Oral infection of neonate gerbils by Neospora caninum tachyzoites / Infecção oral de gerbils neonatos com taquizoítos de Neospora caninum

Neosporosis is a parasitic disease caused by the protozoan Neospora caninum which results in major economic losses for cattle breeding due to abortion and other reproductive disorders. Gerbils (Meriones unguiculatus) are commonly used as experimental models for neosporosis due to their high susceptibility to N. caninum infection, both by oocysts ingestion as by tachyzoites/bradyzoites parenteral inoculation. However, the risk of transmission by tachyzoites ingestion is not fully elucidated. In this study, infection of neonate gerbils by N. caninum (NC-1 strain) tachyzoites inoculated by the oral route and the parasite distribution in gerbils' tissues were evaluated by protozoan DNA detection. Seventeen neonate gerbils, aged 4-5 days, were inoculated with 4x105 tachyzoites by the oral route and one gerbil was kept as uninfected control. N. caninum DNA was detected in 100% of the inoculated gerbils, showing that the oral route is effective as a potential route of infection of neonates by N. caninum tachyzoites. N. caninum DNA was reported in all organs evaluated (heart, lungs, kidneys, liver, spleen and brain), with different frequencies. These results showed systemically distributed infection of neonate gerbils after oral inoculation of tachyzoites.(AU)

Neosporose é uma doença parasitária causada pelo protozoário Neospora caninum e resulta em grandes perdas econômicas para a bovinocultura, o que se deve a abortos e outras desordens reprodutivas. Gerbils (Meriones unguiculatus) são comumente utilizados como modelos experimentais para neosporose, devido a sua alta susceptibilidade à infecção por N. caninum, seja pela ingestão de oocistos ou pela inoculação parenteral de taquizoítos/bradizoítos. Porém, o risco de transmissão pela ingestão de taquizoítos não está totalmente elucidado. Neste estudo, foram avaliadas a infecção de gerbils neonatos por taquizoítos de N. caninum (cepa NC-1) inoculados por via oral e a distribuição do parasita nos tecidos desses gerbils, através da detecção de DNA do protozoário. Dezessete gerbils neonatos, com idade de 4-5 dias, foram inoculados com 4x105 taquizoítos por via oral e um gerbil foi mantido como controle não-infectado. DNA de N. caninum foi detectado em 100% dos gerbils inoculados, demonstrando a eficácia da via oral como potencial rota de infecção de neonatos por taquizoítos de N. caninum. DNA de N. caninum foi encontrado, em diferentes frequências, em todos os órgãos avaliados (coração, pulmões, rins, fígado, baço e cérebro). Esses resultados demonstraram infecção sistêmica dos gerbils neonatos após a inoculação oral de taquizoítos.(AU)

Neospora spp. and Toxoplasma gondii infection in sheep flocks from Rio Grande do Sul, Brazil / Infecção por Neospora spp. e Toxoplasma gondii em rebanhos ovinos no Rio Grande do Sul, Brasil

Neospora caninum and Toxoplasma gondii are coccidian parasites (protozoa: Apicomplexa) that cause reproductive losses in ruminants. Although, in sheep, abortion is generally related to T. gondii, potential damage caused by N. caninum must be considered. The aims of this study were to evaluate the frequencies of antibodies against Neospora spp. and T. gondii, and to identify the risk factors related to neosporosis and toxoplasmosis in sheep from ten flocks located in Central-Western, Northwestern, Southwestern, and Southeastern mesoregions of the Rio Grande do Sul state, southern Brazil. Blood samples were collected from 300 sheep (30 per flock) and an epidemiological questionnaire was completed by the farmers. The presence of canids, felids, and rodents, the sources of water for the animals, and their reproductive history were investigated as potential epidemiological factors related to the studied infections. Serum samples were tested by the indirect fluorescent antibody test for the presence of antibodies against Neospora spp. (cutoff 1:50) and T. gondii (cutoff 1:64), with respective frequencies detected being 16.3% (49/300) and 41.3% (124/300). Seropositivity to both parasites was observed in 8% (24/300) of the animals. Neospora spp. and T. gondii were present in 90% (9/10) and 100% (10/10) of the flocks, respectively. The presence of cats in the pastures, pens, and barns...(AU)

Neospora caninum e Toxoplasma gondii são parasitos coccídeos (protozoa: Apicomplexa) que causam perdas reprodutivas em ruminantes. Embora o aborto em ovinos geralmente esteja associado a T. gondii, potenciais perdas causadas por N. caninum devem ser consideradas. Os objetivos deste estudo foram avaliar as frequências de anticorpos contra Neospora spp. e T. gondii e identificar fatores de risco para neosporose e toxoplasmose em ovinos de dez rebanhos localizados nas mesorregiões Centro- Ocidental, Noroeste, Sudoeste e Sudeste, no estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Foram coletadas amostras de soro sanguíneo de 300 ovinos (30 por rebanho) e foi aplicado inquérito epidemiológico aos proprietários dos rebanhos. A presença de canídeos, felídeos e roedores, as fontes de água dos animais, e seu histórico reprodutivo, foram investigados como potenciais fatores epidemiológicos relacionados às infecções estudadas. As amostras de soro foram testadas pela técnica de imunofluorescência indireta para presença de anticorpos contra Neospora spp. (ponto de corte 1:50) e T. gondii (ponto de corte 1:64), sendo encontradas frequências de 16,3% (49/300) e de 41,3% (124/300), respectivamente. Soropositividade para ambos os agentes foi observada em 8% (24/300) dos animais. Neospora spp. e T. gondii estavam presentes em 90% (9/10) e 100% (10/10) dos rebanhos, respectivamente. A presença de gatos nas...(AU)

Neospora spp. and Toxoplasma gondii infection in sheep flocks from Rio Grande do Sul, Brazil / Infecção por Neospora spp. e Toxoplasma gondii em rebanhos ovinos no Rio Grande do Sul, Brasil

Neospora caninum and Toxoplasma gondii are coccidian parasites (protozoa: Apicomplexa) that cause reproductive losses in ruminants. Although, in sheep, abortion is generally related to T. gondii, potential damage caused by N. caninum must be considered. The aims of this study were to evaluate the frequencies of antibodies against Neospora spp. and T. gondii, and to identify the risk factors related to neosporosis and toxoplasmosis in sheep from ten flocks located in Central-Western, Northwestern, Southwestern, and Southeastern mesoregions of the Rio Grande do Sul state, southern Brazil. Blood samples were collected from 300 sheep (30 per flock) and an epidemiological questionnaire was completed by the farmers. The presence of canids, felids, and rodents, the sources of water for the animals, and their reproductive history were investigated as potential epidemiological factors related to the studied infections. Serum samples were tested by the indirect fluorescent antibody test for the presence of antibodies against Neospora spp. (cutoff 1:50) and T. gondii (cutoff 1:64), with respective frequencies detected being 16.3% (49/300) and 41.3% (124/300). Seropositivity to both parasites was observed in 8% (24/300) of the animals. Neospora spp. and T. gondii were present in 90% (9/10) and 100% (10/10) of the flocks, respectively. The presence of cats in the pastures, pens, and barns...

Neospora caninum e Toxoplasma gondii são parasitos coccídeos (protozoa: Apicomplexa) que causam perdas reprodutivas em ruminantes. Embora o aborto em ovinos geralmente esteja associado a T. gondii, potenciais perdas causadas por N. caninum devem ser consideradas. Os objetivos deste estudo foram avaliar as frequências de anticorpos contra Neospora spp. e T. gondii e identificar fatores de risco para neosporose e toxoplasmose em ovinos de dez rebanhos localizados nas mesorregiões Centro- Ocidental, Noroeste, Sudoeste e Sudeste, no estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Foram coletadas amostras de soro sanguíneo de 300 ovinos (30 por rebanho) e foi aplicado inquérito epidemiológico aos proprietários dos rebanhos. A presença de canídeos, felídeos e roedores, as fontes de água dos animais, e seu histórico reprodutivo, foram investigados como potenciais fatores epidemiológicos relacionados às infecções estudadas. As amostras de soro foram testadas pela técnica de imunofluorescência indireta para presença de anticorpos contra Neospora spp. (ponto de corte 1:50) e T. gondii (ponto de corte 1:64), sendo encontradas frequências de 16,3% (49/300) e de 41,3% (124/300), respectivamente. Soropositividade para ambos os agentes foi observada em 8% (24/300) dos animais. Neospora spp. e T. gondii estavam presentes em 90% (9/10) e 100% (10/10) dos rebanhos, respectivamente. A presença de gatos nas...

Evaluation of a bovine pregnancy-associated glycoprotein enzyme-linked immunosorbent assay kit for serological diagnosis of pregnancy in sheep / Avaliação de um kit de ensaio imunoenzimático na detecção de glicoproteínas associadas à prenhez bovina para o diagnóstico sorológico de gestação em ovinos

Pregnancy diagnosis is an important tool for farm management. Ultrasonography is the main technique used for pregnancy diagnosis in ewes. As an alternative, radioimmunoassay (RIA) allows accurate and early detection of pregnancy-associated glycoproteins (PAGs) in sheep blood. However, radioactive-based techniques, as RIA, have been increasingly inadvisable due to environmental risk. Homology between ovine and bovine PAGs is high, and ELISA kits used for PAGs detection in cattle are safer than RIA. Thus, this study aimed to evaluate the feasibility of PAGs detection for pregnancy diagnosis in sheep serum samples using an ELISA kit produced for cattle. The sensitivity and specificity of the ELISA kit were 93.5% and 98.9%, respectively, whereas positive and negative predictive values were 99.0% and 93.1%, respectively, in comparison to ultrasonography diagnostic (control). PAGs reached consistently detectable concentrations in ovine serum around 33 days after mating. Accuracy of the ELISA test was 96.1% from 33 days of pregnancy until lambing. After parturition, PAGs were still detectable seven days post-lambing. However, from 21 days post-parturition, PAGs from the previous pregnancy were no longer detected in serum samples. In conclusion, the bovine ELISA kit can accurately detect pregnancy in sheep 33 days following mating, while PAGs levels from the previous gestation are no l(AU)

O diagnóstico de gestação é uma ferramenta importante no manejo da propriedade. A ultrassonografia é a principal técnica utilizada no diagnóstico de prenhez em ovelhas. Como alternativa, o radiomunoensaio (RIA) permite acurácia e a detecção precoce de proteínas associadas à prenhez (PAGs) no sangue. No entanto, as técnicas radioativas, como o RIA, têm sido cada vez mais desaconselháveis, devido ao risco ambiental. A homologia entre PAGs de ovinos e bovinos é alta, e os kits de ELISA utilizados para a detecção de PAGs em bovinos são mais seguros do que RIA. Portanto, este estudo teve como objetivo avaliar a viabilidade de detecção de PAGs no soro ovino para diagnóstico de gestação em soro ovino, utilizando um kit de ELISA produzido para bovinos. A sensibilidade e a especificidade do kit de ELISA foram de 93,5% e 98,9%, respectivamente, enquanto que os valores preditivos positivo e negativo foram de 99,0% e 93,1%, respectivamente, em comparação com a ultrassonografia (utilizada como referência). As PAGs atingiram concentrações consistentemente detectáveis no soro ovino em torno de 33 dias após o acasalamento. A acurácia do teste de ELISA foi de 96,1% a partir de 33 dias de gestação até o parto. As PAGs ainda eram detectáveis sete dias pós-parto. No entanto, a partir de 21 dias após o parto, as PAGs da prenhez anterior já não eram detectadas no soro. Em conclusão, o kit de ELISA b(AU)

Nested-PCR multiplex test with increased sensitivity for detection of allogeneic cells transplanted from male to female mice / Nested-PCR multiplex com aumento da sensibilidade de detecção de células alogênicas transplantadas de camundongos machos para fêmeas

Cell therapy has shown encouraging perspectives for human and veterinary medicine. Experimentally, genetic manipulation allows to mark and locate allogeneic cells. However, this makes their genotype/phenotype different from non-marked cells used clinically. Alternatively, the presence of the Y-chromosome enables male donor cells detection in female organisms. However, the concentration of engrafted cells may be minimal in tissues, due to systemic distribution. In this study, a nested-PCR multiplex test was developed, aiming to increase the sensitivity of the presence/absence diagnosis of male mice adipose-derived (ADSC-Y) and bone marrow mononuclear (BMNC-Y) cells in samples of blood and lungs from females, after endovenous transplantation. Four females received placebos; four females received ADSC-Y from two males; and four females received BMNC-Y from two males. The PCR first-step included two primer sets (multiplex): one for amplification of a Y-chromosome fragment (SRYout; 300bp); the other for amplification of an X-chromosome (DXNds3 gene) fragment. In the PCR second-step, one primer set (SRYinn) was used for amplification of a 110bp fragment, restrained in the SRYout amplification product. The PCR internal control (DXNds3 gene) was detected in all DNA samples, whereas the SRY gene external fragment (300bp) was detected exclusively in ADSC-Y and BMNC-Y pure DNA samples. The SRY gene internal fragment (110bp) was detected in 100% of the blood and lung samples from the ADSC-Y and BMNC-Y female recipients. The nested-PCR technique increased sensitivity and reliability for molecular diagnostic of presence or absence of male mice cells in body fluids and tissues of female recipients after endovenous transplantation.(AU)

A terapia celular traz perspectivas encorajadoras à medicina humana e veterinária. Experimentalmente, a manipulação genética permite a marcação e a localização de células alogênicas. Porém, isso torna seu genótipo/fenótipo diferente daquelas usadas clinicamente, sem marcação. Alternativamente, a presença do cromossomo Y possibilita detectar células de doadores machos no organismo de fêmeas. Todavia, a concentração de células transplantadas pode ser mínima em certos tecidos, pela distribuição sistêmica. Neste estudo, foi desenvolvida uma nested-PCR multiplex, visando a aumentar a sensibilidade do diagnóstico de presença/ausência de células derivadas do tecido adiposo (CDTA-Y) e derivadas da fração mononuclear da medula óssea (CFMO-Y) de camundongos machos, em amostras de sangue e de pulmões de camundongos fêmeas, após transplante endovenoso. Quatro fêmeas receberam placebo; quatro fêmeas receberam CDTA-Y de dois machos; e quatro fêmeas receberam CFMO-Y de dois machos. A primeira fase da PCR teve dois pares de primers (multiplex): um para amplificação de fragmento do cromossomo Y (SRYout; 300pb); outro para amplificação de fragmento do cromossomo X (gene DXNds3). Na segunda fase da PCR, foi usado um par de primers para amplificação de fragmento de 110pb (SRYinn) interno ao produto amplificado pelo SRYout. O controle interno da reação (gene DXNds3) foi detectado em todas as amostras de DNA testadas, enquanto que o fragmento externo do gene SRY (300pb) foi detectado apenas nas amostras puras de DNA de CDTA-Y e CFMO-Y. O fragmento interno do gene SRY (110pb) foi detectado no sangue e nos pulmões de 100% das receptoras de CDTA-Y e CFMO-Y. A técnica de nested-PCR aumentou a sensibilidade e a segurança do diagnóstico molecular de presença ou ausência de células de camundongos machos em fluidos e tecidos de receptoras fêmeas após transplante endovenoso.(AU)

Combinação de drogas antiparasitárias como uma alternativa para o controle de nematódeos gastrintestinais multirresistentes em ovinos / Combination of drugs as an alternative to control multi-resistant gastrointestinal nematodes in sheep

Este estudo foi realizado com o objetivo de encontrarem-se tratamentos anti-helmínticos eficazes sobre uma população de nematódeos gastrintestinais de ovinos, a qual desenvolveu resistência a todas as classes de drogas com ação nematicida disponíveis para ruminantes no mercado brasileiro. Valendo-se da eficácia calculada de tratamentos convencionais a partir de um estudo prévio e, assim, conhecendo-se sua ação sobre diferentes gêneros de nematódeos presentes no rebanho, selecionaram-se drogas as quais, utilizadas em combinações ou em altas doses, pudessem aumentar significativamente a eficácia dos tratamentos. Utilizou-se o percentual de redução da contagem de ovos nas fezes e as culturas de larvas para avaliar a ação anti-helmíntica dos tratamentos testados. A combinação de moxidectina 1 por cento + disofenol 20 por cento apresentou 99 por cento de eficácia, e as combinações de moxidectina 1 por cento + triclorfon 10 por cento e de moxidectina 1 por cento + fosfato de levamisol 22,3 por cento superaram os 90 por cento de eficácia. A utilização de combinações de princípios ativos, com diferentes mecanismos de ação, pode promover a recuperação da eficácia dos tratamentos anti-helmínticos sobre populações multirresistentes de nematódeos gastrintestinais de ovinos.(AU)

This study was conducted to find effective anthelmintic treatments on a multi-resistant population of gastrointestinal nematodes of sheep, which was found resisting to all the classes of nematicidal drugs available in the Brazilian market. We took as a starting point the data obtained in a previous study performed in the targeted flock, in which were tested conventional treatments. Thus, using the calculated efficacy of the drugs (tested previously) for the genera of nematodes found in the flock, we selected drugs which, combined or used in higher doses, could improve the efficacy of the treatments. We evaluated the anthelmintic action of each treatment using the percentage of reduction of eggs in the feces, along with larvae cultures. A combination of moxidectin 1 percent + disophenol 20 percent showed 99 percent of efficacy, and combinations of moxidectin 1 percent + trichlorphon 10 percent and moxidectin 1 percent + levamisole phosphate 22.3 percent showed efficacy over 90 percent. Combinations of drugs, with different mechanisms of action, can provide effective anthelmintic treatments on multidrug-resistant populations of gastrointestinal nematodes of sheep.(AU)

Detecção de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras individuais e coletivas de leite de bovinos pela reação de imunofluorescência indireta / Detection of antibodies against Neospora caninum in individual and bulk milk samples from cattle by the technique of indirect immunofluorescence assay

Neospora caninum is a major causative agent of reproductive losses in cattle and the diagnosis of neosporosis is essential for control and eradication programs. Therefore, this study aimed to: (1) standardize an indirect immunofluorescence assay (IFAT) for detection of antibodies against N. caninum in bovine milk, starting from a standard IFAT used for blood serum samples; (2) check the agreement between antibodies detection by IFAT in blood serum and in milk of cows; (3) evaluate the suitability of IFAT for detection of anti-N. caninum antibodies in bulk milk samples. We tested samples of blood serum and milk collected from 112 lactating cows for detection of antibodies against N. caninum, furthermore, six bulk milk samples, each one corresponding to each dairy farm studied. Agreement between the detection of antibodies in blood serum (with antibody titer >50) and in milk, with 90 percent of sensitivity and 100 percent of specificity for the IFAT in milk samples were found in 78 percent of the animals. However, for cows with antibody titers >100 in blood serum, the agreement, the sensitivity and the specificity of the IFAT in milk were of 100 percent. It is shown that, considering the dairy farm conditions. The most appropriate diagnostic approach to be adopted regarding the collection of blood serum or milk can elect for search anti-N. caninum antibodies by IFAT. Moreover, detection of antibodies in bulk milk samples can serve for diagnosis and screening of herds with infected animals.(AU)

Neospora caninum é um agente envolvido em perdas reprodutivas em bovinos. O diagnóstico dessa infecção é de grande importância, principalmente para programas de erradicação e controle. Sendo assim, os objetivos deste estudo foram: (1) adaptar uma reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para detecção de anticorpos anti-N. caninum no leite, a partir de uma RIFI padronizada para a detecção desses anticorpos no soro sanguíneo, (2) analisar a concordância entre a detecção desses anticorpos pela RIFI no soro sanguíneo e no leite de fêmeas bovinas, (3) avaliar a viabilidade da RIFI para a detecção de anticorpos anti-N. caninum em amostras coletivas de leite. Foram testadas amostras de soro sanguíneo e de leite, coletadas de 112 vacas em lactação, e seis amostras coletivas de leite, correspondentes a cada uma das propriedades avaliadas. Encontrou-se 78 por cento de concordância entre a detecção de anticorpos no soro sanguíneo (com título de anticorpos >50) e no leite, com sensibilidade de 90 por cento e especificidade de 100 por cento para a RIFI nas amostras de leite. Entretanto, para as vacas com títulos de anticorpos >100 no soro sanguíneo, tanto a concordância como os valores de sensibilidade e especificidade da RIFI no leite foram de 100 por cento. Todas as amostras coletivas de leite foram positivas na RIFI. Isso demonstra que, conforme a propriedade pode-se eleger com segurança qual a melhor abordagem diagnóstica a ser adotada em relação à coleta de soro sanguíneo ou de leite para a pesquisa de N. caninum pela RIFI. Além disso, a determinação da presença de anticorpos em amostras coletivas de leite pode servir para diagnóstico e triagem de rebanhos com animais infectados.(AU)

Ação anti-helmíntica de diferentes formulações de lactonas macrocíclicas em cepas resistentes de nematódeos de bovinos / Anthelmintic action of different formulations of macrocyclic lactones on resistant strains of nematodes of cattle

As lactonas macrocíclicas (LMs) (avermectinas e milbemicinas) são endectocidas amplamente utilizados em animais e em algumas parasitoses humanas. Em bovinos, a resistência parasitária às LMs é emergente, e o surgimento de formulações que diferem nas suas propriedades farmacológicas tornou complexa a escolha da droga mais indicada a cada caso. Com o objetivo de avaliar possíveis alternativas para recuperar a eficácia de LMs sobre cepas resistentes de nematódeos gastrintestinais, testaram-se, neste estudo, dez diferentes tratamentos a base de LMs sobre uma população de nematódeos gastrintestinais de bovinos a qual, sabidamente, sofrera pressão de seleção por avermectinas a 1 por cento. Adicionalmente, testou-se um benzimidazol. A eficácia das drogas foi calculada com base na redução de ovos por grama de fezes (OPG) dos bovinos. A resistência de cada gênero foi avaliada por meio de identificação de larvas, obtidas de cultivos nas fezes, pré- e pós-tratamentos. Não se obteve a eficácia desejada com o emprego de avermectinas de longa ação - com alta concentração e em associação - ou mesmo, com a aplicação de superdoses. Os gêneros Cooperia spp., Haemonchus spp. e Trichostrongylus spp. foram resistentes às avermectinas, e Ostertagia spp. à ivermectina. Observou-se que, uma vez estabelecida a resistência parasitária a LMs a 1 por cento, a aplicação de fármacos, deste mesmo grupo químico, ainda que em formulações mais concentradas, asso-ciações ou superdoses, pode não resultar na eficácia esperada.(AU)

The macrocyclic lactones (MLs) (avermectins and milbemycins) are endectocides broadly used in livestock and in some parasitic diseases of humans. In cattle, parasite resistance to MLs is emerging, and the appearance of formulations that differ in their pharmacological properties become complex the choice of the most appropriate drug to each case. In order to evaluate possible alternatives to restore the effectiveness of MLs on resistant strains of gastrointestinal nematodes, were tested, in this study, ten different treatments based on the MLs on a population of gastrointestinal nematodes of cattle which, known, was under pressure of selection by 1 percent avermectins. Additionally, was tested a benzimidazole. The efficacy of the drugs was calculated with basis on the reduction of eggs per gram of feces (EPG) of cattle. The resistance of each genus was evaluated by identification of the larvae, obtained from culture in the feces, pre- and post-treatments. The desired efficacy was not obtained using long action avermectins - with high concentration and in association - even with the application of high doses. The genera Cooperia spp., Haemonchus spp. and Trichostrongylus spp. were resistant to avermectins, and Ostertagia spp. to ivermectin. It was observed that, once established parasite resistance to the 1 percent MLs, the application of drugs, of this same chemical group, even in formulations of high concentration, association or in high doses, may not result in the expected efficacy.(AU)