Clonagem animal: a sobrevivência dos mais aptos / Animal cloning: survival of the fittest

A clonagem animal por transferência nuclear de célula somática (TNCS) apresenta inúmeras aplicações científicas e comerciais, incluindo a produção de animais transgênicos, a preservação de animais de genética desejável, rara ou em extinção, ou mesmo a aplicação para o estudo de aspectos básicos em biologia molecular, celular e do desenvolvimento. Não obstante, a clonagem por TNCS ainda é ineficiente, com menos de 5% dos embriões clones produzidos resultando em animais nascidos vivos. O sucesso na clonagem exige o exímio domínio técnico e científico de várias disciplinas e áreas de conhecimento, havendo pelo menos cinco etapas críticas no processo associadas a falhas de desenvolvimento, desde a produção in vitro dos embriões até o nascimento de um animal viável. A identificação de fatores associados às falhas em cada etapa, em especial aqueles relacionados ao oócito receptor (citoplasto), à célula doadora (carioplasto) e aos procedimentos técnicos per se de produção de embriões clones, além da observação cuidadosa dos sinais de anormalidades subsequentes à transferência dos embriões para fêmeas receptoras, é essencial para a optimização de todos os procedimentos para a obtenção, em seu final, de um animal clonado viável e que sobreviva até a vida adulta. Esta revisão visa descrever alguns eventos técnicos e biológicos associados ao sucesso e/ou insucesso da clonagem animal.

Animal cloning by somatic cell nuclear transfer (SCNT) has numerous scientific and commercial applications, including the production of transgenic animals, preservation of animals from desirable or rare gene pools, and animals in risk of extinction, or even for the study of basic aspects in molecular, cell and developmental biology. Nevertheless, cloning by SCNT is still inefficient, with less than 5% of cloned embryos resulting in liveborn animals. The cloning success depends on a proficient technical and scientific know-how of a number of disciplines and areas of knowledge, with at least five critical steps in the process associated with developmental failures, from the in vitro production of cloned embryos through the birth of a viable animal. The identification of factors associated with failures in each step, in special to those related to the recipient oocyte (cytoplast), to the nucleus donor cell (karyoplast), and to the technical procedures for the production of cloned embryos per se, along with the careful observation of signs of abnormalities following the transfer of embryos to recipient females, is essential for the optimization of procedures that, ultimately, may result in a cloned animal that survives to adulthood. This review aims to discuss some technical and biological events associated with success and/or failure in animal cloning.

Clonagem animal: a sobrevivência dos mais aptos / Animal cloning: survival of the fittest

A clonagem animal por transferência nuclear de célula somática (TNCS) apresenta inúmeras aplicações científicas e comerciais, incluindo a produção de animais transgênicos, a preservação de animais de genética desejável, rara ou em extinção, ou mesmo a aplicação para o estudo de aspectos básicos em biologia molecular, celular e do desenvolvimento. Não obstante, a clonagem por TNCS ainda é ineficiente, com menos de 5% dos embriões clones produzidos resultando em animais nascidos vivos. O sucesso na clonagem exige o exímio domínio técnico e científico de várias disciplinas e áreas de conhecimento, havendo pelo menos cinco etapas críticas no processo associadas a falhas de desenvolvimento, desde a produção in vitro dos embriões até o nascimento de um animal viável. A identificação de fatores associados às falhas em cada etapa, em especial aqueles relacionados ao oócito receptor (citoplasto), à célula doadora (carioplasto) e aos procedimentos técnicos per se de produção de embriões clones, além da observação cuidadosa dos sinais de anormalidades subsequentes à transferência dos embriões para fêmeas receptoras, é essencial para a optimização de todos os procedimentos para a obtenção, em seu final, de um animal clonado viável e que sobreviva até a vida adulta. Esta revisão visa descrever alguns eventos técnicos e biológicos associados ao sucesso e/ou insucesso da clonagem animal.(AU)

Animal cloning by somatic cell nuclear transfer (SCNT) has numerous scientific and commercial applications, including the production of transgenic animals, preservation of animals from desirable or rare gene pools, and animals in risk of extinction, or even for the study of basic aspects in molecular, cell and developmental biology. Nevertheless, cloning by SCNT is still inefficient, with less than 5% of cloned embryos resulting in liveborn animals. The cloning success depends on a proficient technical and scientific know-how of a number of disciplines and areas of knowledge, with at least five critical steps in the process associated with developmental failures, from the in vitro production of cloned embryos through the birth of a viable animal. The identification of factors associated with failures in each step, in special to those related to the recipient oocyte (cytoplast), to the nucleus donor cell (karyoplast), and to the technical procedures for the production of cloned embryos per se, along with the careful observation of signs of abnormalities following the transfer of embryos to recipient females, is essential for the optimization of procedures that, ultimately, may result in a cloned animal that survives to adulthood. This review aims to discuss some technical and biological events associated with success and/or failure in animal cloning.(AU)

Criptococose canina: descrição no município deMossoró, Rio Grande do Norte, Brasil / Canine cryptococcosis: description in the municipality of Mossoro, Rio Grande doNorte, Brazil

A criptococose é uma micose sistêmica causada pelo fungo saprófita Cryptococcus neoformans. Oscães e os gatos são as espécies mais suscetíveis à doença. Todavia, a criptococose em pequenos animaisencontra-se pouco descrita nos estados do Nordeste do Brasil. Nesse sentido, relatou-se umcaso de criptococose em um canino oriundo da cidade de Mossoró, estado do Rio Grande do Norte.Uma cadela da raça poodle, com três anos de idade, foi encaminhada para consulta devido à rinitecrônica. O exame físico revelou secreção nasal serosa, estridores respiratórios e linfonodos poplíteoshipertrofiados. Foi colhido material (da cavidade nasal e linfonodos poplíteos) para exame citológicoe microbiológico. A citologia constatou estruturas leveduriformes, basofílicas, esféricas e com cápsulasmucóides, sugestivas de Cryptococcus. A cultura microbiológica isolou o fungo C. neoformans.A análise genotípica detectou que o agente pertencia à variedade grubii (sorotipo A). Prescreveu-separa a paciente um tratamento com itraconazol, na posologia de 10mg/kg, SID, por 90 dias. O animalapresentou adequada recuperação e não demonstrou sinais de recidiva da doença. Embora incomumno Nordeste brasileiro, a criptococose deve ser considerada em cães habitantes de tal região.(AU)

Cryptococcosis is a systemic mycosis caused by the saprophytic fungus Cryptococcus neoformans.Dogs and cats are the species most susceptible to the disease. However, in small animals cryptococcosisis rarely described in the Northeastern states of Brazil. Accordingly, we report a case of cryptococcosisin a dog coming from the city of Mossoro, state of Rio Grande do Norte. A three year old femalepoodle dog was referred for consultation due to chronic rhinitis. Physical examination revealed serousnasal discharge, stridor and hypertrophied popliteal lymph nodes. Material was collected (from thenasal cavity and popliteal lymphnodes) for cytological and microbiological examination. Cytologyshowed spherical, basophilic, yeast-like structures with mucoid capsules, suggestive of Cryptococcus.Microbiological culture isolated the fungus C. neoformans. The genotypic analysis detected that theagent belonged to the variety grubii (serotype A). It was prescribed for the patient a treatment withitraconazole at the dosage of 10 mg/kg, SID for 90 days. The animal showed adequate recovery and no signs of relapse. Although uncommon in the northeastern Brazil, cryptococcosis should be consideredin dogs living in that region.(AU)

Criptococose canina: descrição no município deMossoró, Rio Grande do Norte, Brasil / Canine cryptococcosis: description in the municipality of Mossoro, Rio Grande doNorte, Brazil

A criptococose é uma micose sistêmica causada pelo fungo saprófita Cryptococcus neoformans. Oscães e os gatos são as espécies mais suscetíveis à doença. Todavia, a criptococose em pequenos animaisencontra-se pouco descrita nos estados do Nordeste do Brasil. Nesse sentido, relatou-se umcaso de criptococose em um canino oriundo da cidade de Mossoró, estado do Rio Grande do Norte.Uma cadela da raça poodle, com três anos de idade, foi encaminhada para consulta devido à rinitecrônica. O exame físico revelou secreção nasal serosa, estridores respiratórios e linfonodos poplíteoshipertrofiados. Foi colhido material (da cavidade nasal e linfonodos poplíteos) para exame citológicoe microbiológico. A citologia constatou estruturas leveduriformes, basofílicas, esféricas e com cápsulasmucóides, sugestivas de Cryptococcus. A cultura microbiológica isolou o fungo C. neoformans.A análise genotípica detectou que o agente pertencia à variedade grubii (sorotipo A). Prescreveu-separa a paciente um tratamento com itraconazol, na posologia de 10mg/kg, SID, por 90 dias. O animalapresentou adequada recuperação e não demonstrou sinais de recidiva da doença. Embora incomumno Nordeste brasileiro, a criptococose deve ser considerada em cães habitantes de tal região.

Cryptococcosis is a systemic mycosis caused by the saprophytic fungus Cryptococcus neoformans.Dogs and cats are the species most susceptible to the disease. However, in small animals cryptococcosisis rarely described in the Northeastern states of Brazil. Accordingly, we report a case of cryptococcosisin a dog coming from the city of Mossoro, state of Rio Grande do Norte. A three year old femalepoodle dog was referred for consultation due to chronic rhinitis. Physical examination revealed serousnasal discharge, stridor and hypertrophied popliteal lymph nodes. Material was collected (from thenasal cavity and popliteal lymphnodes) for cytological and microbiological examination. Cytologyshowed spherical, basophilic, yeast-like structures with mucoid capsules, suggestive of Cryptococcus.Microbiological culture isolated the fungus C. neoformans. The genotypic analysis detected that theagent belonged to the variety grubii (serotype A). It was prescribed for the patient a treatment withitraconazole at the dosage of 10 mg/kg, SID for 90 days. The animal showed adequate recovery and no signs of relapse. Although uncommon in the northeastern Brazil, cryptococcosis should be consideredin dogs living in that region.

Leveduras associadas à cloaca e a excrementos de pombos (Columba livia): um enfoque especial para os aspectos micológicos de Cryptococcus spp / Yeasts associated with pigeon droppings and cloaca (Columba livia): a special focus for the mycological aspects of Cryptococcus spp

Aves industriais, domésticas e silvestres têm sido implicadas como possíveis carreadores de fungos patogênicos, tais como Cryptococcus spp. e Candida spp. Em especial, diversos estudos têm detectado a presença de Cryptococcus spp. em fezes de psitaciformes, passeriformes, columbiformes e falconiformes. Para investigar a ocorrência de Cryptococcus spp., assim como de outras leveduras na cloaca e fezes de pombos, 47 amostras de excrementos e 322 amostras provenientes da cloaca foram coletadas na cidade de Fortaleza-Ceará, Brasil. As amostras de fezes suspensas em solução fisiológica estéril (0,9%) e as da cloaca foram semeadas em meio ágar semente de niger (ASN) e ácido caféico modificado (ACM). As colônias leveduriformes eram subcultivadas em ágar Sabouraud 2% para a identificação fúngica por meio de testes micológicos específicos. Para a identificação de Cryptococcus spp. foram realizados os seguintes procedimentos: crescimento em meio L-canavanina azul de bromotimol (CGB), auxonograma em API 20C e PCR. A partir das fezes dos pombos, foi possível isolar: C. neoformans var. neoformans. (n=10), C. laurentii (n=3), C. albicans (n=9), C. tropicalis (n=3), C. krusei (n=1), C. parapsilosis (n=1), Rhodotorula sp. (n=6), Trichosporon sp. (n=3); enquanto da cloaca isoloram-se: C. albicans (n=3), C. tropicalis (n=1), Trichosporon sp. (n=3) and Rhodotorula sp. (n=2). Outro objetivo deste estudo foi investigar a sensibilidade, in vitro, de cepas ambientais e humanas de Cryptococcus spp., através da técnica da microdiluição em caldo preconizada pelo CLSI, (M27-A2). Assim, foram testadas as 10 cepas de C. neoformans var. neoformans e as três cepas de C. laurentii isoladas neste estudo, bem como foram incluídas no teste seis cepas de C. neoformans var. neoformans, obtidas de amostras clínicas humanas e estocadas em nossa micoteca. Entre os isolados ambientais, a resistência só foi detectada em uma única cepa de C. neoformans var. neoformans para o itraconazol (CIM=1g/mL). Dentre as seis cepas de C. neoformans var. neoformans humanas foi observado o seguinte padrão de resistência: itraconazol (n=1), fluconazol (n=3), anfotericina B (n=4). Ademais, foi detectada a presença de multiresistência entre as cepas humanas para fluconazol e anfotericina B (n=2) e para itraconazol e anfotericina B (n=1). Todos os isolados humanos e ambientais foram resistentes a caspofungina. O último objetivo deste estudo foi investigar a capacidade das lectinas como marcadores biológicos de C. neoformans var. neoformans. Para tanto, foi realizado um ensaio de fluorescência direta utilizando lectinas marcadas. Neste protocolo foram testadas cinco cepas de C. neoformans var. neoformans e cinco lectinas (Dioclea violácea - DVL, Cratilya floribunda - CFL, Dioclea grandiflora - DGL, Canavalia braziliensis - ConBr e Dioclea virgata DVG). O padrão de marcação das lectinas foi classificado como: +++ (intenso), ++ (moderado), + (discreto) e (ausente). A lectina DVL foi a que apresentou a melhor capacidade de ligação nas cepas de C. neoformans var. neoformans, seguida por CFL, ConBr, DGL e DVG. Em suma, o presente estudo mostrou a importância dos pombos na disseminação de Cryptococcus spp., Candida spp., Rhodotorula sp e Trichosporon sp., bem como detectou resistência antifúngica em cepas de C. neoformans var. neoformans. Por fim, demonstrou a capacidade de lectinas, particularmente a DVL, para a marcação de C. neoformans var. neoformans

Industrials, domestic and wild birds are known to act as possible carriers of pathogenic fungi such as: Cryptococcus spp. e Candida spp. In particular, several studies have been detected the occurrence of Cryptococcus spp. from bird excrements in psittaciformes, passeriformes, columbiformes and falconiformes. In order to investigate the occurrence of Cryptococcus spp. as well as others yeasts in the cloacae and feces of pigeons, 47 samples of pigeon droppings and 322 samples from pigeon cloacae were collected in the city of Fortaleza-Ceará, Brazil. Feces samples suspended in sterile saline and cloacae swabs were smeared on niger seed agar medium (NSA) and on minimal synthetic caffeic acid medium (MSCAM). Yeast-like colonies were subcultured in Sabouraud glucose agar 2% for fungal identification by specific mycologic tests. For identification of Cryptococcus spp., growth in L-canavanine-glicyne-bromothymol blue (CGB), identification by auxanogram on API 20C and PCR were performed. C. neoformans var. neoformans. (n=10), C. laurentii (n=3), C. albicans (n=9), C. tropicalis (n=3), C. krusei (n=1), C. parapsilosis (n=1), Rhodotorula sp. (n=6), Trichosporon sp. (n=3) were isolated from the pigeon droppings. C. albicans (n=3), C. tropicalis (n=1), Trichosporon sp. (n=3) and Rhodotorula sp. (n=2). were recovered from the cloacae. Furthermore, the in vitro antifungal susceptibility of the environmental and human strains of Cryptococcus spp. was investigated by the microdiluition method as recommended by CLSI (M27-A2). Thus, the 10 isolates of C. neoformans var. neoformans and the three isolates of C. laurentii here isolated, as well as six strains of C. neoformans var. neoformans from human, stored in our fungal culture collection, were tested in this study. Among the environmental Cryptococcus, resistance was detected in only one strain of C. neoformans var. neoformans, which was resistant to itraconazole (MIC=1g/ml). However, from the six human strains the following resistances were observed: itraconazole (n=1), fluconazole (n=3) e amphotericin B (n=4), In addition, multiresistance was detected in human strains to fluconazole and amphotericin B (n=2) and to itraconazole and amphotericin B (n=1). All environmental and clinical isolates were resistant to caspofungin. Finally, it was investigate the lectins ability to binding C. neoformans cells by direct fluorescence using labeled lectins. For that, five C. neoformans var. neoformans strains and five lectins (Dioclea violacea - DVL, Cratilya floribunda - CFL, Dioclea grandiflora - DGL, Canavalia braziliensis - ConBr e Dioclea virgata DVG) were tested. The binding pattern was classified as follows: +++ (intense), ++ (moderate), + (discreet) e (absent). The DVL was the lectin that showed better ability to binding to C. neoformans var. neoformans cells, fllowed by CFL, ConBr, DGL e DVG. Summary, the present study showed the importance of pigeons in disseminating Cryptococcus spp., Candida spp., Trichosporon sp. and Rhodotorula sp., and additionally, it evidenced some antifungal resistance in C. neoformans var. neoformans. Finally, it was observed that lectins, especially DVL, are able to binding to C. neoformans cells