Resumo

The aims of this study were to determine the effect of rutin on in vitro maturation (IVM) of oocytes from in vitro-grown sheep secondary follicles and to analyze the possible involvement of the mammalian target of rapamycin (mTOR) pathway in IVM under the influence of rutin. Secondary follicles were cultured for 18 days in α-Minimum Essential Medium (α-MEM) supplemented with bovine serum albumin (BSA), insulin, glutamine, hypoxanthine, transferrin, selenium, ascorbic acid, and leptin (control medium: α-MEM+). Next, the follicles were evaluated for morphology, antrum formation, and follicular diameter, and the rate of fully grown oocytes (≥110 µm). Fully grown oocytes were submitted to IVM in Tissue Culture Medium 199 (TCM199) supplemented with fetal bovine serum (FBS), luteinizing hormone (LH), and recombinant follicle-stimulating hormone (rFSH) (IVM control medium), or in this medium with 0.1, 1, or 10 µg mL-1rutin. At the end of IVM, the oocytes were evaluated for mitochondrial activity, the reactive oxygen species (ROS) and glutathione (GSH) levels, the percentage of meiotic resumption, DNA fragmentation, and mTOR pathway involvement. After 18 days of in vitro culture, 77.5% of the follicles were normal and 77.7% became antral follicles with a diameter of 380.41 µm. Furthermore, almost 70% of the oocytes grew in vitro, reaching a diameter ≥110 µm and were submitted to IVM. Supplementation with 10 µg mL-1rutin significantly increased the percentage of oocytes that resumed meiosis (47.27%) compared with the control medium (30.43%). There was a significant increase in the ROS and GSH levels in oocytes matured with 0.1 µg mL-1 rutin compared with the other rutin treatments (p < 0.05). Furthermore, oocytes matured with TCM199+ showed a higher (p < 0.05) percentage of DNA fragmentation (30%) than those that matured with 10 µg mL-1 rutin (0%). After IVM, oocytes matured in the presence or absence of rapamycin showed a similar percentage of meiotic resumption (61.76% for TCM199+ 10 µg mL-1 rutin and 70.73% for TCM + 10 µg mL-1 rutin + rapamycin; p > 0.05). In conclusion, supplementation with 10 µg mL-1 rutin increased meiosis resumption and reduced DNA damage.(AU)

Os objetivos deste estudo foram verificar o efeito da rutina sobre a maturação in vitro (MIV) de oócitos provenientes de folículos secundários de ovelhas cultivados in vitro e analisar o possível envolvimento da via mTOR na MIV, sob influência da rutina. Os folículos secundários foram cultivados por 18 dias em meio α-Mínimo Essencial (α-MEM) suplementado com albumina sérica bovina (BSA), insulina, glutamina, hipoxantina, transferrina, selênio, ácido ascórbico e leptina (meio controle: α-MEM+). Em seguida, os folículos foram avaliados quanto à morfologia, formação do antro e diâmetro folicular e taxa de oócitos totalmente crescidos (≥110 µm). Oócitos totalmente crescidos foram submetidos à MIV em meio de cultivo de tecidos 199 (TCM199) suplementado com soro fetal bovino (FBS), hormônio luteinizante (LH), hormônio folículo estimulante recombinante (rFSH) (meio controle MIV) ou neste meio com 0,1, 1 ou 10 µg.mL-1 de rutina. Ao final da MIV, os oócitos foram avaliados quanto à atividade mitocondrial, concentração de espécies reativas de oxigênio (ERO) e glutationa (GSH), porcentagem de retomada de meiose, fragmentação de DNA e envolvimento da via mTOR. Após 18 dias de cultivo in vitro, 77,5% dos folículos estavam normais e 77,7% tornaram-se folículos antrais, com 380,41 µm de diâmetro. Além disso, 70% dos oócitos que cresceram in vitro atingiram diâmetro ≥110 µm e foram submetidos à MIV. A concentração de 10 µg.mL-1 de rutina aumentou significativamente a porcentagem de oócitos que retomaram a meiose (47,27%) em comparação ao meio controle (30,43%). Houve um aumento significativo nas concentrações de ROS e GSH em oócitos maturados com 0.1 µg.mL-1 de rutina em comparação com os outros tratamentos com rutina (p < 0,05). Além disso, a maturação de oócitos em TCM199+ aumentou (p<0,05) o percentual de fragmentação de DNA (30%) comparado ao tratamento com 10 µg.mL-1 de rutina (0%). Após MIV, ambos os tratamentos maturados na presença ou ausência de rapamicina apresentaram porcentagem semelhante de retomada meiótica (61,76% para TCM199+10 µg.mL-1 de rutina e 70,73% para TCM199+ 10 µg.mL-1 de rutina + rapamicina) (p>0,05). Em conclusão, a concentração de 10 µg.mL-1 de rutina aumentou a retomada da meiose e reduziu os danos ao DNA.(AU)

Resumo

This study was conducted to evaluate the effects of the acidified extract of M. oleifera leaves as a supplement into the base medium for in vitro culture of sheep isolated secondary follicles. Follicles were isolated and cultured for 12 days in α-MEM+ (supplemented with bovine serum albumin, insulin, glutamine, hypoxanthine, transferrin, selenium, and ascorbic acid) with or without 0.1; 0.2 or 0.4 mg/ml of the acidified extract of M. oleifera. Follicle morphology, antral cavity formation, follicular and oocyte diameter, glutathione (GSH) concentration, mitochondrial activity and meiotic resumption were evaluated. After 12 days of culture, there was no significant difference among treatments in relation to follicular morphology, antral cavity formation, diameter and mitochondrial activity. Nevertheless, oocytes from follicles cultured in α-MEM+ showed greater GSH concentration than media containing M. oleifera extract. Furthermore, the concentration of 0.4 mg/ml M. oleifera extract significantly increased the percentage of fully grown oocyte (≥ 110 µm) when compared to the other treatments. In conclusion, the concentration of 0.4 mg/ml M. oleifera extract as a supplement of the culture medium, maintained the survival, and increased the percentage of fully grown oocytes.(AU)

Este estudo foi conduzido para avaliar os efeitos do extrato acidificado de folhas de M. oleifera como suplemento ao meio base para cultivo in vitro de folículos secundários isolados de ovinos. Os folículos foram isolados e cultivados por 12 dias em α-MEM+ (suplementado com albumina sérica bovina, insulina, glutamina, hipoxantina, transferrina, selênio e ácido ascórbico) com ou sem 0,1; 0,2 ou 0,4 mg/ml do extrato acidificado de M. oleifera. Foram avaliados morfologia folicular, formação da cavidade antral, diâmetro folicular e oocitário, concentração de glutationa (GSH), atividade mitocondrial e retomada meiótica. Após 12 dias de cultivo, não houve diferença significativa entre os tratamentos em relação à morfologia folicular, formação da cavidade antral, diâmetro e atividade mitocondrial. No entanto, oócitos de folículos cultivados em α-MEM+ apresentaram maior concentração de GSH do que meios contendo extrato de M. oleifera. Além disso, a concentração de 0,4 mg/ml de extrato de M. oleifera aumentou significativamente a porcentagem de oócitos totalmente crescidos (≥ 110 µm) quando comparado aos demais tratamentos. Em conclusão, a concentração de 0,4 mg/ml de extrato de M. oleifera como suplemento do meio de cultura manteve a sobrevivência e aumentou a porcentagem de oócitos totalmente crescidos.(AU)

Resumo

The aim of this study was to examine the effect of replacing the use of follicle-stimulating hormone (FSH) with equine chorionic gonadotropin (eCG) and human chorionic gonadotropin (hCG) on the in vitro maturation (IVM) of sheep oocytes. After sheep ovaries were collected (n=300), the cumulus-oocyte complexes were aspirated, selected, and divided into four groups according to the IVM medium: CON group, in which the basic IVM medium was used; and eCG, hCG, and FSH groups, in which the oocytes were immersed in basic IVM medium with 10 IU/mL eCG, 10 IU/mL hCG, and 10 µg/mL FSH-p, respectively. In vitro maturation of the oocytes was performed at 38.5 °C, in a humidified atmosphere of 5% CO2 in air, for 24 h. Subsequently, the oocytes were evaluated for the degree of cumulus-cell expansion, chromatin configuration, GSH levels, and active mitochondria. There were no significant differences for the rate of cumulus cell expansion. The percentage of oocytes in MII was higher in the eCG group than in the CON and hCG groups (P<0.05) and similar to that of the FSH group. In conclusion, eCG can be used as a substitute for FSH in IVM of sheep oocytes.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da gonadotrofina coriônica equina (eCG) e da gonadotrofina coriônica humana (hCG), em substituição ao uso de hormônio folículo estimulante (FSH) na maturação in vitro (MIV) de oócitos ovinos. Após a coleta de ovários (n=300) ovinos, os complexos cúmulus-oócitos (CCOs) foram aspirados, selecionados e divididos em quatro grupos de acordo com o meio de MIV: grupo CON, em que foi utilizado o meio MIV base; e grupos ECG, HCG e FSH, em que os oócitos foram imersos em meio MIV base adicionado de 10 UI/mL de eCG, 10 UI/mL de hCG e 10 µg/mL de FSH-p, respectivamente. A MIV dos oócitos foi realizada a 38,5°C, em atmosfera umidificada de 5% de CO2 em ar, durante 24 horas. Posteriormente, os oócitos foram avaliados, quanto grau de expansão das células do cumulus, configuração da cromatina, níveis de GSH e mitocôndrias ativas. Não foram observadas diferenças significativas com relação à taxa de expansão de células do cumulus. A percentagem de oócitos em MII foi maior no grupo ECG do que no grupo CON e HCG (P<0,05) e semelhante ao grupo FSH. Em conclusão, a eCG pode ser utilizada em substituição ao FSH na MIV de oócitos ovinos.

Resumo

The objective of this study was to test the efficiency of powdered coconut water (ACP-406®) base-medium without or with the addition of supplements on in vitro culture of isolated goat secondary follicles. Follicles were cultured for 18 days in α-MEM or in ACP-406®, both without supplements (referred to as α-MEM and ACP, respectively), or both supplemented with BSA, insulin, transferrin, selenium, glutamine, hypoxanthine, and ascorbic acid (referred to as α-MEM+ and ACP+). Follicular morphology, antrum formation, follicular and oocyte diameter, levels of glutathione (GSH), and chromatin configuration after in vitro maturation were evaluated. At the end of culture, ACP-406® base-medium (without or with supplements) showed a higher (P < 0.05) percentage of normal follicles than α-MEM (without or with supplements). Antrum formation was similar among α-MEM+, ACP and ACP+, and significantly higher than α-MEM without supplements. The follicular diameter was greater in ACP+ than α-MEM, and similar to other treatments. Moreover, fully and daily grown rates were higher (P < 0.05) in ACP-406® base-medium (without or with supplements) than α-MEM (without or with supplements). Levels of GSH were similar between ACP+ and α-MEM+ treatments. Both ACP+ and α-MEM+ allowed meiotic resumption without a significant difference between the two groups. In conclusion, supplemented ACP-406® base-medium maintained follicular survival and promoted the development as well as meiotic resumption of isolated goat secondary follicles cultured in vitro for 18 days.

Resumo

This study aimed to evaluate the efficacy of adding sucrose in vitrification solution of ovine embryos produced in vivo. Forty Dorper ewes were selected and superovulated. Immediately prior to the embryo collection by laparotomy, a laparoscopy was performed to verify the superovulatory response. The recovered flushing was followed by embryo evaluation and embryos were divided in two experimental groups where embryos from Control group were submitted to a traditional vitrification protocol and embryos from Sucrose group to a modified vitrification protocol with sucrose. After warming, embryos were again divided regarding cryoprotectant removal (Indirect) or not (Direct). The embryo quality was classified as embryos of degrees I (excellent or good), II (regular), III (poor) and IV (dead or degenerate). It was also verified the homogeneity of mass, occurrence of embryonic mass retraction and rupture of pellucid zone. The results were expressed as percentages and were subjected to Chi-square test with P 0.05. The embryos vitrified in the presence of sucrose had lower proportions of lower-quality embryos after warming (22.20 vs. 44.50%), higher percentages of homogeneous embryos after warming (63.89 vs. 38.89 %) while concerning other parameters there was no difference between these groups. It can be concluded that the addition of 0.4 M sucrose during vitrification improves the embryo quality.

Este estudo objetivou avaliar a eficácia da adição de sacarose na solução de vitrificação de embriões ovinos produzidos in vivo. Foram selecionadas 40 ovelhas da raça Dorper as quais foram superovuladas. Imediatamente antes da colheita de embriões por laparotomia, uma laparoscopia foi realizada para verificar a resposta superovulatória. O lavado recuperado foi submetido à procura e avaliação de embriões e estes foram divididos em dois grupos experimentais, onde os embriões do Grupo Controle foram submetidos ao protocolo tradicional de vitrificação e os embriões do Grupo Sacarose a um protocolo modificado de vitrificação com sacarose. Após a descongelação, os embriões foram novamente divididos considerando a remoção (Indireto) ou não (Direto) do crioprotetor. A qualidade embrionária foi classificada como embriões de graus I (excelente ou bom), II (regular), III (pobre) e IV (morto ou degenerado). Foi também verificada a homogeneidade da massa, ocorrência de retração da massa e ruptura de zona pelúcida. Os resultados foram expressos em porcentagem e foram submetidos ao teste do Qui-quadrado com P < 0.05. Os embriões vitrificados na presença de sacarose apresentaram menores proporções de embriões de menor qualidade após a descongelação (22,20 vs. 44,50%), e maiores percentuais de embriões homogêneos após a descongelação (63,89 vs. 38,89%) enquanto com relação aos demais parâmetros não existiram diferenças entre grupos. Pode-se concluir que a adição de 0,4 M de sacarose durante os procedimentos de vitrificação e descongelação beneficia a qualidade embrionária.

Resumo

The objective of this study was to evaluate the effectiveness of reusing a controlled internal drug release (CIDR) device for up to three times in the reproductive performance of dairy goats raised in the semi-arid zone of northeastern Brazil. Forty-five goats were allocated into three hormone treatments, as follows: CIDR1x, treated with new CIDR during nine days. Two days prior to device removal, injections of 75 +-g d-cloprostenol and 300 IU equine chorionic gonadotropin (eCG) were administrated. For the other treatments, the same hormone protocol was used, differing only by the use of the same CIDR for a second time in CIDR2x and for a third time in CIDR3x. The interval from device removal to the onset of estrus (13.3 +- 1.1h vs. 13.8 +- 2.6h vs. 13.3 +-1.4h), as well as estrus duration (33.6 +- 7.3h vs. 29.6 +-3.2h vs. 32.8 +- 4.5h), did not differ (p > 0.05) among groups CIDR1x, CIDR2x and CIDR3x, respectively. All synchronized females were found to be in estrus. The overall fertility and prolificacy after artificial insemination were 82.2% and 1.9 kids, respectively, without significant difference (p > 0.05) among treatments. The use of the same CIDR for up to three times was effective using 9-day estrus synchronization protocols in dairy goats.

Objetivou-se avaliar o efeito da utilização do mesmo dispositivo de liberação controlada de drogas (CIDR) por até três vezes sobre o desempenho reprodutivo de cabras leiterias exploradas no semiárido do Nordeste Brasileiro. Foram utilizadas 45 cabras divididas em três tratamentos de sincronização do estro, sendo: CIDR1x, tratadas com CIDR novo durante nove dias. Dois dias antes da retirada do dispositivo, foram aplicados 75 +-g de d-cloprostenol e 300 UI de gonadotrofina coriônica eqüina (eCG). Para os demais tratamentos, foi utilizado o mesmo protocolo hormonal, diferindo apenas pelo uso do mesmo CIDR pela segunda vez no grupo CIDR2x e uso pela terceira vez no grupo CIDR3x. O intervalo entre a retirada do dispositivo e o início do estro (13,3+- 1,1h vs. 13,8 +- 2,6h vs. 13,3 +- 1,4h), bem como, a duração do estro (33,6 +- 7,3h vs. 29,6 +- 3,2h vs. 32,8 +- 4,5h) não diferiram (p > 0,05) entre os grupos CIDR1x, CIDR2x e CIDR3x, respectivamente. Todas as fêmeas sincronizadas foram identificadas em estro. As médias de fertilidade e prolificidade média após inseminação artificial foram, respectivamente, de 82,2% e 1,9 crias, não havendo diferença significativa (p > 0,05) entre os tratamentos. A utilização do mesmo CIDR por até três vezes foi viável na sincronização do estro de caprinos leiteiros.