e 24 horas de incubação. A concentração citotóxica para 50% das células (CC50) de melitina foi 2,32 μg/ml e apamina não demonstrou toxicidade à maior concentração testada (100μg/ml). Houve efeito antiviral da melitina sobre BoHV-1, especialmente na concentração de 2μg/ml, onde observou-se 85,96% de viabilidade celular quando o tratamento foi realizado antes da infecção e 86,78% de viabilidade quando o tratamento foi realizado após a infecção. Houve ainda redução de 90% das partículas virais de BoHV-1. Em menores concentrações (1 e 1,5μg/ml) de melitina não houve atividade antiviral, pois a viabilidade celular foi baixa, demonstrando...(AU)

The search for an alternative to synthetic drugs have revealed discoveries in the field of pharmacology and, according to melittin and apamin, two components of bee venom which have been described were with various pharmacological actions.This study aimed to evaluate the in vitro antiviral and virucidal capabilities of these components. Therefore, after verification of their toxic doses by MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay, MDBK cells (Madin Darby Bovine Kidney) have been cultivated in microplates and treated with different concentrations of apamin, melittin and its association. This treatment occurred before and after infection with MOI (multiplicity of infection) 0.1 of cytopathogenic strains of bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) strain Los Angeles and bovine viral diarrhea virus (BVDV) strain NADL. After incubation for 72 hours, 37°C, the cells were submitted to MTT assay to estimate cell viability. In parallel experiments, plates were subjected to the same procedure suffered freezing and thawing cycle the cells to rupture the same and measurement of viral titers. The virucidal assay was performed by incubating suspension of bovine herpesvirus type-1 and BVDV with apamin solutions, melittin and association for 24 hours at 37°C and 22°C. The viral titer was evaluated at 0 hours, 1, 2, 4, 8 and 24 hours of incubation. The cytotoxic concentration to 50% of the cells (CC50) of melittin was 2.32g/mL and apamin did not show toxicity at the greater concentration tested (100μg/mL). There was antiviral effect of melittin on bovine herpesvirus type-1, especially at a concentration of 2μg/mL, where was observed 85.96% cell viability when treatment was performed before the infection and 86.78% viability when the treatment was carried out after infection. There was also a 90% reduction of viral particles of...(AU)

Potencial antiviral e virucida da melitina e apamina contra herpesvírus bovino tipo 1 e vírus da diarreia viral bovina

ABSTRACT: The search for an alternative to synthetic drugs have revealed discoveries in the field of pharmacology and, according to melittin and apamin, two components of bee venom which have been described were with various pharmacological actions.This study aimed to evaluate the in vitro antiviral and virucidal capabilities of these components. Therefore, after verification of their toxic doses by MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay, MDBK cells (Madin Darby Bovine Kidney) have been cultivated in microplates and treated with different concentrations of apamin, melittin and its association. This treatment occurred before and after infection with MOI (multiplicity of infection) 0.1 of cytopathogenic strains of bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) strain Los Angeles and bovine viral diarrhea virus (BVDV) strain NADL. After incubation for 72 hours, 37°C, the cells were submitted to MTT assay to estimate cell viability. In parallel experiments, plates were subjected to the same procedure suffered freezing and thawing cycle the cells to rupture the same and measurement of viral titers. The virucidal assay was performed by incubating suspension of bovine herpesvirus type-1 and BVDV with apamin solutions, melittin and association for 24 hours at 37°C and 22°C. The viral titer was evaluated at 0 hours, 1, 2, 4, 8 and 24 hours of incubation. The cytotoxic concentration to 50% of the cells (CC50) of melittin was 2.32g/mL and apamin did not show toxicity at the greater concentration tested (100g/mL). There was antiviral effect of melittin on bovine herpesvirus type-1, especially at a concentration of 2g/mL, where was observed 85.96% cell viability when treatment was performed before the infection and 86.78% viability when the treatment was carried out after infection. There was also a 90% reduction of viral particles of bovine herpesvirus type-1. In lower concentrations (1 and 1.5g/mL) melittin no antiviral activity because cell viability was low, showing cytopathic effect of the virus. At the association two substances there were a decrease in the title of BVDV and there was higher cell viability when compared to the isolated action of the compounds of this virus. This is confirmed in the virucidal activity, since there was a decrease of 90% of the viral particles of BVDV with the combination of the two compounds of bee venom. Acting individually, melittin showed antiviral effect and virucidal against for BoHV-1, zeroing its title in just 2 hours at 37°C. It is concluded that melittin has antiviral and virucidal action against the BoHV-1 and its association with apamin potentiate its effects against BVDV.

RESUMO: A busca por alternativa aos fármacos sintéticos têm revelado descobertas no campo da farmacologia e, nesse sentido, melitina e apamina, dois constituintes do veneno de abelhas, foram descritas com várias ações farmacológicas. Este estudo objetivou avaliar in vitro as capacidades antiviral e virucida destes componentes. Para tanto, células MDBK (Madin Darby Bovine Kidney), após verificação das respectivas doses tóxicas por ensaio MTT ((3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo), foram cultivadas em microplacas e tratadas com diferentes concentrações de apamina, melitina e sua associação. Esse tratamento ocorreu antes e após a infecção com 0,1 MOI (multiplicidade de infecção) de cepas citopatogênicas de herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) cepa Los Angeles e vírus da diarreia viral bovina (BVDV) cepa NADL. Após incubação por 72 horas, 37oC, as células foram submetidas ao ensaio MTT para estimativa da viabilidade celular. Em experimento paralelo, placas que foram submetidas ao mesmo procedimento sofreram ciclo de congelamento e descongelamento das células, para rompimento das mesmas e mensuração dos títulos virais. O ensaio virucida foi realizado incubando-se suspensões de BoHV-1 e BVDV com as soluções de apamina, melitina e associação por 24 horas a 37oC e 22oC. O título viral foi avaliado às 0 horas, 1, 2, 4, 8 e 24 horas de incubação. A concentração citotóxica para 50% das células (CC50) de melitina foi 2,32 g/ml e apamina não demonstrou toxicidade à maior concentração testada (100g/ml). Houve efeito antiviral da melitina sobre BoHV-1, especialmente na concentração de 2g/ml, onde observou-se 85,96% de viabilidade celular quando o tratamento foi realizado antes da infecção e 86,78% de viabilidade quando o tratamento foi realizado após a infecção. Houve ainda redução de 90% das partículas virais de BoHV-1. Em menores concentrações (1 e 1,5g/ml) de melitina não houve atividade antiviral, pois a viabilidade celular foi baixa, demonstrando efeito citopático do vírus. Na associação das duas substâncias houve queda no título de BVDV e observou-se maior viabilidade celular quando comparados à ação isolada dos composto sobre este vírus. Isso se confirma na atividade virucida, uma vez que houve decréscimo de 90% das partículas virais de BVDV com a associação dos dois compostos do veneno de abelhas. Atuando individualmente, melitina apresentou efeito antiviral e virucida frente ao BoHV-1, zerando seu título em apenas 2 horas a 37oC. Conclui-se que melitina tem ação antiviral e virucida frente ao BoHV-1 e sua associação com apamina potencializou seus efeitos frente ao BVDV.

Potencial antiviral e virucida da melitina e apamina contra herpesvírus bovino tipo 1 e vírus da diarreia viral bovina / Antiviral and virucidal potential of melittin and apamin against bovine herpesvirus type 1 and bovine viral diarrhea virus

A busca por alternativa aos fármacos sintéticos têm revelado descobertas no campo da farmacologia e, nesse sentido, melitina e apamina, dois constituintes do veneno de abelhas, foram descritas com várias ações farmacológicas. Este estudo objetivou avaliar in vitro as capacidades antiviral e virucida destes componentes. Para tanto, células MDBK (Madin Darby Bovine Kidney), após verificação das respectivas doses tóxicas por ensaio MTT ((3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo), foram cultivadas em microplacas e tratadas com diferentes concentrações de apamina, melitina e sua associação. Esse tratamento ocorreu antes e após a infecção com 0,1 MOI (multiplicidade de infecção) de cepas citopatogênicas de herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) cepa Los Angeles e vírus da diarreia viral bovina (BVDV) cepa NADL. Após incubação por 72 horas, 37oC, as células foram submetidas ao ensaio MTT para estimativa da viabilidade celular. Em experimento paralelo, placas que foram submetidas ao mesmo procedimento sofreram ciclo de congelamento e descongelamento das células, para rompimento das mesmas e mensuração dos títulos virais. O ensaio virucida foi realizado incubando-se suspensões de BoHV-1 e BVDV com as soluções de apamina, melitina e associação por 24 horas a 37oC e 22oC. O título viral foi avaliado às 0 horas, 1, 2, 4, 8 e 24 horas de incubação. A concentração citotóxica para 50% das células (CC50) de melitina foi 2,32 μg/ml e apamina não demonstrou toxicidade à maior concentração testada (100μg/ml). Houve efeito antiviral da melitina sobre BoHV-1, especialmente na concentração de 2μg/ml, onde observou-se 85,96% de viabilidade celular quando o tratamento foi realizado antes da infecção e 86,78% de viabilidade quando o tratamento foi realizado após a infecção. Houve ainda redução de 90% das partículas virais de BoHV-1. Em menores concentrações (1 e 1,5μg/ml) de melitina não houve atividade antiviral, pois a viabilidade celular foi baixa, demonstrando efeito citopático do vírus. Na associação das duas substâncias houve queda no título de BVDV e observou-se maior viabilidade celular quando comparados à ação isolada dos composto sobre este vírus. Isso se confirma na atividade virucida, uma vez que houve decréscimo de 90% das partículas virais de BVDV com a associação dos dois compostos do veneno de abelhas. Atuando individualmente, melitina apresentou efeito antiviral e virucida frente ao BoHV-1, zerando seu título em apenas 2 horas a 37oC. Conclui-se que melitina tem ação antiviral e virucida frente ao BoHV-1 e sua associação com apamina potencializou seus efeitos frente ao BVDV.(AU)

The search for an alternative to synthetic drugs have revealed discoveries in the field of pharmacology and, according to melittin and apamin, two components of bee venom which have been described were with various pharmacological actions.This study aimed to evaluate the in vitro antiviral and virucidal capabilities of these components. Therefore, after verification of their toxic doses by MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay, MDBK cells (Madin Darby Bovine Kidney) have been cultivated in microplates and treated with different concentrations of apamin, melittin and its association. This treatment occurred before and after infection with MOI (multiplicity of infection) 0.1 of cytopathogenic strains of bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) strain Los Angeles and bovine viral diarrhea virus (BVDV) strain NADL. After incubation for 72 hours, 37°C, the cells were submitted to MTT assay to estimate cell viability. In parallel experiments, plates were subjected to the same procedure suffered freezing and thawing cycle the cells to rupture the same and measurement of viral titers. The virucidal assay was performed by incubating suspension of bovine herpesvirus type-1 and BVDV with apamin solutions, melittin and association for 24 hours at 37°C and 22°C. The viral titer was evaluated at 0 hours, 1, 2, 4, 8 and 24 hours of incubation. The cytotoxic concentration to 50% of the cells (CC50) of melittin was 2.32g/mL and apamin did not show toxicity at the greater concentration tested (100μg/mL). There was antiviral effect of melittin on bovine herpesvirus type-1, especially at a concentration of 2μg/mL, where was observed 85.96% cell viability when treatment was performed before the infection and 86.78% viability when the treatment was carried out after infection. There was also a 90% reduction of viral particles of bovine herpesvirus type-1. In lower concentrations (1 and 1.5μg/mL) melittin no antiviral activity because cell viability was low, showing cytopathic effect of the virus. At the association two substances there were a decrease in the title of BVDV and there was higher cell viability when compared to the isolated action of the compounds of this virus. This is confirmed in the virucidal activity, since there was a decrease of 90% of the viral particles of BVDV with the combination of the two compounds of bee venom. Acting individually, melittin showed antiviral effect and virucidal against for BoHV-1, zeroing its title in just 2 hours at 37°C. It is concluded that melittin has antiviral and virucidal action against the BoHV-1 and its association with apamin potentiate its effects against BVDV.(AU)

Antigenic and immunogenic properties of the canine distemper virus nucleocapsid protein expressed in Escherichia coli employing codon optimized synthetic gene / Propriedades antigênicas e imunogênicas da proteína do nucleocapsídeo do virus da cinomose canina expressa em Escherichia coli empregando gene sintético com codons otimizados

Despite common occurrence and importance of canine distemper disease the majority of tests currently available for diagnosis are hampered by either low sensitivity or specificity. In this study it was evaluated antigenic and immunogenic characteristics of a conserved region of nucleocapsid protein of canine distemper virus (rCDV NP) expressed in Escherichia coli employing a codon optimized synthetic gene. The expression of rCDVNP in Star strain (mean 300μg/mL, purified) was confirmed by SDS-PAGE and Western blot analysis by using His-Tag monoclonal antibodies. Western blot and ELISA, employing positive and negative control dog sera, demonstrated the rCDVNP antigenicity. The rCDVNP was inoculated in hens and immunoglobulin Y (IgY) was purified from the egg yolk. The mean yield of IgY was 28.55mg/mL. IgY reacted with the recombinant protein as demonstrated by Western blot and ELISA assays. In summary, our findings demonstrated that rCDVNP is antigenic since CDV positive dog sera recognized the protein in vitro. Additionally, the rCDVNP proved to be immunogenic in hens being possible to isolate a high concentration of specific IgY antibodies from the egg yolk. Taken together, these results indicate that the rCDVNP along with the specific IgY could be useful tools for development of the canine distemper immunodiagnostic assays.(AU)

Apesar da ocorrência comum e importância da cinomose canina, a maioria dos testes atualmente disponíveis para diagnóstico são prejudicados pela baixa sensibilidade ou especificidade. Neste estudo foram avaliadas características antigênicas e imunogênicas de uma região conservada da proteína do nucleocapsídeo do virus da cinomose canina (rCDV NP) expressa em Escherichia coli empregando um gene sintético e codons otimizados. A expressão na cepa Star (média de 300μg/mL, purificada) foi confirmada por SDS-PAGE e Western blot utilizando anticorpos monoclonais anti-His-Tag. A antigenicidade da rCDVNP foi demonstrada por western blot e ELISA empregando soros de cães positivos e negativos. A rCDVNP foi inoculada em galinhas e imunoglobulina Y (gY) foi obtida e purificada a partir da gema. A produção média de IgY foi 28.55mg/mL. Anticorpos IgY reagiram com a proteína recombinante, quando analisados por Western blot e ELISA. Em resumo, nossos achados demonstram que a rCDVNP produzida é antigênica, uma vez que os anticorpos de soro de cães positivos para CDV reconheceram a proteína in vitro. Além disso, a rCDVNP foi imunogênica em galinhas, sendo possível isolar anticorpos IgY específicos a partir da gema do ovo em altas concentrações. Tomados em conjunto, estes resultados indicam que a rCDVNP juntamente com a IgY específica podem ser ferramentas úteis para elaborar ensaios de imunodiagnóstico de cinomose canina.(AU)

Antigenic and immunogenic properties of the canine distemper virus nucleocapsid protein expressed in Escherichia coli employing codon optimized synthetic gene / Propriedades antigênicas e imunogênicas da proteína do nucleocapsídeo do virus da cinomose canina expressa em Escherichia coli empregando gene sintético com codons otimizados

Despite common occurrence and importance of canine distemper disease the majority of tests currently available for diagnosis are hampered by either low sensitivity or specificity. In this study it was evaluated antigenic and immunogenic characteristics of a conserved region of nucleocapsid protein of canine distemper virus (rCDV NP) expressed in Escherichia coli employing a codon optimized synthetic gene. The expression of rCDVNP in Star strain (mean 300μg/mL, purified) was confirmed by SDS-PAGE and Western blot analysis by using His-Tag monoclonal antibodies. Western blot and ELISA, employing positive and negative control dog sera, demonstrated the rCDVNP antigenicity. The rCDVNP was inoculated in hens and immunoglobulin Y (IgY) was purified from the egg yolk. The mean yield of IgY was 28.55mg/mL. IgY reacted with the recombinant protein as demonstrated by Western blot and ELISA assays. In summary, our findings demonstrated that rCDVNP is antigenic since CDV positive dog sera recognized the protein in vitro. Additionally, the rCDVNP proved to be immunogenic in hens being possible to isolate a high concentration of specific IgY antibodies from the egg yolk. Taken together, these results indicate that the rCDVNP along with the specific IgY could be useful tools for development of the canine distemper immunodiagnostic assays.(AU)

Apesar da ocorrência comum e importância da cinomose canina, a maioria dos testes atualmente disponíveis para diagnóstico são prejudicados pela baixa sensibilidade ou especificidade. Neste estudo foram avaliadas características antigênicas e imunogênicas de uma região conservada da proteína do nucleocapsídeo do virus da cinomose canina (rCDV NP) expressa em Escherichia coli empregando um gene sintético e codons otimizados. A expressão na cepa Star (média de 300μg/mL, purificada) foi confirmada por SDS-PAGE e Western blot utilizando anticorpos monoclonais anti-His-Tag. A antigenicidade da rCDVNP foi demonstrada por western blot e ELISA empregando soros de cães positivos e negativos. A rCDVNP foi inoculada em galinhas e imunoglobulina Y (gY) foi obtida e purificada a partir da gema. A produção média de IgY foi 28.55mg/mL. Anticorpos IgY reagiram com a proteína recombinante, quando analisados por Western blot e ELISA. Em resumo, nossos achados demonstram que a rCDVNP produzida é antigênica, uma vez que os anticorpos de soro de cães positivos para CDV reconheceram a proteína in vitro. Além disso, a rCDVNP foi imunogênica em galinhas, sendo possível isolar anticorpos IgY específicos a partir da gema do ovo em altas concentrações. Tomados em conjunto, estes resultados indicam que a rCDVNP juntamente com a IgY específica podem ser ferramentas úteis para elaborar ensaios de imunodiagnóstico de cinomose canina.(AU)

Efeito do extrato aquoso de própolis marrom sobre a produção de IFN- Após imunização contra parvovírus canino (CPV) e coronavírus canino (CCoV) / Effect of water extract from brown propolis on production of IFN- After immunization against canine parvovirus (CPV) and canine coronavirus (CCoV)

The purpose of this study was to evaluate the imunnostimulatory adjuvant capacity of water extract from brown propolis (WEBP) when added to a vaccine against canine parvovirus (CPV) and canine coronavirus (CCoV), regarding the production of IFN-?. Mice were vaccinated with CPV and CCoV (3.0 x 106 TCID50) with or without 400 µg/dose of WEBP. Thirty days after the third dose, splenocytes were cultured to measure the expression levels of IFN-? mRNA in the immunized animals. Increased levels of IFN-? mRNA expression for CCoV were evidenced by RT-PCR, in the splenocytes of mice inoculated with the vaccine containing 400 ?g/dose of WEBP, demonstrating the ability of propolis to stimulate cellular immune responses against the antigens of this virus. In contrast, the levels of IFN-? to CPV were not influenced by the presence of WEBP.

O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade adjuvante imunoestimulatória do extrato aquoso de própolis marrom (EAPM) quando associado a uma vacina contra parvovírus canino (CPV) e coronavírus canino (CCoV), com relação à produção de IFN-?. Camundongos foram vacinados com CPV e CCoV (3,0x106 TCDI50) em associação ou não com 400 ?g/dose de EAPM. Trinta dias após a terceira dose foi realizado cultivo de esplenócitos para mensuração dos níveis de expressão de mRNA para IFN-? nos animais imunizados. O aumento nos níveis de expressão de mRNA para IFN-? para CCoV nos esplenócitos dos camundongos inoculados com a vacina contendo 400 ?g/dose de EAPM foi evidenciado por RT-PCR, demonstrando a capacidade da própolis em estimular a resposta imune celular contra os antígenos desse vírus. Ao contrário, os níveis de IFN-? para CPV não sofreram influência da presença do EAPM.

EFEITO DO EXTRATO AQUOSO DE PRÓPOLIS MARROM SOBRE A PRODUÇÃO DE IFN- APÓS IMUNIZAÇÃO CONTRA PARVOVÍRUS CANINO (CPV) E CORONAVÍRUS CANINO (CCoV)

The purpose of this study was to evaluate the imunnostimulatory adjuvant capacity of water extract from brown propolis (WEBP) when added to a vaccine against canine parvovirus (CPV) and canine coronavirus (CCoV), regarding the production of IFN-. Mice were vaccinated with CPV and CCoV (3.0 x 106 TCID50) with or without 400 µg/dose of WEBP. Thirty days after the third dose, splenocytes were cultured to measure the expression levels of IFN- mRNA in the immunized animals. Increased levels of IFN- mRNA expression for CCoV were evidenced by RT-PCR, in the splenocytes of mice inoculated with the vaccine containing 400 g/dose of WEBP, demonstrating the ability of propolis to stimulate cellular immune responses against the antigens of this virus. In contrast, the levels of IFN- to CPV were not influenced by the presence of WEBP.

O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade adjuvante imunoestimulatória do extrato aquoso de própolis marrom (EAPM) quando associado a uma vacina contra parvovírus canino (CPV) e coronavírus canino (CCoV), com relação à produção de IFN-. Camundongos foram vacinados com CPV e CCoV (3,0x106 TCDI50) em associação ou não com 400 g/dose de EAPM. Trinta dias após a terceira dose foi realizado cultivo de esplenócitos para mensuração dos níveis de expressão de mRNA para IFN- nos animais imunizados. O aumento nos níveis de expressão de mRNA para IFN- para CCoV nos esplenócitos dos camundongos inoculados com a vacina contendo 400 g/dose de EAPM foi evidenciado por RT-PCR, demonstrando a capacidade da própolis em estimular a resposta imune celular contra os antígenos desse vírus. Ao contrário, os níveis de IFN- para CPV não sofreram influência da presença do EAPM.

Efeito do extrato aquoso de própolis marrom sobre a produção de IFN- Após imunização contra parvovírus canino (CPV) e coronavírus canino (CCoV) / Effect of water extract from brown propolis on production of IFN- After immunization against canine parvovirus (CPV) and canine coronavirus (CCoV)

The purpose of this study was to evaluate the imunnostimulatory adjuvant capacity of water extract from brown propolis (WEBP) when added to a vaccine against canine parvovirus (CPV) and canine coronavirus (CCoV), regarding the production of IFN-?. Mice were vaccinated with CPV and CCoV (3.0 x 106 TCID50) with or without 400 µg/dose of WEBP. Thirty days after the third dose, splenocytes were cultured to measure the expression levels of IFN-? mRNA in the immunized animals. Increased levels of IFN-? mRNA expression for CCoV were evidenced by RT-PCR, in the splenocytes of mice inoculated with the vaccine containing 400 ?g/dose of WEBP, demonstrating the ability of propolis to stimulate cellular immune responses against the antigens of this virus. In contrast, the levels of IFN-? to CPV were not influenced by the presence of WEBP.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade adjuvante imunoestimulatória do extrato aquoso de própolis marrom (EAPM) quando associado a uma vacina contra parvovírus canino (CPV) e coronavírus canino (CCoV), com relação à produção de IFN-?. Camundongos foram vacinados com CPV e CCoV (3,0x106 TCDI50) em associação ou não com 400 ?g/dose de EAPM. Trinta dias após a terceira dose foi realizado cultivo de esplenócitos para mensuração dos níveis de expressão de mRNA para IFN-? nos animais imunizados. O aumento nos níveis de expressão de mRNA para IFN-? para CCoV nos esplenócitos dos camundongos inoculados com a vacina contendo 400 ?g/dose de EAPM foi evidenciado por RT-PCR, demonstrando a capacidade da própolis em estimular a resposta imune celular contra os antígenos desse vírus. Ao contrário, os níveis de IFN-? para CPV não sofreram influência da presença do EAPM.(AU)

Milk production characteristics in southern Brazil / Características da produção de leite no sul do Brasil

This paper aimed to describe milk production in Southern Rio Grande do Sul state, Brazil, and to identify factors that affect milk quality at this region. The average age of regional dairy farmers is 49, and 67.9% has not concluded elementary school. Dairy farming is carried out on properties with an average of 26.06 hectares and 8.4 lactating cows. Most of them (32.83%) yield 50 to 100 L/day. Among the properties, 13.21% yield up to 30 L/day, and only 1.89% produces over 500 milk liters a day. Average yield was 6.8 L/day. Regarding to milking procedure, 39.3% farmers milk manually the animals, only 14.2% performed pre-milking teat disinfection, and 53.9% uses a single cloth to dry all animal teats. For infrastructure, 52.8% milks animals in wooden cowsheds. We observed that the average somatic cell count (SCC) was within legal parameters, presenting negative correlation with milk production (r = -0.23) and lactose content (r = -0.39). However, the total bacterial count (TBC) was above legal parameters. Education level seems to interfere in management and milk quality, because the less educated groups are, the less adequate are infrastructure, management, and product quality. Data show that there is a lower quality milk production where poor management techniques are adopted and owner education level affects milk quality.

Este trabalho teve como objetivo descrever a produção de leite no Sul do Rio Grande do Sul, Brasil, e identificar os fatores que afetam a qualidade do leite na região. A idade média dos produtores de leite da região é de 49 anos, e 67,9% não concluíram o ensino fundamental. A atividade leiteira é realizada em propriedades com média de 26,06 hectares e 8,4 vacas em lactação. A maioria dos produtores (32,83%) produz entre 50 a 100 litros de leite por dia. Entre as propriedades, 13,21% produz até 30 L/dia, e apenas 1.89% produz mais de 500 litros de leite por dia. A produtividade média foi de 6,8 L/vaca/dia. No que diz respeito ao procedimento de ordenha, 39,3% dos produtores de leite ordenha seus animais manualmente, apenas 14,2% realizam desinfecção dos tetos antes da ordenha, e 53,9% usa um único pano para secar todos os tetos dos animais. Com relação à infra-estrutura, 52,8% dos produtores ordenham seus animais em estábulos de madeira. Observou-se que a contagem média de células somáticas (CCS) ficou dentro dos parâmetros legais, apresentando correlação negativa com a produção de leite (r = -0,23) e teor de lactose (r = -0,39). No entanto, a contagem bacteriana total (CBT) ficou acima dos parâmetros legais. O nível de escolaridade parece interferir na adoção de técnicas adequadas de ordenha e, consequentemente, na qualidade do leite, porque os produtores menos instruídos trabalham em uma infra-estrutura mais precária e obtém um produto de menor qualidade. Os dados mostram que há produção de leite de menor qualidade em estabelecimentos onde o nível de escolaridade do proprietário é baixo e são adotadas técnicas inadequadas de manejo de ordenha. Portanto, a instrução do proprietário afeta a qualidade do leite.

Milk production characteristics in southern Brazil / Características da produção de leite no sul do Brasil

This paper aimed to describe milk production in Southern Rio Grande do Sul state, Brazil, and to identify factors that affect milk quality at this region. The average age of regional dairy farmers is 49, and 67.9% has not concluded elementary school. Dairy farming is carried out on properties with an average of 26.06 hectares and 8.4 lactating cows. Most of them (32.83%) yield 50 to 100 L/day. Among the properties, 13.21% yield up to 30 L/day, and only 1.89% produces over 500 milk liters a day. Average yield was 6.8 L/day. Regarding to milking procedure, 39.3% farmers milk manually the animals, only 14.2% performed pre-milking teat disinfection, and 53.9% uses a single cloth to dry all animal teats. For infrastructure, 52.8% milks animals in wooden cowsheds. We observed that the average somatic cell count (SCC) was within legal parameters, presenting negative correlation with milk production (r = -0.23) and lactose content (r = -0.39). However, the total bacterial count (TBC) was above legal parameters. Education level seems to interfere in management and milk quality, because the less educated groups are, the less adequate are infrastructure, management, and product quality. Data show that there is a lower quality milk production where poor management techniques are adopted and owner education level affects milk quality.(AU)

Este trabalho teve como objetivo descrever a produção de leite no Sul do Rio Grande do Sul, Brasil, e identificar os fatores que afetam a qualidade do leite na região. A idade média dos produtores de leite da região é de 49 anos, e 67,9% não concluíram o ensino fundamental. A atividade leiteira é realizada em propriedades com média de 26,06 hectares e 8,4 vacas em lactação. A maioria dos produtores (32,83%) produz entre 50 a 100 litros de leite por dia. Entre as propriedades, 13,21% produz até 30 L/dia, e apenas 1.89% produz mais de 500 litros de leite por dia. A produtividade média foi de 6,8 L/vaca/dia. No que diz respeito ao procedimento de ordenha, 39,3% dos produtores de leite ordenha seus animais manualmente, apenas 14,2% realizam desinfecção dos tetos antes da ordenha, e 53,9% usa um único pano para secar todos os tetos dos animais. Com relação à infra-estrutura, 52,8% dos produtores ordenham seus animais em estábulos de madeira. Observou-se que a contagem média de células somáticas (CCS) ficou dentro dos parâmetros legais, apresentando correlação negativa com a produção de leite (r = -0,23) e teor de lactose (r = -0,39). No entanto, a contagem bacteriana total (CBT) ficou acima dos parâmetros legais. O nível de escolaridade parece interferir na adoção de técnicas adequadas de ordenha e, consequentemente, na qualidade do leite, porque os produtores menos instruídos trabalham em uma infra-estrutura mais precária e obtém um produto de menor qualidade. Os dados mostram que há produção de leite de menor qualidade em estabelecimentos onde o nível de escolaridade do proprietário é baixo e são adotadas técnicas inadequadas de manejo de ordenha. Portanto, a instrução do proprietário afeta a qualidade do leite.(AU)

Avian IgY antibodies: characteristics and applications in immunodiagnostic / Anticorpos IgY aviário: características e aplicações em imunodiagnóstico

Immunoglobulin Y (IgY) is the major antibody isotype in birds, reptiles, amphibia, and lungfish, playing a similar biological role as mammal IgG. Due to its phylogenetic distance, immune diversification and presence in the egg yolk, IgY provide a number of advantages in immunodiagnostic compared to IgG from mammals. Moreover, IgY production is in agreement with international efforts to reduce, refine and if possible, to replace animals in experimentation, contributing substantially in favor of animal welfare. This article presents an overview about structural and functional features, production and applications of IgY in immunodiagnostic, as well as the advantages of chicken antibodies use.(AU)

A imunoglobulina Y (IgY) é a classe de anticorpos de maior importância em aves, répteis, anfíbios e peixes pulmonados, desempenhando um papel semelhante a IgG de mamíferos. Devido a sua distância filogenética, mecanismos de diversificação imune e presença na gema do ovo, IgY proporciona uma série de vantagens em imunodiagnóstico, quando comparada a IgG de mamíferos. Além disso, esse método alternativo de produção de anticorpo está de acordo com os esforços internacionais para reduzir, refinar e, se possível, substituir animais em experimentação, contribuindo substancialmente a favor do bem-estar animal. Este artigo apresenta uma revisão sobre as características estruturais e funcionais da IgY, bem como os métodos de produção, vantagens e aplicações em imunodiagnóstico, além das vantagens da sua utilização.(AU)

Handling milking as a risk factor in the occurrence of microorganisms in raw milk / Manejo de ordenha como fator de risco na ocorrência de microorganismos em leite cru

Milk is naturally a good provider of a whole range of nutrients, however an inadequate milking may significantly interfere on its nutritional and microbiological quality. The main purpose of this study was to isolate and identify microorganisms from bulk tanks of southern Rio Grande do Sul state, Brazil and establish a correlation between animal management and presence of pathogens in the milk. To this end, raw milk samples were collected from different dairy herds and submitted to microbiological analyses. Mean bacterial counts were Staphylococcus sp. (5,32x106 CFU/mL), S. aureus (1,33x105 CFU/mL) and enterobacteria (1,82x107 CFU/mL). The major pathogens isolated and their respective frequency were Escherichia coli (27.8%), Streptococcus agalactiae (6.2%), S. dysgalactiae (37.2%), S. uberis (16.8%), Candida sp. (15.7%), Aspergillus sp. (5.8%), Trichosporum sp. (3.6%) and Cryptococcus sp. (1.5%). In addition, it was identified an Odds Ratio of 3.2 for S. agalactiae regarding manual milking and 3.1 when a single cloth towel was used for drying the udder. For S. bovis the Odds Ratio was 2.8 in properties milking their animals in stalls wood. Somatic cell count (SCC) was significantly higher (p=0,003) in milk samples manually extracted in comparison with machine milking. Likewise, manual milking resulted in the increase in S. aureus counts (p=0.04). Pre-dipping practice have contributed fora significant reduction (p=0.04) in the Staphylococcus sp. counts. Taken together, our results show thatthe adoption of poor management practices can negatively interfere in the microbiological quality ofmilk increasing the risks of occurrence of pathogens and their counts.

O leite é um alimento natural e rico em nutrientes, porém a forma como muitas vezes é obtido interfere na sua qualidade microbiológica e nutricional. E a qualidade dos produtos é uma exigência cada vez maior do mercado consumidor. Assim, objetivou-se identificar micro-organismos presentes no leite de tanques resfriadores, na região sul do Rio Grande do Sul, e estabelecer uma correlação entre o manejo dos animais e sua presença no tanque. Foram coletadas amostras de leite em propriedades de seis municípios e realizadas análises microbiológicas para identificação microbiana. As médias das contagens foram: Staphylococcus sp. 5,32x106 UFC/mL, S. aureus 1,33x105 UFC/mL, enterobactérias 1,82x107 UFC/ mL. Houve presença de Escherichia coli (27,8% das propriedades), Streptococcus agalactiae (6,2%), S. dysgalactiae (37,2%), S. uberis (16,8%), Candida sp. (15,7%), Aspergillus sp. (5,8%), Trichosporum sp. (3,6%) e Cryptococcus sp. (1,5%). Identificou-se uma Odds Ratio de 3,2 para S. agalactiae com relação à ordenha manual e de 3,1 quando um único pano era usado para secagem dos tetos. Para S. dysgalactiae houve 55,8% de probabilidade da ocorrência em caso de não secagem dos tetos. Para S. bovis, uma Odds Ratio de 2,8 em propriedades que ordenham seus animais em estábulos de madeira. Houve aumento significativo (p=0,003) na contagem de células somáticas (CCS) de propriedades que realizam ordenha manual em relação àquelas mecanizadas. A ordenha manual aumentou as contagens deS. aureus (p=0,04). A realização de pré-dipping contribuiu para a redução da contagem de Staphylococcussp. e houve diferença significativa em relação ao grupo que não realizava esta prática (p=0,04). Conclui-seque as técnicas de manejo mais precárias influenciam negativamente na qualidade microbiológica do leite,aumentando os riscos de ocorrência de agentes infecciosos e elevando as contagens de micro-organismos.

Antiviral activity of a Bacillus sp: P34 peptide against pathogenic viruses of domestic animals

P34 is an antimicrobial peptide produced by a Bacillus sp. strain isolated from the intestinal contents of a fish in the Brazilian Amazon basin with reported antibacterial activity. The aim of this work was to evaluate the peptide P34 for its in vitro antiviral properties against canine adenovirus type 2 (CAV-2), canine coronavirus (CCoV), canine distemper virus (CDV), canine parvovirus type 2 (CPV-2), equine arteritis virus (EAV), equine influenza virus (EIV), feline calicivirus (FCV) and feline herpesvirus type 1 (FHV-1). The results showed that the peptide P34 exhibited antiviral activity against EAV and FHV-1. The peptide P34 inhibited the replication of EAV by 99.9% and FHV-1 by 94.4%. Virucidal activity was detected only against EAV. When P34 and EAV were incubated for 6 h at 37 °C the viral titer reduced from 10(4.5) TCID50 to 10(2.75) TCID50, showing a percent of inhibition of 98.6%. In conclusion, our results demonstrated that P34 inhibited EAV and FHV-1 replication in infected cell cultures and it showed virucidal activity against EAV. Since there is documented resistance to the current drugs used against herpesviruses and there is no treatment for equine viral arteritis, it is advisable to search for new antiviral compounds to overcome these infections.

Handling milking as a risk factor in the occurrence of microorganisms in raw milk / Manejo de ordenha como fator de risco na ocorrência de microorganismos em leite cru

Milk is naturally a good provider of a whole range of nutrients, however an inadequate milking may significantly interfere on its nutritional and microbiological quality. The main purpose of this study was to isolate and identify microorganisms from bulk tanks of southern Rio Grande do Sul state, Brazil and establish a correlation between animal management and presence of pathogens in the milk. To this end, raw milk samples were collected from different dairy herds and submitted to microbiological analyses. Mean bacterial counts were Staphylococcus sp. (5,32x106 CFU/mL), S. aureus (1,33x105 CFU/mL) and enterobacteria (1,82x107 CFU/mL). The major pathogens isolated and their respective frequency were Escherichia coli (27.8%), Streptococcus agalactiae (6.2%), S. dysgalactiae (37.2%), S. uberis (16.8%), Candida sp. (15.7%), Aspergillus sp. (5.8%), Trichosporum sp. (3.6%) and Cryptococcus sp. (1.5%). In addition, it was identified an Odds Ratio of 3.2 for S. agalactiae regarding manual milking and 3.1 when a single cloth towel was used for drying the udder. For S. bovis the Odds Ratio was 2.8 in properties milking their animals in stalls wood. Somatic cell count (SCC) was significantly higher (p=0,003) in milk samples manually extracted in comparison with machine milking. Likewise, manual milking resulted in the increase in S. aureus counts (p=0.04). Pre-dipping practice have contributed fora significant reduction (p=0.04) in the Staphylococcus sp. counts. Taken together, our results show thatthe adoption of poor management practices can negatively interfere in the microbiological quality ofmilk increasing the risks of occurrence of pathogens and their counts.(AU)

O leite é um alimento natural e rico em nutrientes, porém a forma como muitas vezes é obtido interfere na sua qualidade microbiológica e nutricional. E a qualidade dos produtos é uma exigência cada vez maior do mercado consumidor. Assim, objetivou-se identificar micro-organismos presentes no leite de tanques resfriadores, na região sul do Rio Grande do Sul, e estabelecer uma correlação entre o manejo dos animais e sua presença no tanque. Foram coletadas amostras de leite em propriedades de seis municípios e realizadas análises microbiológicas para identificação microbiana. As médias das contagens foram: Staphylococcus sp. 5,32x106 UFC/mL, S. aureus 1,33x105 UFC/mL, enterobactérias 1,82x107 UFC/ mL. Houve presença de Escherichia coli (27,8% das propriedades), Streptococcus agalactiae (6,2%), S. dysgalactiae (37,2%), S. uberis (16,8%), Candida sp. (15,7%), Aspergillus sp. (5,8%), Trichosporum sp. (3,6%) e Cryptococcus sp. (1,5%). Identificou-se uma Odds Ratio de 3,2 para S. agalactiae com relação à ordenha manual e de 3,1 quando um único pano era usado para secagem dos tetos. Para S. dysgalactiae houve 55,8% de probabilidade da ocorrência em caso de não secagem dos tetos. Para S. bovis, uma Odds Ratio de 2,8 em propriedades que ordenham seus animais em estábulos de madeira. Houve aumento significativo (p=0,003) na contagem de células somáticas (CCS) de propriedades que realizam ordenha manual em relação àquelas mecanizadas. A ordenha manual aumentou as contagens deS. aureus (p=0,04). A realização de pré-dipping contribuiu para a redução da contagem de Staphylococcussp. e houve diferença significativa em relação ao grupo que não realizava esta prática (p=0,04). Conclui-seque as técnicas de manejo mais precárias influenciam negativamente na qualidade microbiológica do leite,aumentando os riscos de ocorrência de agentes infecciosos e elevando as contagens de micro-organismos.(AU)

Effect of the ethanolic extract from green propolis on production of antibodies after immunization against canine parvovirus (CPV) and canine coronavirus (CCoV) / Efeito do extrato etanólico de própolis verde sobre a produção de anticorpos após imunização contra parvovírus canino (CPV) e coronavírus canino (CCoV)

This study was designed to evaluate whether an ethanolic extract of green propolis (EEP) can interfere with p roduction of specific antibodies after immunization against parvovirus (CPV) and canine coronavirus (CCoV). Mice were vaccinated with CPV and CCoV (0.75, 1.5 and 3 x 106 TCID50) with or without 400 μg/dose of the EEP. Twenty one days after the third dose was measured serum IgG. The co-administration of the EEP significantly enhanced serum specific IgG responses to CPV in animals inoculated with the highest concentration of the antigen, and had no influence on levels of antibodies to CCoV. The results indicate that the EEP has immunomodulatory action closely dependent on the type and concentration of antigen used, being able to increase the levels of antibodies to CPV.(AU)

Este estudo foi realizado para avaliar se extrato etanólico de própolis verde (EEP) pode interferir na produção de anticorpos específicos após imunização contra parvovírus (CPV) e coronavírus canino (CCoV). Camundongos foramvacinados com CPV e CCoV (0.75, 1.5 e 3 x 106 TCID50) com ou sem 400 μg/dose de EEP. Vinte e um dias após a terceira dose foi mensurado IgG sérica. A coadministração de EEP aumentou significativamente os níveis de IgG específica para o CPV em animais inoculados com a maior concentração do antígeno, e não teve influência sobre os níveis de anticorpos para CCoV. Os resultados indicam que o EEP tem ação imunomoduladora intimamente dependente do tipo e concentração do antígeno utilizado, sendo capaz de aumentar os níveis de anticorpos contra CPV.(AU)

Infecção por pox vírus aviário em coruja de igreja (Tyto alba) no sul do Brasil / Avian pox virus infection in a common barn owl (Tyto alba) in southern Brazil

A young common barn owl (Tyto alba) was referred to the Núcleo de Reabilitação da Fauna Silvestre (Nurfs), Federal University of Pelotas (UFPel), after been found in a barn of a brick factory in the urban area of Pelotas, Rio Grande do Sul, Brazil. The bird was apathic, weak and with crusty lesions in the featherless areas (eyes, beak, legs), and died soon after arrival at Nurfs. Necropsy and histopathological examination of the lesions were carried out. The hyperplasia and hypertrophy of the cutaneous lesions, several eosinophilic intracyto-plasmic inclusion bodies in epithelial cells (Bollinger bodies), as well as particles characteristic of poxvirus, observed by electronic microscopy, confirmed the infection by avian poxvirus, what highlights the importance of Tyto alba as carrier of the virus in the wild.(AU)

Uma coruja-de-igreja (Tyto alba) em idade juvenil foi encaminha ao Núcleo de Reabilitação da Fauna Silvestre (Nurfs), Universidade Federal de Pelotas (UFPel), após ter sido encontrada num galpão de uma olaria na região urbana da cidade de Pelotas, RS. A ave apresentava-se apática, debilitada e com lesões crostosas nas áreas sem penas do corpo (olhos, patas e bico), e morreu logo após a chegada ao Nurfs. Foram realizados necropsia e exame histopatológico. A presença de hiperplasia e hipertrofia epidérmica nas lesões cutâneas, várias inclusões intracitoplasmáticas eosinofílicas nas células epiteliais (Corpúsculos de Bollinger), assim como partículas características de poxvirus, demonstradas por microscopia eletrônica, confirmaram a infecção por poxvirus aviário, o que ressalta a importância da espécie Tyto alba como portadora do vírus na natureza.(AU)