Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of IgY Anti-Borrelia anserina antibodies in Gallus gallus domesticus / Ensaio de imunoadsorção enzimático (ELISA) indireto para detecção de anticorpos IgY Anti-Borreliaanserina em Gallus gallus domesticus

This study aimed to promote the standardization of an indirect, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the serological detection of B. anserina in Gallus gallusdomesticus. An aliquoted sera from vaccinated chicken with B. anserina antigen (GI), experimental infected chickens with B. anserina (GII) and rustic poultry rearing of G. gallus (GIII) were tested with in-house ELISA developed to detect serum antibodies against B. anserina in G. gallus domesticus. On average, the experimentally infected chickens became positive at 9 DPI a mean ± standard deviation (SD) ODI value of 163.11 ± 70.65. The highest observed Optical Density Index (ODI) was 372.54 ± 132.39, at 26 DPI, and the highest overall ODI value was 626.51. The vaccinated chickens became positive between 8 and 10 DPV, with an ODI of 245.59 at 10 DPV, with an overall maximum ODI of 543.13. A total of 108 blood samples were collected from poultry raised on rustic farms. Of the total samples collected, 58.33% (63/108) were considered positive for B. anserina. The maximum ODI found among these rustic chickens was 283.24. This stardardization provided a sensitivity and specificity of 100%.

Este estudo teve como objetivo promover a padronização de um ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para a detecção sorológica de Borrelia anserina em Gallus gallus domesticus. Um frango vacinado com antígeno de B. anserina (GI), frangos infectados experimentalmente com B. anserina (GII) e frangos criados de forma rústica (GIII) foram testados com ELISA indireto in house desenvolvido para a detecção sorológica contra B. anserina em G. gallus domesticus. Em média, os frangos infectados experimentalmente tornaram-se positivos aos 9º dia pós-inoculação (DPI), um valor do índice de densidade óptica (ODI) médio ± desvio padrão (SD) de 163,11 ± 70,65. O maior ODI observado foi 372,54 ± 132,39, em 26ºDPI, e o maior valor geral de ODI foi 626,51. Os frangos vacinados tornaram-se positivos entre 8º e 10° DPV, com um ODI de 245,59 a 10 DPV, com um ODI máximo geral de 543,13. Um total de 108 amostras de sangue foram coletadas de aves criadas em fazendas rústicas. Do total de amostras coletadas, 58,33% (63/108) foram consideradas positivas para B. anserina. O ODI máximo encontrado entre essas galinhas rústicas foi 283,24. Essa padronização proporcionou sensibilidade e especificidade de 100%.

Experimental infection by Borrelia anserina strain PL in Gallus gallus / Infecção experimental de Borrelia anserina cepa PL em Gallus gallus

Avian borreliosis is a tick-borne acute septicemic disease that affects a variety of avian species and is caused by the bacterium Borrelia anserina. The present study aimed to establish the infection dynamics of B. anserina in experimentally infected Gallus gallus to determine its impact on the health and weight gain of the animals. Forty G. gallus were divided into four groups. Group 1 (G1) included 10 animals inoculated intramuscularly (IM) with 250µL of blood serum containing 3.7x106 spirochetes per milliliter. Group 2 (G2) included 10 animals inoculated IM with 250µL of saline 0.9%. Group 3 (G3) included 10 animals infested with four Argas miniatus nymphs (3rd instar) infected with B. anserina strain PL. Group 4 (G4) included 10 animals infested with four A. miniatus nymphs (3rd instar) free of infection by B. anserina. The number of spirochetes in the blood was directly proportional to the appearance of clinical signs and symptoms. This is the first study showing the experimental clinical evolution of the B. anserina PL strain in G. gallus. Additionally, the first assessments of spirochetaemia are presented, based on the direct count of bacteria in the serum by a Neubauer chamber, during the infection.(AU)

Borreliose aviária é uma doença septicêmica aguda transmitida por carrapatos que afeta uma variedade de espécies aviárias e é causada pela bactéria Borrelia anserina. O presente estudo teve como objetivo estabelecer a dinâmica da infecção de B. anserina em Gallus gallus experimentalmente infectados e determinar seu impacto na saúde e no ganho de peso dos animais. Quarenta G. gallus foram divididos em quatro grupos. O Grupo 1 (G1) incluiu 10 animais inoculados por via intramuscular (IM) com 250µL de soro sanguíneo contendo 3,7x106 espiroquetas por mL; Grupo 2 (G2) incluiu 10 animais inoculados IM com 250µL de soro fisiológico 0,9%; Grupo 3 (G3) incluiu 10 animais infestados com quatro ninfas de Argas miniatus (3º instar) infectadas com B. anserina cepa PL. O Grupo 4 (G4) incluiu 10 animais infestados com quatro ninfas de A. miniatus (3º instar) livres de infecção por B. anserina. O número de espiroquetas no sangue foi diretamente proporcional ao aparecimento de sinais e sintomas clínicos. Este é o primeiro estudo que mostra a evolução clínica experimental da cepa B. anserina PL em G. gallus. Além disso, são apresentadas as primeiras avaliações da espiroquetemia, baseadas na contagem direta da bactéria no soro por uma câmara de Neubauer, durante a infecção.(AU)

Hemoparasites in ticks of wild birds of Serra dos Órgãos National Park, state of Rio de Janeiro, Brazil / Hemoparasitos em carrapatos de aves silvestres do Parque Nacional da Serra dos Órgãos, estado do Rio de Janeiro, Brasil

The aim of this study is to detect the presence of tick-borne agents of genera Rickettsia, Borrelia, Babesia, Ehrlichia and Anaplasma in ticks collected from native wild birds in the state of Rio de Janeiro. Birds were captured and observed carefully to find the ectoparasites. DNA detection of hemoparasites was performed by means of the polymerase chain reaction (PCR). The sequences obtained were analyzed and their homologies were compared to the available isolates in the GenBank platform database. A total of 33 birds were captured from 20 different species, of which 14 were parasitized by Amblyomma longirostre (n = 22). There was absence of DNA from agents of the genera Babesia, Anaplasma and Ehrlichia in the evaluated samples. The phylogenetic analysis indicated that one sample had 100% identity with Rickettsia bellii (KJ534309), the other two samples showed 100% identity with Rickettsia sp. Aranha strain and strain AL (EU274654 and AY360216). The positive sample for R. bellii was also demonstrated to be positive for Borrelia sp., which presented a similarity of 91% with Borrelia turcica (KF422815). This is the first description of Borrelia sp. in ticks of the genus Amblyomma in South America.(AU)

Este trabalho teve como objetivo detectar evidências moleculares da presença de agentes dos gêneros Rickettsia, Borrelia, Babesia, Anaplasma e Ehrlichia transmitidos por carrapatos coletados de aves silvestres no estado do Rio de Janeiro. Aves foram capturadas e observadas cuidadosamente a procura de ectoparasitos. A detecção de DNA de hemoparasitos foi realizada por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR). As sequências obtidas foram analisadas e sua homologia comparada aos isolados disponíveis na base de dados da plataforma GenBank. Foram capturadas 33 aves, de 20 espécies diferentes das quais 14 estavam parasitadas por Amblyomma longirostre (n = 22). Houve ausência de DNA de agentes dos gêneros Babesia, Anaplasma e Ehrlichia nas amostras avaliadas. A análise filogenética indicou que uma amostra apresentou 100% de identidade com Rickettsia bellii (KJ534309), as outras duas amostras apresentaram 100% de identidade com Rickettsia sp. cepa Aranha e Cepa AL (EU274654 e AY360216.). A amostra positiva para R. bellii também apresentou positividade para Borrelia sp. que apresentou similaridade de 91% com Borrelia turcica (KF422815). Esta é a primeira descrição de Borrelia sp. em carrapatos do gênero Amblyomma na América do Sul.(AU)

Ocorrência de Amblyomma rotundatum Koch, 1844 (Acari: Ixodidae) em Rhinella icterica (Spix, 1824) (Anura: Bufonidae) em Maricá, Rio de Janeiro, Brasil / Occurrence of Amblyomma rotundatum Koch, 1844 (Acari: Ixodidae) in Rhinella icterica (Spix, 1824) (Anura: Bufonidae) in Maricá, Rio de Janeiro, Brazil / Ocurrencia de Amblyomma rotundatum Koch, 1844 (Acari: Ixodidae) en Rhinella icterica (Spix, 1824) (Anura: Bufonidae) en Maricá, Río de Janeiro, Brasil

Anfíbios anuros são comumente parasitados por carrapatos da espécie Amblyomma rotundatum, os quais possuem alta predileção por animais ectotérmicos. Fêmeas e ninfas ingurgitadas de A. rotundatum foram coletadas em condições naturais a partir de um espécime de "sapo-cururu" da espécie Rhinella icterica. A identificação dos carrapatos foi feita por meio de características morfológicas. Este é o primeiro relato do parasitismo deste carrapato em sapos desta espécie no Município de Maricá, Região Metropolitana do Estado do Rio de Janeiro, Brasil.(AU)

Anuran amphibians are commonly parasitized by ticks of the species Amblyomma rotundatum, which have high predilection for ectothermic animals. Engorged females and nymphs of A. rotundatum were collected under natural conditions from a "toad-cururu" specimen of the species Rhinella icterica. The identification of ticks was made through morphological characteristics. This is the first report of the parasitism of this tick in toads of this species in the Municipality of Maricá, Metropolitan Region of the State of Rio de Janeiro, Brazil.(AU)

Los anfibios anuros son comúnmente parasitados por garrapatas de la especie Amblyomma rotundatum, los cuales poseen alta predilección por animales ectotermos. Las hembras y ninfas ingurgitadas de A. rotundatum fueron recolectadas en condiciones naturales a partir de un espécimen de "sapo cururú" de la especie Rhinella icterica. La identificación de las garrapatas se ha hecho a través de características morfológicas. Este es el primer relato del parasitismo de esta garrapata en sapos de esta especie en el Municipio de Maricá, Región Metropolitana del Estado de Río de Janeiro, Brasil.(AU)

Ocorrência de Amblyomma rotundatum Koch, 1844 (Acari: Ixodidae) em Rhinella icterica (Spix, 1824) (Anura: Bufonidae) em Maricá, Rio de Janeiro, Brasil / Occurrence of Amblyomma rotundatum Koch, 1844 (Acari: Ixodidae) in Rhinella icterica (Spix, 1824) (Anura: Bufonidae) in Maricá, Rio de Janeiro, Brazil / Ocurrencia de Amblyomma rotundatum Koch, 1844 (Acari: Ixodidae) en Rhinella icterica (Spix, 1824) (Anura: Bufonidae) en Maricá, Río de Janeiro, Brasil

Anfíbios anuros são comumente parasitados por carrapatos da espécie Amblyomma rotundatum, os quais possuem alta predileção por animais ectotérmicos. Fêmeas e ninfas ingurgitadas de A. rotundatum foram coletadas em condições naturais a partir de um espécime de "sapo-cururu" da espécie Rhinella icterica. A identificação dos carrapatos foi feita por meio de características morfológicas. Este é o primeiro relato do parasitismo deste carrapato em sapos desta espécie no Município de Maricá, Região Metropolitana do Estado do Rio de Janeiro, Brasil.(AU)

Anuran amphibians are commonly parasitized by ticks of the species Amblyomma rotundatum, which have high predilection for ectothermic animals. Engorged females and nymphs of A. rotundatum were collected under natural conditions from a "toad-cururu" specimen of the species Rhinella icterica. The identification of ticks was made through morphological characteristics. This is the first report of the parasitism of this tick in toads of this species in the Municipality of Maricá, Metropolitan Region of the State of Rio de Janeiro, Brazil.(AU)

Los anfibios anuros son comúnmente parasitados por garrapatas de la especie Amblyomma rotundatum, los cuales poseen alta predilección por animales ectotermos. Las hembras y ninfas ingurgitadas de A. rotundatum fueron recolectadas en condiciones naturales a partir de un espécimen de "sapo cururú" de la especie Rhinella icterica. La identificación de las garrapatas se ha hecho a través de características morfológicas. Este es el primer relato del parasitismo de esta garrapata en sapos de esta especie en el Municipio de Maricá, Región Metropolitana del Estado de Río de Janeiro, Brasil.(AU)

Morphological, molecular and phylogenetic characterization of Borrelia theileri in Rhipicephalus microplus / Caracterização morfológica, molecular e filogenética de Borrelia theileri em Rhipicephalus microplus

This study aimed to perform a morphological, molecular and phylogenetic characterization of Borrelia theileri obtained from infected Rhipicephalus microplus in Brazil. Fifty engorged R. microplus females from cattle in the municipality of Seropédica, Rio de Janeiro, were analyzed for spirochetes by hemolymph smear. Macerated eggs and positive ticks, as well as blood from the bovine infested by these ticks, were analyzed the glpQ, flaB and hpt genes by PCR. The PCR products were purified and sequenced for analysis and construction of a phylogenetic tree. Only 2% (1/50) of the ticks generated a positive result by both smear and PCR. The spiral forms (n = 50) had (media ± SD) a mean length of 19.17 ± 4.12 µm, diameter of 0.2935 ± 0.0469 and number of turns 8.44 ± 2.59. Sequence alignments of the three evaluated genes exhibited 98% similarity to B. theileri isolates, occurring in a clade highly related to B. theileri strain KAT. Egg maceration samples were positive for the three evaluated genes, whereas bovine blood was negative by PCR. This is the most detailed characterization of B. theileri in the Americas to-date, presenting morphological, molecular and phylogenetic data, including the transovarial transmission of the spirochete in the host tick.(AU)

O estudo teve como objetivo realizar a caracterização morfológica, molecular e filogenética de Borrelia theileri obtida de Rhipicephalus microplus naturalmente infectado em bovino no estado do Rio de Janeiro, Brasil. Um total de 50 fêmeas de R. microplus ingurgitadas foram analisadas para espiroquetas por meio de esfregaço de hemolinfa. Ovos macerados e carrapatos, assim como sangue de bovinos infectados por esses carrapatos, foram analisados os genes glpQ, flaB e hpt por PCR. Os produtos de PCR foram purificados e sequenciados para análise e construção de uma árvore filogenética. Apenas 2% (1/50) dos carrapatos geraram um resultado positivo tanto pelo esfregaço como pela PCR. As formas espirais (n = 50) apresentaram (média ± DP) comprimento médio de 19,17 ± 4,12, diâmetro de 0,2935 ± 0,0469 e número de voltas de 8,44 ± 2,59. Os alinhamentos das sequências dos três genes avaliados exibiram 98% de similaridade aos isolados de B. theileri, ocorrendo em um clado altamente relacionado à linhagem de B. theileri KAT. As amostras de maceração de ovos foram positivas para os três genes avaliados, enquanto o sangue bovino foi negativo pela PCR. Esta é a mais completa caracterização de B. theileri nas Américas, apresentando dados morfológicos, moleculares e filogenéticos, incluindo a transmissão transovarial da espiroqueta no carrapato hospedeiro.(AU)

Soroprevalência de anticorpos homólogos antiBorrelia burgdorferi em equinos de uso militar no Brasil / Seroprevalence of homologous antiBorrelia burgdorferi antibodies in horses of military use in Brazil

A maioria das atividades de treinamento militar transcorre em ambiente de risco para aquisição de doenças de transmissãovetorial, incluindo importantes zoonoses e doenças emergentes/reemergentes. O objetivo deste estudo foi relatar a ocorrênciade anticorpos homólogos da classe IgG anti-Borrelia burgdorferi em equinos de uso militar no Brasil, assim como analisar osfatores de risco associados à soropositividade nos animais. Foram estudados dois plantéis de equinos, sendo um no municípiode Resende, estado do Rio de Janeiro, tendo sido encontrada prevalência de 29,9%, e outro no município de São Borja, estadodo Rio Grande do Sul, com prevalência de 44,7%, totalizando 474 animais e prevalência de 39,24%. Na análise dos fatores derisco associados, observou-se que a infestação por carrapatos constituiu-se no fator de risco para a soropositividade. A evidênciade circulação de Borrelia spp. com soroprevalência nos equinos reforça seu papel como sentinela, sendo fator de alerta parapotencial ocorrência de casos humanos. Os resultados obtidos reforçam a importância da vigilância epidemiológica dos carrapatosvetores e sua associação tanto com agentes infecciosos de risco para a saúde do efetivo militar humano, como nos equinos deuso militar nas regiões avaliadas. Isto também realça a necessidade da adoção de medidas de proteção coletivas e individuaisvisando mitigar o risco de doenças transmitidas por carrapatos em atividades militares.(AU)

Most military training activities take place at risk for the acquisition of vector-borne diseases, including important zoonosis andemerging/reemerging diseases This study aimed to analyze the seroprevalence of homologous antibodies antiBorrelia burgdorferiin horses for military use in Brazil, as well as to analyze the risk factors associated with seropositivity in animals. Two herds ofhorses for military use were studied, one in the city of Resende, state of Rio de Janeiro, having been found prevalence of 29.9%,and in São Borja, state of Rio Grande do Sul, with prevalence 44,7% to 474 animals and prevalence of 39,3%. In the analysis ofrisk factors, it was observed that the tick infestation constituted risk factors for seropositivity. Evidence of Borrelia spp. circulationwith seroprevalence in horses reinforces its role as sentinels, and alert factor for potential occurrence of human cases. Theseresults support the importance of epidemiological surveillance of vector ticks and its association with agents of risk to the health ofhorses for military use, in the evaluated areas. This also highlights the need to adopt collective and individual protection measuresto mitigate the risk of tick-borne diseases in military activities.(AU)