Resumo
Os objetivos deste estudo foram: 1) Avaliar a eficiência da técnica de autotransplante heterotópico de tecido ovariano equino, após exposição ou não dos fragmentos ovarianos ao processo de resfriamento e/ou VEGF antes do enxerto (Fase 1); 2) Avaliar o efeito da exposição prévia de tecidos ovarianos equinos ao resfriamento, criopreservação e VEGF no xenotransplante heterotópico. (Fase 2). Na fase 1, os fragmentos ovarianos foram coletados por biópsia in vivo e autoenxertados no sítio subcutâneo do pescoço da égua. Na fase 2, ovários equinos foram coletados por ovariectomia, em seguida fragmentados, vitrificados, expostos ao VEGF e xenoenxertados na parede intraperitoneal de camundongos BALB nude. Na fase 1, a exposição dos fragmentos ovarianos ao VEGF não foi benéfica para a qualidade do tecido; contudo, o processo de resfriamento dos fragmentos reduziu (P < 0,05) a hiperemia aguda pós-enxertia. Os enxertos resfriados comparados com enxertos não resfriados obtiveram valores semelhantes (P > 0.05) para folículos pré-antrais normais e em desenvolvimento, densidade vascular e apoptose das células estromais. Na fase 2, A exposição ao VEGF aumentou (P < 0,05) a densidade vascular (vasos novos e maduros) no tecido criopreservado transplantado. Um equilíbrio das fibras de colágeno dos tipos I e III no tecido transplantado e resfriado foi observado em tecido exposto ao VEGF. Em conclusão, a exposição ao VEGF antes do autotransplante não melhorou a qualidade dos tecidos enxertados. No entanto, resfriar o tecido ovariano por pelo menos 24 horas antes do enxerto pode ser benéfico, pois foram obtidas taxas satisfatórias de sobrevivência e ativação folicular e de sobrevivência e proliferação de células estromais, bem como aumento da densidade de vasos.
The objectives of this study were: 1) To evaluate the efficiency of the heterotopic autotransplantation technique of equine ovarian tissue, after exposure or not of the ovarian fragments to the cooling process and / or VEGF before the graft (Phase 1); 2) Evaluate the effect of previous exposure of equine ovarian tissues to cooling, cryopreservation and VEGF in heterotopic xenotransplantation. (Level 2). In phase 1, the ovarian fragments were collected by biopsy in vivo and autografted in the subcutaneous site of the mare's neck. In phase 2, equine ovaries were collected by ovariectomy, then fragmented, vitrified, exposed to VEGF and xenografted on the intraperitoneal wall of nude BALB mice. In phase 1, the exposure of ovarian fragments to VEGF was not beneficial for tissue quality; however, the cooling process of the fragments reduced (P <0.05) the acute post-grafting hyperemia. The cooled grafts compared with non-cooled grafts obtained similar values (P> 0.05) for normal and developing preantral follicles, vascular density and apoptosis of stromal cells. In phase 2, VEGF exposure increased (P <0.05) the vascular density (new and mature vessels) in the transplanted cryopreserved tissue. A balance of types I and III collagen fibers in the transplanted and cooled tissue was observed in tissue exposed to VEGF. In conclusion, exposure to VEGF before autotransplantation did not improve the quality of the grafted tissues. However, cooling ovarian tissue for at least 24 hours before the graft can be beneficial, as satisfactory rates of survival and follicular activation and stromal cell survival and proliferation have been achieved, as well as increased vessel density.
Resumo
A ultrassonografia Doppler é uma ferramenta útil que permite a avaliação da dinâmica do fluxo sanguíneo e a detecção da neovascularização. Cálculos de índices de vascularidade da porção distal da artéria ovariana podem ser útil para informações quanto á qualidade oócitaria O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de protocolos de estimulação ovariana nos parâmetros dopplervelocimétricos da artéria ovariana e verificar sua relação com a população de folículos antrais e qualidade do oócito. Cabras Canindé (n = 10) foram usadas para a estimulação ovariana utilizando dois protocolos diferentes: doses múltiplas (FSH) ou dose única (FSH). O fluxo sanguíneo do ovário foi determinada nas artérias ovarianas para verificar as mudanças do fluxo sanguíneo em resposta a estimulação hormonal e ainda a avaliação por ultra-som modo B, para acompanhar o crescimento folicular em resposta a estimulação hormonal, onde foram monitorados duas vezes ao dia, entre os dias 7 a 9 do tratamento com progestágeno e posteriormente pouco antes do momento da retirada da esponja. O número médio de folículos gravados por animal foi maior (P <0,05) em cabras do grupo de dose múltipla (8,8 vs. 7,1). O índice de resistência, velocidade sistólica de pico, e gradiente de pressão da artéria ovariana foi semelhante (P> 0,05) entre os tratamentos hormonais protocolo. O gradiente de pressão da artéria ovariana mostraram correlações positivas (P <0,05) com o número de intermediário (3-4 mm), grande (> 5 mm) e folículos totais. A média de oócitos viáveis (GI e GII) foi maior (P <0,05) no tratamento de dose múltipla. Além disso, observou-se um maior (P <0,05) o número de oócitos e GIII degenerados no tratamento de dose única. Foram observadas associações positivas de oócitos GII com pico de velocidade sistólica (P = 0,06) e gradiente de pressão (P <0,05). Além disso, os oócitos GIII foram negativamente associado com velocidade de pico sistólica. O índice de resistência e o gradiente pressão foram correlacionados (P <0,05) positivamente e negativamente com oócitos degenerados, respectivamente. Em conclusão, o número de folículos recrutados e qualidade dos oócitos foi superior no grupo de dose múltipla. Além disso, observou-se uma relação entre o gradiente de pressão e população folicular antral, enquanto a velocidade de pico sistólica, índice de resistência, e gradiente de pressão foram associados com a qualidade do oócito.
Doppler ultrasound is a useful tool which enables the evaluation of blood flow dynamics and detection of neovascularization. vascularity indices calculations of the distal portion of the ovarian artery can be useful for information as to the quality oocyte. The aim of this study was to evaluate the effect of ovarian stimulation protocols on Doppler velocimetry parameters of the ovarian artery and verify its relationship with the antral follicle population and oocyte quality. Canindé goats (n = 10) were used for ovarian stimulation according two different protocols: multiple doses (FSH) or single dose (eCG). The ovarian blood flow was determined in ovarian arteries to verify the changes in blood flow in response to hormonal stimulation and the evaluation by ultrasonic B mode, to monitor follicle growth in response to hormonal stimulation, which were monitored twice day, between days 7-9 of treatment with progestogen and then just before the time of sponge removal. The mean number of follicles recorded per animal was higher (P < 0.05) on goats from the multiple dose group (8.8 vs. 7.1). The resistance index, peak systolic velocity, and pressure gradient of ovarian artery was similar (P > 0.05) between the hormonal protocol treatments. The pressure gradient of ovarian artery showed positive correlations (P < 0.05) with the number of intermediate (3-4 mm), large (>5 mm), and total follicles. The mean of viable oocytes (GI and GII) was higher (P < 0.05) in multiple dose treatment. Moreover, we observed a greater (P < 0.05) number of GIII and degenerate oocytes on the single dose treatment. Positive associations of oocytes GII with peak systolic velocity (P = 0.06) and pressure gradient (P < 0.05) were observed. Also, oocytes GIII were negatively associated with peak systolic velocity. Resistance index and pressure gradient were correlated (P < 0.05) positively and negatively with degenerated oocytes, respectively. In conclusion, the number of recruited follicles and oocyte quality was superior on multiple dose group. Also, we observed a relationship between pressure gradient and antral follicular population while the peak systolic velocity, resistance index, and pressure gradient were associated with oocyte quality.