Construction and characterization of a recombinant vaccine encoding the nucleocapsid protein gene of avian infectious bronchitis virus / Construção e caracterização de uma vacina recombinante codificando o gene da proteina do nucleocapsideo do virus da bronquite infecciosa das galinhas

A vacinação é a forma mais utilizada para prevenir a bronquite infecciosa causada pelo vírus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV). Contudo, as vacinas convencionais são incapazes de diferenciar aves infectadas de vacinadas. No presente trabalho foi construído, caracterizado, e avaliado como candidato vacinal, um adenovírus recombinante expressando o gene N do IBV. O gene N foi clonado em um adenovírus humano tipo 5 defectivo e transfectado para as células HEK-293A para gerar rAd5_N. Após o vetor ser obtido como esperado e a confirmação da expressão da proteína N em HEK-293ª, foi realizada inoculação pela via oculo-nasal na dose de 10 7 TCID 50 /0,1mL para imunização de galinhas livres de patógenos específicos (SPF). A resposta imunológica do Ad5_N e a proteção contra o desafio ao IBV foram avaliadas e comparadas com uma vacina viva comercial. Não foram detectados anticorpos anti-IBV em aves vacinadas com o Ad5_N. A vacina comercial induziu anticorpos detectáveis a partir do 7º dia pós-vacinal. Em aves vacinadas com o Ad5_N não houve aumento na expressão de IFNγ. Neste estudo, o rAd5_N obtido não conferiu proteção contra desafio com IBV-M41. Os resultados indicam a necessidade de avaliar adenovírus recombinantes expressando outros genes do IBV.(AU)

Construction and characterization of a recombinant vaccine encoding the nucleocapsid protein gene of avian infectious bronchitis virus / Construção e caracterização de uma vacina recombinante codificando o gene da proteina do nucleocapsideo do virus da bronquite infecciosa das galinhas

A vacinação é a forma mais utilizada para prevenir a bronquite infecciosa causada pelo vírus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV). Contudo, as vacinas convencionais são incapazes de diferenciar aves infectadas de vacinadas. No presente trabalho foi construído, caracterizado, e avaliado como candidato vacinal, um adenovírus recombinante expressando o gene N do IBV. O gene N foi clonado em um adenovírus humano tipo 5 defectivo e transfectado para as células HEK-293A para gerar rAd5_N. Após o vetor ser obtido como esperado e a confirmação da expressão da proteína N em HEK-293ª, foi realizada inoculação pela via oculo-nasal na dose de 10 7 TCID 50 /0,1mL para imunização de galinhas livres de patógenos específicos (SPF). A resposta imunológica do Ad5_N e a proteção contra o desafio ao IBV foram avaliadas e comparadas com uma vacina viva comercial. Não foram detectados anticorpos anti-IBV em aves vacinadas com o Ad5_N. A vacina comercial induziu anticorpos detectáveis a partir do 7º dia pós-vacinal. Em aves vacinadas com o Ad5_N não houve aumento na expressão de IFNγ. Neste estudo, o rAd5_N obtido não conferiu proteção contra desafio com IBV-M41. Os resultados indicam a necessidade de avaliar adenovírus recombinantes expressando outros genes do IBV.(AU)

Obtenção e caracterização de imunógeno conjugado de lipopolissacarídeo de Pseudomonas aeruginosa e albumina bovina / Obtainment and characterization of an immunogenic conjugate of Pseudomonas aeruginosa lipopolysaccharide and bovine serum albumin

A Pseudomonas aeruginosa é agente etiológico de infecções oportunistas, principalmente em pacientes imunocomprometidos. Suas características inerentes em desenvolver resistência aos mais variados tipos de antibacterianos a torna um ponto crítico no controle de infecções. Em animais, os problemas com multirresistência ocorrem principalmente em casos de otite, cistite, úveo-conjuntivite, endometrite e mastite, não havendo vacina comercialmente disponível. No intuito de melhorar a imunogenicidade desse antígeno, foi testada a técnica de conjugação do lipopolissacarídeo (LPS) de P. aeruginosa à albumina bovina (BSA) por aminação redutiva direta utilizando .-periodato de sódio. A conjugação foi avaliada por cromatografia de gel-permeação, dosando-se açúcar e proteína totais, e tanto o LPS quanto a BSA foram identificados em proporções semelhantes. A imunização de camundongos com a vacina conjugada LPS-BSA conferiu títulos de anticorpos aglutinantes contra P. aeruginosa inferiores aos obtidos com a mistura de LPS e BSA livres. Foram 65% e 86% menores na 6ª e na 10ª semanas após o procedimento de hiperimunização, respectivamente. Isto indica que a reação de conjugação resultou em um produto imunogênico, porém, sua qualidade precisará ser melhorada.

Pseudomonas aeruginosa is an etiologic agent of opportunistic infections mainly in immunocompromised patients. Its inherent feature of developing resistance to a wide range of antibacterial agents make it a critical point in infection control. In animals, problems with multidrug resistance occur in otitis, cystitis, uveo-conjunctivitis, endometritis and mastitis, and there is no commercially available vaccine. With the aim of improving its immunogenicity, the lipopolysaccharide (LPS) antigen was coupled to bovine serum albumin (BSA) with .-periodate as the reductive agent. The conjugation was evaluated by gel-permeation chromatography, by quantitating total sugar and protein, and both LPS and BSA were detected in similar proportions. The immunization of mice with LPS-BSA conjugate vaccine resulted in an agglutinating antibody response against P. aeruginosa lower than that obtained for a mixture of free LPS and BSA. They were 65% and 86% lower in the 6th and 10th weeks after the hyperimmunization procedure, respectively. This indicates that the conjugation reaction resulted in an immunogenic product, however its quality should be improved.

OBTENÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE IMUNÓGENO CONJUGADO DE LIPOPOLISSACARÍDEO DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA E ALBUMINA BOVINA

ABSTRACT Pseudomonas aeruginosa is an etiologic agent of opportunistic infections mainly in immunocompromised patients. Its inherent feature of developing resistance to a wide range of antibacterial agents make it a critical point in infection control. In animals, problems with multidrug resistance occur in otitis, cystitis, uveo-conjunctivitis, endometritis and mastitis, and there is no commercially available vaccine. With the aim of improving its immunogenicity, the lipopolysaccharide (LPS) antigen was coupled to bovine serum albumin (BSA) with .-periodate as the reductive agent. The conjugation was evaluated by gel-permeation chromatography, by quantitating total sugar and protein, and both LPS and BSA were detected in similar proportions. The immunization of mice with LPS-BSA conjugate vaccine resulted in an agglutinating antibody response against P. aeruginosa lower than that obtained for a mixture of free LPS and BSA. They were 65% and 86% lower in the 6th and 10th weeks after the hyperimmunization procedure, respectively. This indicates that the conjugation reaction resulted in an immunogenic product, however its quality should be improved.

RESUMO A Pseudomonas aeruginosa é agente etiológico de infecções oportunistas, principalmente em pacientes imunocomprometidos. Suas características inerentes em desenvolver resistência aos mais variados tipos de antibacterianos a torna um ponto crítico no controle de infecções. Em animais, os problemas com multirresistência ocorrem principalmente em casos de otite, cistite, úveo-conjuntivite, endometrite e mastite, não havendo vacina comercialmente disponível. No intuito de melhorar a imunogenicidade desse antígeno, foi testada a técnica de conjugação do lipopolissacarídeo (LPS) de P. aeruginosa à albumina bovina (BSA) por aminação redutiva direta utilizando .-periodato de sódio. A conjugação foi avaliada por cromatografia de gel-permeação, dosando-se açúcar e proteína totais, e tanto o LPS quanto a BSA foram identificados em proporções semelhantes. A imunização de camundongos com a vacina conjugada LPS-BSA conferiu títulos de anticorpos aglutinantes contra P. aeruginosa inferiores aos obtidos com a mistura de LPS e BSA livres. Foram 65% e 86% menores na 6ª e na 10ª semanas após o procedimento de hiperimunização, respectivamente. Isto indica que a reação de conjugação resultou em um produto imunogênico, porém, sua qualidade precisará ser melhorada.