Efeito da suplementação com fontes de ácido graxos poliinsaturados em doadoras primíparas da raça Nelore durante o pré e pós-parto sobre número de oócitos obtidos in vivo e produção in vitro de embriões / Effect of pre- anc postcalving supplementation of primiparous Nellore donor cows with sources of polyunsarurated fatty acids on the number of oocytes obtained in vivo and in vitro embryo production

O objetivo do trabalho foi avaliar os efeitos das suplementações ricas em ácidos linoleico (n-6) e linolênico (n-3) protegidos ou não, no pré e pós-parto de fêmeas primíparas da raça Nelore sobre número de folículos, número total de complexos cúmulos oócitos (CCO) aspirados (OPU) e de oócitos susceptíveis ao cultivo (graus I, II e III) e a produção in vitro de embriões (PIVE). As doadoras foram divididas aleatoriamente em 3 grupos: Controle (n=7), Megalac-E® (n=8; 100 g/doadora/dia) e Linhaça (n=7; 1,0 kg/doadora/dia). As dietas foram fornecidas pelo menos 30 dias pré-parto e 75 dias pós-parto. Estes animais foram submetidos à OPU nos dias 30, 45, 60 e 75 do pós-parto. Os oócitos recuperados foram selecionados e os considerados susceptíveis ao cultivo submetidos aos procedimentos da PIVE. Os dados foram analisados em um delineamento inteiramente casualisado com medidas repetidas no tempo. Não foi detectado efeito das suplementações no número de folículos, no número de CCO recuperados e susceptíveis ao cultivo e na PIVE. No entanto, houve um aumento na taxa de oócitos susceptíveis ao cultivo recuperado pela OPU nos dias 60 e 75 do pós-parto em comparação aos dias 30 e 45. Além disso, a taxa de embriões produzidos in vitro foi maior a partir do dia 45 pós-parto. Em conclusão, a suplementação pré e pós-parto com 100 g/dia de Megalac-E® ou 1,0 kg/dia de torta de linhaça não altera o número de oócitos obtidos in vivo e a PIVE de doadoras primíparas da raça Nelore lactantes. No entanto, a PIVE melhora quando os programas são realizados após 45 dias pós-parto...

The objective of this study was to evaluate the effects of feeding primiparous Nellore cows supplements rich in protected or unprotected linoleic (n-6) and linolenic (n-3) acids before and after calving on the number of follicles, total number of cumulus-oocyte complexes (COCs) collected by aspiration (OPU) and oocytes suitable for culture (grades I, II and III), and in vitro embryo production (IVEP). The donor cows were randomly divided into three groups: control (n=7), Megalac-E® (n=8; 100 g/donor/day), and flaxseed (n=7; 1.0 kg/donor/day). The diets were offered at least 30 days precalving and 75 days postcalving. The animals were submitted to OPU on postcalving days 30, 45, 60 and 75. Recovered oocytes were selected and those considered suitable for culture were submitted to the IVEP procedures. The data were analyzed using a completely randomized design with repeated measures over time. There was no effect of supplementation on the number of follicles, the number of recovered COCs and those suitable for culture, or IVEP. However, the rate of oocytes suitable for culture recovered by OPU was higher on postcalving days 60 and 75 when compared to days 30 and 45. Additionally, the rate of embryos produced in vitro increased after postcalving day 45. In conclusion, pre- and postcalving supplementation with 100 g/day Megalac-E® or 1.0 kg/day flaxseed does not alter the number of oocytes obtained in vivo or IVEP rates of lactating primiparous Nellore donor cows. However, IVEP improves when the programs are carried out 45 days after calving...

Efeito da suplementação com fontes de ácido graxos poliinsaturados em doadoras primíparas da raça Nelore durante o pré e pós-parto sobre número de oócitos obtidos in vivo e produção in vitro de embriões / Effect of pre- anc postcalving supplementation of primiparous Nellore donor cows with sources of polyunsarurated fatty acids on the number of oocytes obtained in vivo and in vitro embryo production

O objetivo do trabalho foi avaliar os efeitos das suplementações ricas em ácidos linoleico (n-6) e linolênico (n-3) protegidos ou não, no pré e pós-parto de fêmeas primíparas da raça Nelore sobre número de folículos, número total de complexos cúmulos oócitos (CCO) aspirados (OPU) e de oócitos susceptíveis ao cultivo (graus I, II e III) e a produção in vitro de embriões (PIVE). As doadoras foram divididas aleatoriamente em 3 grupos: Controle (n=7), Megalac-E® (n=8; 100 g/doadora/dia) e Linhaça (n=7; 1,0 kg/doadora/dia). As dietas foram fornecidas pelo menos 30 dias pré-parto e 75 dias pós-parto. Estes animais foram submetidos à OPU nos dias 30, 45, 60 e 75 do pós-parto. Os oócitos recuperados foram selecionados e os considerados susceptíveis ao cultivo submetidos aos procedimentos da PIVE. Os dados foram analisados em um delineamento inteiramente casualisado com medidas repetidas no tempo. Não foi detectado efeito das suplementações no número de folículos, no número de CCO recuperados e susceptíveis ao cultivo e na PIVE. No entanto, houve um aumento na taxa de oócitos susceptíveis ao cultivo recuperado pela OPU nos dias 60 e 75 do pós-parto em comparação aos dias 30 e 45. Além disso, a taxa de embriões produzidos in vitro foi maior a partir do dia 45 pós-parto. Em conclusão, a suplementação pré e pós-parto com 100 g/dia de Megalac-E® ou 1,0 kg/dia de torta de linhaça não altera o número de oócitos obtidos in vivo e a PIVE de doadoras primíparas da raça Nelore lactantes. No entanto, a PIVE melhora quando os programas são realizados após 45 dias pós-parto...(AU)

The objective of this study was to evaluate the effects of feeding primiparous Nellore cows supplements rich in protected or unprotected linoleic (n-6) and linolenic (n-3) acids before and after calving on the number of follicles, total number of cumulus-oocyte complexes (COCs) collected by aspiration (OPU) and oocytes suitable for culture (grades I, II and III), and in vitro embryo production (IVEP). The donor cows were randomly divided into three groups: control (n=7), Megalac-E® (n=8; 100 g/donor/day), and flaxseed (n=7; 1.0 kg/donor/day). The diets were offered at least 30 days precalving and 75 days postcalving. The animals were submitted to OPU on postcalving days 30, 45, 60 and 75. Recovered oocytes were selected and those considered suitable for culture were submitted to the IVEP procedures. The data were analyzed using a completely randomized design with repeated measures over time. There was no effect of supplementation on the number of follicles, the number of recovered COCs and those suitable for culture, or IVEP. However, the rate of oocytes suitable for culture recovered by OPU was higher on postcalving days 60 and 75 when compared to days 30 and 45. Additionally, the rate of embryos produced in vitro increased after postcalving day 45. In conclusion, pre- and postcalving supplementation with 100 g/day Megalac-E® or 1.0 kg/day flaxseed does not alter the number of oocytes obtained in vivo or IVEP rates of lactating primiparous Nellore donor cows. However, IVEP improves when the programs are carried out 45 days after calving...(AU)

Influência do diâmetro e da fase folicular sobre a competência in vitro de oócitos obtidos de novilhas da raça Nelore / Influence of diameter and follicular fase on the in vitro competence of oocytes from Nelore heifers

Avaliou-se o efeito do diâmetro e da fase do desenvolvimento folicular sobre a competência de oócitos para a produção in vitro de embriões bovinos. A primeira onda folicular foi sincronizada com progestógeno por nove dias e 24 horas após a sua retirada aplicou-se LH. Os ovários foram recuperados 60h (G-60), 96h (G-96) e 108h (G-108) após a ovulação induzida pelo LH. Os folículos foram dissecados ou aspirados e medidos e os oócitos recuperados e submetidos à maturação, fecundação e cultivo in vitro. Os ovários do G-60 apresentaram mais oócitos viáveis (graus I, II e III) (96,6 por cento). A taxa de clivagem teve efeito significativo sobre o diâmetro folicular, sendo maior nos oócitos oriundos de folículos classe 3 (>7mm). Na taxa de produção de blastocisto observou-se interação diâmetro versus fase de desenvolvimento folicular. A taxa de produção de blastocisto foi maior em oócitos obtidos de folículos com diâmetros <5mm (classe 1) no G-60 (64,5 por cento), de 5-7mm (classe 2) no G-96 (33,3 por cento) e >7mm (classe 3) no G-108 (50 por cento). Conclui-se que o diâmetro e a fase de desenvolvimento folicular influenciam a competência oocitária para o desenvolvimento in vitro. Nos estádios iniciais da onda folicular a produção de blastocisto foi maior em oócitos de folículos pequenos; com o avanço da onda, a produção de blastocistos foi maior em oócitos obtidos de folículos maiores.(AU)

The effect of follicular phase and follicle diameter on in vitro production of bovine embryos was evaluated. Follicular wave was synchronized in Nelore heifers with a progestogen for nine days and LH was administered 24 hours after progestogen withdrawal. Ovaries were recovered 60h (G-60), 96 h (G-96), or 108 h (G-108) after LH treatment. Ovarian follicles were dissected or aspirated and measured before oocytes were recovered and submitted to in vitro maturation, fertilization, and culture. The G-60 ovaries presented more viable oocyte (degrees I, II and III) (96.6 percent). Cleavage rate was higher for oocytes from follicles 7mm in diameter (class 3). There was a follicular phase-by-follicle diameter interaction effect on blastocyst production rate. Blastocyst production rates were higher for oocytes from follicles 5mm in diameter (class 1) in the G-60 group (64.5 percent), from follicles 5-7mm (class 2) in the G-96 group (33.3 percent), and from follicles 7mm (class 3) in the G-108 group (50 percent). Both the phase of follicular development and the follicle diameter influenced oocyte competence and ability for development in vitro. At the initial stages of the follicular wave, blastocyst production was higher for oocytes from small follicles. However, as the follicular wave advances, blastocyst production increases for oocytes from larger follicles.(AU)

Oocyte activation and preimplantation development of bovine embryos obtained by specific inhibition of cyclin-dependent kinases / Ativação oocitária e desenvolvimento pré-implantação de embriões bovinos obtidos com o uso de inibidores específicos das quinases dependentes de ciclina

The efficiency of bohemine and roscovitine in combination with ionomycin on parthenogenetic activation and initial embryonic development of bovine oocytes was studied. Two experiments were performed: in the first, different concentrations (0, 50, 75 or 100æM) and different exposure periods (2, 4 or 6 hours) to bohemine or roscovitine were tested for activation rates of in vitro matured (IVM) bovine oocytes, which were pre-exposed to ionomycin. The best treatments, 75µM bohemine and 50µM roscovitine, both for 6h, were used in the second experiment, in which IVM bovine oocytes were exposed to ionomycin, followed or not by bohemine or roscovitine treatment, and evaluated for nuclear status, activation rate and blastocyst development were assessed. The combined treatments (ionomycin + cyclin-dependent kinases inhibitors - CDKIs) showed better results for activation rates (77.3 percent) and initial embryonic development (35.2 percent) than the single ionomycin treatment (69.4 percent for activation and 21.9 percent for development); and also lead to a more uniform activation (nearly 90 percent single pronucleus development). The results showed that CDKIs improve the effects of ionomycin on parthenogenetic activation and blastocyst development in bovine oocytes and could help to achieve more efficient activation protocols, increasing the developmental competence of embryos obtained by reproductive biotechniques.(AU)

Realizaram-se dois experimentos para avaliar a eficiência da bohemina e roscovitina associadas à ionomicina para ativação partenogenética e desenvolvimento embrionário inicial de bovinos. No primeiro, foram testadas diferentes concentrações (0, 50, 75 ou 100æM) e diferentes tempos de exposição (2, 4 ou 6 horas) à bohemina ou à roscovitina na ativação de oócitos bovinos maturados in vitro (MIV) pré-expostos à ionomicina. Os melhores tratamentos, bohemina 75µM e roscovitina 50µM, ambos por seis horas, foram utilizados no segundo experimento, no qual oócitos bovinos MIV foram expostos à ionomicina seguido ou não pelo tratamento com inibidores específicos das quinases dependentes de ciclina (CDKI), e avaliados quanto à configuração nuclear, taxa de ativação e desenvolvimento até blastocisto. Os tratamentos combinados (ionomicina+CDKI) apresentaram melhor taxa de ativação (77,3 por cento) e desenvolvimento embrionário inicial (35,2 por cento) do que a ionomicina sozinha (69,4 por cento e 21,9 por cento, respectivamente), e também promoveram ativação mais uniforme (aproximadamente 90 por cento de formação de um pronúcleo). Estes resultados demonstram que os CDKIs potencializam o efeito da ionomicina na ativação e desenvolvimento embrionário inicial e podem auxiliar na obtenção de protocolos de ativação mais eficientes, aumentando a capacidade de desenvolvimento de embriões produzidos por meio de biotécnicas reprodutivas.(AU)

Testosterona e gonadotrofina coriônica humana estimulam a esteroidogênese em células da granulosa de folículo pré-ovulatório de égua? / Do testosterone and human chorionic gonadotropin stimulate steroidogenesis in granulosa cells of preovulatory follicle in mare?

Avaliou-se o papel da gonadotrofina coriônica humana (hCG) e da testosterona na produção de progesterona (P4) e 17ß-estradiol (E2) pelas células da granulosa cultivadas in vitro de folículo antral de égua. Os tratamentos usados foram: 1- controle (nenhum hormônio adicionado), 2- 1UI hCG (0,3µg/ml) e 3- 10UI hCG (3,0µg/ml). O tratamento com hCG foi realizado na presença ou não de testosterona (144ng/ml). O meio foi coletado e substituído com 0,25, 3, 6, 12, 24 e 144h de cultivo. As concentrações de P4 e E2 foram mensuradas por radioimunoensaio. Não se observou diferença entre os tratamentos 1 e 3 quanto à produção de P4 e E2; o tratamento 1 resultou em aumento da concentração de progesterona após 24h de cultura (P<0,01), mas somente em presença de testosterona. A concentração de estradiol aumentou em presença de testosterona, alcançando concentração máxima com 6h de cultura (P<0,01), e diminuiu gradativamente, até atingir a concentração observada com 0,25h de cultura. A adição de hCG não influenciou a síntese do estradiol. A testosterona desempenhou importante efeito estimulador na síntese/secreção doe E2 pelas células da granulosa e modulou a ação do hormônio luteinizante na diferenciação e luteinização das células da granulosa de folículo antral presumidamente pré-ovulatório de égua in vitro.(AU)

The role of the human chorionic gonadotropin (hCG) and testosterone was evaluated in the progesterone (P4) and estradiol-17b (E2) production by granulosa cells of antral follicles from mare cultivated in vitro. The treatment (groups) with gonadotropin consisted of: 1- control (no added hormone); 2- 1 IU hCG (0.3mg/ml) and 3- 10 IU hCG (3.0mg/ml). The treatment with hCG was carried out in the presence or not of testosterone (144ng/ml). The culture medium was collected and replaced at 0.25, 3, 6, 12, 24 and 144h of culture. The concentrations of P4 and E2 were measured by radioimunoassay. Analyses of variance were used for P4 and E2, and mean of the factors were compared by the Tukey test at 5% of probability. No difference was observed between 1 and 2 groups. Treatment with 1 IU of hCG increased progesterone concentration after 24h of culture (P<0.01), only in the presence of testosterone. The concentration of estradiol increased in the presence of testosterone, reaching maximum concentration with 6h of culture (P<0.01), and reduced gradually until the observed concentration at 0.25h of culture. The addition of hCG had no effect in the synthesis of this steroid. The testosterone modulates the action of the luteinizing hormone in the differentiation and luteinization of the granulosa cells and plays important estimulator effect in the synthesis/secretion of E2 by granulosa cells in vitro of presumptive pre-ovulatory antral follicle in mare.(AU)

Activation of bovine oocytes by strontium combined or not with an electric pulse / Ativação de oócitos bovinos com estrôncio combinado ou não com pulso elétrico

O objetivo deste trabalho foi avaliar as taxas de ativação e de clivagem de oócitos bovinos tratados com estrôncio (10mm de SrCl2), após maturação in vitro por 27-28 horas. No experimento 1, os tratamentos foram: S4 - ativação pelo estrôncio por 4 horas; S12 - ativação pelo estrôncio por 12 horas; S30 - ativação pelo estrôncio por 30 horas; e P - ativação por pulso elétrico (3 pulsos de 1,0kv/cm). No experimento 2 os tratamentos foram: PS4 - ativação combinada pelo pulso elétrico e pelo estrôncio por 4 horas; S4P - ativação pelo estrôncio por 4 horas e pelo pulso elétrico; e PS30 - ativação pelo pulso elétrico e pelo estrôncio por 30 horas. No experimento 1, todos os tratamentos apresentaram taxas similares de ativação (83-90 por cento; P>0,05). Para clivagem, P foi melhor (53 por cento; P<0,05) do que todos os tratamentos com estrôncio (6 a 28 por cento). No experimento 2, o tratamento S4P apresentou melhor taxa de ativação (88 por cento; P<0,05) do que PS4 e PS30 (60 e 68 por cento, respectivamente). Para clivagem, observou-se o mesmo padrão, S4P (65 por cento; P<0,05) e PS4 e PS30 (37 por cento e 44 por cento, respectivamente). Conclui-se que o estrôncio é capaz de ativar oócitos bovinos e sua combinação com pulso elétrico não melhora a ativação. Este é o primeiro relato demonstrando que o estrôncio ativa oócitos bovinos.(AU)

Effect on insulin-like growth factor-1 during in vitro oocyte maturation and in vitro culture of bovine embryos / Efeito do fator de crescimento semelhante à insulina-1 durante a maturação in vitro dos oócitos e cultivo in vitro de embriões bovinos

The effects of insulin-like growth factor-I (IGF-I) on in vitro maturation (IVM) (experiment I) and on in vitro embryo development (experiment II) of bovine oocytes fertilized in vitro, were evaluated in terms of cleavage (CR), blastocyst (BR) and hatching (HR) rates. For IVM, immature cumulus-oocyte complexes were cultured in TCM-199 medium supplemented with Hepes, sodium bicarbonate, sodium pyruvate, additives, fetal calf serum (B-199 medium) and gonadotropins (14 U/ml PMSG and 7 U/ml hCG). For embryo development, the oocytes/zygotes were cultured in B-199 medium with bovine oviduct epithelial cells in suspension under silicon oil. Treatments for in vitro culture conditions for both experiments were: 1- B-199 + 200 ng/ml IGF-I; 2- B-199 + 100 ng/ml IGF-I; 3- B-199 + 50 ng/ml IGF-I; 4- B-199 + 10 ng/ml IGF-I; 5- B-199 + 0 ng/ml IGF-I. All cultures were performed at 38.5oC in 5% CO2 in air and the data were analyzed by chi-square test. In experiment I, there were no differences (P>0.05) among treatments for CR, BR or HR. In experiment II, the addition of IGF-I to the embryo culture medium (ECM) resulted in a significant increase in CR while for BR and HR this effect was not observed. The addition of 200 ng/ml IGF-I to ECM increased CR (71.1%) when compared to 100 ng/ml IGF-I (57.6%) or control (56.7%) groups, however, there were no differences when compared to 50 (69.4%) or 10 ng/ml (73.1%) groups. There was no beneficial effect of the addition of IGF-I in the IVM or ECM media on the in vitro development of embryos produced from oocytes matured and fertilized in vitro. (AU)

Avaliaram-se o efeito do IGF-I na maturação in vitro (MIV) (experimento I) e no desenvolvimento embrionário (DE) (experimento II) de oócitos bovinos fecundados in vitro, quanto às taxas de clivagem (TC), de blastocistos (TB) e de eclosão (TE). Para MIV, complexos cumulus-oócitos imaturos foram cultivados em meio TCM-199 suplementado com HEPES, bicarbonato e piruvato de sódio, aditivos, soro fetal bovino (meio B-199) e gonadotrofinas 14U/ml de PMSG e 7U/ml de hCG). Para o desenvolvimento embrionário, os oócitos/zigotos foram cultivados em meio B-199 com células epiteliais do oviduto bovino em suspensão sob óleo de silicone. As condições de cultivo in vitro para ambos os experimentos seguiram os tratamentos: 1- meio B-199 + 200 ng/ml IGF-I; 2- B-199 + 100 ng/ml IGF-I; 3- B-199 + 50 ng/ml IGF-I; 4- B-199 + 10 ng/ml IGF-I; 5- B-199 + 0 ng/ml IGF-I. Todas as culturas foram realizadas a 38,5° C em atmosfera com 5% de CO2 e os dados foram analisados pelo teste do qui-quadrado. No experimento I, não houve diferença (P>0,05) entre os tratamentos quanto às TC, TB e TE, quando o meio de MIV foi suplementado com IGF-I. No experimento II, a adição de IGF-I ao meio de DE resultou em aumento na TC (P<0,05) mas não influenciou a TB e a TE. A adição de 200 ng/ml de IGF-I ao meio DE melhorou a TC (71,1%) quando comparada com a TC dos grupos de 100 ng/ml de IGF-I (57,6%) ou controle (56,7%), entretanto não houve diferença quando comparada com a dos grupos de 50 ng/ml (69,4%) ou 10 ng/ml (73,1%) de IGF-I. Não houve efeito benéfico na adição de 10 a 200 ng/ml de IGF-I nos meios de MIV e de DE com relação ao desenvolvimento de embriões produzidos a partir de oócitos maturados e fecundados in vitro. (AU)