Resumo
Histopathological and spermatogenesis classification by Johnsen is widely used in the germinal epithelium maturation analysis, besides identifying pathological alterations able to cause subfertility and even infertility. The aim of this study was to analyze cell-differentiation histopathological data and to correlate them with expression of PRM-1, TNP-2, 17β-HSD3, LHR, generic MHC-I, MIC-B, NC1 and NC3 genes, involved in bovine spermatogenesis using qRT-PCR from testicular parenchyma. Based on Johnsens criteria, the results showed normal spermatogenic activity in these animals, classified at 6, 7 and 8 scores. The qRT-PCR analysis expression showed that MHC-I (generic) gene was less expressed than all the other genes in evaluated scores (p < 0.05) and, PRM-1 and TNP-2 were the most expressed genes (p < 0.05). The PRM-1 gene expression was significantly higher than TNP-2 (p < 0.05). Comparing scores, 17β-HSD3 gene expression was lower (p < 0.05) in score 6 when compared to scores 7 and 8 animals. It was also observed that PRM-1 expression was lower in score 6 when compared to 7, as well as TNP-2 gene was less expressed in the score 6 (p < 0.05) when compared to 7 and 8 scores. Our results demonstrated that MHC I (generic), MIC-B, NC1, NC3, and LHR genes are poorly expressed in bovine testis, suggesting their marginal action on spermatogenesis. Instead, PRM-1, TNP-2, and 17β-HSD3 expression were higher, supporting the notion that these genes can act directly on the germ cells differential development during bovine spermatogenesis.
A classificação histopatológica e espermatogênica segundo Johnsen é amplamente utilizada na análise da matu-ração do epitélio germinativo, além de identificar alterações patológicas capazes de causar subfertilidade e até infertilidade. O objetivo deste estudo foi analisar dados histopatológicos de diferenciação celular e correlacioná-los à expressão dos genes PRM-1, TNP-2, 17β-HSD3, LHR, MHC-I genérico, MIC-B, NC1 e NC3, envolvidos na espermatogênese bovina usando qRT-PCR do parênquima testicular. Com base nos critérios de Johnsen, os resultados demonstraram atividade espermatogê-nica normal nesses animais, classificados nos escores 6, 7 e 8. A análise de expressão gênica (qRT-PCR) demonstrou que o gene MHC-I (genérico) foi menos expresso do que os demais nos escores avaliados (p < 0,05) e, PRM-1 e TNP-2 foram os mais expressos (p < 0,05). A expressão do PRM-1 foi significativamente maior do que TNP-2 (p < 0,05). Comparando os escores, a expressão do 17β-HSD3 foi menor (p < 0,05) no escore 6 quando comparado aos escores 7 e 8. Observou-se também que a expressão do PRM-1 foi menor no escore 6 quando comparado ao 7, bem como o TNP-2 foi menos expresso no escore 6 (p < 0,05) quando comparado aos escores 7 e 8. Nossos resultados demonstraram que os genes MHC-I (genérico), MIC-B, NC1, NC3 e LHR são pouco expressos em testículos bovinos, sugerindo sua ação indireta na espermatogênese. Em contrapartida, a expressão de PRM-1, TNP-2 e 17β-HSD3 foi alta, corroborando com a hipótese de que esses genes podem atuar diretamente no desenvolvimento diferencial de células germinativas durante a espermatogênese bovina.
Assuntos
Masculino , Animais , Bovinos , Bovinos/anatomia & histologia , Bovinos/genética , Espermatogênese , Expressão Gênica , Testículo/anatomia & histologiaResumo
The Mearim River Watershed has multiple uses e.g. leisure, navigation, fishing and subsistence agriculture and constitutes the main source of supply for the populations of municipalities situated along its course. In addition to being a water supply source, the existence of the 'pororoca' (tidal bore) effect in a stretch of the lower course of the Mearim River attracts people from several Brazilian states and different countries, as it offers excellent conditions for surfing in fresh water. In this respect, given the importance of the watershed, this study was developed to report the detection of diarrheagenic Escherichia coli pathotypes in a stretch of the lower course of the Mearim River, located in the state of Maranhão, Brazil. Thirty water samples were collected from 10 sampling points. To quantify E. coli, the chromogenic enzymatic system was used and positive samples were isolated and biochemically identified. Pure cultures underwent DNA extraction by heating followed by polymerase chain reaction (PCR) characterization. At the time of the collections, an observation schedule was used to record information on the existence of rearing of livestock and domestic animals; businesses; residences; and fruit and vegetable farming on the riverbanks. The samples were analyzed for the mean populations of E. coli, which ranged from 444 to 2,585 MPN mL-1. Twenty bacterial isolates were identified and the diarrheal pathotypes ETEC, typical EPEC and atypical EPEC were detected. The detection of these pathotypes can represent an epidemiological risk and compromise several uses of this water resource, such as irrigation of fruits and vegetables consumed raw, fishing, animal watering and recreation. Structural investments in basic sanitation are essential to minimize environmental degradation resulting from anthropic activities and to act preventively in public health. In addition, the recovery of riparian forests along the watershed and the maintenance of vegetation in these areas are measures to reduce the transport of particles from the soil to the watercourses, improving the qualitative and quantitative characteristics of this water resource.(AU)
A Bacia Hidrográfica do Rio Mearim apresenta múltiplos usos - lazer, navegação, pesca e agricultura de subsistência - e constitui a principal fonte de abastecimento para as populações dos municípios inseridos em seu curso. Além de fonte hídrica de abastecimento, a existência do efeito pororoca em um trecho do baixo curso do Rio Mearim atrai pessoas de vários estados brasileiros e diferentes países, pois apresenta excelentes condições para a prática de surfe em água doce. Nesse sentido, considerando a importância da Bacia Hidrográfica, objetivou-se relatar a detecção de patótipos diarreiogênicos de Escherichia coli em um trecho do baixo curso do rio Mearim, localizado no estado do Maranhão. Para isso, foram realizadas coletas de 30 amostras de água em 10 pontos amostrais. Para a quantificação de E. coli utilizou-se o sistema cromogênico enzimático e das amostras positivas procedeu-se ao isolamento e identificação bioquímica dos isolados. A extração do DNA das culturas puras foi realizada por aquecimento seguido da caracterização por reação em cadeia da polimerase (PCR). No momento das coletas utilizou-se uma pauta de observação para anotação de informações sobre a existência de criação de animais de interesse pecuário e doméstico, empreendimentos comerciais, residências e cultivo de frutas e hortaliças nas margens do rio. Nas amostras analisadas, foram quantificadas populações médias de E. coli que variaram de 444 a 2.585 NMP.mL-1, identificados 20 isolados bacterianos e detectados os patótipos diarreiogênicos ETEC, EPEC-típica e EPEC-atípica. A detecção destes patótipos pode representar risco epidemiológico e compromete diversos usos desse recurso hídrico, como a irrigação de frutas e hortaliças ingeridas cruas, pesca, dessedentação animal e recreação. Investimentos estruturais em saneamento básico são fundamentais para minimizar a degradação ambiental resultante das atividades antrópicas e para atuar preventivamente na saúde pública. Adicionalmente, a recuperação das matas ciliares ao longo da Bacia Hidrográfica e manutenção da vegetação nestas áreas são medidas para a redução do transporte de partículas do solo para os cursos d'água, e em consequência, acarretará na melhoria das características quali-quantitativas desse recurso hídrico.(AU)
Assuntos
Animais , DNA , Recursos Hídricos , Reação em Cadeia da Polimerase , Saúde Pública , Escherichia coli , Animais DomésticosResumo
Abstract A serological, molecular and histopathological study was carried out in order to investigate occurrences of Toxoplasma gondii in pigs slaughtered with and without inspection service. Serum samples were collected from 60 pigs to detect anti-T. gondii antibody by indirect fluorescent antibody (IFAT). Tongue, masseter and diaphragm fragments were also collected for parasite DNA detection by means of the polymerase chain reaction (PCR) and histopathological analysis. The serological results showed that 77% (44/60) of the pigs were positive. Regarding PCR, 66.67% (40/60) were positive for T. gondii. Among the tissues evaluated, the diaphragm was the one with the highest frequency of positivity (40%; 24/60), followed by the masseter (38.33%; 23/60) and tongue (33.3%; 20/60). Histopathological changes were only observed in the diaphragm, which presented inflammatory infiltrates of lymphohistiocytic and neutrophilic types. These results not only show the potential threat of T. gondii to human health, but also demonstrate the dynamic epidemiological situation of toxoplasmosis in pigs in the city of São Luís, providing support for food security regarding pigs and for T. gondii control programs in Brazil.
Resumo Realizou-se um estudo sorológico, molecular e histopatológico com o objetivo de verificar a ocorrência de Toxoplasma gondii em suínos abatidos com e sem serviço de inspeção. Foram coletados soros de 60 suínos para a pesquisa de anticorpos anti-T. gondii pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Também foram coletados fragmentos de língua, masseter e diafragma para a detecção do DNA do parasito por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) e análise histopatológica. A análise sorológica demonstrou que 77% (44/60) dos suínos apresentaram anticorpos anti-T. gondii. Com relação ao PCR, 66,67% (40/60) foram positivos para T. gondii. Dentre os tecidos avaliados, o diafragma foi o que obteve maior frequência de positividade (40%; 24/60), seguidos de masseter (38,33%; 23/60) e língua (33,3%; 20/60). Alterações histopatológicas foram observadas apenas no diafragma, que apresentou infiltrado inflamatório do tipo linfohistiocitário e neutrofílico. Esses resultados não evidenciam apenas a ameaça potencial de T. gondii à saúde humana, mas também demonstram a dinâmica situação epidemiológica da toxoplasmose em suínos na região da cidade de São Luís, fornecendo suporte para a segurança alimentar de suínos e programas de controle de T. gondii no país.
Assuntos
Animais , Doenças dos Suínos/diagnóstico , Doenças dos Suínos/epidemiologia , Toxoplasma , Toxoplasmose Animal/diagnóstico , Toxoplasmose Animal/epidemiologia , Suínos , Brasil/epidemiologia , Anticorpos Antiprotozoários , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo/veterináriaResumo
Abstract Anaplasma marginale is an obligate intracellular Gram-negative bacterium found in ruminants' erythrocytes and is the etiological agent of bovine anaplasmosis. The bacterium's genetic diversity has been characterized based on sequences of major surface proteins (MSPs), such as MSP1α. The aim of the present study was to investigate the genetic diversity of A. marginale in cattle in the state of Maranhão, northeastern Brazil. To this end, 343 blood samples were harvested and subjected to iELISA assays using the recombinant surface protein MSP5. Out of 343 blood samples, 235 (68.5%) were randomly chosen and submitted to DNA extraction, qPCR and conventional PCR targeting the msp1α gene to determine amino acid sequences and classify the genotypes. The iELISA results showed 81.34% seropositivity (279/343), whereas qPCR revealed 224 positive samples (95.32%). Among these qPCR-positive samples, 67.4% (151/224) were also positive in the cPCR. Among the 50 obtained sequences, 21 strains had not been previously reported. Regarding the genotypes, H (26/50) and E (18/50) were identified most often, while genotypes F and C were only identified twice each and B and G once each. In conclusion, high prevalence and genetic diversity for A. marginale were observed in dairy cattle herds in the state of Maranhão.
Resumo Anaplasma marginale é uma bactéria Gram-negativa intracelular obrigatória de eritrócitos de ruminantes e responsável pela anaplasmose bovina. A diversidade genética de A. marginale tem sido caracterizada com base nas sequências das principais proteínas de superfície (MSPs), como a MSP1α. O objetivo deste estudo foi investigar a diversidade genética de A. marginale em bovinos no estado do Maranhão, Nordeste do Brasil. Dessa forma, 343 amostras de sangue foram submetidas ao ensaio iELISA, utilizando-se a proteína recombinante MSP5. Das 343 amostras de sangue, 235 (68,5%) foram escolhidas aleatoriamente e submetidas à extração de DNA, qPCR e PCR convencional para gene msp1α, para determinação das sequências de aminoácidos e classificação dos genótipos. Os resultados do iELISA mostraram 81,34% de soropositividade (279/343), enquanto qPCR revelou 224 amostras positivas (95,32%). Dentre estas na qPCR, 67,4% (151/224) mostraram-se positivas no PCR convencional. Das 50 sequências obtidas, 21 cepas não haviam sido relatadas anteriormente. Em relação aos genótipos, H (26/50) e E (18/50) foram os mais frequentes, enquanto os genótipos F e C foram identificados apenas duas vezes cada, e B e G uma vez cada. Em conclusão, alta prevalência e marcante diversidade genética de A. marginale foram observadas em rebanhos leiteiros no estado do Maranhão.
Assuntos
Animais , Doenças dos Bovinos , Anaplasma marginale/genética , Anaplasmose , Variação Genética , Brasil , Bovinos , GenótipoResumo
Abstract Bartonella is a genus of emerging zoonotic bacteria that are mainly associated with mammalian erythrocytes and endothelial cells. Bats are natural reservoirs for a variety of important pathogens that impact human and animal health. Recent reports have highlighted the role of bats and bat flies in the maintenance of Bartonella. Here, we showed that none of the 29 bat DNA blood samples obtained from five bat species in São Luís Island, state of Maranhão, northeastern Brazil, were positive for Bartonella in qPCR assays targeting nuoG. On the other hand, three out of 15 DNA samples (20%) from flies in the family Streblidae were positive for Bartonella. The BLASTn results showed that the gltA and rpoB sequences shared identities ranging from 97.2% to 100%, with Bartonella sequences amplified from bats or bat flies from Costa Rica and Brazil. These findings were supported by phylogenetic analyses based on Bayesian inferences. The present study showed that Bartonella genotypes are present in bat flies, thus shedding some light on the distribution of bat fly-related Bartonella genotypes in South America.
Resumo Bartonella é um gênero de bactérias zoonóticas emergentes associadas principalmente a eritrócitos e células endoteliais de mamíferos. Morcegos são reservatórios naturais para uma variedade de patógenos importantes que afetam a saúde humana e animal. Além disso, estudos recentes destacaram o papel dos morcegos e de moscas associadas a morcegos na manutenção de Bartonella. No presente estudo, nenhuma das 29 amostras de DNA obtidas a partir do sangue de cinco espécies de morcegos amostrados na ilha de São Luís, estado do Maranhão, Nordeste do Brasil, foi positiva para Bartonella nos ensaios de qPCR direcionados ao gene nuoG. Por outro lado, três das 15 (20%) amostras de DNA de moscas da família Streblidae foram positivas para Bartonella. Os resultados do BLASTn mostraram que as sequências dos genes gltA e rpoB compartilharam identidade, variando de 97,2% a 100%, com as sequências de Bartonella amplificadas em morcegos ou moscas amostrados na Costa Rica ou Brasil. Tais resultados corroboraram as análises filogenéticas realizadas por Inferência Bayesiana. O presente estudo mostrou a ocorrência de Bartonella em moscas de morcegos, auxiliando a esclarecer a distribuição dos genótipos de Bartonella relacionadas a moscas Streblidae na América do Sul.
Assuntos
Animais , Bartonella/genética , Infecções por Bartonella/veterinária , Infecções por Bartonella/epidemiologia , Quirópteros/microbiologia , Dípteros/microbiologia , Filogenia , Variação Genética , Brasil/epidemiologia , Teorema de Bayes , GenótipoResumo
Abstract Schistosomiasis is a neglected disease that affects millions of people around the world, being common in the state of Maranhão. A total of 225 rodents of the Holochilus sciureus species from the Western Lowland Maranhão were studied, of which 144 animals (64%) exhibited Schistosoma eggs in their feces samples. Macroscopic lesions characterized as well-defined whitish areas on the liver and spleen surfaces were observed. Histopathological examination revealed multifocal granulomas in the esophagus, liver, spleen, pancreas and duodenum, with structures compatible with Schistosoma mansoni eggs, as well as severe hepatic micro-vacuolar degeneration, multifocal and coalescent, with proliferation of random bile ducts and associated epithelial hyperplasia to areas of fibrosis. Adult forms of the parasite were observed in the blood vessels of the portal space. The lungs exhibited moderate and diffuse interstitial pneumonia with intralesional S. mansoni eggs. In the kidneys, hyaline cylinders were observed in the pelvis and diffuse hemorrhage. In conclusion, H. sciureus displays a pathological picture similar to human being. This rodent plays a role as sentinel in Baixada Maranhense.
Resumo A esquistossomose é uma doença negligenciada que afeta milhões de pessoas em todo o mundo, sendo comum no estado do Maranhão. Um total de 225 roedores da espécie Holochilus sciureus da Planície Ocidental do Maranhão foram estudados, dos quais 144 animais (64%) apresentaram ovos de Schistosoma em suas fezes. Lesões macroscópicas caracterizadas como áreas esbranquiçadas bem definidas nas superfícies do fígado e baço foram observadas. O exame histopatológico revelou granulomas multifocais no esôfago, fígado, baço, pâncreas e duodeno, com estruturas compatíveis com ovos de Schistosoma mansoni, degeneração micro-vacuolar hepática grave, multifocal e coalescente, com proliferação de ductos biliares aleatórios e hiperplasia epitelial associada a áreas de fibrose. Formas adultas do parasito foram observadas nos vasos sanguíneos do espaço portal. Os pulmões exibiram pneumonia intersticial moderada e difusa com ovos de S. mansoni intralesionais. Nos rins, foram observados cilindros hialinos na pelve e hemorragia difusa. Em conclusão, H. sciureus apresenta um quadro patológico semelhante ao ser humano. Este roedor desempenha um papel de sentinela na Baixada Maranhense.
Assuntos
Animais , Schistosoma mansoni/isolamento & purificação , Esquistossomose mansoni/veterinária , Sigmodontinae/parasitologia , Contagem de Ovos de Parasitas , Esquistossomose mansoni/parasitologia , Esquistossomose mansoni/patologia , Fezes/parasitologiaResumo
O objetivo do presente estudo foi identificar e caracterizar as principais alterações patológicas em rete ovarii, observadas em rebanho bovino mestiço. Foram coletadas amostras de 467 pares de ovários de fêmeas bovinas (gestantes e não gestantes), com idades variáveis, provenientes de dois frigoríficos da região metropolitana de Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil, no período de setembro a dezembro de 2012, para avaliação anatomopatológica. Das amostras coletadas, observou-se a rete ovarii em ambos os lados de 417/467 animais (89,3%). Na análise macroscópica, verificou-se a presença de cistos foliculares (5,03%), cistos de corpo lúteo (0,72%) e secreções purulentas (0,48%) de coloração amarela intensa e consistência viscosa, indicativo de processo inflamatório supurativo. No exame microscópico, observaram-se em 23/417 amostras (5,51%), um processo hiperplásico adenomatoso de rete ovarii, com espessamento da camada epitelial, modificação do padrão de epitélio variando de cúbico a colunar, com duas ou três camadas de células, sendo em alguns momentos ciliadas e com dilatação tubular. Destas amostras, verificou-se associação de lesão hiperplásica com infiltrado inflamatório predominantemente linfomacrofágico em 15/23 amostras (65,22%). Ainda em relação às amostras confirmadas para hiperplasia, observou-se reação proliferativa estromal com característica fibroplástica em 21/23 amostras (91,30%). Conclui-se que em fêmeas bovinas mestiças a frequência de alterações encontradas em rete ovarii é baixa ou rara e o conhecimento desta lesão pode auxiliar no manejo reprodutivo desta espécie animal, a fim de diagnosticar possíveis alterações patológicas que podem promover subfertilidade e até infertilidade do rebanho bovino, que resultam em significativas perdas econômicas.
The aim of this study was to identify and characterize the main pathological changes in rete ovarii observed in cattle herd mestizo. Samples were collected from 467 pairs of ovaries of cows (pregnant and non-pregnant), with varying ages, from two refrigerators in the metropolitan region of Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil, in the period from September to December 2012 for anatomopathological evaluation. From samples collected, the rete ovarii was observed on both sides of 417/467 animals (89.3%). In macroscopic analysis, the presence of follicular cysts (5.03%), corpus luteum cyst (0.72%) and purulent discharge (0.48%) with yellow color and viscous consistency indicating a suppurative inflammatory process. At microscopic analysis, were observed in 23/417 samples (5.51%), a hyperplastic adenomatous rete ovarii process, and thickening of the epithelial cell layer, with two or three cell layers of cuboidal to columnar cells, and some cilia and tubular dilatation. From these samples, there was association between hyperplastic lesions with predominantly a lymphomacrofagic inflammatory cell infiltrate in 15/23 samples (65.22%). Also in relation to the samples confirmed for hyperplasia, there was proliferating fibroblasts in 21/23 samples (91.30%). It is concluded that in mestizo cattle the frequency of alterations found in rete ovarii is low or rarity, and the knowledge of this lesion may assist in the reproductive management of this animals species, in order to diagnose possible pathological alterations that can promote subfertility and even infertility of the herd that results in significant economic losses
Assuntos
Bovinos , Gado , InfertilidadeResumo
The aim of the present study was to assess histological features, sex steroid profile, and ovarian gene expression throughout the ovarian maturation of Genyatremus luteus in Brazilian Coastal Equatorial Amazon. Specimens were categorized into different gonadal maturation stagesimmature (n = 7), maturing (n = 7), mature (n = 7), and spawned (n = 7)based on histological features of ovarian follicles and on oocyte development. Plasma E2, 11-KT and 17α-OHP levels were measured through enzyme-linked immunosorbent assays. The gene expression of estrogen (er) and LH (lhr) receptors in the ovary was analyzed through real-time polymerase chain reaction. The highest plasma E2 concentration was found in mature specimens (P < 0.05). Plasma 17α-OHP concentrations have significantly increased from the immature to the final maturation stage (P < 0.05). Maturational reproductive stage did not have any effect on plasma 11-KT concentrations. Er expression in ovaries has significantly increased throughout ovarian maturation (P < 0.05), and it remained high at mature and spawned stages. Lhr expression showed similar trend throughout the maturation process, although its peak was observed at spawned stage (P < 0.05). In conclusion, the gene expression profile of er and lhr and plasma E2 and 17α-OHP concentrations are proportional to oocyte development; they play important role in regulating ovarian development and ovulation in G. luteus.(AU)
O objetivo deste estudo foi avaliar as características histológicas, o perfil de esteroides sexuais e a expressão gênica ovariana ao longo do desenvolvimento da maturação ovariana de Genyatremus luteus na Amazônia equatorial costeira brasileira. Os espécimes foram categorizados em diferentes estágios de maturação gonadal imaturo (n = 7), em maturação (n = 7), maduro (n = 7) e desovado (n = 7) , com base nas características histológicas dos folículos ovarianos e no desenvolvimento do oócito. Os níveis plasmáticos de E2, 11-KT e 17α-OHP foram medidos por meio de ensaio de imunoabsorção enzimática. A expressão gênica dos receptores de estrogênio (er) e LH (lhr) no ovário foi analisada por reação em cadeia da polimerase em tempo real. A maior concentração plasmática de E2 foi encontrada em espécimes maduros (P < 0,05). As concentrações plasmáticas de 17α-OHP aumentaram significativamente desde o estágio imaturo até o estágio final de maturação (P < 0,05). O estágio reprodutivo maturacional não teve nenhum efeito nas concentrações plasmáticas de 11-KT. A expressão de er nos ovários aumentou significativamente ao longo da maturação ovariana (P < 0,05) e permaneceu alta nos estágios de maturação e desova. A expressão de lhr apresentou tendência semelhante ao longo do processo de maturação, embora tenha atingido seu pico na fase de desova (P < 0,05). Em conclusão, o perfil de expressão gênica de er e lhr e as concentrações plasmáticas de E2 e 17α-OHP são proporcionais ao desenvolvimento oocitário e desempenham papel importante na regulação do desenvolvimento ovariano e ovulação em G. luteus.(AU)