Seroprevalence of Brucella ovis-epididymitis, smooth-Brucella, leptospirosis, toxoplasmosis, and Maedi-Visna in sheep slaughtered in Minas Gerais State, Brazil / Soroprevalência de Brucella ovis, Brucella lisa, leptospirose, toxoplasmose e Maedi-Visna em ovinos abatidos em Minas Gerais, Brasil

The present study aimed to estimate the prevalence of antibodies against Brucella ovis-epididymitis, smooth-Brucella, leptospirosis, toxoplasmosis and Maedi-visna in sheep slaughtered in Minas Gerais, Brazil and to study their simultaneous occurrence, including caseous lymphadenitis, at sheep and flock levels. The study was conducted at a sheep slaughterhouse with Federal Inspection Service. Sera from 594 animals from 21 flocks were collected, in 2007. The agar gel immunodiffusion (AGID) was employed to detect anti-B. ovis and anti-Maedi Visna antibodies, whereas Rose Bengal (RB) and the 2-mercaptoethanol test (2ME) were used to test anti-smooth Brucella antibodies. For the detection of anti-Leptospiraantibodies, sera were examined by microscopic agglutination test (MAT), while for the detection of IgG antibodies to Toxoplasma gondii ELISA was used. Prevalence of antibodies against smooth Brucella, B. ovis-epididimitis, Leptospiraspp., toxoplasmosis and Maedi-Visna found in sheep from Minas Gerais was 0.00%, 24.04%, 25.96%, 10.46% and 3.08%, respectively; whereas the seroprevalence in flocks was 0.00%, 80.95%, 90.48%, 71.43% and 23.81%, respectively. Moreover, when data on antibodies anti-Corynebacterium pseudotuberculosis, previously obtained, were included, about 60% of the flocks showed animals that were exposed to four or more of the studied agents. However, only 25.47% of the sheep exhibited simultaneously antibodies against more than one pathogen. Thus, data from the present study on sheep slaughtered in Minas Gerais, Brazil, showed no antibodies to smooth-Brucella and a low frequency of antibodies anti-Maedi Visna lentivirus, and a high and widespread seroprevalence of B. ovis, Leptospira spp., and T. gondii among animals and flocks.(AU)

O presente estudo teve como objetivo estimar a prevalência de anticorpos contra Brucella ovis (epididimite ovina), Brucellalisa, leptospirose, toxoplasmose e Maedi-visna em ovinos abatidos em Minas Gerais, Brasil, e estudar sua ocorrência simultânea, incluindo linfadenite caseosa, nos ovinos e nos rebanhos. O estudo foi realizado em um abatedouro de ovinos com Serviço de Inspeção Federal. Soros de 594 animais de 21 rebanhos foram coletados, em 2007. A imunodifusão em gel de ágar (IDGA) foi empregada para detectar anticorpos anti-B. ovis e anticorpos anti-Maedi Visna, enquanto o teste do antígeno acidificado tamponado (AAT) e o teste de 2-mercaptoetanol (2ME) foram utilizados para testar anticorpos anti-Brucella lisa. Para a detecção de anticorpos anti-Leptospira, os soros foram examinados pelo teste de aglutinação microscópica (MAT), enquanto que para a detecção de anticorpos IgG para Toxoplasma gondii, foi usado o ELISA. A prevalência de anticorpos anti-Brucella lisa, B. ovis, Leptospira spp., toxoplasmose e Maedi-Visna encontrados em ovinos de Minas Gerais foi de 0,00%, 24,04%, 25,96%, 10,46% e 3,08%, respectivamente; enquanto a soroprevalência em rebanhos foi de 0,00%, 80,95%, 90,48%, 71,43% e 23,81%, respectivamente. Além disso, quando dados de anticorpos anti-Corynebacterium pseudotuberculosis, previamente obtidos, foram incluídos, cerca de 60% dos rebanhos apresentaram animais expostos a quatro ou mais dos agentes estudados. No entanto, apenas 25,47% dos ovinos exibiram simultaneamente anticorpos contra mais de um patógeno. Assim, os dados do presente estudo sobre ovinos abatidos em Minas Gerais, Brasil, mostram que ausência de anticorpos anti-Brucella lisa e baixa frequência de anticorpos anti-Maedi Visna, e uma soroprevalência alta e generalizada de B. ovis, Leptospira spp. e T. gondii entre animais e rebanhos.(AU)

Seroprevalence of Brucella ovis-epididymitis, smooth-Brucella, leptospirosis, toxoplasmosis, and Maedi-Visna in sheep slaughtered in Minas Gerais State, Brazil / Soroprevalência de Brucella ovis, Brucella lisa, leptospirose, toxoplasmose e Maedi-Visna em ovinos abatidos em Minas Gerais, Brasil

The present study aimed to estimate the prevalence of antibodies against Brucella ovis-epididymitis, smooth-Brucella, leptospirosis, toxoplasmosis and Maedi-visna in sheep slaughtered in Minas Gerais, Brazil and to study their simultaneous occurrence, including caseous lymphadenitis, at sheep and flock levels. The study was conducted at a sheep slaughterhouse with Federal Inspection Service. Sera from 594 animals from 21 flocks were collected, in 2007. The agar gel immunodiffusion (AGID) was employed to detect anti-B. ovis and anti-Maedi Visna antibodies, whereas Rose Bengal (RB) and the 2-mercaptoethanol test (2ME) were used to test anti-smooth Brucella antibodies. For the detection of anti-Leptospiraantibodies, sera were examined by microscopic agglutination test (MAT), while for the detection of IgG antibodies to Toxoplasma gondii ELISA was used. Prevalence of antibodies against smooth Brucella, B. ovis-epididimitis, Leptospiraspp., toxoplasmosis and Maedi-Visna found in sheep from Minas Gerais was 0.00%, 24.04%, 25.96%, 10.46% and 3.08%, respectively; whereas the seroprevalence in flocks was 0.00%, 80.95%, 90.48%, 71.43% and 23.81%, respectively. Moreover, when data on antibodies anti-Corynebacterium pseudotuberculosis, previously obtained, were included, about 60% of the flocks showed animals that were exposed to four or more of the studied agents. However, only 25.47% of the sheep exhibited simultaneously antibodies against more than one pathogen. Thus, data from the present study on sheep slaughtered in Minas Gerais, Brazil, showed no antibodies to smooth-Brucella and a low frequency of antibodies anti-Maedi Visna lentivirus, and a high and widespread seroprevalence of B. ovis, Leptospira spp., and T. gondii among animals and flocks.(AU)

O presente estudo teve como objetivo estimar a prevalência de anticorpos contra Brucella ovis (epididimite ovina), Brucellalisa, leptospirose, toxoplasmose e Maedi-visna em ovinos abatidos em Minas Gerais, Brasil, e estudar sua ocorrência simultânea, incluindo linfadenite caseosa, nos ovinos e nos rebanhos. O estudo foi realizado em um abatedouro de ovinos com Serviço de Inspeção Federal. Soros de 594 animais de 21 rebanhos foram coletados, em 2007. A imunodifusão em gel de ágar (IDGA) foi empregada para detectar anticorpos anti-B. ovis e anticorpos anti-Maedi Visna, enquanto o teste do antígeno acidificado tamponado (AAT) e o teste de 2-mercaptoetanol (2ME) foram utilizados para testar anticorpos anti-Brucella lisa. Para a detecção de anticorpos anti-Leptospira, os soros foram examinados pelo teste de aglutinação microscópica (MAT), enquanto que para a detecção de anticorpos IgG para Toxoplasma gondii, foi usado o ELISA. A prevalência de anticorpos anti-Brucella lisa, B. ovis, Leptospira spp., toxoplasmose e Maedi-Visna encontrados em ovinos de Minas Gerais foi de 0,00%, 24,04%, 25,96%, 10,46% e 3,08%, respectivamente; enquanto a soroprevalência em rebanhos foi de 0,00%, 80,95%, 90,48%, 71,43% e 23,81%, respectivamente. Além disso, quando dados de anticorpos anti-Corynebacterium pseudotuberculosis, previamente obtidos, foram incluídos, cerca de 60% dos rebanhos apresentaram animais expostos a quatro ou mais dos agentes estudados. No entanto, apenas 25,47% dos ovinos exibiram simultaneamente anticorpos contra mais de um patógeno. Assim, os dados do presente estudo sobre ovinos abatidos em Minas Gerais, Brasil, mostram que ausência de anticorpos anti-Brucella lisa e baixa frequência de anticorpos anti-Maedi Visna, e uma soroprevalência alta e generalizada de B. ovis, Leptospira spp. e T. gondii entre animais e rebanhos.(AU)

Seroprevalence of Brucella ovis-epididymitis, smooth-Brucella, leptospirosis, toxoplasmosis, and Maedi-Visna in sheep slaughtered in Minas Gerais State, Brazil / Soroprevalência de Brucella ovis, Brucella lisa, leptospirose, toxoplasmose e Maedi-Visna em ovinos abatidos em Minas Gerais, Brasil

The present study aimed to estimate the prevalence of antibodies against Brucella ovis-epididymitis, smooth-Brucella, leptospirosis, toxoplasmosis and Maedi-visna in sheep slaughtered in Minas Gerais, Brazil and to study their simultaneous occurrence, including caseous lymphadenitis, at sheep and flock levels. The study was conducted at a sheep slaughterhouse with Federal Inspection Service. Sera from 594 animals from 21 flocks were collected, in 2007. The agar gel immunodiffusion (AGID) was employed to detect anti-B. ovis and anti-Maedi Visna antibodies, whereas Rose Bengal (RB) and the 2-mercaptoethanol test (2ME) were used to test anti-smooth Brucella antibodies. For the detection of anti-Leptospira antibodies, sera were examined by microscopic agglutination test (MAT), while for the detection of IgG antibodies to Toxoplasma gondii ELISA was used. Prevalence of antibodies against smooth Brucella, B. ovis-epididimitis, Leptospira spp., toxoplasmosis and Maedi-Visna found in sheep from Minas Gerais was 0.00%, 24.04%, 25.96%, 10.46% and 3.08%, respectively; whereas the seroprevalence in flocks was 0.00%, 80.95%, 90.48%, 71.43% and 23.81%, respectively. Moreover, when data on antibodies anti-Corynebacterium pseudotuberculosis, previously obtained, were included, about 60% of the flocks showed animals that were exposed to four or more of the studied agents. However, only 25.47% o

O presente estudo teve como objetivo estimar a prevalência de anticorpos contra Brucella ovis (epididimite ovina), Brucella lisa, leptospirose, toxoplasmose e Maedi-visna em ovinos abatidos em Minas Gerais, Brasil, e estudar sua ocorrência simultânea, incluindo linfadenite caseosa, nos ovinos e nos rebanhos. O estudo foi realizado em um abatedouro de ovinos com Serviço de Inspeção Federal. Soros de 594 animais de 21 rebanhos foram coletados, em 2007. A imunodifusão em gel de ágar (IDGA) foi empregada para detectar anticorpos anti-B. ovis e anticorpos anti-Maedi Visna, enquanto o teste do antígeno acidificado tamponado (AAT) e o teste de 2-mercaptoetanol (2ME) foram utilizados para testar anticorpos anti-Brucella lisa. Para a detecção de anticorpos anti-Leptospira, os soros foram examinados pelo teste de aglutinação microscópica (MAT), enquanto que para a detecção de anticorpos IgG para Toxoplasma gondii, foi usado o ELISA. A prevalência de anticorpos anti-Brucella lisa, B. ovis, Leptospira spp., toxoplasmose e Maedi-Visna encontrados em ovinos de Minas Gerais foi de 0,00%, 24,04%, 25,96%, 10,46% e 3,08%, respectivamente; enquanto a soroprevalência em rebanhos foi de 0,00%, 80,95%, 90,48%, 71,43% e 23,81%, respectivamente. Além disso, quando dados de anticorpos anti-Corynebacterium pseudotuberculosis, previamente obtidos, foram incluídos, cerca de 60% dos rebanhos apresentaram a

Challenges on the follow-up experimental leptospiral infection in sheep

Background: Leptospirosis is currently a source of significant economic losses in the agribusiness; as such, experimentalstudies on this infection are required to develop a better understanding of the pathogenesis, treatment, and immunoprophylaxisof the disease. Sheep may represent a good model for ruminants in such models. Despite the extent of the studies that hasbeen conducted thus far, researchers have yet to reach a consensus on the experimental practices to apply for leptospirosisin this animal species, and several gaps in understanding remain. To bridge these gaps, the present study aimed to assessthe usage of several tools for the monitoring of experimental leptospirosis in sheep.Materials, Methods & Results: Twelve Santa Ines sheep of different ages were each allocated to one of four groups (A, B,C, and D). The subjects in groups A, B, and C received different doses of Leptospira interrogans serogroup Icterohemorrhagiae by intraperitoneal route, 1x102, 1x105, and 1x108 respectively. Group D was the control. Hematological, biochemicaland clinical parameters were evaluated daily. Serology by microscopic agglutination test (MAT) and PCR were performedto evaluate the infection status. The most remarkable clinical signs were fever (41ºC) and dehydration, and acute pain(cub). Two animals from Group C presented leukocytosis. Only those in Group C exhibited positive results according toserology, while positivity in PCR was observed in animals in groups A and C. The results of the experiment indicated thatsheep may be experimentally infected and can, therefore, be used as a model for leptospirosis in ruminants. Clinical signscannot be considered to represent a reliable parameter for evaluating the development of leptospirosis in experimentallyinfected sheep. We recommend the use of urine PCR and serology to confirm the infection in...

Challenges on the follow-up experimental leptospiral infection in sheep

Background: Leptospirosis is currently a source of significant economic losses in the agribusiness; as such, experimentalstudies on this infection are required to develop a better understanding of the pathogenesis, treatment, and immunoprophylaxisof the disease. Sheep may represent a good model for ruminants in such models. Despite the extent of the studies that hasbeen conducted thus far, researchers have yet to reach a consensus on the experimental practices to apply for leptospirosisin this animal species, and several gaps in understanding remain. To bridge these gaps, the present study aimed to assessthe usage of several tools for the monitoring of experimental leptospirosis in sheep.Materials, Methods & Results: Twelve Santa Ines sheep of different ages were each allocated to one of four groups (A, B,C, and D). The subjects in groups A, B, and C received different doses of Leptospira interrogans serogroup Icterohemorrhagiae by intraperitoneal route, 1x102, 1x105, and 1x108 respectively. Group D was the control. Hematological, biochemicaland clinical parameters were evaluated daily. Serology by microscopic agglutination test (MAT) and PCR were performedto evaluate the infection status. The most remarkable clinical signs were fever (41ºC) and dehydration, and acute pain(cub). Two animals from Group C presented leukocytosis. Only those in Group C exhibited positive results according toserology, while positivity in PCR was observed in animals in groups A and C. The results of the experiment indicated thatsheep may be experimentally infected and can, therefore, be used as a model for leptospirosis in ruminants. Clinical signscannot be considered to represent a reliable parameter for evaluating the development of leptospirosis in experimentallyinfected sheep. We recommend the use of urine PCR and serology to confirm the infection in... (AU)

Ação do extrato do resíduo de Caryocar brasiliense frente a formação de biofilme dos principais microrganismos veiculados por produtos de origem animal / Action of the Caryocar brasiliense waste extract against the biofilm formation of the main microorganisms carried by products of animal origin

Objetivou-se com o presente estudo avaliar a inibição da formação de biofilme pelo extrato do resíduo do pequi frente a microrganismos patogênicos e deteriorantes de alimentos. A casca do pequi foi obtida de frutas coletadas na cidade de Montes Claros/MG, foi seca em estufa de ventilação forçada, moída e peneirada em 250 Mesh. Seu extrato foi obtido em micro-ondas analítico. Foram utilizadas cinco cepas padrão e cinco isolados de produtos de origem animal, que foram reativadas e confirmado a sua pureza em ágar específico. Para avaliar a formação do biofilme foram utilizadas microplacas esterilizadas, sendo adicionados 90µL de BHI com 1% de glicose, 10µL da suspensão de cada bactéria e o extrato em diferentes concentrações. Concluiu-se que o extrato da casca do pequi inibe a formação de biofilme por bactérias patogênicas e deteriorantes.(AU)

Ação do extrato do resíduo de Caryocar brasiliense frente a formação de biofilme dos principais microrganismos veiculados por produtos de origem animal / Action of the Caryocar brasiliense waste extract against the biofilm formation of the main microorganisms carried by products of animal origin

Objetivou-se com o presente estudo avaliar a inibição da formação de biofilme pelo extrato do resíduo do pequi frente a microrganismos patogênicos e deteriorantes de alimentos. A casca do pequi foi obtida de frutas coletadas na cidade de Montes Claros/MG, foi seca em estufa de ventilação forçada, moída e peneirada em 250 Mesh. Seu extrato foi obtido em micro-ondas analítico. Foram utilizadas cinco cepas padrão e cinco isolados de produtos de origem animal, que foram reativadas e confirmado a sua pureza em ágar específico. Para avaliar a formação do biofilme foram utilizadas microplacas esterilizadas, sendo adicionados 90µL de BHI com 1% de glicose, 10µL da suspensão de cada bactéria e o extrato em diferentes concentrações. Concluiu-se que o extrato da casca do pequi inibe a formação de biofilme por bactérias patogênicas e deteriorantes.

Seroprevalence of Leptospira spp. infection in sheep from northwest of Rio Grande do Sul, Brazil / Soroprevalência da infecção por Leptospira spp. em ovinos do noroeste do Rio Grande do Sul, Brasil

Leptospirosis is a zoonosis that is widely distributed in tropical countries. This infection is also associated with reproductive losses in livestock, which has a significant economic impact. The objective of this study is to investigate the seroprevalence and risk factors associated with leptospiral infection in commercial sheep flocks from the northwestern mesoregion of Rio Grande do Sul. Serum samples were analyzed in 319 sheep using the Microscopic Agglutination Test (MAT). At the time of sampling, an individual and herd questionnaire was carried out to investigate the risk factors. On an individual level, positive reactions were observed in 5.6% (18/319) of the studied sera, with Sejroe being the most prevalent serogroup. Animals >3 years old were more likely to be seropositive than animals 1-3 years old (OR 14.4; 95% CI 1.9-110). The predominance of Sejroe serogroup in this manner draws attention to how subclinical infection is associated with economic losses. Therefore, the importance of maintaining measures for the prevention and control of leptospirosis among the sheep flocks of the studied region is reiterated.

A leptospirose é uma zoonose amplamente distribuída em países tropicais. Essa infecção também está associada a perdas reprodutivas na pecuária, apresentando uma relevância econômica notável. O objetivo deste estudo foi investigar a soroprevalência e os fatores de risco associados à infecção por leptospirose em rebanhos comerciais de ovinos da mesorregião noroeste do Rio Grande do Sul. Amostras de soro de 319 ovelhas foram analisadas pelo Teste de Aglutinação Microscópica (MAT). No momento da amostragem foi realizado um questionário individual e de rebanho para investigar os fatores de risco. No nível individual, reações positivas foram observadas em 5.6% (18/319) dos soros estudados, sendo Sejroe o sorogrupo mais prevalente. Animals >3 years old were more likely to be seropositive than animals 1-3 years old (OR 14.4; 95% CI 1.9-110). A predominância do sorogrupo Sejroe chama a atenção para a infecção subclínica associada a perdas econômicas. Portanto, reitera-se a importância da manutenção de medidas de prevenção e controle da leptospirose entre os rebanhos ovinos da região estudada.

Seroprevalence of Leptospira spp. infection in sheep from northwest of Rio Grande do Sul, Brazil / Soroprevalência da infecção por Leptospira spp. em ovinos do noroeste do Rio Grande do Sul, Brasil

Leptospirosis is a zoonosis that is widely distributed in tropical countries. This infection is also associated with reproductive losses in livestock, which has a significant economic impact. The objective of this study is to investigate the seroprevalence and risk factors associated with leptospiral infection in commercial sheep flocks from the northwestern mesoregion of Rio Grande do Sul. Serum samples were analyzed in 319 sheep using the Microscopic Agglutination Test (MAT). At the time of sampling, an individual and herd questionnaire was carried out to investigate the risk factors. On an individual level, positive reactions were observed in 5.6% (18/319) of the studied sera, with Sejroe being the most prevalent serogroup. Animals >3 years old were more likely to be seropositive than animals 1-3 years old (OR 14.4; 95% CI 1.9-110). The predominance of Sejroe serogroup in this manner draws attention to how subclinical infection is associated with economic losses. Therefore, the importance of maintaining measures for the prevention and control of leptospirosis among the sheep flocks of the studied region is reiterated.(AU)

A leptospirose é uma zoonose amplamente distribuída em países tropicais. Essa infecção também está associada a perdas reprodutivas na pecuária, apresentando uma relevância econômica notável. O objetivo deste estudo foi investigar a soroprevalência e os fatores de risco associados à infecção por leptospirose em rebanhos comerciais de ovinos da mesorregião noroeste do Rio Grande do Sul. Amostras de soro de 319 ovelhas foram analisadas pelo Teste de Aglutinação Microscópica (MAT). No momento da amostragem foi realizado um questionário individual e de rebanho para investigar os fatores de risco. No nível individual, reações positivas foram observadas em 5.6% (18/319) dos soros estudados, sendo Sejroe o sorogrupo mais prevalente. Animals >3 years old were more likely to be seropositive than animals 1-3 years old (OR 14.4; 95% CI 1.9-110). A predominância do sorogrupo Sejroe chama a atenção para a infecção subclínica associada a perdas econômicas. Portanto, reitera-se a importância da manutenção de medidas de prevenção e controle da leptospirose entre os rebanhos ovinos da região estudada.(AU)

Molecular demonstration of intermittent shedding of Leptospira in cattle and sheep and its implications on control / Demonstração molecular da intermitência eliminando Leptospira em vacas e ovelhas e suas implicações no controle

ABSTRACT: For a long time, it has been stated that urine leptospiral shedding is intermittent, which was observed primarily by culturing. However, culturing presents serious limitations, mainly low sensitivity, and failure on detection of leptospires cannot be neglected. PCR presents several advantages, mainly higher sensitivity. The present study aimed to analyze the occurrence of intermittency on leptospiral shedding by PCR in naturally and experimentally infected animals. In this study two experiments were conducted, the first with 60 cows naturally infected from an endemic herd. The second one was conducted in three sheep experimentally infected, each one with a different strain of Leptospira (strains Copenhageni L1-130, Canicola LO-4 and Pomona Fromm). Considering cattle, 43.3% presented negative in all tests, the remaining (56.7%) were positive at least once. From these, only one (1.6%) was positive in all samples, and seven (11.8%) were positive only in the last sampling, making it impossible to evaluate the intermittency. Noteworthy, 26 cows (43.3%) presented the typical intermittent pattern of leptospiral shedding in urine. In sheep, all experimentally infected animals presented the typical intermittent shedding patterns, independently of the inoculated leptospiral strain. We considered that a careful serial analysis of urine samples for a more definitive and reliable individual diagnosis would be required for a successful antimicrobial therapy and control of leptospirosis on a herd.

RESUMO: Durante muito tempo, foi afirmado que a eliminação de leptospiras na urina era intermitente, o que havia sido demonstrado principalmente por meio do cultivo microbiano. No entanto, a cultura apresenta graves limitações, principalmente com relação à baixa sensibilidade. Em contraste, a PCR apresenta várias vantagens em relação ao cultivo bacteriológico para leptospiras, sendo esta ferramenta cada vez mais utilizada para o diagnóstico de animais eliminadores da bactéria em diversos sítios. Assim, o presente estudo teve como objetivo analisar a ocorrência de intermitência na eliminação de leptospiras por meio de PCR em animais natural e experimentalmente infectados. Para este estudo foram realizados dois experimentos, sendo o primeiro com 60 vacas naturalmente infectadas de um rebanho sabidamente endêmico e o segundo em três ovelhas experimentalmente infectadas, cada uma com uma estirpe diferente de Leptospira (estirpes Copenhageni L1-130, Canicola LO-4 e Pomona Fromm). Considerando-se os bovinos, 43,3% apresentaram negatividade em todos os testes, sendo os demais 56,7% positivos ao menos uma vez. Destes, apenas um (1,6%) foi positivo em todas as amostras, e sete (11,8%) foram positivos somente na última coleta, o que impossibilitou a avaliação da intermitência. Não obstante, 26 vacas naturalmente infectadas (43,3%) apresentaram o padrão de eliminação tipicamente intermitente de leptospiras na urina. Das três ovelhas experimentalmente infectadas, todas apresentaram eliminação intermitente da bactéria na urina, independentemente da estirpe inoculada. Consideramos que seria necessária uma cuidadosa análise seriada de amostras de urina para um diagnóstico individual mais definitivo e confiável para uma terapia antimicrobiana bem-sucedida e o controle da leptospirose em um rebanho.

Molecular demonstration of intermittent shedding of Leptospira in cattle and sheep and its implications on control / Demonstração molecular da intermitência eliminando Leptospira em vacas e ovelhas e suas implicações no controle

ABSTRACT: For a long time, it has been stated that urine leptospiral shedding is intermittent, which was observed primarily by culturing. However, culturing presents serious limitations, mainly low sensitivity, and failure on detection of leptospires cannot be neglected. PCR presents several advantages, mainly higher sensitivity. The present study aimed to analyze the occurrence of intermittency on leptospiral shedding by PCR in naturally and experimentally infected animals. In this study two experiments were conducted, the first with 60 cows naturally infected from an endemic herd. The second one was conducted in three sheep experimentally infected, each one with a different strain of Leptospira (strains Copenhageni L1-130, Canicola LO-4 and Pomona Fromm). Considering cattle, 43.3% presented negative in all tests, the remaining (56.7%) were positive at least once. From these, only one (1.6%) was positive in all samples, and seven (11.8%) were positive only in the last sampling, making it impossible to evaluate the intermittency. Noteworthy, 26 cows (43.3%) presented the typical intermittent pattern of leptospiral shedding in urine. In sheep, all experimentally infected animals presented the typical intermittent shedding patterns, independently of the inoculated leptospiral strain. We considered that a careful serial analysis of urine samples for a more definitive and reliable individual diagnosis would be required for a successful antimicrobial therapy and control of leptospirosis on a herd.(AU)

RESUMO: Durante muito tempo, foi afirmado que a eliminação de leptospiras na urina era intermitente, o que havia sido demonstrado principalmente por meio do cultivo microbiano. No entanto, a cultura apresenta graves limitações, principalmente com relação à baixa sensibilidade. Em contraste, a PCR apresenta várias vantagens em relação ao cultivo bacteriológico para leptospiras, sendo esta ferramenta cada vez mais utilizada para o diagnóstico de animais eliminadores da bactéria em diversos sítios. Assim, o presente estudo teve como objetivo analisar a ocorrência de intermitência na eliminação de leptospiras por meio de PCR em animais natural e experimentalmente infectados. Para este estudo foram realizados dois experimentos, sendo o primeiro com 60 vacas naturalmente infectadas de um rebanho sabidamente endêmico e o segundo em três ovelhas experimentalmente infectadas, cada uma com uma estirpe diferente de Leptospira (estirpes Copenhageni L1-130, Canicola LO-4 e Pomona Fromm). Considerando-se os bovinos, 43,3% apresentaram negatividade em todos os testes, sendo os demais 56,7% positivos ao menos uma vez. Destes, apenas um (1,6%) foi positivo em todas as amostras, e sete (11,8%) foram positivos somente na última coleta, o que impossibilitou a avaliação da intermitência. Não obstante, 26 vacas naturalmente infectadas (43,3%) apresentaram o padrão de eliminação tipicamente intermitente de leptospiras na urina. Das três ovelhas experimentalmente infectadas, todas apresentaram eliminação intermitente da bactéria na urina, independentemente da estirpe inoculada. Consideramos que seria necessária uma cuidadosa análise seriada de amostras de urina para um diagnóstico individual mais definitivo e confiável para uma terapia antimicrobiana bem-sucedida e o controle da leptospirose em um rebanho.(AU)

Repetição de estro é o problema reprodutivo mais comum em vacas leiteiras do Estado do Rio de Janeiro, Brasil / Repetition of estrus is the most frequent reproductive problem after breeding in dairy cattle from Rio de Janeiro, Brazil

Reproductive efficiency is one of the key elements for any milk production system to be successful. In this regard, reproductive management must be planned properly and the identification of the main reproductive disorders that affect the herd is primordial for decision-making. The aim of the present study was to identify the main reproductive problems that affect dairy herds on Rio de Janeiro (RJ), Brazil. Data regarding breed, age, reproductive disorder occurrence, and breeding system were individually collected from dairy cows raised at 25 farms located at RJ. The occurrence of reproductive disorders was reported in 37% of the studied animals. Estrous repetition (76.2%) and abortion (15.6%) were the most frequent reproductive problems reported. Estrous repetition was more common in older animals (>6 years old). However, an association between abortion and age of animal was not observed, nor an association between breeding system and occurrence of abortion. The present results demonstrated that estrous repetition is the main obstacle to the reproductive efficiency in dairy herds at RJ, and that the replace of older cows by heifers is an important point within reproductive management of a dairy herd.

A eficiência reprodutiva é um dos principais elementos para qualquer sistema de produção de leite ser bem-sucedida. Neste contexto, o manejo reprodutivo deve ser planejado adequadamente e a identificação das principais desordens reprodutivas que afetam o rebanho é essencial para a tomada de decisão. O objetivo do presente estudo foi identificar os principais problemas reprodutivos que acometem rebanhos leiteiros no Rio de Janeiro (RJ), Brasil. Dados relacionados com a raça, idade, ocorrência de problema reprodutivo e o sistema de acasalamento foram individualmente coletados de vacas leiteiras criadas em 25 fazendas localizadas no RJ. A ocorrência de desordens reprodutivas foi relatada em 37% dos animais estudados. A repetição de estro (76,2%) e abortamento (15,6%) foram os problemas reprodutivos mais frequentemente relatados. A repetição de estro foi mais comum em animais mais velhos (>6 anos). Contudo, uma associação entre abortamento e idade do animal não foi observada, nem uma associação entre o sistema de acasalamento e a ocorrência abortamento. Os presentes resultados demonstraram que a repetição de estro é o principal obstáculo para a eficiência reprodutiva nos rebanhos leiteiros do RJ, e que a substituição de animais mais velhos por novilhas é um importante ponto dentro do manejo reprodutivo de um rebanho leiteiro.

Detection of anti-Leptospira antibodies in domestic captive primates from Acre, Brazil / Detecção de anticorpos anti-Leptospira spp. em primatas provenientes de cativeiro doméstico no Acre-Brasil

Because the Wild Animals Screening Center (CETAS) focuses intensely on restoration and maintenance of primate health and diversity in the Amazon region, detection of potential threats to animal health is crucial. In this view, neglected infections such as leptospirosis are of particular interest. In this report, we have studied the seroreactivity of anti-Leptospira antibodies from primate blood samples collected at CETAS between September 2011 and September 2012. Of the 14 animals investigated by the microscopic agglutination test using live antigens, five (35.7%) were reactive against serovars Celledoni (1), Hebdomadis (1), Icterohaemorrhagiae (2), and Sejroe (1). The results indicate that it is important to identify the contact of these animals with possible pathogens in order to ensure reintroduction of healthy animals into the wild and further understand the disease epidemiology in animals under captivity, gathering, and voluntary surrender of domestic captivity in Acre, Brazil.(AU)

Tendo em vista a importância do Centro de Triagem de Animais Silvestres (CETAS) no estado do Acre para restauração e manutenção da saúde e diversidade de primatas da Região Amazônica, é necessária a detecção de possíveis ameaças à saúde animal, em especial infecções negligenciadas como a leptospirose. Neste sentido estudou-se a ocorrência de sororreatividae anti-Leptospira sp., pela técnica da soroaglutinação microscópica com antígenos vivos, em primatas recolhidos pelo CETAS no período de setembro/2011 a setembro/2012. Dos 14 animais testados, cinco (35,7%) foram reativos aos sorogrupos Celledoni (1), Hebdomadis (1), Icterohaemorrhagiae (2) e Sejroe (1). Neste sentido é importante identificar o contato dos animais de triagem com agentes patogênicos a fim de garantir a reintrodução de animais saudáveis e conhecer a epidemiologia da enfermidade em animais provenientes de apreensão, recolhimento e entrega voluntária de cativeiros domésticos no Acre, Brasil.(AU)

Repetição de estro é o problema reprodutivo mais comum em vacas leiteiras do Estado do Rio de Janeiro, Brasil / Repetition of estrus is the most frequent reproductive problem after breeding in dairy cattle from Rio de Janeiro, Brazil

Reproductive efficiency is one of the key elements for any milk production system to be successful. In this regard, reproductive management must be planned properly and the identification of the main reproductive disorders that affect the herd is primordial for decision-making. The aim of the present study was to identify the main reproductive problems that affect dairy herds on Rio de Janeiro (RJ), Brazil. Data regarding breed, age, reproductive disorder occurrence, and breeding system were individually collected from dairy cows raised at 25 farms located at RJ. The occurrence of reproductive disorders was reported in 37% of the studied animals. Estrous repetition (76.2%) and abortion (15.6%) were the most frequent reproductive problems reported. Estrous repetition was more common in older animals (>6 years old). However, an association between abortion and age of animal was not observed, nor an association between breeding system and occurrence of abortion. The present results demonstrated that estrous repetition is the main obstacle to the reproductive efficiency in dairy herds at RJ, and that the replace of older cows by heifers is an important point within reproductive management of a dairy herd.(AU)

A eficiência reprodutiva é um dos principais elementos para qualquer sistema de produção de leite ser bem-sucedida. Neste contexto, o manejo reprodutivo deve ser planejado adequadamente e a identificação das principais desordens reprodutivas que afetam o rebanho é essencial para a tomada de decisão. O objetivo do presente estudo foi identificar os principais problemas reprodutivos que acometem rebanhos leiteiros no Rio de Janeiro (RJ), Brasil. Dados relacionados com a raça, idade, ocorrência de problema reprodutivo e o sistema de acasalamento foram individualmente coletados de vacas leiteiras criadas em 25 fazendas localizadas no RJ. A ocorrência de desordens reprodutivas foi relatada em 37% dos animais estudados. A repetição de estro (76,2%) e abortamento (15,6%) foram os problemas reprodutivos mais frequentemente relatados. A repetição de estro foi mais comum em animais mais velhos (>6 anos). Contudo, uma associação entre abortamento e idade do animal não foi observada, nem uma associação entre o sistema de acasalamento e a ocorrência abortamento. Os presentes resultados demonstraram que a repetição de estro é o principal obstáculo para a eficiência reprodutiva nos rebanhos leiteiros do RJ, e que a substituição de animais mais velhos por novilhas é um importante ponto dentro do manejo reprodutivo de um rebanho leiteiro.(AU)

Leptospirosis in native mixed-breed sheep slaughtered in a semiarid region of Brazil / Leptospirose em ovinos mestiços abatidos em uma região semiárida do Brasil

Sheep breeding is an economic activity of great value for the Brazilian livestock industry, and infectious diseases can significantly compromise its productivity. The aim of this study was to detect Leptospira spp. in mixed breed sheep from a semiarid region of the State of ParaМba, Northeast Brazil. In total, 49 blood and renal tissue samples, as well as 25 urine samples, were collected from 49 sheep in the slaughter line. The microscopic agglutination test (MAT) was used to verify the presence of anti -Leptospira spp. antibodies in blood samples. Renal tissue and urine samples were analyzed by both PCR and bacterial culture. Sero reactivity was observed in 8.2% (4/49) of animals. Three renal samples were positive for leptospiral DNA by PCR although all urine samples were negative. No leptospires in pure culture were recovered from the samples tested. Low prevalence of Leptospira spp. observed by serology and PCR suggested that the rusticity of the mixed-breed sheep may have contributed to the low occurrence of leptospirosis in the semiarid region investigated.

A criação de ovinos é uma atividade econômica de grande valor para a indústria pecuária brasileira. As doenças infecciosas podem comprometer significativamente a sua produtividade. O objetivo deste estudo foi detectar Leptospira spp. em ovinos sem raça definida a partir de uma região semiárida do estado da Paraíba, Nordeste do Brasil. Quarenta e nove amostras de sangue e tecido renal, bem como amostras de urina, de 25 das 49 ovelhas, foram coletados na linha de abate. A presença de anticorpos anti -Leptospira spp. foi verificada com o teste de aglutinação microscópica (SAM). As amostras de urina e rins foram processadas por PCR e cultura bacteriológica. Sororreatividade foi observada em 8,2% (4/49) dos animais. Em relação à PCR, três amostras renais foram positivas, no entanto, todas as amostras de urina foram negativas. Nenhuma cultura pura de leptospiras foi recuperada a partir das amostras testadas. Levando em consideração a baixa frequência de positividade na sorologia e PCR, é possível sugerir que a rusticidade das ovelhas de raças mestiças colaborou para a baixa ocorrência de leptospirose na região semiárida investigada.

False-negative reactions to the comparative intradermal tuberculin test for bovine tuberculosis / Reações falso-negativas ao teste cervical comparativo para tuberculose bovina

According to the Brazilian National Program for the Control and Eradication of Animal Brucellosis and Tuberculosis (PNCEBT), the routine tests for the diagnosis of bovine tuberculosis in the country are the simple intradermal tuberculin test (SITT) of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the caudal fold test and the comparative intradermal tuberculin test (CITT). The latter is also used as a confirmatory test. A group of 53 animals from three dairy herds in a focal area for bovine tuberculosis, that were submitted to depopulation in the state of Rio Grande do Sul, were submitted to the CITT. Tissues were cultured and the resulting colonies were confirmed by PCR and DNA sequencing. Among the 53 animals analyzed using the CITT, 32 (60.4%) were negative, 14 (26.4%) were positive and seven (13.2%) results were inconclusive. The CITT detected 11 of the 39 animals with culture-confirmed M. bovis infection as positive. Among the total of 14 uninfected animals based on cultures, the CBT detected eight as negative. Thus, the CITT demonstrated sensitivity of 28.2% and specificity of 57.1% for the population sampled. A total of 24/32 (75.0%) of the animals with negative CITT results were culture positive (confirmed by PCR) and were considered false negatives based on the CITT. The maintenance of these false-negative animals in herds has serious implications for the control of the disease, since they can be a source of infection. The addition of complementary tests could help identify such animals and increase the odds of diagnostic success.(AU)

No Brasil, segundo o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal (PNCEBT), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), os testes de rotina para o diagnóstico de tuberculose bovina são o teste cervical simples (TCC), o teste da prega caudal (TPC) e o teste cervical comparativo (TCC), sendo que o último também é utilizado como teste confirmatório. Um grupo de 53 animais oriundos de três rebanhos leiteiros de área de foco para tuberculose bovina que foram submetidos a vazio sanitário no Rio Grande do Sul foi submetido ao TCC. Os tecidos destes animais foram cultivados e as colônias resultantes confirmadas por PCR e sequenciamento de DNA. Dos 53 animais analisados no TCC, 32 (60,4%) foram negativos, 14 (26,4%) positivos e sete (13,2%) inconclusivos, com base no PNCEBT. O TCC detectou como positivos 11 dos 39 animais com infecção por M. bovis confirmada por cultivo. Do total de 14 animais não infectados, baseado na cultura, o TCC detectou oito como negativos. Assim, o TCC apresentou, para a população amostrada, sensibilidade de 28,2% e especificidade de 57,1%. Um total de 24/32 (75,0%) dos animais negativos ao TCC foi positivo no cultivo (confirmado por PCR), sendo considerados falso-negativos ao TCC. A manutenção destes animais falso-negativos nos rebanhos tem sérias implicações para o controle da enfermidade, já que os mesmos podem ser fonte de infecção. A adição de testes complementares poderia auxiliar na identificação destes animais, aumentando a cobertura diagnóstica.(AU)

Leptospirosis in native mixed-breed sheep slaughtered in a semiarid region of Brazil / Leptospirose em ovinos mestiços abatidos em uma região semiárida do Brasil

Sheep breeding is an economic activity of great value for the Brazilian livestock industry, and infectious diseases can significantly compromise its productivity. The aim of this study was to detect Leptospira spp. in mixed breed sheep from a semiarid region of the State of ParaМba, Northeast Brazil. In total, 49 blood and renal tissue samples, as well as 25 urine samples, were collected from 49 sheep in the slaughter line. The microscopic agglutination test (MAT) was used to verify the presence of anti -Leptospira spp. antibodies in blood samples. Renal tissue and urine samples were analyzed by both PCR and bacterial culture. Sero reactivity was observed in 8.2% (4/49) of animals. Three renal samples were positive for leptospiral DNA by PCR although all urine samples were negative. No leptospires in pure culture were recovered from the samples tested. Low prevalence of Leptospira spp. observed by serology and PCR suggested that the rusticity of the mixed-breed sheep may have contributed to the low occurrence of leptospirosis in the semiarid region investigated. (AU)

A criação de ovinos é uma atividade econômica de grande valor para a indústria pecuária brasileira. As doenças infecciosas podem comprometer significativamente a sua produtividade. O objetivo deste estudo foi detectar Leptospira spp. em ovinos sem raça definida a partir de uma região semiárida do estado da Paraíba, Nordeste do Brasil. Quarenta e nove amostras de sangue e tecido renal, bem como amostras de urina, de 25 das 49 ovelhas, foram coletados na linha de abate. A presença de anticorpos anti -Leptospira spp. foi verificada com o teste de aglutinação microscópica (SAM). As amostras de urina e rins foram processadas por PCR e cultura bacteriológica. Sororreatividade foi observada em 8,2% (4/49) dos animais. Em relação à PCR, três amostras renais foram positivas, no entanto, todas as amostras de urina foram negativas. Nenhuma cultura pura de leptospiras foi recuperada a partir das amostras testadas. Levando em consideração a baixa frequência de positividade na sorologia e PCR, é possível sugerir que a rusticidade das ovelhas de raças mestiças colaborou para a baixa ocorrência de leptospirose na região semiárida investigada. (AU)

False-negative reactions to the comparative intradermal tuberculin test for bovine tuberculosis / Reações falso-negativas ao teste cervical comparativo para tuberculose bovina

According to the Brazilian National Program for the Control and Eradication of Animal Brucellosis and Tuberculosis (PNCEBT), the routine tests for the diagnosis of bovine tuberculosis in the country are the simple intradermal tuberculin test (SITT) of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the caudal fold test and the comparative intradermal tuberculin test (CITT). The latter is also used as a confirmatory test. A group of 53 animals from three dairy herds in a focal area for bovine tuberculosis, that were submitted to depopulation in the state of Rio Grande do Sul, were submitted to the CITT. Tissues were cultured and the resulting colonies were confirmed by PCR and DNA sequencing. Among the 53 animals analyzed using the CITT, 32 (60.4%) were negative, 14 (26.4%) were positive and seven (13.2%) results were inconclusive. The CITT detected 11 of the 39 animals with culture-confirmed M. bovis infection as positive. Among the total of 14 uninfected animals based on cultures, the CBT detected eight as negative. Thus, the CITT demonstrated sensitivity of 28.2% and specificity of 57.1% for the population sampled. A total of 24/32 (75.0%) of the animals with negative CITT results were culture positive (confirmed by PCR) and were considered false negatives based on the CITT. The maintenance of these false-negative animals in herds has serious implications for the control of the disease, since they can be a source of infection. The addition of complementary tests could help identify such animals and increase the odds of diagnostic success.(AU)

No Brasil, segundo o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal (PNCEBT), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), os testes de rotina para o diagnóstico de tuberculose bovina são o teste cervical simples (TCC), o teste da prega caudal (TPC) e o teste cervical comparativo (TCC), sendo que o último também é utilizado como teste confirmatório. Um grupo de 53 animais oriundos de três rebanhos leiteiros de área de foco para tuberculose bovina que foram submetidos a vazio sanitário no Rio Grande do Sul foi submetido ao TCC. Os tecidos destes animais foram cultivados e as colônias resultantes confirmadas por PCR e sequenciamento de DNA. Dos 53 animais analisados no TCC, 32 (60,4%) foram negativos, 14 (26,4%) positivos e sete (13,2%) inconclusivos, com base no PNCEBT. O TCC detectou como positivos 11 dos 39 animais com infecção por M. bovis confirmada por cultivo. Do total de 14 animais não infectados, baseado na cultura, o TCC detectou oito como negativos. Assim, o TCC apresentou, para a população amostrada, sensibilidade de 28,2% e especificidade de 57,1%. Um total de 24/32 (75,0%) dos animais negativos ao TCC foi positivo no cultivo (confirmado por PCR), sendo considerados falso-negativos ao TCC. A manutenção destes animais falso-negativos nos rebanhos tem sérias implicações para o controle da enfermidade, já que os mesmos podem ser fonte de infecção. A adição de testes complementares poderia auxiliar na identificação destes animais, aumentando a cobertura diagnóstica.(AU)

Leptospirosis in native mixed-breed sheep slaughtered in a semiarid region of Brazil

ABSTRACT: Sheep breeding is an economic activity of great value for the Brazilian livestock industry, and infectious diseases can significantly compromise its productivity. The aim of this study was to detect Leptospira spp. in mixed breed sheep from a semiarid region of the State of Paraíba, Northeast Brazil. In total, 49 blood and renal tissue samples, as well as 25 urine samples, were collected from 49 sheep in the slaughter line. The microscopic agglutination test (MAT) was used to verify the presence of anti -Leptospira spp. antibodies in blood samples. Renal tissue and urine samples were analyzed by both PCR and bacterial culture. Sero reactivity was observed in 8.2% (4/49) of animals. Three renal samples were positive for leptospiral DNA by PCR although all urine samples were negative. No leptospires in pure culture were recovered from the samples tested. Low prevalence of Leptospira spp. observed by serology and PCR suggested that the rusticity of the mixed-breed sheep may have contributed to the low occurrence of leptospirosis in the semiarid region investigated.

RESUMO: A criação de ovinos é uma atividade econômica de grande valor para a indústria pecuária brasileira. As doenças infecciosas podem comprometer significativamente a sua produtividade. O objetivo deste estudo foi detectar Leptospira spp. em ovinos sem raça definida a partir de uma região semiárida do estado da Paraíba, Nordeste do Brasil. Quarenta e nove amostras de sangue e tecido renal, bem como amostras de urina, de 25 das 49 ovelhas, foram coletados na linha de abate. A presença de anticorpos anti -Leptospira spp. foi verificada com o teste de aglutinação microscópica (SAM). As amostras de urina e rins foram processadas por PCR e cultura bacteriológica. Sororreatividade foi observada em 8,2% (4/49) dos animais. Em relação à PCR, três amostras renais foram positivas, no entanto, todas as amostras de urina foram negativas. Nenhuma cultura pura de leptospiras foi recuperada a partir das amostras testadas. Levando em consideração a baixa frequência de positividade na sorologia e PCR, é possível sugerir que a rusticidade das ovelhas de raças mestiças colaborou para a baixa ocorrência de leptospirose na região semiárida investigada.

Análise de custo-efetividade de protocolos no diagnóstico da tuberculose bovina em um rebanho naturalmente infectado / Cost-effectiveness of protocols for diagnosis of bovine tuberculosis in a naturally infected herd

Em diversos países, a tuberculose bovina, causada por Mycobacterium bovis, é tanto um problema econômico quanto de saúde pública. Mundialmente, são implementados programas de erradicação da enfermidade com políticas baseadas em testes tuberculínicos e abate dos animais reativos, porém pouco se sabe sobre os custos e a efetividade das políticas de erradicação. O presente estudo avaliou a relação de custo-efetividade dos protocolos de diagnóstico da tuberculose bovina, em uma abordagem multidisciplinar, empregados em um rebanho naturalmente infectado. Após realização da análise de custo-efetividade (C/Ef) dos protocolos diagnósticos ante-mortem observou-se que o Teste Cervical Comparativo (C/Ef=4,68), quando utilizado isoladamente, é a escolha diagnóstica mais custo-efetiva para um rebanho naturalmente infectado. Para os protocolos confirmatórios de diagnóstico post-mortem a histopatologia (C/Ef=17,47) associada ao Teste Cervical Simples e Teste Cervical Comparativo foi a escolha mais custo-efetiva para os animais do rebanho estudado. Entretanto, o único protocolo eficaz em diagnosticar 100% dos animais infectados foi o uso em conjunto do teste humoral ELISA associado ao teste celular IFN.(AU)

In several countries, bovine tuberculosis, caused by Mycobacterium bovis, is an economic and public health problem. Worldwide disease eradication programs are implemented with policies based on tuberculin testing and slaughter of reactive animals. However, little is known about the costs and the effectiveness of the eradication policies. We evaluated the cost-effectiveness of bovine tuberculosis diagnostic protocols on a multidisciplinary approach, applied in a naturally infected herd. Regarding the cost-effectiveness analysis (C/Ef) of ante-mortem diagnostic protocols, the Cervical Comparative Test (C/Ep=4.68), when used alone, is the diagnostic protocol most cost-effective for a naturally infected herd. For post-mortem confirmatory diagnostic, the histopathology (C/Ep=17.47) associated with the Cervical Simple Test and Cervical Comparative Test was the most cost-effective choice for the animals studied in this herd. However, the only diagnostic protocol that was able to identify 100% of the infected animals was the ELISA associated with the IFN test.(AU)