New sensitive real-time PCR targeting p28 gene for detection of Ehrlichia canis in blood samples from dogs / Novo PCR em tempo real sensível que visa o gene p28 para a detecção de Ehrlichia canis em amostras de sangue de cães

This study aims to describe a new detection method of a quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) targeting the 28 kDa outer membrane protein gene (p28) as well as to compare this method with a conventional PCR (cPCR), which targets the same gene, in order to evaluate the performance of the technique designed in this study in detecting Ehrlichia canis (E. canis). Optimum oligonucleotides concentrations were reached, and the analytical sensitivity and specificity of the qPCR were performed. A total of 218 dogs’ whole blood samples were conventionally collected for this study. The DNA was extracted from each sample. Subsequently, the samples were tested by an established cPCR and the new qPCR to compare each technique’s performances. This new qPCR method for the molecular detection of E. canis presented a detection limit of ten copies of the fragment and was considered specific for E. canis according to analytical specificity analyses performed in vitro and in silico. The standard curve revealed 100% efficiency and a coefficient of determination (R²) equivalent to 99.8%. Among the samples examined by qPCR, 24.31% were considered positive, significantly greater than those detected by cPCR (15.13%). The qPCR technique reached a higher sensitivity than the cPCR when targeting the p28 gene in detecting E. canis. The qPCR standardized in this study is an efficient method for confirming canine monocytic ehrlichiosis (CME) diagnosis and might provide the parasitemia monitoring during the disease treatment.

Este estudo tem como objetivo descrever um novo método de detecção de uma reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) visando o gene da proteína da membrana externa de 28 kDa (p28), bem como comparar este método com um PCR convencional (cPCR), que visa o mesmo gene, a fim de avaliar o desempenho da técnica desenhada neste estudo na detecção de Ehrlichia canis (E. canis). As concentrações ideais de oligonucleotídeos foram alcançadas e a sensibilidade analítica e a especificidade do qPCR foram determinadas. Um total de 218 amostras de sangue total de cães foram coletadas convencionalmente para este estudo. O DNA foi extraído de cada amostra. Posteriormente, as amostras foram testadas por um cPCR estabelecido e o novo qPCR para comparar os desempenhos entre cada técnica. A curva padrão revelou 100% de eficiência e coeficiente de determinação (R²) equivalente a 99,8%. Dentre as amostras examinadas por qPCR, 24,31% foram consideradas positivas, percentual significativamente maior do que as detectadas por cPCR (15,13%). A técnica qPCR atingiu uma sensibilidade maior do que a cPCR na detecção de E. canis. A qPCR padronizada neste estudo é um método eficiente para a confirmação do diagnóstico de erliquiose monocítica canina (EMC) e pode fornecer o monitoramento de níveis de parasitemia ao longo do tratamento da doença.

New sensitive real-time PCR targeting p28 gene for detection of Ehrlichia canis in blood samples from dogs / Novo PCR em tempo real sensível que visa o gene p28 para a detecção de Ehrlichia canis em amostras de sangue de cães

This study aims to describe a new detection method of a quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) targeting the 28 kDa outer membrane protein gene (p28) as well as to compare this method with a conventional PCR (cPCR), which targets the same gene, in order to evaluate the performance of the technique designed in this study in detecting Ehrlichia canis (E. canis). Optimum oligonucleotides concentrations were reached, and the analytical sensitivity and specificity of the qPCR were performed. A total of 218 dogs whole blood samples were conventionally collected for this study. The DNA was extracted from each sample. Subsequently, the samples were tested by an established cPCR and the new qPCR to compare each techniques performances. This new qPCR method for the molecular detection of E. canis presented a detection limit of ten copies of the fragment and was considered specific for E. canis according to analytical specificity analyses performed in vitro and in silico. The standard curve revealed 100% efficiency and a coefficient of determination (R²) equivalent to 99.8%. Among the samples examined by qPCR, 24.31% were considered positive, significantly greater than those detected by cPCR (15.13%). The qPCR technique reached a higher sensitivity than the cPCR when targeting the p28 gene in detecting E. canis. The qPCR standardized in this study is an efficient method for confirming canine monocytic ehrlichiosis (CME) diagnosis and might provide the parasitemia monitoring during the disease treatment.(AU)

Este estudo tem como objetivo descrever um novo método de detecção de uma reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) visando o gene da proteína da membrana externa de 28 kDa (p28), bem como comparar este método com um PCR convencional (cPCR), que visa o mesmo gene, a fim de avaliar o desempenho da técnica desenhada neste estudo na detecção de Ehrlichia canis (E. canis). As concentrações ideais de oligonucleotídeos foram alcançadas e a sensibilidade analítica e a especificidade do qPCR foram determinadas. Um total de 218 amostras de sangue total de cães foram coletadas convencionalmente para este estudo. O DNA foi extraído de cada amostra. Posteriormente, as amostras foram testadas por um cPCR estabelecido e o novo qPCR para comparar os desempenhos entre cada técnica. A curva padrão revelou 100% de eficiência e coeficiente de determinação (R²) equivalente a 99,8%. Dentre as amostras examinadas por qPCR, 24,31% foram consideradas positivas, percentual significativamente maior do que as detectadas por cPCR (15,13%). A técnica qPCR atingiu uma sensibilidade maior do que a cPCR na detecção de E. canis. A qPCR padronizada neste estudo é um método eficiente para a confirmação do diagnóstico de erliquiose monocítica canina (EMC) e pode fornecer o monitoramento de níveis de parasitemia ao longo do tratamento da doença.(AU)

New sensitive real-time PCR targeting p28 gene for detection of Ehrlichia canis in blood samples from dogs / Novo PCR em tempo real sensível que visa o gene p28 para a detecção de Ehrlichia canis em amostras de sangue de cães

ABSTRACT: This study aims to describe a new detection method of a quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) targeting the 28 kDa outer membrane protein gene (p28) as well as to compare this method with a conventional PCR (cPCR), which targets the same gene, in order to evaluate the performance of the technique designed in this study in detecting Ehrlichia canis (E. canis). Optimum oligonucleotides concentrations were reached, and the analytical sensitivity and specificity of the qPCR were performed. A total of 218 dogs' whole blood samples were conventionally collected for this study. The DNA was extracted from each sample. Subsequently, the samples were tested by an established cPCR and the new qPCR to compare each technique's performances. This new qPCR method for the molecular detection of E. canis presented a detection limit of ten copies of the fragment and was considered specific for E. canis according to analytical specificity analyses performed in vitro and in silico. The standard curve revealed 100% efficiency and a coefficient of determination (R2) equivalent to 99.8%. Among the samples examined by qPCR, 24.31% were considered positive, significantly greater than those detected by cPCR (15.13%). The qPCR technique reached a higher sensitivity than the cPCR when targeting the p28 gene in detecting E. canis. The qPCR standardized in this study is an efficient method for confirming canine monocytic ehrlichiosis (CME) diagnosis and might provide the parasitemia monitoring during the disease treatment.

RESUMO: Este estudo tem como objetivo descrever um novo método de detecção de uma reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) visando o gene da proteína da membrana externa de 28 kDa (p28), bem como comparar este método com um PCR convencional (cPCR), que visa o mesmo gene, a fim de avaliar o desempenho da técnica desenhada neste estudo na detecção de Ehrlichia canis (E. canis). As concentrações ideais de oligonucleotídeos foram alcançadas e a sensibilidade analítica e a especificidade do qPCR foram determinadas. Um total de 218 amostras de sangue total de cães foram coletadas convencionalmente para este estudo. O DNA foi extraído de cada amostra. Posteriormente, as amostras foram testadas por um cPCR estabelecido e o novo qPCR para comparar os desempenhos entre cada técnica. A curva padrão revelou 100% de eficiência e coeficiente de determinação (R2) equivalente a 99,8%. Dentre as amostras examinadas por qPCR, 24,31% foram consideradas positivas, percentual significativamente maior do que as detectadas por cPCR (15,13%). A técnica qPCR atingiu uma sensibilidade maior do que a cPCR na detecção de E. canis. A qPCR padronizada neste estudo é um método eficiente para a confirmação do diagnóstico de erliquiose monocítica canina (EMC) e pode fornecer o monitoramento de níveis de parasitemia ao longo do tratamento da doença.

Occurrences of Ornithocoris toledoi (Cimicidae) on a free-range chicken farm in the state of Rio de Janeiro, Brazil / Ocorrência de Ornithocoris toledoi (Cimicidae) em uma fazenda com criação rústica de galinhas no estado do Rio de Janeiro, Brasil

Ornithocoris toledoi is a hematophagous insect that parasites birds, particularly, galliformes. Although the occurrence of this arthropod is relatively low in Brazil, this is an important ectoparasite associated with backyarding poultry. The objective of this study was to report the occurrence of O. toledoi in a free-range chicken farm in the state of Rio de Janeiro, Brazil, including aspects of its taxonomic identification, biology and epidemiology.(AU)

Ornithocoris toledoi é um inseto hematófago que parasita aves, particularmente os galiformes. Embora a ocorrência deste artrópode seja relativamente baixa no país, este é um ectoparasito importante relacionado à criação rústica de galinhas. O objetivo estudo foi relatar a ocorrência de O. toledoi em uma criação rústica de galinhas no estado do Rio de Janeiro, incluindo aspectos sobre a sua identificação taxonômica, biologia e epidemiologia.(AU)

Soroprevalência de anticorpos homólogos antiBorrelia burgdorferi em equinos de uso militar no Brasil / Seroprevalence of homologous antiBorrelia burgdorferi antibodies in horses of military use in Brazil

A maioria das atividades de treinamento militar transcorre em ambiente de risco para aquisição de doenças de transmissãovetorial, incluindo importantes zoonoses e doenças emergentes/reemergentes. O objetivo deste estudo foi relatar a ocorrênciade anticorpos homólogos da classe IgG anti-Borrelia burgdorferi em equinos de uso militar no Brasil, assim como analisar osfatores de risco associados à soropositividade nos animais. Foram estudados dois plantéis de equinos, sendo um no municípiode Resende, estado do Rio de Janeiro, tendo sido encontrada prevalência de 29,9%, e outro no município de São Borja, estadodo Rio Grande do Sul, com prevalência de 44,7%, totalizando 474 animais e prevalência de 39,24%. Na análise dos fatores derisco associados, observou-se que a infestação por carrapatos constituiu-se no fator de risco para a soropositividade. A evidênciade circulação de Borrelia spp. com soroprevalência nos equinos reforça seu papel como sentinela, sendo fator de alerta parapotencial ocorrência de casos humanos. Os resultados obtidos reforçam a importância da vigilância epidemiológica dos carrapatosvetores e sua associação tanto com agentes infecciosos de risco para a saúde do efetivo militar humano, como nos equinos deuso militar nas regiões avaliadas. Isto também realça a necessidade da adoção de medidas de proteção coletivas e individuaisvisando mitigar o risco de doenças transmitidas por carrapatos em atividades militares.(AU)

Most military training activities take place at risk for the acquisition of vector-borne diseases, including important zoonosis andemerging/reemerging diseases This study aimed to analyze the seroprevalence of homologous antibodies antiBorrelia burgdorferiin horses for military use in Brazil, as well as to analyze the risk factors associated with seropositivity in animals. Two herds ofhorses for military use were studied, one in the city of Resende, state of Rio de Janeiro, having been found prevalence of 29.9%,and in São Borja, state of Rio Grande do Sul, with prevalence 44,7% to 474 animals and prevalence of 39,3%. In the analysis ofrisk factors, it was observed that the tick infestation constituted risk factors for seropositivity. Evidence of Borrelia spp. circulationwith seroprevalence in horses reinforces its role as sentinels, and alert factor for potential occurrence of human cases. Theseresults support the importance of epidemiological surveillance of vector ticks and its association with agents of risk to the health ofhorses for military use, in the evaluated areas. This also highlights the need to adopt collective and individual protection measuresto mitigate the risk of tick-borne diseases in military activities.(AU)

Hematological changes associated with hemoplasma infection in cats in Rio de Janeiro, Brazil / Alterações hematológicas associadas à infecção por hemoplasmas em gatos do Rio de Janeiro, Brasil

Abstract This study aimed to detect Mycoplasma spp. in naturally infected cats from Rio de Janeiro and to evaluate hematological abnormalities and factors associated with this infection. Out of the 197 cats sampled, 11.2% presented structures compatible with hemoplasma organisms on blood smears. In contrast, 22.8% were positive for Mycoplasma spp. by means of 16S rRNA gene real-time polymerase chain reaction, which reflects the weak concordance between techniques. The infection rates, by means of 16S rRNA gene conventional polymerase chain reaction, was 4.6%, 4.6% and 11.7% for Mycoplasma haemofelis (Mhf), Candidatus Mycoplasma turicensis (CMt) and Candidatus Mycoplasma haemominutum (CMhm), respectively. Mhf and CMhm infections are more frequent in the summer (p>0.05). Presence of anemia (p 0.02), lymphocytosis (p 0.03), thrombocytopenia (p 0.04) and activated monocytes (p 0.04) was associated with Mhf infection. No hematological abnormality was associated with CMt or CMhm infection. Male cats were more prone to be infected by Mhf or CMhm (p 0.01). Adult cats had more chance to be infected by CMhm. Three hemoplasma species occur in the metropolitan region of Rio de Janeiro and Mhf seems to be the most pathogenic of them. Anemia is the most important hematological abnormality.(AU)

Resumo Este estudo teve por objetivo detectar Mycoplasma spp. em gatos naturalmente infectados do Rio de Janeiro e avaliar as alterações hematológicas e fatores associados à infecção. Dos 197 gatos amostrados, 11,2% apresentaram estruturas compatíveis com hemoplasmas em esfregaços de sangue. Em contraste, 22,8% foram positivas para Mycoplasma spp. por meio da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR), baseado no gene 16S rRNA, o que reflete a fraca concordância entre as técnicas. As taxas de infecção, por meio da reação em cadeia da polimerase convencional baseada no gene 16S rRNA, foi de 4,6%, 4,6% e 11,7% para Mycoplasma haemofelis (Mhf), 'Candidatus Mycoplasma turicensis' (CMt) e 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' (CMhm), respectivamente. Infecção por Mhf e CMhm foram mais frequentes no verão (p> 0,05). Anemia (p 0,02), linfocitose (p 0,03), trombocitopenia (p 0,04), e presença de monócitos ativados (p 0,04) foram associados à infecção por Mhf. Nenhuma alteração hematológica foi associada à infecção por CMt ou CMhm. Gatos machos estão mais propensos à infecção por Mhf ou CMhm (p 0,01). Gatos adultos têm maiores chances de se infectarem por CMhm. Há ocorrência de três espécies de hemoplasmas na Região Metropolitana do Rio de Janeiro e Mhf parece ser o mais patogênico, tendo a anemia como principal alteração hematológica.(AU)

Toxoplasma gondii and Neospora caninum in dogs from the state of Tocantins: serology and associated factors / Toxoplasma gondii e Neospora caninum em cães provenientes de Tocantins: sorologia e fatores associados

This study investigated occurrences of anti-Neospora caninum and anti-Toxoplasma gondii IgG antibodies by means of the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescence assay (IFAT), along with risk factors associated with toxoplasmosis and neosporosis, in 204 dogs from urban and rural areas of the municipality of Araguaína, state of Tocantins, Brazil. One hundred and thirty samples (63.7%) were positive for T. gondii using ELISA: 57.1% and 70.7% in the urban and rural areas, respectively. The seropositivity frequency for T. gondii observed through IFAT was 57.4%, distributed between rural and urban areas as 62.6% and 52.4%, respectively. The factors associated with canine toxoplasmosis were age and breed (p<0.05). In relation to N. caninum, 88 samples (43.1%) were positive, according to ELISA, distributed as 42.9% in urban areas and 43.3% in rural areas. Anti - N. caninum antibodies were detected through IFAT in 62 dogs (30.4%), distributed as 31.3% and 29.5% between rural and urban areas, respectively. Age and breed were associated with neosporosis occurrence (p<0.05) by IFAT. This study provides the first detection of IgG antibodies for canine toxoplasmosis and neosporosis in the state of Tocantins and highlights the importance of dogs in the epidemiological chain of these diseases.(AU)

Este estudo investigou a ocorrência de anticorpos anti-Neospora caninum e anti-Toxoplasma gondii por ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) e reação de imunofluorescência indireta (RIFI), assim como os fatores de risco associados à toxoplasmose e à neosporose em 204 cães provenientes de áreas urbana e rural do município de Araguaína, Estado de Tocantins, Brasil. Cento e trinta amostras (63,7%) foram positivas para T. gondii, destas 57,1% e 70,7% oriundas de áreas urbanas e rurais, respectivamente. Considerando-se o teste RIFI, a frequência de soropositividade para T. gondii foi de 57,4% com distribuição de 62,6% e 52,4% entre áreas rurais e urbanas, respectivamente. Fatores associados à toxoplasmose canina foram raça e idade, com soropositividade maior para animais mais velhos (p<0,05). Em relação à N. caninum, 88 (43,1%) amostras foram positivas, segundo ELISA, sendo distribuídas em 42,9% para área urbana e 43,3% para área rural. Por meio da RIFI, anticorpos anti-N. caninum foram detectados em 62 (30,4%) cães, sendo distribuídos em 31,3% e 29,5% entre áreas rurais e urbanas, respectivamente. Os fatores associados à ocorrência de neosporose, pela RIFI, foram idade e raça (p<0,05). Este estudo representa a primeira detecção de anticorpos IgG para toxoplasmose e neosporose canina no Estado de Tocantins e evidencia a importância de cães na cadeia epidemiológica dessas doenças.(AU)

Seroepidemiological aspects of Leishmania spp in dogs in the Itaguai micro-region, Rio de Janeiro, Brazil / Aspectos soroepidemiológicos de Leishmania spp em cães na microrregião de Itaguaí, Rio de Janeiro, Brasil

This study evaluated factors associated with the frequency ofLeishmania spp. antibodies in dogs residing in the Itaguai micro-region, State of Rio de Janeiro, Brazil. Blood samples were collected from 524 dogs. The serum samples were submitted to indirect fluorescent antibody test (IFAT) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) forLeishmania spp. The frequency of seropositive dogs was 28.24% (n = 148) in the micro-region, and among the three municipalities within that region, the highest frequency (p < 0.05) was observed in Seropedica (59.46%), followed by Itaguai (29.05%) and Mangaratiba (11.49%). Regarding factors associated with the host, mongrel dogs and those over the age of two presented higher frequency of antibodies to Leishmaniaspp. (p < 0.05). Concerning factors related to the environment and habits of the animal, dogs residing in rural areas (FR = 1.67, p = 0.0002), living outside the residence (FR = 1.42, p = 0.0197), with access to forest, streams and pastures (FR = 2.81, p = 0.0007), remaining loose (FR = 1.66, p = 0.0073), and those that had no shelter (FR = 2.16, p < 0.0001) were more likely to be seropositive. Canine leishmaniasis is a disease with high occurrence in the Itaguai micro-region, and aspects such as the definition of breed, age, habits and care by owners showed significant association in this micro-region.

Este estudo avaliou os fatores associados à frequência de anticorpos específicos para Leishmania spp. em cães domiciliados na microrregião de Itaguaí, Rio de Janeiro. Foram colhidas amostras de sangue de 524 cães. As amostras de soro foram submetidas a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e ensaio imunoenzimático indireto (ELISA-teste) para Leishmania spp. A frequência de cães soropositivos foi de 28,24% (n = 148) na microrregião e, entre os três municípios avaliados, a maior frequência (p < 0,05) foi observada em Seropédica (59,46%), seguida de Itaguaí (29,05%) e Mangaratiba (11,49%). Em relação aos fatores associados ao hospedeiro, observou-se que cães sem raça definida e aqueles com idade acima de dois anos apresentaram maior frequência de anticorpos para Leishmania spp. (p < 0,05). Em relação aos fatores relacionados ao ambiente e ao hábito do animal, os cães residentes em áreas rurais (RF = 1,67, p = 0,0002), animais que vivem fora da residência (RF = 1,42, p = 0,0197), com acesso à mata, córregos e pastagens (FR = 2,81, p = 0,0007), que permanecem soltos (RF = 1,66, p = 0,0073), e aqueles que não possuem abrigo (RF = 2,16, p < 0,0001) apresentaram maior chance de serem soropositivos. A leishmaniose canina é uma enfermidade com elevada ocorrência na microrregião de Itaguai, e aspectos como definição racial, idade, hábitos e cuidados estabelecidos pelo proprietário mostraram associação significativa nessa microrregião.

Amblyomma cajennense infestation on horses in two microregions of the state of Rio de Janeiro, Brazil / Infestação por Amblyomma cajennense em equinos de duas microrregiões do estado do Rio de Janeiro, Brasil

The objective of this study was to evaluate factors associated with infestation by Amblyomma cajennense on horses in two microregions of the state of Rio de Janeiro. Horses on 62 farms in the municipalities of the Itaguaí and Serrana microregions were evaluated between January and May 2009. The animals were examined to determine the presence of ticks and infestation level. The animals' rearing and management were assessed on each farm property using an epidemiological questionnaire. Out of the 635 horses evaluated, 41.6% were infested with A. cajennense. It was observed that farms in low-altitude regions (OR=3.69; CI: 2.3-5.8), with unsatisfactory zootechnical and sanitary management (OR=5.92; CI: 3.8-9.2) and an extensive rearing system (OR=4.25; CI: 2.1-8.5) were factors associated with tick infestation (p < 0.05) and also with cases of high infestation on horses. Use of chemical acaricides on horses was also associated with infestation (p < 0.05); the owners described different therapeutic approaches with different treatment intervals. From the present study, low altitudes, unsatisfactory management, extensive rearing and inappropriate use of acaricide products were factors associated with occurrences of A. cajennense at different infestation levels on horses in these municipalities.

O objetivo deste estudo foi avaliar os fatores associados à infestação por Amblyomma cajennense em equinos em duas microrregiões do estado do Rio de Janeiro. Equinos de 62 fazendas nos municípios das microrregiões de Itaguaí e Serrana foram avaliados entre janeiro e maio de 2009. Os animais foram inspecionados quanto à presença e ao nível de infestação destes carrapatos. As condições de criação e o manejo foram avaliados em cada propriedade, por um questionário epidemiológico. Dos 635 equinos avaliados, 41,6% apresentavam-se infestados por A. cajennense. Observou-se que as criações dos animais em regiões de baixas altitudes (OR=3,69, IC: 2,3-5,8), em propriedades com manejo zootécnico e sanitário insatisfatório (OR=5,92, IC: 3,8-9,2) e em sistema de criação extensivo (OR=4,25, IC: 2,1-8,5) foram fatores associados (p < 0,05) à infestação, sendo também relacionados à intensa infestação nos equinos. O uso de carrapaticida nos equinos também apresentou associação (p < 0,05) à infestação, sendo descritas pelos proprietários, diferentes condutas terapêuticas, em intervalos alternados de tratamento. Baixas altitudes, condição de manejo insatisfatória, criação extensiva e o uso inadequado dos produtos carrapaticidas são fatores associados à ocorrência de A. cajennense em diferentes níveis de infestação nos equinos dos municípios estudados.

Detection and molecular characterization of piroplasms species from naturally infected dogs in southeast Brazil / Detecção e caracterização molecular de piroplasmas em cães naturalmente infectados no Sudeste do Brasil

Rangelia vitalii is a protozoon described from dogs in the south and southeast regions of Brazil. It is phylogenetically related to Babesia spp. that infects dogs, but data on this enigmatic parasite is still limited. The aim of this work was to detect piroplasm species in dogs in the state of Rio de Janeiro, Brazil, by 18S rRNA gene-based PCR assay, restriction fragment length polymorphism (RFLP) and sequence analyses. Of 103 dogs examined, seven (6.8%) were positive for Babesia spp. by PCR. The amplified products were digested by restriction enzymes to differentiate the Babesia species, and one sample was identified as Babesia vogeli. The pattern observed for the other six amplification products did not match with pattern described for large Babesia infecting dogs. Sequencing analysis confirmed these six samples as R. vitalii, with high homologies (99-100%) with a sequence from south Brazil. This study confirms the presence of Babesia vogeli and Rangelia vitalii circulate in domestic dogs in Teresópolis, Rio de Janeiro, Brazil.(AU)

Rangelia vitalii é um protozoário que infecta cães e foi descrito nas regiões Sul e Sudeste do Brasil. R. vitalii é filogeneticamente próxima à Babesia spp., mas dados deste misterioso parasito ainda são escassos. O objetivo deste trabalho foi detectar a presença de piroplasmas em cães naturalmente infectados no estado do Rio de Janeiro, através da amplificação do gene 18S rRNA pela PCR, clivagem com enzimas de restrição (RFLP) e caracterização genética através do sequenciamento. De 103 cães, sete (6,8%) foram positivos para Babesia spp. pela PCR. Os produtos amplificados foram digeridos por enzimas de restrição para a diferenciação das espécies de Babesia e uma amostra foi identificada como Babesia vogeli. O padrão de amplificação observado nas outras seis amostras não correspondeu ao padrão descrito para babesias que infectam cães. O sequenciamento das seis amostras confirmou ser uma espécie geneticamente idêntica a R. vitalii apresentando grande homologia (99-100%) com a sequência do sul do Brasil. Este estudo confirma a presença de Babesia vogeli e Rangelia vitalii infectando cães em Teresópolis, Rio de Janeiro, Brasil.(AU)

Occurrence of anti-Neospora caninum and anti-Toxoplasma gondii IgG antibodies in goats and sheep in western Maranhão, Brazil / Ocorrência de anticorpos IgG anti-Neospora caninum e anti-Toxoplasma gondii em caprinos e ovinos do oeste do Maranhão, Brasil

Neosporosis and toxoplasmosis are parasitic diseases which can cause reproductive problems in goats and sheep. The current study aimed to determine the occurrence of anti-Neospora caninum and anti-Toxoplasma gondii IgG antibodies in goats and sheep from the districts of Amarante do Maranhão and Buritirana, Imperatriz microregion, western area of Maranhão State, northeastern Brazil, and to assess factors associated to infection by these etiologic agents. Blood samples from 110 animals (46 goats and 64 sheep) from five herds were collected, and indirect immunofluorescence assay was used for serological testing. Of 46 goat samples, 17.39 percent (n = 8) showed anti-N. caninum antibodies and 4.35 percent (n = 2) anti-T. gondii, while of 64 sheep samples 4.69 percent (n = 3) and 18.75 percent (n = 12) showed anti-N. caninum and anti-T. gondii antibodies, respectively. No significant difference regarding the presence of domestic cats and/or dogs on the property and veterinary care was seen for both etiologic agents studied. However, food supplementation and animal reproductive failure were significantly (p < 0.05) for N. caninum among sheep and goats, respectively. The current study showed that goats and sheep in western Maranhão are exposed to N. caninum and T. gondii. It is the first evidence of these agents in small ruminants in this region.(AU)

A neosporose e a toxoplasmose são doenças parasitárias que podem causar problemas reprodutivos em caprinos e ovinos. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de anticorpos IgG anti-Neospora caninum e anti-Toxoplasma gondii em caprinos e ovinos dos municípios de Amarante do Maranhão e Buritirana, microrregião de Imperatriz, Oeste maranhense, Nordeste do Brasil, bem como avaliar fatores associados à infecção por esses agentes etiológicos. Amostras de sangue de 110 animais (46 caprinos e 64 ovinos), provenientes de cinco propriedades, foram coletadas, e a reação de imunofluorescência indireta utilizada para o diagnóstico sorológico. Das 46 amostras de caprinos, 17,39 por cento (n = 8) apresentaram anticorpos anti-N. caninum e 4,35 por cento (n = 2) anti-T. gondii, enquanto das 64 amostras de ovinos, 4,69 por cento (n = 3) e 18,75 por cento (n = 12) apresentaram anticorpos anti-N. caninum e anti-T. gondii, respectivamente. Não houve diferença significativa, considerando-se a presença de gato e/ou cão na propriedade e assistência veterinária para ambos os agentes estudados. Entretanto, suplementação alimentar e presença de animais com problemas reprodutivos diferiram significativamente (p < 0,05) em ovinos e caprinos, respectivamente. Os resultados do presente estudo demonstraram que caprinos e ovinos, da região Oeste do Maranhão são expostos aos coccídios N. caninum e T. gondii. Essa é a primeira evidência desses agentes em pequenos ruminantes nessa região.(AU)

Seroprevalence of IgG antibodies against Anaplasma marginale in cattle from south Mozambique / Soroprevalência de anticorpos de classe IgG contra Anaplasma marginale em bovinos da região Sul de Moçambique

The current study aimed to investigate the seroprevalence of IgG antibodies to Anaplasma marginale in cattle from Maputo, Gaza and Inhambane provinces, south Mozambique. A total of 809 serum samples from cattle were obtained and tested by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (i-ELISA). The chi-square test at 5 percent significance was used to assess the association between seroprevalence and the variables gender, age and geographic origin of animals. The overall seropositivity was 76.5 percent (n = 619) and anti-A. marginale antibodies were detected in 89.1 percent (n = 156), 68.4 percent (n = 308) and 84.2 percent (n = 155) of the animals in the provinces of Maputo, Gaza and Inhambane, respectively. A significant association (p < 0.05) was found with the geographic origin of the animals, while sex had no significant relationship. The frequencies of seropositive in the age groups were 63.2 percent (n = 72), 80.0 percent (n = 92), 83.1 percent (n = 98) and 77.3 percent (n = 357) for animals <12; >12 and <24; >24 and <36; >36 months, respectively. These results indicate that in southern Mozambique there are areas of enzootic stability to A. marginale. Thus, epidemiological monitoring is required to monitor the immune status of animals in the region.(AU)

O objetivo do presente estudo foi investigar a soroprevalência de anticorpos da classe IgG contra Anaplasma marginale em bovinos de corte da região Sul de Moçambique. Para esse efeito, 809 amostras de soro foram coletadas e avaliadas pelo ensaio imunoadsorção enzimático indireto (ELISA-i). O teste Qui-Quadrado, a 5 por cento de significância, foi utilizado para avaliar a associação entre a soroprevalência e as variáveis sexo, idade e origem geográfica dos animais. A soropositividade geral foi de 76,5 por cento (n = 619), e anticorpos anti-A. marginale foram detectados em 89,1 por cento (n = 156), 68,4 por cento (n = 308) e 84,2 por cento (n = 155) dos animais nas províncias de Maputo, Gaza e Inhambane, respectivamente. Uma associação significativa (p < 0,05) foi observada entre a origem geográfica dos animais, enquanto o sexo não demonstrou uma relação significativa. A frequência de soropositivos com relação à faixa etária foi de 63,2 por cento (n = 72), 80,0 por cento (n = 92), 83,1 por cento (n = 98) e 77,3 por cento (n = 357) para animais de <12; >12 a <24; >24 <36; >36 meses, respectivamente. Os resultados demonstram que, no Sul de Moçambique, existem áreas de estabilidade enzoótica para A. marginale, em animais maiores de 12 meses. Assim, monitoramento epidemiológico deve ser realizado para o acompanhamento do status imunológico dos animais na região.(AU)

Factors associated to Theileria equi in equids of two microregions from Rio de Janeiro, Brazil / Fatores associados à Theileria equi em equídeos de duas microrregiões do Rio de Janeiro, Brasil

Serum samples from 714 equids of Itaguaí and Serrana microregions, Rio de Janeiro, southeastern Brazil, were examined by indirect fluorescent antibody test (titer 1:80) for Theileria equi. The prevalence in the microregions and factors associated with seropositivity were evaluated and the prevalence ratio (PR) calculated. The overall prevalence of T. equi infection was 81.09 percent (n = 579), with higher prevalence (p < 0.05) in the Itaguaí (85.43 percent) when compared to Serrana microregion (76.92 percent). The geographic area, altitude, farming condition and area of origin of equids were associated (p < 0.05) with seropositivity for T. equi. Equids reared in the Itaguaí microregion (PR = 1.11, p = 0.003) and at altitudes below 500 m (PR = 1.10; p = 0,014) were more likely to be seropositive for T. equi. Furthermore, when equids were born in the farm (PR = 1.10, p = 0.008) and reared with poor farming conditions (PR = 1.13, p = 0.018) they were more likely to be exposed to T. equi. The main ticks found on equids were Amblyomma cajennense and Dermacentor (Anocentor) nitens. The microregions studied are endemic areas for equine theileriosis and there exists enzootic stability for T. equi. Only factors related to the collection area of serum samples influenced the seropositivity of equids for T. equi in that region.(AU)

Amostras de soro de 714 equídeos das microrregiões de Itaguaí e Serrana, Rio de Janeiro, Brasil, foram submetidas ao teste de imunofluorescência indireta (título 1:80) para Theileria equi. A prevalência entre as microrregiões e os fatores associados à soropositividade foram avaliados e a razão de prevalência (RP) calculada. A prevalência geral para T. equi foi de 81,09 por cento (n = 579), com maior prevalência (p < 0,05) para microrregião de Itaguaí (85,43 por cento), quando comparado a Serrana (76,92 por cento). A região, altitude, nível da propriedade e origem dos equídeos foram associados (p < 0,05) com a soropositividade para T. equi. Equídeos criados na microrregião de Itaguaí (RP = 1,11; p = 0,003) e em altitudes abaixo de 500 m (RP = 1.10; p = 0,014) apresentaram maior chance de se tornarem soropositivos para T. equi. Além disso, quando são criados em propriedades de nível ruim (RP = 1,13; p = 0,018) e nascidos na propriedade (RP = 1,10; p = 0,008) apresentaram mais chance de terem contato com T. equi. As principais espécies de carrapatos encontradas parasitando os equídeos foram Amblyomma cajennense e Dermacentor (Anocentor) nitens. As microrregiões estudadas são endêmicas para theileriose equina e de estabilidade enzoótica para T. equi. Apenas os fatores relacionados à área de coleta das amostras de soro influenciaram a soropositividade dos equídeos para T. equi naquela região.(AU)

The influence of the fasting period on the number of nymphal instars and on the sex ratio of Argas (Persicargas) miniatus (Acari: Argasidae) / Influência do período de jejum no número de instares ninfais e na razão sexual de Argas (Persicargas) miniatus (Acari: Argasidae)

The current study investigated the biology of nymphs of the first and second instars of Argas (Persicargas) miniatus.Nymphs were deprived of food for 15, 30 or 60 days and held at 27 ± 1 °C and 80 ± 10% relative humidity (controlledconditions) or at room conditions of temperature and relative humidity. Nymphs of first instar deprived of food for15 or 30 days molted to second and third instars in both controlled and room conditions. Nymphs of the first instardeprived of food for 60 days had 28 and 37% mortality in controlled and room conditions, respectively; and survivorsdid not attach to the host. Nymphs of the second instar, deprived of food for 60 days, molted either to the third instaror to males after feeding on Gallus gallus, and the nymphs of the third instar developed to adults (42.42% males and36.36% females when nymphs were held in controlled temperature and humidity conditions, and 40.54% males and48.65% females when nymphs were held in room conditions). The remainder of the nymphs molted to the fourthinstar and then molted to females. In conclusion, the nymphal starvation period of 60 days determined the number ofnymph instars in the life cycle of A. miniatus under the experimental conditions studied.(AU)

Os aspectos biológicos de ninfas de primeiro e segundo instares de Argas (Persicargas) miniatus quando submetidasa diferentes períodos de jejum (15, 30 e 60 dias), foram estudados em estufa climatizada (27 ± 1 °C e 80 ± 10% deumidade relativa) e em ambiente de laboratório. Ninfas de primeiro instar que foram submetidas a um período dejejum de 15 e 30 dias mudaram para ninfas de segundo e terceiro instar, em ambas as condições estudadas. No períodode 60 dias de jejum verificou-se mortalidade de 28 e 37% das ninfas de primeiro instar, em estufa climatizada e emambiente de laboratório, respectivamente. As ninfas sobreviventes não se fixaram sobre os hospedeiros. As ninfas desegundo instar, após 60 dias de jejum, desenvolveram-se em ninfas de terceiro instar ou machos, quando alimentadasem Gallus gallus. Ainda neste grupo, as ninfas de terceiro instar mudaram para adultos (42,42 e 40,54% machos;36,36 e 48,65% fêmeas, nas condições ambiente de laboratório e estufa climatizada, respectivamente) e o restantedesenvolveu-se em ninfas de quarto instar que por sua vez mudaram para fêmeas. Então, a situação de jejum (60 dias)em que as ninfas foram submetidas determinou o número de ninfas no ciclo biológico de A. miniatus, sob as condições experimentais estudadas.(AU)

Estudo comparativo de três métodos de diagnóstico para detecção de anticorpos anti-Theileria equi em eqüinos de áreas endêmicas do estado do Rio de Janeiro / Comparative studies of three methods for detection Theileria equi antibody in endemic areas horses from Rio de Janeiro state

Este trabalho teve o objetivo de avaliar a reação de imunofluorescência indireta (RIFI), ensaio imunoenzimático (ELISA) e a reação de fixação do complemento (RFC) no diagnóstico de Theileria equi em amostras de soro de 79 equinos na Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro(UFRRJ), Seropédica, RJ, Brasil. Houve reação positiva para Theileria equi em 74,7, 75,9 e 60,8% das amostras testadas pela RIFI, ELISA eRFC, respectivamente. Observou-se discrepância em 16,45% (n=13) das amostras de soro testadas pelo ELISA indireto e RIFI. Quando comparado a RIFI e a RFC, a discrepância observada entre os soros testados foi de 36,70% (n=29). O teste ELISA indireto e a RFC apresentaram discordância em 37,97% (n=30) das amostras de soros. Os resultados do presente estudo sugerem que a melhor alternativa para o diagnóstico sorológico de T. equi em eqüinos portadores é aassociação dos testes de RIFI e ELISA indireto, especialmente para a realização de estudos soroepidemiológicos.(AU)

This study was carried out to evaluate indirect fluorescent antibody test (IFAT), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and complement fixation test (CFT) of Theileria equi diagnosis in sera samples of 79 horses at Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro(UFRRJ), Seropédica, RJ, Brazil were tested. Positive reaction was obtained in 74.7, 75.9 and 60.8% of samples tested by IFAT, indirect ELISA and CFT, respectively. Discrepancy was observed in 16.45%(n=13) of serum samples tested by ELISA and IFAT. While IFAT and CFT were compared, the discrepancy observed among the samples tested were 36.71% (n=29). Indirect ELISA and CFT test presented disagreement in 37.97% (n=30) of serum samples tested. Results of present study suggests that the best alternative for serological diagnosis T. equi in carriers horses is the combined use of IFAT and indirect ELISA test, especially for accomplishment of seroepidemiological studies.(AU)

Aspectos epidemiológicos da babesiose eqüina na microrregião fluminense do Grande Rio-ltaguaí, Estado do Rio de Janeiro / Epidemiological aspects of equine babesiosis in the region of ltaguaí, State of Rio de Janeiro

Foram colhidas amostras de sangue de 78 eqüinos, pertencentes ao Setor de Eqüinocultura do Instituto de Zootecnia da Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRRJ) e a propriedades vizinhas no município de ltaguaí, Estado do Rio de Janeiro, no período de abril a agosto de 1985. Das amostras, separou-se o soro, que foi inativado em banho-maria a 36ºC e posteriormente mantido na temperatura de -15ºC até a coleta e preparo de todo o material. De cada animal sangrado, foram coletados carrapatos que foram identificados como Amblyomma cajennense e Anocentor nitens. As amostras de soro foram analisadas no Instituto de Parasitologia da Universidade de Hannover, Alemanha, onde foi realizada a técnica de fixação do complemento, utilizando antígenos específicos para Babesia equi e B. caballi para a identificação de animais portadores de babesiose. Os carrapatos foram examinados através de análise de hemolinfa, tubo digestivo, ovários e glândula salivar, a procura de formas evolutivas de Babesia sp. Os resultados mostraram que todos os animais examinados apresentaram resposta positiva, mesmo em diferentes graus, para B. equi, B. caballi, ou ambas. Dos animais examinados 93,6% apresentaram reação positiva para B. caballi e 84,6% para B. equi. Os carrapatos examinados foram negativos para Babesia. Isto mostra que a prevalência é elevada na região estudada, caracterizando-a como uma área fortemente enzoótica e, potencialmente, de risco para animais procedentes de áreas livres de carrapatos vetores.

Blood samples of 78 equines from ltaguaí, State of Rio de Janeiro were collected from April to August 1985. The sera were inactived at 36ºC and maintained in a freezer temperature (-15ºC). Ticks were collected from each equine and were classified as Amblyomma cajennense and Anocentor nitens. The ticks and sera samples were sent to Hanover, Germany, for examination. The complement fixation (CF) test was used to identify the positive equines for Babesia caballi and B. equi. Hemolymph, avaries, salivar glands and digestive organs were examined for detection of field infections of Babesia sp. The results showed that ali of the equines were positives for Babesia. The prevalence of B. equi was 84.6% and of B. caballiwas 93.6% by the CF test. The ticks were negatives for Babesia. These results showed that the prevalence was high. This area is highly enzootic for B. equi and B. caballi and could be considered a hazard for animais from tick free areas.