Resumo
Two waterbucks from São Paulo Zoo Foundation exhibited respiratory symptoms in July 2004. After euthanasia, granulommas in lungs and mediastinic lymph nodes were observed. Acid-fast bacilli isolated were identified as Mycobacterium bovis spoligotype SB0121 by PRA and spoligotyping. They were born and kept in the same enclosure with the same group, without any contact to other species housed in the zoo. This is the first detailed description of M. bovis infection in Kobus ellipsiprymnus.
Resumo
The objective of the present study was to improve the detection of B. abortus by PCR in organs of aborted fetuses from infected cows, an important mechanism to find infected herds on the eradication phase of the program. So, different DNA extraction protocols were compared, focusing the PCR detection of B. abortus in clinical samples collected from aborted fetuses or calves born from cows challenged with the 2308 B. abortus strain. Therefore, two gold standard groups were built based on classical bacteriology, formed from: 32 lungs (17 positives), 26 spleens (11 positives), 23 livers (8 positives) and 22 bronchial lymph nodes (7 positives). All samples were submitted to three DNA extraction protocols, followed by the same amplification process with the primers B4 and B5. From the accumulated results for organ, the proportion of positives for the lungs was higher than the livers (p=0.04) or bronchial lymph nodes (p=0.004) and equal to the spleens (p=0.18). From the accumulated results for DNA extraction protocol, the proportion of positives for the Boom protocol was bigger than the PK (p 0.0001) and GT (p=0.0004). There was no difference between the PK and GT protocols (p=0.5). Some positive samples from the classical bacteriology were negative to the PCR and viceversa. Therefore, the best strategy for B. abortus detection in the organs of aborted fetuses or calves born from infected cows is the use, in parallel, of isolation by classical bacteriology and the PCR, with the DNA extraction performed by the Boom protocol.
O objetivo do presente estudo foi aperfeiçoar a detecção de Brucella abortus pela PCR em homogeneizados de órgãos de fetos abortados por vacas infectadas, importante mecanismo para descobrir focos da doença na fase de erradicação. Assim, foram comparados diferentes protocolos de extração de DNA, visando à detecção de B. abortus pela PCR em amostras clínicas colhidas de abortos ou de bezerros oriundos de vacas desafiadas com a estirpe 2308 de B. abortus. Para tanto, foram construídos dois grupos padrão ouro com base na bacteriologia clássica, constituídos por: 32 pulmões (17 positivos), 26 baços (11 positivos), 23 fígados (8 positivos) e 22 linfonodos bronquiais (7 positivos). Todas essas amostras foram submetidas a três protocolos de extração de DNA, seguidos do mesmo processo de amplificação com os primers B4 e B5. Nos resultados acumulados por órgão, a proporção de positivos nos pulmões foi maior que a encontrada nos fígados (p=0,04) e nos linfonodos bronquiais (p=0,004), e igual a verificada nos baços (p=0,18). Nos resultados acumulados por método de extração de DNA, a proporção de positivos para o protocolo de Boom foi maior que a verificada para o PK (p 0,0001) e GT (p=0,0004). Não houve diferença entre os protocolos PK e GT (p=0,5). Algumas amostras positivas ao isolamento foram negativas à PCR e vice-versa. Assim, a melhor estratégia para se pesquisar B. abortus em tecidos de fetos abortados ou de bezerros nascidos de vacas infectadas é a utilização, em paralelo, do isolamento e da PCR, com extração do DNA pelo método do Boom.
Resumo
Nontuberculous mycobacteria infection is one of the most common chronic bacterial diseases in ornamental aquarium fish and appears to be directly related to stressful husbandry practices. Furthermore, it also represents zoonotic potential. Here we present the isolation and characterization of non-tuberculous mycobacteria from diseased freshwater angelfish (Pterophyllum scalare) in São Paulo, Brazil. Nine discarded breeding females with signs of disease were evaluated. The fish exhibited lethargy, loss of appetite, cachexia, skin ulcers, and exophthalmia. At necropsy, four fishes presented macroscopic granulomas in the spleen. Mycobacterium chelonae, M. fortuitum, M. gordonae, M. intracellulare and M. peregrinum were isolated and identified by hsp65 PCR restriction analysis. Histopathological analysis revealed microscopic lesions compatible with mycobacteriosis, and Mycobacterium bacillus were observed by Ziehl-Neelsen stain. Notably, all Mycobacterium species identified in this study have already been reported in human patients; therefore, diseased animals may be a source of infection for people who handle fish and aquariums.
A infecção por micobactérias não tuberculosas é uma das doenças bacterianas crônicas mais comuns em peixes ornamentais de aquário e parece estar diretamente relacionada a práticas de manejo estressantes. Além disso, também representa potencial zoonótico. Aqui, apresentamos o isolamento e a caracterização de micobactérias não tuberculosas de peixes-anjo de água doce doentes (Pterophyllum scalare) em São Paulo, Brasil. Foram avaliadas nove fêmeas reprodutoras descartadas com sinais de doença. Os peixes exibiam letargia, perda de apetite, caquexia, úlceras cutâneas e exoftalmia. Na necropsia, quatro peixes apresentaram granulomas macroscópicos no baço. Mycobacterium chelonae, M. fortuitum, M. gordonae, M. intracellulare e M. peregrinum foram isolados e identificados por análise de restrição por PCR de hsp65. A análise histopatológica revelou lesões microscópicas compatíveis com micobacteriose, e o bacilo de Mycobacterium foi observado pela coloração de Ziehl-Neelsen. Notavelmente, todas as espécies de Mycobacterium identificadas neste estudo já foram relatadas em pacientes humanos; portanto, animais doentes podem ser uma fonte de infecção para pessoas que manipulam peixes e aquários.