Avanços na criopreservação de tecido ovariano de cabras e ovelhas / Advances in ovarian tissue cryopreservation in goats and sheep

A criopreservação de tecido ovariano, sem dúvidas, tem se tornado, uma prática não apenas suplementar as técnicas de reprodução assistida, mas também fundamental para a preservação da fertilidade da fêmea. Isso tem sido observado, especialmente na espécie humana, cuja espécie em uma década de trabalho, já se soma aproximadamente trinta nascimentos de bebês saudáveis oriundos de ovário criopreservado. No entanto, todo o avanço que hoje é estabelecido, muito se deve aos trabalhos pioneiros realizados em animais de animais de produção como os ovinos. Relatos de sucesso após criopreservação e transplante de tecido ovariano no início dos anos 90 impulsionaram importantes equipes a investir esforços e dedicação nessa área, voltados para a reprodução humana, e embora, o sucesso seja evidente, os avanços da criopreservação de tecido ovariano tanto na espécie ovina, como na espécie caprina são ainda bastante limitados. Portanto, o objetivo desse trabalho, é apresentar uma retrospectiva dos principais resultados obtidos com a criopreservação de tecido ovariano nessas duas espécies.(AU)

Cryopreservation of ovarian tissue, no doubt, has been considerated not only as an additional practice to assisted reproductive techniques, but it is fundamental for female fertility preservation. This have been related particularly in humans, whose specie in a decade, it was reported approximately thirty healthy babies born after procedures of cryopreservation and tranplant of ovarian tissue. However, the currently successful is due to hard efforts done in animals farm such as sheep. Reports of success after cryopreservation and transplantation of ovarian tissue in the early 90 stimulated several researchers to invest efforts and dedication in that research field, regarding human reproduction, and although success is evident, advances in cryopreservation of ovarian tissue in sheep and goats are still quite limited. Therefore, the aim of this work is to present a retrospective of the main results obtained with the cryopreservation of ovarian tissue in these two species.(AU)

Avanços na criopreservação de tecido ovariano de cabras e ovelhas / Advances in ovarian tissue cryopreservation in goats and sheep

A criopreservação de tecido ovariano, sem dúvidas, tem se tornado, uma prática não apenas suplementar as técnicas de reprodução assistida, mas também fundamental para a preservação da fertilidade da fêmea. Isso tem sido observado, especialmente na espécie humana, cuja espécie em uma década de trabalho, já se soma aproximadamente trinta nascimentos de bebês saudáveis oriundos de ovário criopreservado. No entanto, todo o avanço que hoje é estabelecido, muito se deve aos trabalhos pioneiros realizados em animais de animais de produção como os ovinos. Relatos de sucesso após criopreservação e transplante de tecido ovariano no início dos anos 90 impulsionaram importantes equipes a investir esforços e dedicação nessa área, voltados para a reprodução humana, e embora, o sucesso seja evidente, os avanços da criopreservação de tecido ovariano tanto na espécie ovina, como na espécie caprina são ainda bastante limitados. Portanto, o objetivo desse trabalho, é apresentar uma retrospectiva dos principais resultados obtidos com a criopreservação de tecido ovariano nessas duas espécies.

Cryopreservation of ovarian tissue, no doubt, has been considerated not only as an additional practice to assisted reproductive techniques, but it is fundamental for female fertility preservation. This have been related particularly in humans, whose specie in a decade, it was reported approximately thirty healthy babies born after procedures of cryopreservation and tranplant of ovarian tissue. However, the currently successful is due to hardefforts done in animals farm such as sheep. Reports of success after cryopreservation and transplantation of ovarian tissue in the early 90 stimulated several researchers to invest efforts and dedication in that research field, regarding human reproduction, and although success is evident, advances in cryopreservation of ovarian tissue in sheep and goats are still quite limited. Therefore, the aim of this work is to present a retrospective of the main results obtained with the cryopreservation of ovarian tissue in these two species.

Histological study of rat ovaries cryopreserved by vitrification or slow freezing and reimplanted in the early or late postmenopausal stage

To compare two rat ovary cryopreservation techniques (vitrification vs. slow freezing) and two postmenopausal stages (early vs. late) with regard to graft take. Thirty-three Wistar rats were submitted to bilateral oophorectomy. One ovary was submitted to histological analysis while the other was cryopreserved by slow freezing or vitrification. The cryopreserved ovary was thawed and reimplanted in the greater omentum one week (early menopause) or one month (late menopause) after oophorectomy. One month after ovary reimplantation, the graft take was evaluated macroscopically and histologically. Six of the animals were used ascontrols and seven died. The histological findings of 20 animals included atretic follicles (n=4), primordial follicles (n=2), and corpus luteum with primordial follicles (n=3). No ovarian tissue was found in 11 animals. Vitrification resulted in a higher graft take rate than slow freezing (50% vs. 38.5%), but the difference was not statistically significant. However, the graft take rate was 9.3 times higher in the early than in the late postmenopausal stage (61.5% vs. 14.3%) (p=0.043). Vitrification was superior to slow freezing as ovarian cryopreservation technique, and grafting was significantly more successful when the ovary was reimplanted in the late postmenopausal stage.(AU)

Congelação lenta de tecido ovariano ovino utilizando 1, 2- propanodiol (PROH) seguida de incubação de curta duração / Sheep ovarian tissue slow freezing using 1, 2-propanediol (PROH) as cryoprotectant followed by short-term in vitro culture

A criopreservação de tecido ovariano tem como principal objetivo, a manutenção deste tecido para sua posterior utilização, garantindo a preservação do material biológico de fêmeas de animais de alto valor genético. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos definir protocolo ótimo para criopreservação de tecido ovariano ovino utilizando PROH como agente crioprotetor e avaliar a resposta do tecido criopreservado incubado in vitro por curtos períodos. Para tanto, o tecido ovariano foi exposto (5, 10 ou 20 minutos) e/ou congelado utilizando PROH em duas diferentes concentrações (1,0 ou 1,5M). Em seguida, após a definição do protocolo mais adequado, realizouse a incubação deste tecido por 2 ou 4 horas. Em ambas as etapas, o tecido ovariano foi avaliado por Histologia Clássica ou viabilidade por inclusão em Azul de Tripan. Verificou-se que a exposição por 5 minutos seguida de criopresevação do tecido em solução de 1,5 M de PROH garantiu percentual de folículos viáveis significativamente semelhantes ao tecido fresco (P<0,05). Em seguida, o tecido congelado nessas condições foi cultivado por 2 ou 4 horas. Tal procedimento demonstrou que, com o decorrer do cultivo, os folículos sofrem perda gradual de sua normalidade morfológica em comparação ao tecido fresco, o que foi confirmado pela análise de viabilidade (P<0,05). Assim, o presente trabalho conclui que é possível congelar eficientemente o tecido ovariano ovino utilizando 1,5 M de PROH e exposição por 5 minutos e, que ocorre uma redução gradual na qualidade folicular do tecido criopreservado e submetido a curtos períodos de incubação.

Ovarian tissue cryopreservation aims to maintain the tissue for later use, ensuring the preservation of biologic material from women and high genetic valuable animals. In this context, this work aimed to define an optimum sheep ovarian tissue cryopreservation protocol using PROH as crioprotectant and to evaluate the responsiveness of cryopreservated tissue to a short-term in vitro culture. Then, the ovarian tisse was exposed (5, 10 or 30 minutes) and/or cryopreservated using PROH (1,0 or 1,5M). After the definition of the most appropriate protocol, the tissue was cultures for 2 or 4 hours. In both stages, ovarian tissue was evaluated by Classic Histology and viability using Trypan blue staining. We observed that the exposure for 5 minutes followed by cryopreservation in 1,5M PROH maintained similar percentages of viable follicles than fresh tissue (P<0,05). Thereafter, cryopreserved tissue was cultured for 2 or 4 hours. This procedure showed that, as in vitro culture goes on, follicles suffer gradual loss in their morphology, what was confirmed by viability analysis (P<0,05) Thus, this work concludes that is possible to properly cryopreservate sheep ovarian tissue using 1,5M PROH and 5 minutes exposure. Moreover, it occurs a gradual quality reduction of follicles obtained from short-term cultured tissue after cryopreservation procedure.

Congelação lenta de tecido ovariano ovino utilizando 1, 2- propanodiol (PROH) seguida de incubação de curta duração / Sheep ovarian tissue slow freezing using 1, 2-propanediol (PROH) as cryoprotectant followed by short-term in vitro culture

A criopreservação de tecido ovariano tem como principal objetivo, a manutenção deste tecido para sua posterior utilização, garantindo a preservação do material biológico de fêmeas de animais de alto valor genético. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos definir protocolo ótimo para criopreservação de tecido ovariano ovino utilizando PROH como agente crioprotetor e avaliar a resposta do tecido criopreservado incubado in vitro por curtos períodos. Para tanto, o tecido ovariano foi exposto (5, 10 ou 20 minutos) e/ou congelado utilizando PROH em duas diferentes concentrações (1,0 ou 1,5M). Em seguida, após a definição do protocolo mais adequado, realizouse a incubação deste tecido por 2 ou 4 horas. Em ambas as etapas, o tecido ovariano foi avaliado por Histologia Clássica ou viabilidade por inclusão em Azul de Tripan. Verificou-se que a exposição por 5 minutos seguida de criopresevação do tecido em solução de 1,5 M de PROH garantiu percentual de folículos viáveis significativamente semelhantes ao tecido fresco (P<0,05). Em seguida, o tecido congelado nessas condições foi cultivado por 2 ou 4 horas. Tal procedimento demonstrou que, com o decorrer do cultivo, os folículos sofrem perda gradual de sua normalidade morfológica em comparação ao tecido fresco, o que foi confirmado pela análise de viabilidade (P<0,05). Assim, o presente trabalho conclui que é possível congelar eficientemente o tecido ovariano ovino utilizando 1,5 M de PROH e exposição por 5 minutos e, que ocorre uma redução gradual na qualidade folicular do tecido criopreservado e submetido a curtos períodos de incubação.(AU)

Ovarian tissue cryopreservation aims to maintain the tissue for later use, ensuring the preservation of biologic material from women and high genetic valuable animals. In this context, this work aimed to define an optimum sheep ovarian tissue cryopreservation protocol using PROH as crioprotectant and to evaluate the responsiveness of cryopreservated tissue to a short-term in vitro culture. Then, the ovarian tisse was exposed (5, 10 or 30 minutes) and/or cryopreservated using PROH (1,0 or 1,5M). After the definition of the most appropriate protocol, the tissue was cultures for 2 or 4 hours. In both stages, ovarian tissue was evaluated by Classic Histology and viability using Trypan blue staining. We observed that the exposure for 5 minutes followed by cryopreservation in 1,5M PROH maintained similar percentages of viable follicles than fresh tissue (P<0,05). Thereafter, cryopreserved tissue was cultured for 2 or 4 hours. This procedure showed that, as in vitro culture goes on, follicles suffer gradual loss in their morphology, what was confirmed by viability analysis (P<0,05) Thus, this work concludes that is possible to properly cryopreservate sheep ovarian tissue using 1,5M PROH and 5 minutes exposure. Moreover, it occurs a gradual quality reduction of follicles obtained from short-term cultured tissue after cryopreservation procedure.(AU)